专利名称：：作为药物的反式阿朴长春蔓宁酸酯衍生物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及新的下式所代表的外消旋的和旋光活性的反式阿朴长春蔓宁酸酯衍生物及其治疗上可接受的盐和含有这些化合物的药物组合物其中R为氢或Z-C=O基团，其中Z代表C1-4烷基，取代或未取代的芳基、芳基烷基、杂环芳基或14-象牙(洪达木)烯宁基；而n为2，3或4的整数此外，本发明还涉及制备上述的化合物和组合物的方法。本发明的化合物是新的并具有很高价值的生物学活性。在体外条件下，这些化合物表现了显著的抗氧化(脂质过氧化)作用。在活体条件下进行的研究表明，这些化合物具有显著的抗局部缺血和抗遗忘作用。相应地，本发明涉及一种治疗方法，包括以治疗有效量的式(Ⅰ)的化合物或其药学上可接受的盐向接受治疗的患者给药。在式(Ⅰ)中在R的定义中作为C1-4烷基的Z可以代表直链或支链的饱和或不饱和基团，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、乙烯基、丙烯基等；作为芳基的Z可以是例如苯基；作为芳基烷基，Z可以代表苄基、二苯基甲基等；作为杂环芳基，Z可以是含有相同或不同杂原子(例如氮、氧或硫原子)的5-、6-或7-员环基，例如吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡喃基、吡唑基、咪唑基、嘧啶基、吗啉基等。上述的芳基、芳基烷基、杂环芳基的取代基可以是卤素，例如氟、氯或溴；C1-4烷基或C1-4烷氧基；以及羟基、硝基、氨基、氰基、三氟甲基等。本发明的式(Ⅰ)的化合物的医疗上可接受的盐可以是酸加成盐或季盐。用作原料物质的式(Ⅱ)的阿朴长春蔓宁酸衍生物可以通过用酸处理英国专利说明书GB2，124，214中所述的一种适当的羟亚氨基八氢吲哚并[2，3-a]喹嗪衍生物而制得。从文献中已知有与式(Ⅰ)的化合物结构相关的化合物。在匈牙利专利说明书186，891中描述了具有消炎、抗痉挛、抗帕金森氏病和抗粥样硬化作用的反式阿朴长春蔓宁酸的酯。在匈牙利专利说明书187，733中公开了具有抗缺氧或血管扩张作用的、带有各种侧链的阿朴长春蔓宁酸衍生物。与上述的文献中已知的物质相反，新的反式阿朴长春蔓宁酸酯衍生物具有显著的抗氧化、抗遗忘和抗局部缺血作用。中枢神经系统(CNS)正常功能的发挥要求保持血液循环的连续性，因为这确保了大脑组织大量葡萄糖和氧气的适当供应。由于局部缺血和再灌注，识别功能受到损伤根据局部缺血的严重程度和持续时间，可逆的和不可逆的损伤都可能发生。神经细胞膜的结构和功能的损伤可能导致神经元的死亡。由于局部缺血可导致几种病理学过程例如自由基的形成。自由基的形成可导致作为膜的重要成分的不饱和脂肪酸的氧化(脂质过氧化)。这是一种能改变或损伤生物分子的特异性小的细胞破坏过程，因此，细胞、器官或整个有机体的各级功能都可能受到损伤。自由基反应可能在几种局部缺血诱导的损伤(例如缺血性肠道病、心肌缺血、出血性休克、伴随局部缺血而出现的脑血管功能紊乱、缺血性肝脏损伤、肾缺血等)的致病机理中起着因果关系的作用。由于抗氧化剂化合物具有抑制脂质过氧化的作用，它们能保证组织在局部缺血条件下不受由自由基诱导的损伤。因此，作为抗局部缺血剂的抗氧化剂可用于上述的疾病治疗。抗氧化剂作用的体外研究试验通过两种方法对抗氧化剂作用进行了研究1．对大脑微粒体中NADPH诱导的脂质过氧化的影响J．M．Braughler等新的21-氨基类固醇作为依赖于铁的脂质过氧化作用的强有力的抑制剂[J．Biol．Chem．262，10438-10440(1987)]。T．J．Player和A．A．Horton大鼠大脑的微粒体部分中酶脂质过氧化作用[J．Neuronchem．37，422-426(1981)]。体重为150-250g的雄性Hannover-Wistar大鼠用于制备微粒体。断头后，取出整个大脑，在10倍体积的冰冷的0．25M的糖溶液中匀浆。匀浆液用HitachiCR26H仪器以15000g的转速在4℃离心10分钟，然后收集上清液并用HitachiSCP85H仪器以78000g的转速在4℃离心60分钟。把沉淀物悬浮于0．15M的KCl溶液中，然后测定得到的溶液的蛋白含量，在把蛋白浓度调整到10mg／ml的浓度。这样得到的微粒体放在干燥的冰-丙酮混合物中冷冻并在-70℃贮存待用。温育混合物的成分为50mMTRIS-HCl(pH6．8)，0．2mMFeCl3，1mMKH2PO4，0．5mMADP，0．2mg的微粒体及待试验的化合物。温育在37℃下进行，温育时间20分钟，最终体积1ml。通过加入0．4mM的NADPH来诱导脂质过氧化作用(空白样品不含有NADPH)。通过加入0．375ml的含有40％的三氯乙酸和5M盐酸(2∶1)的终止液来终止反应。用硫代巴比土酸测定生成的丙二醛。终止反应后，称重1ml的1％的硫代巴比土酸，加入到各样品中，然后在100℃的水浴中放置10分钟。然后，用JanetzkiK70仪器以2000g的转速在4℃离心10分钟，用Hitachi150-20光谱仪在535nm处测定有颜色的上清液的吸收值，丙二醛双(二乙缩醛)用作参照化合物。2．对大脑匀浆液中Fe2+引发的脂质过氧化作用的影响把每只重为150-250g的Hannover-Wistar大鼠断头后，整个大脑在9倍体积的冰冷的含有15mMHEPES，(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基乙磺酸)(pH7．4)，140mMNaCl，3．6mMKCl，1．5mMCaCl2，0．7mMMgCl2，1．4mMKH2PO4和10mM葡萄糖的Krebs-Ringer缓冲液中匀浆，然后测定溶液的蛋白含量并把蛋白浓度调整到10mg／ml的浓度。把5μl待试验的抑制剂加入到200μl的匀浆液中，温育混合物在37℃温育20分钟。通过加入5μl8mM的Fe2(NH4)2(SO4)2来实现Fe2+引发的脂质过氧化作用。温育时间过后，通过加入1ml含有0．8M盐酸和12．5％的三氯乙酸的终止液来终止反应，然后样品用JanetzkiK70仪器以2000g的转速在4℃离心10分钟。向0．5ml的上清液中加入1ml的1％的硫代巴比土酸溶液，然后样品在100℃的水浴中放置20分钟。以丙二醛双(二乙缩醛)用作参比化合物，用Hitachi150-20光谱仪在535nm处测定产生的色度。以试验化合物的浓度／作用关系为基础，测定IC50值，表1中示出了两种方法的测定结果。表1从表1的数据可以看出，本发明的每个试验化合物都表现了抗氧化作用(抑制脂质过氧化作用)活性。同时用酶催化的(NADPH诱导的，AEI)脂质过氧化试验和非酶催化的(Fe2+诱导的，ANI)脂质过氧化试验研究了抗氧化作用。化合物的抗氧化活性水平用其IC50值来表征。把具有大脑保护作用的艾地苯醌、天然的抗氧化剂维生素E(DL-α-生育酚)和具有肝脏保护作用的水飞蓟素用作参比化合物。根据表1中的数据，在抑制NADPH(酶催化)诱导的脂质过氧化作用方面，试验化合物表现了比参比化合物更高的活性，正如表中所示，试验化合物的IC50值比DL-α-生育酚或水飞蓟素的IC50值低得多。其中证明是很有效的的化合物中，化合物No．2705279，1010961，1011088，1011037和1011047的抗氧化作用与艾地苯醌相当。化合物No．1010885，1010962，1010960，1011005，1010887，1010886，1011038，1011036和2705283抑制NADPH诱导的脂质过氧化作用的能力大约是水飞蓟素的20倍。绝大多数的表1中所列的化合物表现了比参比化合物大得多的抑制Fe2+诱导(非酶催化)的脂质过氧化的作用。化合物No．2705279，2705283，2705284，1010962，1010960，1010961，1010887，1010886，1011038和1010336证明是特别有活性的，因为它们中的每一个的活性都大约为艾地苯醌或DL-α-生育酚的两倍。化合物No．1011005和1011037的抗氧化作用与DL-α-生育酚相似。化合物No．1010885和1011047Fe2+离子诱导的脂质过氧化的作用强于艾地苯醌。化合物No．1011008的抗氧化活性也大于水飞蓟素。通过比较两种体外试验得到的数据，可以认为化合物No．2705279，1010962，1010960，1010961，1010886，1011038和1011336很显著地抑制以不同反式(通过Fe2+离子或NADPH)诱导的脂质过氧化作用，即证明这些化合物的IC50值低于10μM。由于在两种试验中没有一个参比化合物能产生这样的作用(即它们抑制NADPH-或Fe2+-离子诱导的脂质过氧化的作用达到不同的量级)，可以认为本发明的化合物比参比化合物更有效。由于每个被研究的化合物都能抑制通过在Fenton反应(Fe2+催化的)中或在NADPH-细胞色素c还原酶的活性期间产生的自由基引发的脂质过氧化作用，所以它们都具有显著的抗氧化剂功效。缩写NADPH还原型的磷酸烟酰胺-腺嘌呤二核苷酸TRIS三(羟甲基)氨基甲烷ADP腺苷-5′-二磷酸艾地苯醌6-(10-羟基癸基)-2，3-二甲氧基-5-甲基-1，4-苯醌DL-α-生育酚2，5，7，8-四甲基-2-(4′，8′，12′-三甲基三癸基)-6-苯并二氢呋喃醇鞣花酸2，3，7，8-四羟基[1]苯并吡喃并[5，4，3-cde][1]苯并呋喃-5，10-二酮水飞蓟素水飞蓟素+异水飞蓟素+次水飞蓟素AEI酶催化(NADPH-)引发的脂质过氧化试验ANI非酶催化(Fe2+)引发的脂质过氧化试验用于研究抗局部缺血和抗健忘作用的体外试验1．抗局部缺血作用(两侧动脉结扎模式)N．Himori等涉及NMDA受体活化及学习和记忆能力错乱的有意识的老鼠的大脑局部缺血模式[J．Pharmacol．Meth．23，311-327(1990)]。用450mg／kg的腹膜注射的(i．p．)水合氯醛使老鼠(每只重30-32g)的颈动脉两侧暴露于麻醉剂下，分开交感神经和迷走神经，在颈动脉下两侧进行宽松结扎，结扎的两头拉出放到背上耳朵下。第二天，在清醒状态下，把结扎的两头拉出使得通过颈动脉的血液供应停止，这种情况持续5分钟，然后松开使血液再灌注，记录这5分钟期间和以后的24小时内死亡的动物数。显著性计算通过chi2试验进行。在结扎前30分钟，预先进行腹膜注射(i．p．)化合物。表2中列出了2mg／kg剂量的腹膜注射的化合物对两侧动脉结扎引起的死亡率的影响。表2表3中列出了参比化合物和腹膜给药的最有效的化合物的ED50值。表3以两侧动脉结扎引起的大脑局部缺血模式研究了在体外条件下具有显著的抗氧化作用的化合物在体内的生物学活性。大脑血液供应的瞬时的急骤下降，然后停止结扎后开始再灌注导致形成极其有毒的氧自由基(超氧化物自由基，过氧化氢)。具有抗氧化性能的化合物在保护机体免受自由基的毒害方面是很有效的。5分钟的两侧颈动脉结扎引起导致了70％的死亡率。2mg／kg剂量的腹膜注射的本发明的最有效的化合物(2705279，1010960，1010887，1010886)使该死亡率下降到10-30％；而已知的用作参比化合物的抗氧化剂(例如艾地苯醌或维生素E)在同样的剂量下活性要小得多。发现具有优良活性的化合物No．2705279是最有效的，当比较化合物的ED50值时尤其引人注目[ED50是与未经处理的对照组相比，使死亡率降低50％时的剂量(单位mg／kg)。腹膜注射的艾地苯醌的ED50值为4．5mg／kg，而腹膜注射的化合物No．2705279的该值为0．76mg／kg。也可以在口服给药后测定该化合物的抗局部缺血作用。在其它的试验中也表明，该化合物不仅在涉及整个大脑物质的完全的局部缺血模式中是活性的，而且在精确定位的大脑区域中引起的所谓的“聚焦的”局部缺血模式中也是活性的。本发明的化合物的抗健忘作用通过下列的试验得到证实。2．安定诱导的顺行健忘C．L．Broekkamp等苯并二吖庚因、氟柳双胺和PK9084对老鼠获得被动性免疫的影响的比较[Psychopharmacology(Berlin)83，122-125(1984)]。用被动性免疫方法在每只重25-28g的NMRI老鼠身上进行记忆试验，该方法基于啮齿类动物的遗传决定的嗜夜行为。在学习期间，把预先选定的动物(在30秒内从明亮的空间进入黑暗的空间的老鼠)置于一个明亮的空间，进入黑暗的空间后，让动物在30秒内从跎足接受电击(1mA的电流持续3分钟)，然后记录进入黑暗的空间前的时间(潜伏期)。24小时后，再次把动物放入明亮的空间，测定转入黑暗的空间前的时间(保留时间=T，时间限度为300秒)。为了诱导顺行健忘，在学习前30分钟，给动物腹膜注射3mg／kg的安定，学习前1小时，以0．1或10mg／kg的剂量给动物口服化合物，用下式的方法计算保护效果(P％)的百分值并列于表4中。表4在安定诱导的顺行健忘模式中化合物的作用</tables>具有抗氧化活性的化合物在大脑局部缺血[瞬时的局部发作(TIA)，中风]中发挥了显著的保护作用，其中除各种程度不同的神经综合症外，还可能发生学习和记忆损伤。通过使用结构相似的而且正在临床实践中使用的长春西汀作为参照化合物，以安定诱导的顺行健忘模式研究了本发明的化合物的抗健忘效果。在反式-α-乙基-和反式-β-乙基-阿朴长春蔓宁酸衍生物中都发现了活性化合物。化合物No．2705279，1010886，1011038和1010887证明是特别有效的。活性最好的物质是2705279，该化合物在所用的两种剂量下都表现了显著的保护作用，其保护作用远大于长春西汀。在其它的健忘模式中也证实了2705279的抗健忘效果在电击诱导的顺行健忘模式中，通过口服0．1-10mg／kg范围的剂量，2705279显示了依赖于剂量的保护作用；口服0．1-10mg／kg范围的剂量，2705279保护免受局部缺血引起的记忆损伤。化合物的抗健忘作用也可以在大鼠中测定。概要本发明的新的反式阿朴长春蔓宁酸衍生物具有显著的抗氧化剂作用和抗局部缺血作用。发现化合物No．2705279的抗氧化剂活性是最有效的，其体外活性和在活体中的活性都超过了分别被用作参比化合物的艾地苯醌或长春西汀。本发明的化合物除具有抗氧化剂和抗局部缺血作用外，还具有不同程度的抗健忘作用，在这方面也是化合物No．2705279的活性最强。由于本发明的化合物具有抗氧化剂、抗局部缺血作用和抗健忘作用，它们可被用于治疗各种疾病，其中自由基在疾病的尖锐期或晚期后遗症的发展中起作用。这些疾病是脑血管局部缺血、中风、卒中、大脑损伤或脊柱损伤、蛛网膜下出血或大脑内出血以及各种退行性神经疾病，例如早老性痴呆症。由于这些化合物具有抗局部缺血作用，它们不仅可用于治疗局部缺血性大脑损伤，而且还能用于治疗其它器官(例如肝脏、心脏或肌肉)的局部缺血性损伤。在上述的临床综合症中，期望本发明的化合物的治疗剂量为0．1-40mg／kg体重，以口服或胃肠外给药途径，每天一次或分几次给药。本发明的新的式(Ⅰ)的反式阿朴长春蔓宁酸酯衍生物及其治疗上可接受的盐可以通过使一种外消旋的或旋光活性的下式的反式阿朴长春蔓宁酸酯衍生物在一种碱性催化剂的存在下，在一种合适的二元醇中发生酯交换反应而制备其中R1代表C1-4的烷基；以及如果需要的话，使所得的其中R为氢的式(Ⅰ)的化合物进行酰化，以及／或如果需要的话，拆分式(Ⅰ)的外消旋化合物，以及／或如果需要的话，把式(Ⅰ)的化合物转变为其治疗上可接受的盐。下面将详细地描述本发明的新的用于治疗的活性化合物。在本发明的制备其中R代表氢的式(Ⅰ)的化合物的方法中，使式(Ⅱ)的一种化合物发生酯交换反应。该反应在过量的酯交换醇、例如一种合适的二元醇、优选乙二醇的存在下，在催化量的一种强碱的存在下，在合适的无水条件下进行。对于碱，可使用碱金属氢化物或碱金属烷氧化物、合适的叔烷氧化物，优选例如叔丁醇钾。酯交换反应在80-140℃的温度范围进行，优选在110-120℃的温度范围进行。如果需要的话，把进行酯交换反应后得到的产物用于下一步的反应中而不需要分离；或者如果需要的话，可以这样回收得到的产物，即把反应混合物倒入水中，过滤后，如果需要的话，通过重结晶纯化沉淀物；或者，用水稀释后，反应混合物用一种惰性的、与水不相容的有机溶剂(例如二氯甲烷或氯苯)萃取，然后通过蒸馏或成盐来分离出产物。可以通过酰化使其中R为氢的式(Ⅰ)的化合物转变为其中R为Z-C=O基团的式(Ⅰ)的化合物。酰化反应可以通过使用任何包含合适的酰基的有机羧酸或者用其活性的衍生物(例如酰卤、优选酰氯，或酸酐等)，按照已知的方式，在缚酸剂的存在下进行。在用合适的羧酸进行酰化时，反应在缩合剂的存在下，在惰性的有机溶剂(例如偶极的非质子性溶剂，如二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、乙腈等)中进行。可使用的缩合剂例如是碳酰二亚胺的衍生物，例如二环己基碳酰二亚胺或羰基二咪唑。反应在0-40℃的温度、优选在室温下进行。假如反应用酰卤、合适的酰氯进行，则反应在惰性的有机溶剂(例如脂肪醚或环醚，如二乙醚或四氢呋喃(THF)；或氯代烃，例如氯仿；或芳香烃，例如苯、氯苯会甲苯；或有机碱，例如吡啶)中进行，优选在缚酸剂的存在下进行。在反应中使用的有机碱(例如吡啶)可以同时起到溶剂和缚酸剂的作用。其中R为Z-C=O基团的式(Ⅰ)的化合物可以按照下列的方式从溶剂中回收得到。除去溶剂后，或者如果需要的话，除去过量的反应试剂和缚酸剂后，把得到的残留物溶于一种水和一种与水不相容的溶剂(例如乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、苯、二乙醚等)，然后，如果需要的话，通过加入氢氧化铵水溶液或碱金属的碳酸氢盐溶液把混合物的pH值调节到弱碱性(pH8到9)，并分离两相。有机相用水洗涤、干燥，在减压下除去溶剂，得到所要的化合物。如果需要的话，可以把本发明的式(Ⅰ)的化合物转变为季盐。使用稍高于等摩尔量的烷基卤化物，优选使用氯化物、溴化物、碘化物或硫酸烷基酯以形成季盐。该反应可以在一种惰性的、有机的、偶极的非质子性溶剂溶剂中进行。如果需要的话，通过使用任何可用于形成治疗上可接受的酸加成盐的酸，按照已知的方式，可以把式(Ⅰ)的化合物转变为其酸加成盐。如果需要的话，可以使按照本发明的方法制备的式(Ⅰ)的化合物接受进一步的纯化操作，例如重结晶。可用于重结晶的溶剂范围依赖于要结晶的化合物的溶解性和结晶性能。本发明的新的式(Ⅰ)的反式阿朴长春蔓宁酸酯衍生物可以是外消旋的或旋光活性的。通过使用式(Ⅱ)的旋光活性的化合物作为反应物，可以得到式(Ⅰ)的旋光活性的化合物；其中把式(Ⅱ)的旋光活性的化合物用作反应物时，得到式(Ⅰ)的外消旋的化合物。用己知的方法，通过拆分可以从式(Ⅰ)的外消旋体得到旋光活性的化合物。通过把新的外消旋的或旋光活性的式(Ⅰ)的反式阿朴长春蔓宁酸酯衍生物或其盐与无毒的、惰性的固体或液体载体和／或其它的常用于胃肠外给药或肠道给药的治疗的辅剂混合，可以使其转变为药物组合物。可用的载体例如为水、明胶、乳糖、淀粉、果胶、硬脂酸镁、硬脂酸、滑石、植物油(例如花生油、橄榄油)等。可以把活性成分制成任何常用的药物组合物、特别是固体组合物，例如片剂、糖衣丸、胶囊、栓剂等。固体载体的数量可以在很宽的限度内变化，优选地，固体载体的数量为大约25mg-1g。组合物还可以选择性地含有常用的其它药物辅剂，例如稳定剂、防腐剂、润湿剂、表面活性剂、乳化剂等。该药物组合物可以用常用的制药技术，按照已知的方式制备，而且，如果需要的话，可以使该组合物接受其它常规的处理，例如灭菌。借助于下列的非限定性的实施例，可以详细地说明本发明。实施例1(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)的制备在120℃下，在1g叔丁醇钾的存在下，在300ml的乙二醇中搅拌15g(0．045摩尔)(-)-反式阿朴长春蔓宁酸甲酯(3β，16α)5小时，然后把反应混合物冷却到室温，将混合物倒入1升的冰水中，过滤出结晶沉淀，每次用50ml水洗涤两次，干燥，得到15．9g(产率97％)的标题化合物，熔点82-87℃；[α]D20=-138．7℃(c=0．2；氯仿)。1H-NMR(CDCl3)δ0．65(3H，t，CH3CH2)；0．66-3．2(14H，m，骨架质子，OH)；3．85(2H，m，HO-CH2)；4．43(2H，m，CH2-O-C=O)；6．35(1H，s，H-15)；7．00-7．55(4H，m，芳烃质子)。元素分析C22H26N2O3(分子量366．44)计算值C72．10；H7．15；N7．65％；测定值C71．89；H7．15；N7．62％；实施例2(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-乙酰氧基乙基酯(3β，16α)-盐酸盐的制备向含有3．66g(0．01摩尔)的(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)溶于50ml的无水吡啶的溶液中，滴加入5ml(0．052摩尔)的乙酸酐，使反应混合物在室温下静置过夜，然后在减压下蒸干。把蒸馏的残留物溶于100ml的乙酸乙酯、30ml的水和50ml的饱和碳酸氢钠溶液的混合物后，分离两相。有机层每次用20ml水洗涤3次，并用无水硫酸钠干燥。通过加入氯化氢的乙醇溶液把蒸馏的残留物溶于30ml异丙醇的溶液酸化到pH4，置于冰箱中静置过夜，然后过滤出结晶沉淀物，并干燥，得到2．8g(产率62％)的标题化合物，熔点179-189℃；[α]D20=-118．9℃(c=0．2；甲醇)。1H-NMR(CDCl3)δ0．75(3H，t，CH3CH2)；2．1(3H，s，CH3CO)；4．28(1H，s，H-3)；6．28(1H，s，H-15)；4．30-4．70(4H，m，-OCH2CH2CH2O-)；7．05-7．60(4H，m，芳烃质子)。实施例3(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-(2-硫代苯酰氧基)乙基酯(3β，16α)-盐酸盐的制备向通过在室温下把3．66g(0．01摩尔)的(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)溶于20ml的无水吡啶而制备的溶液中，滴加入4．8ml(0．045摩尔)的氯化硫代苯基-2-羧酸，使反应混合物静置24小时，然后在减压下蒸干。向蒸馏的残留物中加入100ml的二氯甲烷和30ml的水。通过加入20ml的饱和碳酸氢钠溶液把pH调节到9。分离两相后，有机相用水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，在减压下把溶液蒸干，将残留物溶于50ml异丙醇中，并通过加入氯化氢的乙醇溶液把溶液的pH调节到4。在冰箱中静置过夜后，过滤溶液，结晶沉淀物用冷的异丙醇洗涤，得到2．9g(产率57％)的标题化合物，熔点178-183℃；[α]D20=-113．9℃(c=0．2；氯仿)。实施例4(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-(4-硝基苄氧基)乙基酯(3β，16α)的制备向通过在室温下把3．66g(0．01摩尔)的(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)溶于20ml的无水吡啶而制备的溶液中，滴加入4．2g(0．0225摩尔)的4-硝基苯甲酰，使反应混合物静置24小时。反应混合物用150ml的乙酸乙酯稀释后，加入50ml的水和3ml的浓氢氧化铵溶液。分离两相后，有机相每次用25ml水洗涤4次，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，在减压下把溶液蒸干，将油状的残留物溶于50ml热的异丙醇中，加活性炭澄清，过滤后把溶液静置几小时。过滤出结晶沉淀物，用10ml异丙醇洗涤并干燥，得到2．6g(产率58％)的标题化合物，熔点139-142℃；[α]D20=-86．7℃(c=0．2；氯仿)。实施例5(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-(尼古丁酰氧基)乙基酯(3β，16α)二盐酸盐的制备向含有2．4g(0．0065摩尔)的(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)溶于20ml的无水吡啶的溶液中，滴加入2．15g(0．015摩尔)的尼古丁酰氯溶于10ml的吡啶的溶液，反应混合物在室温下搅拌3小时，然后在减压下蒸干。把蒸馏的残留物溶于150ml的乙酸乙酯和50ml的饱和碳酸氢钠溶液后，分离两相，有机层每次用20ml水洗涤2次，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，在减压下把溶液蒸干，将蒸馏的残留物溶于30ml异丙醇中，并通过加入氯化氢的乙醇溶液把溶液的pH调节到4。在减压下把溶液蒸干后，过滤溶液，残留物用50ml乙酸乙酯结晶，得到1．30g(产率36％)的标题化合物，熔点158-164℃；[α]D20=-69．5℃(c=0．2；氯仿)。元素分析C28H29N3O4·2HCl(分子量544．47)计算值C61．76；H5．73；N7．71；Cl13．02％；测定值C61．73；H6．05；N7．69；Cl12．90％。实施例6(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-(苯甲酰氧基)乙基酯(3β，16α)的制备向4．4g(0．012摩尔)的(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)溶于60ml的无水吡啶的溶液中，加入1．83g(0．018摩尔)的三乙胺和2．5g(0．018摩尔)的苯甲酰氯，在40℃下搅拌混合物30分钟，然后通过加入15ml10％的碳酸氢钠溶液把碱调节到pH8。分离两相后，有机相每次用20ml水洗涤两次，并用无水硫酸镁干燥。过滤除去干燥剂后，溶液每次用3ml的氯苯洗涤两次，加入氯化氢的二噁烷溶液，直到pH3-4，然后在0℃下过滤结晶沉淀物。用冷的丙酮充分研制并过滤，得到4．8g(产率79％)的标题化合物，熔点216-217．5℃；[α]D20=-86．6℃(c=1；甲醇)。实施例7(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-(4-氯苯甲酰氧基)乙基酯(3β，16α)甲磺酸盐的制备把4．4g(0．012摩尔)的(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)溶于60ml的二氯甲烷中后，加入1．83g(0．018摩尔)的三乙胺和3．15g(0．018摩尔)的4-氯代苯甲酰氯，在40℃下搅拌反应混合物30分钟，冷却到10℃后，加入25ml水，通过加入15ml10％的碳酸氢钠溶液把混合物的pH值调节到8。分离两相后，有机相每次用20ml水洗涤两次，并用无水硫酸镁干燥。过滤除去干燥剂后，溶液每次用5ml的氯苯洗涤两次，蒸馏有机相直到它不含有溶剂。把残留物溶解于35ml的丙酮中，并通过加入甲磺酸酸化到pH4，然后在0℃下过滤结晶沉淀物，用冷的丙酮洗涤并干燥得到5．85g(产率81％)的标题盐，熔点197-199℃；[α]D20=-73．3℃(c=1；甲醇)。实施例8(-)-反式阿朴长春蔓宁酸-2-(丙酰氧基乙基)酯(3β，16α)盐酸盐的制备向含有4．4g(0．012摩尔)的(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)溶于100ml的氯苯的溶液中，加入5．33g(0．04摩尔)的丙酸酐和1．4g(0．014摩尔)三乙胺，在80℃下搅拌反应混合物4小时，在减压下蒸去40ml的氯苯和过量的丙酸酐。在室温下向残留物中加入25ml水后，通过加入20ml10％的碳酸氢钠溶液把混合物的pH值调节到8。分离两相后，有机相每次用20ml水洗涤两次，并通过无水硫酸镁干燥。过滤除去干燥剂后，溶液每次用3ml的氯苯洗涤两次，减压下蒸馏直到它不含有溶剂。把残留物溶解于40ml的丙酮中，并用加入氯化氢的二噁烷溶液把溶液酸化到pH4，然后在5℃下过滤结晶，用丙酮洗涤并干燥，得到4．2g(产率76％)的标题的盐酸盐，熔点219-220℃；[α]D20=-111．9℃(c=1；甲醇)。实施例9(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-(3，4，5-三甲氧基苯甲酰氧基)乙基酯(3β，16α)盐酸盐的制备向含有5．1g(0．014摩尔)的(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)溶于80ml的氯苯的溶液中，加入2g(0．02摩尔)的三乙胺和4．6g(0．02摩尔)的3，4，5-三甲氧基苯甲酰氯，在50℃下搅拌混合物1小时，然后在室温下加入50ml水，通过加入20ml10％的碳酸氢钠溶液把混合物碱化到pH8。分离两相后，有机相每次用25ml水洗涤两次，并用无水硫酸镁干燥。过滤除去干燥剂后，溶液每次用5ml的氯苯洗涤两次，减压下把滤液蒸馏至干。把残留物溶解于25ml的乙酸乙酯中，并用氯化氢的二噁烷溶液把溶液酸化到pH4，然后在10℃下过滤结晶沉淀物，并用丙酮洗涤，得到6．2g(产率76％)的标题的盐酸盐，熔点19(-)94℃；[α]D20=-96．2℃(c=1；甲醇)。实施例10(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-(3，4，5-三甲氧基苯甲酰氧基)乙基酯(3β，16α)盐酸盐的制备向含有5．1g(0．014摩尔)的(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)溶于100ml的二氯甲烷的溶液中，加入6g(0．06摩尔)的三乙胺，然后在冷却下加入7．54g(0．02摩尔)的(-)-反式氯化阿朴长春蔓宁酸盐酸盐，之后在室温下搅拌反应混合物2小时。向反应混合物中加入50ml水和20ml10％的碳酸氢钠溶液直到pH8并分离后，有机相每次用25ml水洗涤两次，并用无水硫酸镁干燥。滤液每次用5ml的二氯甲烷洗涤两次，蒸馏有机层直到不含溶剂。把残留物溶解于60ml的丙酮中，并通过加入氯化氢的二噁烷溶液把溶液酸化到pH3．5，然后在5℃下过滤结晶沉淀物，并用丙酮洗涤，得到6．55g(产率63％)的标题的二盐酸盐，熔点222-225℃；[α]D20=-131．5℃(c=1；甲醇)。实施例11(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-(乙酰氧基)乙基酯(3β，16α)甲磺酸盐的制备向7．3g(0．02摩尔)的(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)溶于100ml的二氯甲烷的溶液中，加入2．2g(0．022摩尔)的三乙胺和2．42g(0．03摩尔)的乙酰氯，在50℃下搅拌反应混合物15分钟后，在室温下加入50ml水，通过加入20ml10％的碳酸氢钠溶液把混合物碱化到pH8。分离两相后，有机相每次用25ml水洗涤两次，并用无水硫酸镁干燥。过滤除去干燥剂后，溶液每次用5ml的二氯甲烷洗涤两次，减压下蒸馏滤液直到不含溶剂。把残留物溶解于40ml的乙酸乙酯中，并用甲磺酸把溶液酸化到pH3，在0℃下过滤结晶沉淀物，用乙酸乙酯洗涤并干燥，得到7．75g(产率77％)的标题的盐，熔点130-133℃；[α]D20=-92．2℃(c=1；甲醇)。实施例12(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-(乙酰氧基)乙基酯(3β，16α)苯磺酸盐的制备按照实施例11的方法，用苯磺酸代替甲磺酸在pH3．5时进行成盐，得到苯磺酸盐，产率7．9g(70％)，熔点180．5-183℃；[α]D20=-90．3℃(c=1；甲醇)。实施例13(+)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)的制备在120℃下，把含有16．88g(0．05摩尔)的(+)-反式阿朴长春蔓宁酸甲酯(3β，16α)溶于335ml的乙二醇的溶液与1g的叔丁醇钾搅拌5小时。冷却到室温后，把反应混合物慢慢倒入1升的冰水中。过滤沉淀，每次用500ml的水洗涤3次，并干燥，得到17．6g(产率96％)的标题化合物，熔点85-90℃；[α]D20=+131．2℃(c=1；氯仿)。实施例14(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-(苯甲酰氧基)乙基酯(3β，16α)盐酸盐的制备按照实施例6中所述的方法，用4．4g(0．12摩尔)的(+)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)代替(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)，得到4．7g(77％)的标题的盐酸盐，熔点217-219℃；[α]D20=+84．9℃(c=1；甲醇)。实施例15(+)-反式阿朴长春蔓宁酸2-(4-氯-苯甲氧基)乙基酯(3β，16α)甲磺酸盐的制备按照实施例7中所述的方法，用4．4g(0．12摩尔)的(+)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)代替4．4g(0．12摩尔)的(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)，得到5．5g(76％)的标题的盐，熔点199-200℃；[α]D20=+73．3℃(c=1；甲醇)。实施例16(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-(丙酰氧基)乙基酯(3β，16α)盐酸盐的制备按照实施例8中所述的方法，但是用4．4g(0．12摩尔)的(+)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)代替4．4g(0．12摩尔)的(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)，得到4．35g(79％)的标题的盐酸盐，熔点220-221℃；[α]D20=+109．7℃(c=1；甲醇)。实施例17(+)-反式阿朴长春蔓宁酸2-(3，4，5-三甲氧基苯甲酰氧基)乙基酯(3β，16α)盐酸盐的制备按照实施例9中所述的方法，但是用5．1g(0．14摩尔)的(+)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)代替5．1g(0．14摩尔)的(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)，得到6．2g(76％)的标题的盐酸盐，熔点192-195℃；[α]D20=+95．3℃(c=1；甲醇)。实施例18(+)-反式阿朴长春蔓宁酸2-(乙酰氧基)乙基酯(3β，16α)盐酸盐的制备向7．3g(0．02摩尔)的(-)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)溶于100ml的二氯甲烷的溶液中，加入2．2g(0．022摩尔)的三乙胺和2．42g(0．03摩尔)的乙酰氯，在40℃下搅拌25分钟后，在室温下加入50ml水，通过加入20ml10％的碳酸氢钠溶液把pH值调节到8。分离两相后，有机相每次用25ml水洗涤两次，并用无水硫酸镁干燥。过滤后，干燥剂每次用5ml的二氯甲烷洗涤两次，减压下蒸馏滤液直到不含溶剂。把残留物溶解于40ml的乙酸乙酯中，并通过加入氯化氢的二噁烷溶液把溶液酸化到pH4，在0℃下过滤结晶沉淀物，用乙酸乙酯洗涤并干燥，得到6．95g(产率78％)的标题的盐，熔点221-224．5℃；[α]D20=+107．4℃(c=1；甲醇)。实施例19外消旋的反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)盐酸盐的制备按照实施例13中所述的方法，但是用16．8g(0．05摩尔)的外消旋的-反式阿朴长春蔓宁酸甲酯(3β，16α)代替16．8g(0．05摩尔)的(+)-反式阿朴长春蔓宁酸甲酯(3β，16α)，得到17．4g(95％)的标题的外消旋的盐酸盐，熔点97-101℃。实施例20外消旋的反式阿朴长春蔓宁酸2-(乙酰氧基)乙基酯(3β，16α)盐酸盐的制备按照实施例18中所述的方法，但是用7．3g(0．02摩尔)的外消旋的反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)代替7．3g(0．02摩尔)的(+)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)，得到7．1g(80％)的标题的盐酸盐，熔点187-189℃。实施例21(-)-反式阿朴长春蔓宁酸3-羟基丙基酯(3β，16α)的制备按照实施例1中所述的方法，但是用300ml的丙二醇代替300ml的乙二醇。倒入水中后，把得到的不与水混溶的油状物溶于100ml的二氯甲烷中，每次用20ml的水洗涤两次，有机层并用无水硫酸镁干燥并过滤，干燥剂每次用5ml的二氯甲烷洗涤两次，在减压下蒸馏滤液直到不含溶剂。得到16．8g的淡黄色的、粘稠油状的标题化合物。用丙酮重结晶，得到熔点为216-218℃的盐酸盐；[α]D20=-122．2℃(c=1；甲醇)。实施例22(-)-反式阿朴长春蔓宁酸3-(乙酰氧基)丙基酯(3β，16α)盐酸盐制备按照实施例18中所述的方法，但是用7．6g(0．02摩尔)的(-)-反式阿朴长春蔓宁酸3-羟基丙基酯(3β，16α)代替7．3g(0．02摩尔)的(+)-反式阿朴长春蔓宁酸2-羟乙基酯(3β，16α)，得到7．0g(76％)的标题的盐酸盐，熔点205-207℃；[α]D20=-113．2℃(c=1；甲醇)。权利要求1．新的下式所代表的外消旋的和旋光活性的反式阿朴长春蔓宁酸酯衍生物及其治疗上可接受的盐其中R为氢或Z-C=O基团，其中Z代表C1-4烷基，取代或未取代的芳基、芳基烷基、杂环芳基或14-象牙(洪达木)烯宁基；以及n为2，3或4的整数。2．(-)-反式阿朴长春蔓宁酸α-(乙酰氧基)乙基酯(3β，16α)及其治疗学上可接受的盐。3．药物组合物，包含作为活性成分的下式的化合物或其治疗上可接受的盐其中R为氢或Z-C=O基团，其中Z代表C1-4烷基，取代或未取代的芳基、芳基烷基、杂环芳基或14-象牙(洪达木)烯宁基；以及n为2，3或4的整数，与载体和／或制药工业中常用的其它添加剂的混合物。4．制备新的下式所代表的外消旋的和旋光活性的反式阿朴长春蔓宁酸酯衍生物及其治疗上可接受的盐的方法其中R为氢或Z-C=O基团，其中Z代表C1-4烷基，取代或未取代的芳基、芳基烷基、杂环芳基或14-象牙(洪达木)烯宁基；以及n为2，3或4的整数，包括使外消旋的或旋光活性的下式代表的反式阿朴长春蔓宁酸酯衍生物其中R1代表C1-4的烷基，在碱性催化剂的存在下，在合适的二元醇中发生酯交换反应而制备；以及如果需要的话，使所得的其中R为氢的式(Ⅰ)的化合物进行酰化，以及／或如果需要的话，拆分式(Ⅰ)的外消旋化合物，以及／或如果需要的话，把式(Ⅰ)的化合物转变为其治疗上可接受的盐。5．制备药物组合物的方法，包括使新的下式所代表的外消旋的或旋光活性的反式阿朴长春蔓宁酸酯衍生物或其治疗上可接受的盐其中R为氢或Z-C=O基团，其中Z代表C1-4烷基，取代或未取代的芳基、芳基烷基、杂环芳基或14-象牙(洪达木)烯宁基；以及n为2，3或4的整数，与载体和／或制药工业中常用的其它添加剂混合，以及把该混合物转变为药物组合物。6．抑制脂质过氧化作用并保护或治疗局部缺血和健忘以及各种退行性疾病例如早老性痴呆症的方法，包括以治疗有效量的下式所代表的外消旋的或旋光活性的反式阿朴长春蔓宁酸酯衍生物或其治疗上可接受的盐其中R为氢或Z-C=O基团，其中Z代表C1-4烷基，取代或未取代的芳基、芳基烷基、杂环芳基或14-象牙(洪达木)烯宁基；以及n为2，3或4的整数，单独或以药物组合物的形式，向接受治疗的患者给药。7．下式化合物或其治疗上可接受的盐R为氢或Z-C=O基团，其中Z代表C1-4烷基，取代或未取代的芳基、芳基烷基、杂环芳基或14-象牙(洪达木)烯宁基；以及n为2，3或4的整数，用于制备抑制脂质过氧化作用并保护或治疗局部缺血和健忘以及各种退行性疾病例如早老性痴呆症的药物组合物。8．下式化合物或其治疗上可接受的盐R为氢或Z-C=O基团，其中Z代表C1-4烷基，取代或未取代的芳基、芳基烷基、杂环芳基或14-象牙(洪达木)烯宁基；以及n为2，3或4的整数，用于抑制脂质过氧化作用并保护或治疗局部缺血和健忘以及各种退行性疾病例如早老性痴呆症。全文摘要本发明涉及新的式(Ⅰ)的外消旋的和旋光活性的反式阿朴长春蔓宁酸酯衍生物及其治疗上可接受的盐,其中R为氢或基团(a),其中Z代表C文档编号A61P25/28GK1205701SQ9619913公开日1999年1月20日申请日期1996年12月13日优先权日1995年12月22日发明者乔包·桑泰,伊什特万·莫尔德瓦伊,安德拉斯·韦德尔斯,玛丽亚·因采,亚诺什·克赖德尔,拉斯洛·奇布拉,耶诺奈·福尔考什(玛丽亚·柯杰克),伊达·多伊奇柰尤哈兹,阿尼克·盖尔,玛吉特·佩廖尼兹奈帕罗猜,伊丽莎白·拉彼斯,安德拉斯·塞凯瑞斯,玛丽亚·扎杰尔奈包拉日,亚当·萨卡地,费伦茨·奥什,贝拉·基斯,埃贡·卡尔帕蒂,山多尔·福尔考什申请人:里克特格登化工有限公司