专利名称：(22RS)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺的 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及通式(I)和(II)两种差向异构体，
即(22R)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺[通式(I)化合物]和(22S)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺[通式(II)化合物]。
本说明书通式中的虚线(
)表示取代基是α构型，即在环平面下，楔型线(
)表示取代基是β构型，即在环平面上。
通式(I)和(II)化合物的代谢产物和代谢前体都在本发明范围内。
比例为1∶1的通式(I)和(II)的差向异构体混合物即化合物(22RS)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺(实验室代码FCE 28260)已在我们前一国际专利申请W094/03475(参见第15页化合物41和第45页实施例5)中公开，而(22R)或(22S)的单一差向异构体没有在其中具体说明。
已证明该差向异构体混合物是体内及体外都有效的睾酮5α-还原酶抑制剂(参见WO94/03475第33页表(I)中数据)，因此可用于需要降低雄激素活性的病例，例如治疗良性前列腺增生、乳腺和前列腺癌以及某些皮肤-头发(skin-hair)变化，例如治疗粉刺、脂溢性皮炎、妇女多毛症和男子秃顶。
我们已将两种差向异构体从其差向异构体混合物中分离出，并且评价了它们作为睾酮5α-还原酶抑制剂的活性。
该两种差向异构体可按照WO94/03475中描述的方法制备，然后分离差向异构体混合物。可通过高压液相色谱法(HPLC)进行所述分离。
另外，通过将3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酸与先前已拆分过的单一对映体1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基胺反应可获得彼此独立的单一差向异构体。
此外，由于将3-氧代-雄甾-4-烯-17β-羧酸与(±)-1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基胺反应而获得的相应差向异构体酰胺比相应的3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺差向异构体更易于分离，所以单一纯度的差向异构体可有利地按如下获得a)将3-氧代-雄甾-4-烯-17β-羧酸或其衍生物与(±)-1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基胺反应；b)分离所得(22RS)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17β-羧酰胺的两种差向异构体(例如通过硅胶上的快速色谱法)；c)按照已知反应分别将所得的差向异构体转化为最终的通式(I)和(II)差向异构体。
以下反应方案I(C(22)位的绝对构型是推测的)描述了这一合成途径
方案I
d)NaOH，H2O，二噁烷/回流/3he)(COCl)2，T甲苯/RT/3hf)(±)-PhCF3(CH3)CNH2，吡啶，CHCl3/回流/5hg)色谱分离h)KMnO4，NalO4，tBuOH/35-40℃/2h
方案I(续)
i)NH3，(CH2OH)2/0-180℃/2hl)H2/PtO2，AcOH/40-50psi/45-50°m)(PhSeO)2O，PhCl/回流/5h
如下文所述，体外抑制人前列腺睾酮5α-还原酶的生物试验意外地表明，一种差向异构体(分别测试)的活性是另一种的约两倍，而差向异构体混合物如所预料的具有中间活性。
因此，本发明的目的是上述两种通式(I)和(II)差向异构体以及它们作为5α-还原酶抑制剂的用途。
这些差向异构体可用于需要降低雄激素活性的病例，例如治疗和/或化学预防良性前列腺增生和前列腺癌。另外，这些差向异构体也可用于治疗乳腺癌和某些皮肤-头发变化，例如治疗粉刺、脂溢性皮炎、妇女多毛症和男子秃顶。
另外，本发明涉及含有通式(I)或(II)的差向异构体之一或者其混合物(其中一种差向异构体的含量大大超过另一种)以及一种或多种可药用载体和/或稀释剂的药物组合物。
含有本发明化合物的药物组合物通常按照常规方法制备，并且以适当药物形式给药，例如WO94/03475中所述的那些之一。
以下实施例进一步阐明本发明。
实施例1(22RS)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺氮气下，经30分钟在3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾烷-17β-羧酸(7克)的氯仿(100毫升)悬浮液中滴加入亚硫酰氯(SOCl2)(35毫升)的氯仿(15毫升)溶液，在冰水浴中保持反应混合物在约+3℃。室温下搅拌悬浮液1小时，然后真空蒸发挥发性化合物。得到白色固体。
将该固体悬浮在氯仿(330毫升)中，将悬浮液冷却至+3℃；加入吡啶(1.78毫升)，然后加入(±)-1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基胺(7.1克)，将反应混合物加热至60℃并保持4小时，然后于室温搅拌过夜。将反应混合物倒入氯化铵饱和水溶液(500毫升)中，分离有机层，水层用二氯甲烷萃取(2×100毫升)。合并的有机萃取物用水洗涤，以硫酸钠干燥，真空除去溶剂。将粗品在硅胶上通过快速色谱纯化(洗脱液二氯甲烷/丙酮70∶30)，从而得到7.036克(22RS)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺[差向异构体比例50∶50，HPLC(柱Partisphere C8，4.6×250mm；洗脱液乙腈/水50∶50；流速1mL/分钟；检测器210nm UV)]。
实施例2通过制备型HPLC将该混合物分离成单一差向异构体仪器PrepLC/System 500(Water Associates)柱2PrepPAK-500/SILICA洗脱液甲苯/乙酸/甲醇100∶3∶3流速150毫升/分钟检测器折射率因为X射线结晶学尚没有确定单一差向异构体的绝对构型，因此用实验室代码FCE 29330和FCE 29331分别区分第一个洗脱下来的差向异构体(Rfsup.)和第二个洗脱下来的化合物(Rfinf.)。FCE 29330NMR(CDCl3)δ7.50-7.33(m，5H，Ph)，6.78(d，1H，H(1))，5.87(bs，1H，NH(21))，5.82(dd，1H，H(2))，5.48(bs，1H，NH(4))，3.33(dd，1H，H(5a))，2.07(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，0.98(s，3H，Me(19))，0.72(s，3H，Me(18)).[α]D+46.7°(c0.89，无水EtOH)FCE 29331NMR(CDCl3)δ7.50-7.33(m，5H，Ph)，6.78(d，1H，H(1))，5.90(bs，1H，NH(21))，5.82(dd，1H，H(2))，5.48(bs，1H，NH(4))，3.33(dd，1H，H(5a))，2.04(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，0.98(s，3H，Me(19))，0.68(s，3H，Me(18)).[α]D+58.3°(c0.061，无水EtOH)实施例3
将外消旋(±)-1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基胺拆分成单一对映体用(+)-O，O，-二苯甲酰基-D-酒石酸处理外消旋(±)-1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基胺；从异丙醇中结晶出非对映体盐。5次结晶后，得到部分拆分的胺，其中主要是(+)-对映体[对映体比例(+)/(-)＝88/12]。
类似地，从异丙醇中将外消旋胺与(-)-O，O’-二苯甲酰基-L-酒石酸的非对映体盐结晶5次后，得到富含(-)-对映体的胺[对映体比例(+)/(-)＝12/88]。
实施例4将3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾烷-17β-羧酸与富含(+)-对映体的胺[对映体比例(+)/(-)＝88/12]反应，得到FCE 29331和FCE 29330混合物，其中FCE29331/FCE 29330的差向异构体比例为88/12(HPLC确定)。
将3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾烷-17β-羧酸与富含(-)-对映体的胺[对映体比例(+)/(-)＝12/88]反应，得到FCE 29331和FCE 29330混合物，其中FCE29331/FCE 29330的差向异构体比例为12/88(HPLC确定)。
实施例5(22RS)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17β-羧酰胺(化合物(VI))在冷却至10℃的3-氧代-雄甾-4-烯-17β-羧酸(化合物(IV))(2.00克)的甲苯(28毫升)和吡啶(0.640毫升)悬浮液中经10分钟加入草酰氯(0.68毫升)的甲苯(4毫升)溶液。除去冷却浴，将混合物于室温搅拌1.5小时。在低于40℃的温度减压除去挥发性化合物。将所得酰氯(化合物(V))溶于氯仿(100毫升)，于冰水浴中冷却；加入三乙胺(0.876毫升)，然后加入(±)-1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基胺(2.375克)的氯仿(4毫升)溶液。加热回流反应混合物4小时。将反应混合物倒入冷却的饱和氯化钠水溶液(200毫升)中，用二氯甲烷萃取(3×100毫升)；有机萃取物用水洗涤，以硫酸钠干燥，减压除去溶剂。得到2.150克标题化合物。
在硅胶上通过快速色谱分离两种差向异构体(洗脱液正己烷/乙酸乙酯70∶30)，得到770毫克较少保留(Rfsup.)的差向异构体和700毫克较多保留(Rfinf.)的差向异构体。
按照类似方法，用富含(+)-对映体的胺[对映体比例(+)/(-)＝88/12]可获得Rfinf.和Rfsup.差向异构体间具有相同差向异构体比例的最终化合物。该事实表明(+)-胺产生Rfinf.差向异构体。
类似地，用富含(-)-对映体的胺可得到富含Rfsup.差向异构体的最终化合物。
化合物(VIb)(Rfsup.)NMR(CDCl3)δ7.50-7.30(m，5H，Ph)，5.86(bs，1H，NH(21))，5.75(m，1H，H(4))，2.08(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，1.20(s，3H，Me(19))，0.76(s，3H，Me(18)).[α]D+187°(cl，无水EtOH)化合物(VIa)(Rfinf.)NMR(CDCl3)δ7.50-7.30(m，5H，Ph)，5.90(bs，1H，NH(21))，5.75(m，1H，H(4))，2.04(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，1.20(s，3H，Me(19))，0.72(s，3H，Me(18)).[α]D +126°(c1，无水EtOH)17β-[N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)氨基甲酰基]-5-氧代-4-去甲-3，5-断雄烷-3-酸(Rfinf.)(化合物(VIIa))于约40℃，在N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17β-羧酰胺(Rfinf.)(化合物(VIa))(1.70克；3.486毫摩尔)的叔丁醇(40毫升)溶液和2M碳酸钠水溶液(2.09毫升)中经约5分钟同时滴加入2％高锰酸钾水溶液(1.8毫升)和0.75M偏高碘酸钠水溶液(30毫升)，加入的速率应使反应混合物一直保持粉红色。在40℃搅拌1小时15分钟后，将反应混合物冷却至室温，过滤，通过真空蒸发将叔丁醇从滤液中除去(收集到40毫升溶剂)。然后将溶液冷却至约0℃，用水稀释，以1N盐酸酸化并用乙酸乙酯(4×30毫升)和二氯甲烷(2×30毫升)萃取；收集到的有机萃取物用水(2×30毫升)、盐水(20毫升)洗涤，用硫酸钠干燥。蒸发溶剂后得到固体状泡沫，通过快速色谱纯化(洗脱液∶正己烷/乙酸乙酯50∶50)而得到1.656克白色固体化合物。NMR(CDCl3)δ7.30-7.50(m，5H，Ph)，5.90(bs，1H，NH)，2.04(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，1.12(s，3H，Me(19))，0.71(s，3H，Me(18)).MS(FAB+)(m/z)508[M+H]+，490[M-H2O+H]+，336[M-C(CF3)CH3Ph+2H]+，173 PhCH3(CF3)C+[α]D+108.2°(c1，无水乙醇 )按照类似方法，以N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17β-羧酰胺(Rfsup.)(化合物(VIb))开始，可得到差向异构体化合物(化合物VIIb)NMR(CDCl3)δ7.30-7.50(m，5H，Ph)，5.88(bs，1H，NH)，2.08(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，1.14(s，3H，Me(19))，0.78(s，3H，Me(18)).[α]D+80°(c1，无水乙醇)N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮杂-雄甾-5-烯-17β-羧酰胺(Rfinf.)(化合物(VIIIa))在0℃用无水氨气将17β-[N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)氨基甲酰基]-5-氧代-4-去甲-3，5-断雄烷-3-酸(Rfinf.)(化合物(VIIa))(1.540克)的无水乙二醇(35毫升)悬浮液饱和断酸完全溶解。将所得溶液经1小时10分钟缓慢加热至180℃，并在该温度保持20分钟。然后经0.5小时使温度达室温。在彻底搅拌下将黄色溶液冷却至约0℃最终化合物开始沉淀。用水(30毫升)稀释后，于0℃继续搅拌0.5小时，过滤沉淀物，用水洗涤。得到1.36克淡褐色固体，在硅胶上通过快速色谱纯化(洗脱液∶正己烷/乙酸乙酯50∶50)，得到1.090克标题化合物。NMR(CDCl3)δ7.50-7.30(m，5H，Ph)，5.88(bs，1H，NH)，4.81(m，1H，H(6))，2.06(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，1.12(s，3H，Me(19))，0.71(s，3H，Me(18)).[α]D+48.5°(c1，无水乙醇)按照类似方法，以17β-[N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)氨基甲酰基]-5-氧代-4-去甲-3，5-断雄烷-3-酸(Rfsup.)(化合物(VIIb))开始，得到差向异构体化合物(化合物VIIIb)NMR(CDCl3)δ7.50-7.30(m，5H，Ph)，5.88(bs，1H，NH)，4.78(m，1H，H(6))，2.09(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，1.12(s，3H，Me(19))，0.74(s，3H，Me(18)).[α]D-2°(c1，无水乙醇)N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾烷-17β-羧酰胺(Rfinf.)(化合物(IXa))45℃时，在PtO2(Adams’催化剂)(140毫克)存在下于45psi压力的氢气下将N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮杂-雄甾-5-烯-17β-羧酰胺(Rfinf.)(化合物(VIIIa))(700毫克)的冰醋酸(45毫升)溶液氢化1小时。将反应混合物冷却至室温，滤除催化剂，减压除去溶剂。用二氯甲烷溶解残余物，用1N硫酸、盐水、碳酸钠水溶液、盐水、水洗涤，硫酸钠干燥，真空除去溶剂。将所得粗制固体在硅胶上通过快速色谱纯化(洗脱液甲苯/乙酸乙酯/甲醇75∶20∶5)而得到420毫克标题化合物。NMR(CDCl3)δ7.50-7.30(m，5H，Ph)，5.88(bs，1H，NH(21))，5.55(bs，1H，NH(4))，3.06(dd，1H，H(5a))，2.05(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，0.92(s，3H，Me(19))，0.68(s，3H，Me(18)).[α]D+12°(c1，无水乙醇)按照类似方法，从N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾-5-烯-17β-羧酰胺(Rfsup.)(化合物(VIIIb))开始，得到差向异构体化合物(化合物(IXb))NMR(CDCl3)δ7.50-7.30(m，5H，Ph)，5.88(bs，1H，NH(21))，5.55(bs，1H，NH(4))，3.06(dd，1H，H(5a))，2.05(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，0.92(s，3H，Me(19))，0.71(s，3H，Me(18)).[α]D+62°(c1，无水乙醇)N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺(Rfinf.)(FCE 29331)在N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾烷-17β-羧酰胺(Rfinf.)(化合物(IXa))(106毫克)的氯苯(5毫升)溶液中加入苯基亚硒酸酐(108.3毫克)。将溶液回流5小时，同时通过Marcusson装置除去水。蒸发溶液，将残余物溶于二氯甲烷中，用碳酸钠水溶液、饱和氯化钠溶液及水洗涤，硫酸钠干燥。蒸发溶剂后，将粗品通过快速色谱纯化(洗脱液甲苯/乙酸乙酯/甲醇75∶20∶5)而得70毫克标题化合物。NMR(CDCl3)δ7.50-7.33(m，5H，Ph)，6.78(d，1H，H(1))，5.90(bs，1H，NH(21))，5.82(dd，1H，H(2))，5.48(bs，1H，NH(4))，3.33(dd，1H，H(5a))，2.04(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，0.98(s，3H，Me(19))，0.68(s，3H，Me(18)).[α]D+46°(c1，CHCl3)按照类似方法，从N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾烷-17β-羧酰胺(Rfsup.)(化合物(IXb))开始，得到差向异构体化合物FCE29330NMR(CDCl3)δ7.50-7.33(m，5H，Ph)，6.78(d，1H，H(1))，5.87(bs，1H，NH(21))，5.82 dd，1H，H(2))，5.48(bs，1H，NH(4))，3.33(dd，1H，H(5a))，2.07(s，3H，C(CF3)CH3Ph)，0.98(s，3H，Me(19))，0.72(s，3H，Me(18)).[α]D+21°(c1，CHCl3)如该实施例所示，从(+)-胺获得FCE 29331，而FCE 29330是从(-)-胺获得的。
体外5α-还原酶抑制试验用来自增生人前列腺组织匀浆的粒状部分作为酶源评价对5α-还原酶的抑制。在140,000×g将前列腺组织匀浆离心而制备粒状部分。将所得颗粒洗涤数次后再悬浮在缓冲液中，以含有约10mg蛋白质/毫升的等分保存在-80℃。
在pH 5.5的40mM TRIS-HCl缓冲液中于0.5毫升的终体积进行5α-还原酶试验，该缓冲液含有1mM二硫苏糖醇、5mM NADPH、1uM[14C]睾酮、等分酶制剂和不同浓度的抑制剂。在37℃孵育30分钟后，加入2毫升冷乙醚终止反应，分离有机相，于氮气下蒸发，再悬浮于乙酸乙酯中。在硅胶F 254板(Merck)上TLC分离该提取物中的睾酮代谢产物，用氯仿、丙酮和正己烷(2∶1∶2)作为展开溶剂系统。
记录板上的放射性，通过TLC-分析仪(Berthold)描绘的定量图分析。通过比较5α-还原代谢产物(5α-二氢睾酮、3α-和3β-雄甾烷二醇)区域中的14C-放射性和睾酮及5α-还原代谢产物区域的总放射性计算睾酮5α-还原作用分数。50％降低对照5α-还原酶活性所需每一化合物的浓度(IC50)通过绘制％抑制对抑制剂浓度的对数值(log)来确定。
单一差向异构体FCE 29330和FCE 29331所得结果以及外消旋混合物FCE 28260所得结果如下表1所示。
表1FCE 28260的立体异构体对人前列腺5α-还原酶的体外抑制化合物 IC50(nM)FCE 2826012FCE 2933017FCE 293318从表1所示结果可看出，差向异构体FCE 29331的活性是另一差向异构体FCE 29330活性的约2倍。混合物FCE 28260，正如所料，表现出中间活性。
权利要求
1.通式(I)和(II)的差向异构体
即(22R)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺[通式(I)化合物]和(22S)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺[通式(II)化合物]。
2.一种制备权利要求1的通式(I)或(II)的差向异构体的方法，包括从相应差向异构体混合物中分离单一差向异构体。
3.一种制备权利要求1的通式(I)或(II)的差向异构体的方法，包括将3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酸与先前已拆分的1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基胺的单一对映体反应。
4.一种制备权利要求1的通式(I)或(II)的差向异构体的方法，包括a)将3-氧代-雄甾-4-烯-17β-羧酸或其衍生物与(±)-1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基胺反应；b)分离所得(22RS)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-雄甾-4-烯-17β-羧酰胺的两种差向异构体；c)按照已知反应分别将所得的差向异构体转化为最终的通式(I)和(II)差向异构体。
5.一种含有权利要求1的通式(I)或(II)的差向异构体之一或者其混合物以及一种或多种可药用载体和/或稀释剂的药物组合物，其中在混合物中一种差向异构体的含量大大超过另一种。
6.一种权利要求1的通式(I)或(II)化合物，用作睾酮5α-还原酶抑制剂。
7.一种权利要求1的通式(I)或(II)化合物，用作为抗雄激素药物。
8.一种权利要求1的通式(I)或(II)化合物，用在治疗和/或化学预防良性前列腺增生或前列腺癌中。
9.一种权利要求1的通式(I)或(II)化合物，用在治疗乳腺癌、粉刺、脂溢性皮炎、妇女多毛症和/或男子秃顶中。
全文摘要
本发明涉及以下差向异构体可用作睾酮5α-还原酶抑制剂的(22R)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺和(22S)-N-(1，1，1-三氟-2-苯基丙-2-基)-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-羧酰胺，并且涉及它们的制备方法和含有它们的药物组合物。
文档编号A61K31/58GK1159195SQ96190785
公开日1997年9月10日 申请日期1996年6月28日 优先权日1995年7月21日
发明者A·潘泽里, M·奈西, E·迪·萨勒 申请人:法玛西雅厄普约翰公司