专利名称：：稳定的含甲状旁腺激素的药物给药剂型的制作方法
技术领域：
：本发明涉及含甲状旁腺激素或其片断作为活性物质的药物制剂以及相应的冻干粉剂或注射液形式的药物给药剂型。甲状旁腺激素(PTH)是由84个氨基酸构成的蛋白质，它参与血液和组织中钙和磷酸盐的调节。从文献(参考WO90／10067；WO91／06564；EP0301484；WO93／15109)中已知该激素的N-端片断和具有适当改变的氨基酸顺序的肽具有与PTH(1-84)类似的生理活性。然而，由于在分子中的游离甲硫氨酸基处的氧化过程，在药物的给药剂型中难以使PTH稳定。加入抗氧化剂如甲硫氨酸或抗坏血酸不能使给药剂型具有足够的药用稳定性以便药用。从EP619119中已知，通过将糖和氯化钠的混合物冷冻干燥可实现稳定作用。然而，已表明该种类型的稳定作用容易形成二聚物。然而，在药物的给药剂型中，二聚物是成问题的，因为当将它们给予病人时，由于免疫学反应，它们可产生不需要的副作用。另外，在药物的给药剂型中，特别是当该药物的给药剂型长期和不在最佳温度下贮存时，二聚物可导致蛋白质活性的丧失。另外，当生产适当干燥的药物给药剂型时，冷冻干燥是成问题的。意外地发现，如果在给药剂型中含有一种或几种碱性氨基酸，特别是精氨酸，赖氨酸或鸟氨酸作为药物附加剂，那么可获得PTH或其片断稳定的药物给药剂型。结果，可以不必加入抗氧剂或表面活性剂。而且，加入碱性氨基酸可形成在长期贮存中稳定的给药剂型。尤其可减少或基本上避免形成不需要的聚集。另外发现，通过进一步加入酸性氨基酸和／或中性氨基酸可改善冷冻干燥。尤其，稳定的含水给药剂型是那些含无机或有机酸并且pH值为4-8，特别是6-8的给药剂型。尤其，本发明意义内的甲状旁腺激素片断是人完整蛋白质的N-端片断，例如片断(1-34)，(1-35)，(1-36)，(1-37)或(1-38)。然而，用样可以使用那些N-和C-端缩短的甲状旁腺激素片断，如在N-端由一个或两个氨基酸缩短的片断。另外，可使用适当变化或修饰的该激素，其中，在PTH(1-84)的氨基酸顺序中，一个或几个氨基酸被其他氨基酸取代。这也适用于相应的N-和／或C-端缩短的片断。尤其，在本发明的意义内，可生产含甲状旁腺激素片断hPTH1-37的药物制剂。该片断是非常不稳定的，这是由其结构和构型决定的。因此，生产含常规药物附加剂物质的药物制剂常常导致产品的不稳定性，因为在较长时间的贮存过程中，由于肽的聚集和分解使得活性物质的含量不断地减少。在液体给药剂型中，活性物质甲状旁腺激素或甲状旁腺激素片断的含量最多10mg／ml，尤其最多5mg／ml或2mg／ml。优选地，活性物质的含量至少为0．01mg／ml，0．04mg／ml或0．1mg／ml。更优选地，活性物质的含量为0．01-5mg／ml，尤其为0．04-2mg／ml。冷冻干燥的给药剂型含活性物质的量为能够使相应的活性物质的输液或注射液在所述浓度范围内，该浓缩范围是通过加入一定体积的生理上可耐受的再配制溶液得到的。本发明意义内的药物给药剂型基本上不含表面活性剂和常规生理上可耐受的抗氧剂，尤其是含巯基的试剂，例如甲硫氨酸或半胱氨酸或抗坏血酸。而且，优选地，它们基本上不含氯离子，因为氯离子有利于形成二聚物。尤其，本发明给药剂型也不含任何其它药物添加剂或辅助物质如糖或生理上可耐受的聚合物。尤其，本发明意义内的药物给药剂型的特定是基本上只由氨基酸和有机或无机酸组成，但它们至少含一种碱性氨基酸。所有生理上可耐受的、具有至少一个碱性侧基的氨基酸都可以作为本发明碱性氨基酸。尤其，碱性侧基是可任选由其它基团如C1-C6烷基取代的氨基。尤其优选地，组氨酸、赖氨酸、精氨酸或鸟氨酸作为碱性氨基酸。相应地，生理上可耐受的、具有侧基并且不具有巯基的氨基酸(半胱氨酸，甲硫氨酸)可作为中性氨基酸，如苯丙氨酸，甘氨酸或异亮氨酸。原则上，氨基酸可以以其外消旋体或其光学活性形式(D或L氨基酸)使用。在液体给药剂型中，氨基酸的浓度为最多100mg／ml。浓度最多80mg／ml，尤其最多60mg／ml和最多50mg／ml或40mg／ml是特别有利的。优选地，氨基酸浓度至少为1mg／ml，尤其至少为5mg／ml。在本发明范围内，生理上可耐受的羧酸，羟基羧酸或氨基酸及其盐，特别是碱金属盐，可作为有机酸。在本发明范围内，乳酸、乙酸、柠檬酸或天冬氨酸是有利的。如果这些酸具有手性中心，那么也可以使用其外消旋体和光学活性衍生物。适宜的有机酸为生理上可耐受的酸，如磷酸或硫酸或其在水溶液中也可以用作缓冲剂的盐，如磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、硫酸氢钠等。有机酸或无机酸也可以彼此结合使用。所选择酸的量为使得水溶液的pH值为4-8，优选6-8。通常，在溶液中，酸的浓度最多100mg／ml，尤其最多50mg／ml或最多40mg／ml。酸的浓度至少为1mg／ml，优选地至少为5mg／ml或10mg／ml。尤其，优选地可用于本发明中的、生理上可耐受的辅助物质为下列添加剂的混合物a)精氨酸和磷酸(精氨酸磷酸盐)，b)精氨酸、磷酸和天冬氨酸或c)精氨酸、磷酸、天冬氨酸和异亮氨酸。药物给药剂型可以作为在适当的安瓿中随时可用于注射的注射液或输液提供。或者，也可以为适宜的冻干粉剂，该冻干粉剂可以在临对病人给药前，通过加入等渗溶剂转化为水溶液。通过将所有的组分配制成水溶液并将它们转移到适宜的安瓿或玻璃小瓶中来生产给药剂型是方便的。在生产冻干粉剂时，优选地，将它们在填充溶液的玻璃容器中直接干燥。通过下列应用实例更详细地说明本发明。实施例1将15mgPTH(1-37)和2．5gL-精氨酸溶解在100ml注射用水中并用99％的乙酸将pH值调至6．5。通过过滤将该溶液灭菌并在氮气下将1ml等分量的该溶液分装到玻璃小瓶中。实施例2将15mgPTH(1-37)和5．5g精氨酸溶解在100ml注射用水中并用85％的磷酸将pH值调至7．4。通过过滤将该溶液灭菌并在氮气下将1ml等分量的该溶液分装到玻璃小瓶中。将这些小瓶冷冻干燥、密封并卷边。实施例3将150mgPTH(1-37)和5．5g精氨酸溶解在100ml注射用水中并用85％的磷酸将pH值调至7．4。通过过滤将该溶液灭菌并在氮气下将1ml等分量的该溶液分装到玻璃小瓶中。将这些小瓶冷冻干燥、密封并卷边。实施例4将15mgPTH(1-37)，3gL-精氨酸和2g天冬氨酸溶解在100ml注射用水中并用85％的磷酸将pH值调至7．4。通过过滤将该溶液灭菌并在氮气下将1ml等分量的该溶液分装到玻璃小瓶中。将这些小瓶冷冻干燥、密封并卷边。实施例5将15mgPTH(1-37)，3．0gL-精氨酸和2．0g异亮氨酸溶解在100ml注射用水中并用85％的磷酸将pH值调至7．4。通过过滤将该溶液灭菌并在氮气下将1ml等分量的该溶液分装到玻璃小瓶中。将这些小瓶冷冻干燥、密封并卷边。实施例6将15mgPTH(1-37)，3．0g精氨酸，1．0g天冬氨酸和1．0g异亮氨酸溶解在100ml注射用水中并用85％的磷酸将pH值调至7．4。通过过滤将该溶液灭菌并在氮气下将1ml等分量的该溶液分装到玻璃小瓶中。将这些小瓶冷冻干燥、密封并卷边。实施例7将15mgPTH(1-37)、2．0mg蔗糖和100mg氯化钠溶解在100ml注射用水中。通过过滤将该溶液灭菌并在氮气下将1ml等分量的该溶液分装到玻璃小瓶中。将这些小瓶冷冻干燥、密封并卷边。实施例8在该实施例中，制备具有各种pH值的实施例2制剂。同时改变精氨酸的量。<tablesid="table1"num="001"><table>制剂精氨酸pH值8a5．8g8．08b5．0g6．58c3．2g5．08d3．2g3．0</table></tables>将PTH和精氨酸溶解在100ml注射用水中并用85％的磷酸将pH值调至各自的pH值。通过过滤将该溶液灭菌并在氮气下将1ml等分量的该溶液分装到玻璃小瓶中。将这些小瓶冷冻干燥、密封并卷边。实施例9类似于实施例2制剂制备实施例9制剂。在制剂9a)中，使用10mg甲硫氨酸。在制剂9b)中，使用10mg抗坏血酸。将两溶液调至pH7．4。通过过滤将该溶液灭菌并在氮气下将1ml等分量的该溶液分装到玻璃小瓶中。将这些小瓶冷冻干燥、密封并卷边。实施例10在实施例10中使用实施例2制剂并加入10mg吐温20。在该实例中，将PTH(1-84)、精氨酸和吐温20溶解在注射用水中并用85％的磷酸将pH值调至7．4。通过过滤将该溶液灭菌并在氮气下将1ml等分量的该溶液分装到玻璃小瓶中。将这些小瓶冷冻干燥、密封并卷边。实施例11将15mgPTH(1-37)和3．5g组氨酸溶解在100ml注射用水中并用85％的磷酸将pH值调至7．4。通过过滤将该溶液灭菌并在氮气下将1ml等分量的该溶液分装到玻璃小瓶中。将这些小瓶冷冻干燥、密封并卷边。实施例12将15mgPTH(1-84)(Sigma公司生产)和5．5gL-精氨酸溶解在100ml注射用水中并用85％的磷酸将pH值调至7．4。通过过滤将该溶液灭菌并在氮气下将1ml等分量的该溶液分装到玻璃小瓶中。将这些小瓶冷冻干燥、密封并卷边。表中注解对于上述应用实施例，表1简要说明在冰箱温度和在50℃下贮存1或3个月后，测定稳定性的结果。当通过SDS-PAGE方法测定时，在本发明给药剂型中未发现二聚物。另外发现，在大约4℃下贮存1或3个月后，PTH的含量至少为98％。甚至在较高的温度(50℃)下，也未发现PTH含量的明显损失。相反，在实施例7，9和10中所描述的给药剂型有利于形成二聚物并且显示在贮存1或3个月后，PTH含量降低，因此就贮存稳定性而言，可列为不适宜的药物给药剂型。原则上证明了加入氯离子对贮存稳定性产生负作用，所以优选地，本发明的给药剂型是不含氯化物的剂型。表三个月后，稳定性的测定结果权利要求1．在贮存过程中稳定的药物制剂，它包含甲状旁腺激素或甲状旁腺激素片断作为活性物质以及一种或几种碱性氨基酸。2．权利要求1中所要求的药物制剂，另外包含适用于将pH值调至3．0-8．0的有机或无机酸。3．权利要求1或2中所要求的药物制剂，其中，它另外包含一种或几种中性氨基酸。4．权利要求1-3任一项所要求的药物制剂，其中，碱性氨基酸是组氨酸、赖氨酸或精氨酸。5．权利要求1-4之一所要求的药物制剂，其中，有机酸选自羧酸或氨基酸，尤其是乳酸、乙酸、柠檬酸或天冬氨酸。6．权利要求1-4之一所要求的药物制剂，其中，无机酸为磷酸或硫酸。7．权利要求1-6之一所要求的药物制剂，其中，它包含有机酸和无机酸尤其是磷酸和天冬氨酸或其生理上可耐受的盐的混合物。8．权利要求3-7之一所要求的药物制剂，其中，它包含不含羟基的氨基酸，特别是苯丙氨酸、甘氨酸或异亮氨酸，作为中性氨基酸。9．权利要求1-8之一所要求的药物制剂，其形式为用于注射或输注的液体剂型，其中，溶液的pH值为4-8。10．权利要求1-8之一所要求的药物制剂，其形式为用于制备pH值为4-8，尤其为6-8的输液或注射液的冻干粉剂。11．权利要求1-10之一所要求的药物制剂，其中，它包含活性物质的浓度为0．01-10mg／ml，优选地为0．04-2mg／ml。12．权利要求1-11之一所要求的药物制剂，其中，它包含碱性氨基酸的浓度为1-100mg／ml，优选地为5-60mg／ml。13．权利要求1-12之一所要求的药物制剂，其中，它包含有机或无机酸的浓度为1-50mg／ml，优选地为5-40mg／ml。14．权利要求1-13之一所要求的药物制剂，它基本上是由氨基酸和有机或无机酸构成的，其中，它至少包含一种碱性氨基酸。15．制备权利要求1-13之一所要求的药物制剂的方法，其中，在生理上可耐受的溶剂中制备活性物质的溶液剂或悬浮液并且加入一种或几种碱性氨基酸和一种或几种有机或无机酸，然后，将溶液加工成随时可用于注射的输液用注射剂或将溶液冷冻干燥。16．权利要求1-13之一所要求的药物给药剂型用于治疗钙代谢疾病尤其是骨质疏松症的用途。17．利用碱性氨基酸来制备贮存稳定的含甲状旁腺激素或甲状旁腺激素片断药物给药剂型的用途。全文摘要本发明涉及甲状旁腺激素的药物组合物,它在贮存过程中是稳定的并且包含碱性氨基酸,任选地包含生理上可耐受的有机或无机酸。文档编号A61K38/29GK1204262SQ96199061公开日1999年1月6日申请日期1996年10月17日优先权日1996年10月17日发明者H·范布伊伦,R·D·加贝,W·勒德,H·沃格申请人:曼海姆泊灵格股份公司