专利名称：哇巴因多克隆抗体在制备治疗高血压药物的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于治疗高血压的药物领域，涉及一种哇巴因多克隆抗体在制备治疗高血压药物的应用。
内源性哇巴因(Endogenous Ouabain，EO)是由肾上腺皮质分泌的一种类固醇激素，研究证明EO是高血压发病的重要因素之一，参与了高血压的形成。哇巴因多克隆抗体是由哇巴因刺激机体而产生的一种大分子蛋白的免疫物质，可以用免疫动物的方法获得。本发明前哇巴因多克隆抗体已作为一种试剂用于实验室(由实验室制备，非商品)检测样本内哇巴因的含量。本发明在应用哇巴因多克隆抗体检测动物体内哇巴因的实验研究中，发现给动物体内注射哇巴因多克隆抗体，可降低动物血压，从而提出把哇巴因多克隆抗体应用在制备治疗高血压的药物中。
高血压是我国最常见的心血管疾病，也是脑卒中、冠心病、心、肾功能衰竭最主要的危险因素。有效地控制高血压，可防止心、脑、肾靶器官的严重损害，大大降低死亡率。目前临床上应用治疗高血压药物很多，主要有利尿剂，肾上腺素能神经元阻断药、肾上腺素受体阻滞剂、血管扩张剂、钙拮抗剂、血管紧张素转换酶抑制剂等几类，治疗高血压的机理主要是针对高血压的病理变化，通过降低外周血管张力达到降压目的。这类药物多系化学合成制品，难免存在着副作用较多的缺点。而我国治疗高血压的中草药种类较多，但大多未能从天然植物中提取确切的有效成份，临床应用存在起效慢、疗程长、服药量大等缺点。
本发明的目的是将现有技术中的实验检测用的哇巴因多克隆抗体应用到制备治疗高血压的药物中，而这种药物具有与人体组织相容性好，降压速度快，降压效果明显，毒副作用小的优点。
本发明的解决方案是基于哇巴因多克隆抗体可与机体内哇巴因结合，从而降低体内哇巴因含量和效能而达到降低血压的原理。
本发明的具体实施方案为一种哇巴因多克隆抗体在制备治疗高血压药物的应用，其主要特点是把哇巴因多克隆抗体用于制备治疗高血压的药物。具体方法是采用免疫学方法，通过用哇巴因免疫动物的方法制备哇巴因多克隆抗体。
哇巴因多克隆抗体的制备1、合成哇巴因-卵清蛋白哇巴因→加入NaIO4→室温下搅拌→加入BSA→室温搅拌→加入NaBH4，室温搅拌1h→加入饱和硫酸胺，静置→溶解沉淀→用生理盐水透析。
2、免疫程序哇巴因→卵清蛋白与等量的弗氏完全佐剂混匀成为乳剂，常规消毒动物(兔)颈背部皮肤，皮下多点注射，末次免疫后从颈动脉放血，收集血清，用硫酸铵盐析法+DEAE-纤维柱层析法提纯，-20℃冻存。
由于哇巴因多克隆抗体只有通过静脉给药途径才具有良好的降压效果。将哇巴因多克隆抗体制成注射剂，为了贮存运输方法，也可制成冻干粉剂。使用时，将哇巴因多克隆抗体室温下生理盐水稀释后通过静脉途径用药，冻干粉剂用溶液溶解后给药。
本发明的动物药效学实验表明哇巴因多克隆抗体的降压作用有以下特点①降压效应与用药剂量有关，降压幅度和持续时间与用药剂量呈正相关；②降压效果比常用降压药物硝普钠降压持续时间长。③降压起效快，用药后2-5分钟起效。
实验方法及结果如下“一肾一夹”高血压模型实验实验分为6组，即生理盐水组、正常兔IgG组、硝普钠组、3个剂量的哇巴因抗体组，每组8-10只。哇巴因多克隆抗体用量分大、中、小三组(即23mg/kg，4.6mg/kg，2.3mg/kg)。
各组大鼠均经25％乌拉坦麻醉，颈动脉插管监测血压，待血压稳定后舌静脉给药，阳性对照药为硝普钠(静注剂量为0.3mg/kg体重)，阴性对照为生理盐水及正常兔IgG。
哇巴因多克隆抗体急性毒性试验(最大耐受性试验)选择18-22g体重的健康小鼠20只，雌雄各半，经尾静脉及腹腔两种途径一次注入最大浓度(230mg/kg体重)哇巴因多克隆抗体50ml/kg体重(最大体积)，观察①试验即刻动物反应情况动物活动明显减少，但无抽搐及呼吸急促等发生；②继续观察了10天，实验第一天动物饮食及活动明显减少，第二天好转，第三天后恢复正常，观察10天无动物死亡。
结论最大耐受性试验显示，哇巴因多克隆抗体的急性毒性作用较小。
本发明的优点在于将免疫方法取得的哇巴因多克隆抗体用于制备治疗高血压药物，具有组织相容性好，毒副作用小，降压速度快(2-5分钟起效)，作用时间长，效果显著的特点。
图1是一肾一夹高血压模型药效学试验结果图。
权利要求
1.一种哇巴因多克隆抗体在制备治疗高血压药物的应用，其特征在于把哇巴多克隆抗体用于制备治疗高血压的药物。
2.根据权利要求1所述的哇巴因多克隆抗体在制备治疗高血压药物的应用，其特征在于把哇巴因多克隆抗体制备成静脉注射剂。
全文摘要
该发明提供了一种哇巴因多克隆抗体在制备治疗高血压药物的应用,制备的哇巴因多克隆抗体静脉注射剂具有与机体组织相容性好,毒副作用小,降压速率快(2—5分钟起效),持续时间长,效果显著的特点。
文档编号A61K39/395GK1248472SQ98112970
公开日2000年3月29日 申请日期1998年9月21日 优先权日1998年9月21日
发明者吕卓人 申请人:西安医科大学第一临床医学院