专利名称：治疗腹泻疾病和从结肠中除去特定细菌种群的方法
与相关申请的参照根据《美国联邦法典》第35册第119(e)条，本申请要求1997年6月9日提交的美国临时专利申请No.60/049,236的利益。
背景技术：
乳链菌肽(nisin)是一种由食品级微生物产生的细菌素，为抗微生物物质，属于被称为羊毛硫抗生素(lantibiotics或lanthocin)的一组类似物质，后者还包括枯草菌素、表皮素、gallidermin、pep5。
乳链菌肽由属于蓝斯菲尔德N血清群的乳酸乳球菌乳亚种(Lactococcuslactis subsp.lactis)产生〔A.T.R.Mattick和A.Hirsch，1947Lancet.2，5〕。乳链菌肽是一种由34个氨基酸残基组成的肽，含有由构成羊毛硫氨酸或β-甲基羊毛硫氨酸残基的硫醚桥交联的5个环结构。这些硫醚由半胱氨酸的巯基与丝氨酸或苏氨酸残基形成的脱氢侧链缩合而成，是乳链菌肽前体肽翻译后经修饰的结果。
据报道，乳链菌肽起着阳离子表面活性剂的作用，其活性可以被阴离子去垢剂中和〔H.R.Ramseier，1960Arch.Mikrobiol，37，57〕，在分子水平上，乳链菌肽作用于细胞质膜而且抑制肽聚糖的生物合成(Reising等.1980Arch.Microbiol，127，187)。乳链菌肽抗营养期细菌的作用很可能是因为该肽插入脂质双层后对细胞质膜的电压依赖性去极化作用，这可能是通过相邻乳链菌肽分子的相互作用形成一个临时性的孔或通道。乳链菌肽的分子特性及其生物合成的机制已成为目前一篇评论的主题(G.Jung和H.G.Sahl，1991《乳链菌肽和新的羊毛硫抗生素》(Nisin and Novel Lantibiotics)ESCOM Science Publishers，Leiden)。
乳链菌肽被认为只有窄谱活性而且通常只有抗某些革兰氏阳性菌的活性，但在与螯合剂组合时能出乎意料地抗革兰氏阴性菌并且表现出抗革兰氏阳性菌的活性增强(Blackburn等的美国专利No.5,217,950和5,260,271)。乳链菌肽已被用作抗微生物食品防腐剂并被JEFCA及包括美国、英国和欧洲经济共同体在内的各国食品添加剂管理当局认为是安全的。
虽然乳链菌肽在动物模型的初步研究中被证明是有效的〔A.T.R.Mattick和A.Hirsh，1947 Lancet.2，5；E.M.Bavin等，1952 Lancent 1127；J.L.Gowans等，1952Brit.J.Pharmacol.7438；A.Hirsh和A.T.R.Mattick，1949 Lancet.ii190〕，但是乳链菌肽被发现其有效性不足以开发成用于人或兽医的治疗。
艰难梭菌(Clostridium difficile)是一种厌氧性革兰氏阳性杆菌，能产生孢子并产毒，在人结肠中很少以明显数量被发现。然而，由于许多抗菌剂对其不起作用且其易流行于医院和疗养院，因此，当结肠的正常细菌菌丛被压制时(最经常的是在用广谱抗菌剂进行治疗后)，会有艰难梭菌出现。在某些情况下，艰难梭菌可引起被称为与抗生素相关的腹泻和假膜性结肠炎的严重的疾病。对这些疾病的治疗包括使用甲硝唑和口服万古霉素。但目前万古霉素的使用面临严重的问题，因为万古霉素(尤其是口服形式)选择出一类新的高度耐药的肠内微生物〔即对万古霉素耐药的肠球菌(VRE)〕，而VRE可在其它体内部位引起致命的无法治疗的感染。甲硝唑不能杀灭肠球菌(enterococci)，因此，其使用也有助于选择出VRE在结肠中繁殖。艰难梭菌疾病的复发率非常高，约为20％；据认为，这可能与孢子的形成有关，因为孢子难以根除。
发明概述本发明的目的是，提供一种治疗结肠的由细菌引发的疾病并根除定居于结肠的有潜在危险的细菌的方法。为此，已证明向结肠施用大剂量的乳链菌肽等含羊毛硫氨酸的细菌素(羊毛硫抗生素)时它在结肠中意外的稳定性且没有毒性。由于该发现，本发明的又一个目的是，提供一种将足量的选定的羊毛硫抗生素释放至结肠以有效治疗结肠感染的方法。
附图的简单说明
图1表示乳链菌肽对胃肠道中的酶的敏感性。
图2表示片剂包衣厚度对片剂在磷酸盐缓冲液中的崩解开始时间的影响。
图3表示片剂包衣厚度对片剂在磷酸盐缓冲液中的崩解开始时间和崩解结束时间两者的影响。
图4表示包衣厚度对乳链菌肽向pH6.8磷酸盐缓冲液中释放的延迟的影响。
图5表示具有40％EudragitTM包衣的6粒片剂的药物溶出特性。
图6A和6B表示40％包衣厚度的片剂制剂在被摄取后7小时里通过人胃肠道的过程。
图7A和7B表示120％包衣厚度的片剂制剂在被摄取后12小时里通过人胃肠道的过程。
图8A和8B表示180％包衣厚度的片剂制剂在被摄取后16小时里通过人胃肠道的过程。
发明详述本发明的一个目的是，提供治疗结肠与艰难梭菌相关的疾病并除去大肠中定居的微生物(如VRE)的方法。
为达到此目的，我们发现，乳链菌肽对包括VRE在内的各种革兰氏阳性细菌的病原性菌株具有很强的活性(美国专利申请No.08/667,650，此专利的全部内容在本文中引作参考)。已知乳链菌肽对梭菌属的食物腐败性微生物具有活性，在我们最先发现其对艰难梭菌具有活性之后，最近，这些活性被公开了〔Kerr等，1997Lancet 3491026〕。这里，我们证明，乳链菌肽对包括对氯林可霉素和甲硝唑耐药的菌株在内的很多艰难梭菌的临床分离菌具有特别有效的活性。此外，乳链菌肽已被证明对人的主要的正常肠道菌丛〔即脆弱拟杆菌(Bacteroidesfragilis)〕几乎无活性。事实上，对50％的艰难梭菌有效的乳链菌肽浓度与对50％的脆弱拟杆菌有效的浓度之间的差值非常大。这意味着与Kerr等给出的教导相反，乳链菌肽的有效剂量不太可能对肠中的保护性共生细菌产生不良影响。虽然如前面已陈述的，乳链菌肽要对大多数革兰氏阴性菌产生活性需要有增效剂，但也有一些例外。例如，需要复杂营养的革兰氏阴性菌〔如淋病奈瑟氏球菌(Neisseriagonorrhoeae)〕对单独的乳链菌肽是敏感的。脆弱拟杆菌是需要复杂营养的厌氧微生物，其对乳链菌肽的敏感性如何先前并不知道。
由于乳链菌肽是一种肽，可被小肠中大量存在的蛋白水解酶消化(参见图1)，其对胃肠道下部靶感染的经口使用先前未曾考虑过。而且，不知道将完整的乳链菌肽释放于胃肠道下部时对其是否耐受，也无法预料在该部位是否有足够的稳定性以产生抗菌活性。
我们现已用动物模型证明，在亚急性结肠内毒性研究中将乳链菌肽反复释放时不会对结肠产生刺激。而且，我们已证明，在进行了上述处理的动物的血液中检测不出完整的乳链菌肽，这提示，通过这种途径不大会出现全身吸收(和可能的全身毒性)。此外，在将一部分结肠结扎的动物研究中，业已证明，相当部分的乳链菌肽在被滴注至结肠后数小时在原处仍是完整的。
因此，开发乳链菌肽或其它羊毛硫抗生素类抗菌肽(包括由基因工程法或通过半合成化学法生产的这些分子的结构变异体)的给药系统以治疗由对这些肽敏感的微生物(包括但不限于艰难梭菌)引起的结肠感染或除去大肠中对个体或对其它患者具有潜在危害的敏感的定居微生物(包括但不限于VRE)具有潜在的实际效用。因此，本发明的另一个方面是，开发可使有效量的治疗结肠细菌感染的乳链菌肽通过口服给药的制剂。
这些肽的药物制剂包括口服用的适当包衣的片剂或颗粒剂或胶囊，这些制剂在通过胃和小肠时能保持剂型的完整性，然后在胃肠道的合适区域(小肠下部至大肠上部)释放活性成分。然而，可以料想到的是，例如栓剂和灌肠剂也可用作有效的剂型。下面所述的具体剂型仅是举例而并非是对本发明范围的任何限定。
实施例实施例1-5涉及乳链菌肽在结肠环境中的特性和乳链菌肽对通常存在于结肠中的细菌的有效性的测试。
实施例1a乳链菌肽对艰难梭菌的活性将得自弗吉尼亚州Richmond市McGuire美国退伍军人管理局医院的20株对氯林可霉素耐药的临床分离菌在含羊血的Brucella琼脂中于无氧条件下进行试验。将MIC(最小抑制浓度)定义为完全抑制细菌可见的生长的最低试验浓度。
如表1所示，所有菌株被0.25μg/ml或更低浓度的乳链菌肽抑制。
用与前述相同的方法测试得自佛罗伦萨大学(意大利)医院的60株临床分离菌对乳链菌肽和对目前用于治疗艰难梭菌腹泻和结肠炎的抗菌剂的敏感性。如表2所示，乳链菌肽对这些菌株的MIC中值即MIC50(抑制50％或者更多的受试菌株生长的浓度)为0.05μg/ml，显著低于抑制相同菌株所需的万古霉素或甲硝唑的量。MIC90值是抑制90％或更多的受试菌株生长的抗菌剂浓度。
该实施例表明，艰难梭菌是适合用乳链菌肽或相关肽治疗的靶菌。
实施例1b乳链菌肽缺乏对脆弱拟杆菌的活性用与前述相同的方法对得自弗吉尼亚州Richmond市McGuire美国退伍军人管理局医院的脆弱拟杆菌的9株分离菌进行测试。即使是所用的最高乳链菌肽浓度(32μg/ml)，也无一菌株被抑制。因此，乳链菌肽对这些菌株的MIC在64μg/ml以上。同样地，如表3所示，23株得自佛罗伦萨大学(意大利)医院的分离菌对乳链菌肽的敏感性也较低；MIC中值大于128μg/ml。
本实施例表明，乳链菌肽不大可能破坏人肠的正常菌丛。它还表明，单独的乳链菌肽对需要复杂营养的革兰氏阴性菌的活性无法由现有的对其它菌种的数据进行预测。
表1乳链菌肽对20株艰难梭菌的临床分离菌的体外活性
表2乳链菌肽对60株艰难梭菌的临床分离菌的比较活性
所有MIC值均以μg/ml表示。MIC50和MIC90用几何方法算出。
表3乳链菌肽对23株脆弱拟杆菌的临床分离菌的比较活性
所有MIC值均以μg/ml表示。MIC50和MIC90用几何方法算出。
实施例2乳链菌肽在家兔结扎的肠中的可耐受性将5只家兔麻醉，在整个实验过程中使其保持睡眠状态。开腹，将包含回肠-盲肠结合部和近段结肠在内的一段肠结扎。将2只家兔用作对照，往另3只家兔的肠结扎段中直接注入20mg原料药(即从厂商处得到的)乳链菌肽。将家兔保持6小时，然后宰杀。
在尸检时和对肠的暴露区域进行组织病理学检查时未发现由乳链菌肽治疗导致的刺激或毒性的体征。本实施例表明，一次给药于家兔结肠以近似于可能给与人的剂量的乳链菌肽不会引起任何局部毒性，即使在将肠结扎以人工地使结肠中的剂量维持6小时也是如此。
实施例3向家犬的结肠重复给药时的乳链菌肽的可耐受性在近段结肠区域手术植入插管。痊愈后，以6只家犬为一组，每日通过插管往结肠注入0、50、125或300mg/kg的乳链菌肽原料药，持续28日；将剂量对半分，在每日上午10点和下午4点左右投药。
在尸检时及进行组织病理学和临床检查时未发现由乳链菌肽治疗导致的局部刺激或全身毒性的体征。本实施例表明，在向哺乳动物的结肠反复给药后，非常大剂量的乳链菌肽是可以耐受的。
实施例4乳链菌肽未经结肠全身吸收在上面的实施例2和3所述的毒理实验中，采取血样以测定血清中的乳链菌肽。
在家兔结扎的肠模型(实施例2)中在滴注乳链菌肽后0.5、2和6小时后抽取血。分析方法是一种特殊的ELISA分析法，其在家兔血清中的定量限度为1μg/ml。
在这些试样中均未检测出乳链菌肽，表明在该动物模型中由结肠的吸收可以忽略。
在家犬实验(实施例3)中，在第28日早晨给与乳链菌肽后0.5、1、2、3、4、5、6和7小时后收集血样。在该实验中，以藤黄微球菌(Micrococcus luteus)为受试菌，用微生物分析法分析血清；该分析法在家犬血清中的定量限度为0.5μg/ml。在用乳链菌肽处理的18只家犬中，17只完成了研究，16只经尸检确认导管放置正确。(2只家犬显示有药物渗漏至腹膜中；一只不得不在处理过程的初期宰杀了，另一只则完成了研究)。在导管放置正确(在肠内)的家犬中，在任何时间均未在血清中检测出乳链菌肽。
本实施例表明，当正确释药至哺乳动物的结肠时，即使是非常大的剂量，乳链菌肽也不会被吸收进入全身循环统，因此，引起全身毒性的可能性很小。
实施例5乳链菌肽可以在哺乳动物结肠中保持足以抑制靶菌的浓度在上述家兔实验(实施例2)中，尸检时收集肠袢的内容物。提取内容物并用HPLC进行分析。用对照组(未用乳链菌肽处理过的)家兔的肠内容物评价提取方法的效果如何。该评价通过往这些试样中加入已知量的乳链菌肽、匀化和提取来进行。然后将最有效的提取方法(可将约50％的添加的乳链菌肽回收)施用于已用乳链菌肽处理过的家兔肠内容物。从处理过的家兔的肠内容物中回收到高达给药量的24％的乳链菌肽，这意味着很可能高达一半的残留乳链菌肽能在原处保持稳定6小时。
假定在成人的每次治疗中乳链菌肽的剂量扩大至600mg，平均(全部)结肠容量约为4升，则在结肠中的局部浓度应可长时间地达到高至40-80μg/ml(或40-80μg/g结肠内容物)。这是靶菌〔艰难梭菌和肠球菌(Enterococcus spp.)〕MIC的许多倍，但处于或低于保护性革兰氏阴性肠菌丛(如脆弱拟杆菌)的敏感性限度。实际剂量可较高或较低，因为它当然地取决于许多因素，如剂型在人体内打开和溶出的效率、活性成分的局部生物利用度(可自由地与细菌作用的量与被束缚于固体物质的量之比)、疾病的严重程度、药品在腹泻患者中的通过时间，等等。因此，可以料想到的是，可在任何24小时的时间里进行多次治疗(高达6次)。预期日剂量范围在最小约100mg至最大的约6g之间，最好在约300g至2g之间。
由于已知乳链菌肽可非常迅速地杀死敏感细菌，本实施例提示，乳链菌肽或类似的肽在以足够剂量释放于结肠时可用来治疗由敏感细菌引起的细菌性疾病或用来除去定居于肠中有潜在危险性的敏感细菌。
上面的实施例表明，与预料的相反，乳链菌肽和具有相似抗菌特性的其它肽会对结肠环境产生所需的效果而没有任何预想的、可能的不良效果。
首先，将制剂设计成使治疗量的乳链菌肽通过口服给药在结肠中释放。实施例6-8涉及这样的制剂。在下面的研究中所要研究的是可在胃的pH中保持其完整性至少4小时和在pH6.8(小肠下部的pH)中保持0.5-3小时然后开始在结肠中或在结肠附近崩解的剂型。
最初的制剂研究的目标是开发一种可在pH7.0的磷酸盐缓冲液中迅速崩解的无包衣芯片。由于乳链菌肽的特殊理化特性及活性药物占芯片的较大比率，片芯较难配制。与包括药用肽在内的大多数药物不同，乳链菌肽是两亲分子(既亲水又亲油)(并且是疏水性的)。因此，虽然乳链菌肽的水溶性很好(即使在中性pH中)，但在片芯浸入缓冲液中时它不会迅速从被压缩的片芯中扩散开来，而是在片剂周围形成一层凝胶化的乳链菌肽，它阻止水进入片剂内部。在评价各种赋形剂和崩解剂的范围广泛的配制程序之后，该独特的问题仅通过将最佳量的氯化钠掺入片剂中而得到解决。掺入氯化钠可充分降低凝胶程度，从而使片剂能够崩解。
遇到的第二个制剂问题涉及芯片的强度。片剂必须能经受后面的WusterTM流化床包衣工艺时遇到的剧烈搅动。含各种比率的高效粘合剂(Povidone，Methocel及CarbopolTM)的片剂所具有的强度不适合此工艺。通过深入的评价而得到的结论是，由于乳链菌肽的性质和理化特性，残存空气阻碍了粘合，从而导致片剂的物理强度差。该问题通过在制片工艺中导入碾压技术而得到解决。
制剂的释放特性是通过在芯片上以甲基丙烯酸/甲基丙烯酸酯共聚物(EudragitTM)包衣而赋予的。片剂开始崩解的时间和崩解完毕的时间通过在芯片上包以不同重量的包衣而能重现性地发生变化。
实施例6-11涉及各种制剂以及它们是否适于使有效量的本发明羊毛硫抗生素在结肠中释放的试验。
实施例6a崩解剂对片剂崩解的作用制备含以下成分的芯片
1相对于乳链菌肽原料药的重量百分比所用的崩解剂是Ac-Di-Sol、Explotab和Polyplasdone XL。含各种崩解剂的片剂的崩解时间(在pH7的磷酸盐缓冲液中测得)如下
用Ac-Di-Sol作为崩解剂配制的片剂比用其它受试崩解剂配制的片剂更快地崩解。因此，后面的制剂用Ac-Di-Sol制备。
实施例6b氯化钠对片剂崩解的作用制备含以下成分的芯片
1相对于乳链菌肽原料药的重量百分比含不同量的氯化钠的片剂的崩解时间(在pH7的磷酸盐缓冲液中测得)如下
上述结果表明，足够浓度的氯化钠的存在克服了乳链菌肽的胶凝问题并大大促进了乳链菌肽片剂在生理pH条件下的崩解。含1％以上氯化钠的受试芯片在4-6分钟内崩解，而氯化钠浓度为1％或更低的片剂即使在1.5小时后也未崩解。而且，在氯化钠浓度15.3％以内，崩解时间的变化很小。根据本发明，含浓度约为2-20％的氯化钠的制剂预期可有效地将乳链菌肽或另一种羊毛硫抗生素释放于结肠。
实施例7乳链菌肽芯片制备和测试含下述比率的各成分的芯片制剂
1相对于乳链菌肽原料药的重量百分比NIP(1)配方(相对于乳链菌肽原料药的百分比)颗粒内
颗粒外
片剂特性抗碎强度＝5.65±1.8kp(n＝10)崩解时间在反渗透纯水中＝24.4±2.5min(n＝3)在pH7.0磷酸盐缓冲液中＝33.1±4.5min(n＝3)NIP(2)配方(相对于乳链菌肽原料药的百分比)颗粒内
颗粒外
片剂特性抗碎强度＝5.56±1.89kp(n＝10)崩解时间在反渗透纯水中＝23.9±2.1min(＝3)在pH7.0磷酸盐缓冲液中＝29.9±2.7min(n＝3)不仅发现这些剂型在模拟通过胃肠道的条件下具有合乎要求的崩解特性和所需的抗碎强度，而且发现这些剂型还保持了乳链菌肽的完整性和含量均匀性。
实施例8(A)芯片的制备
1AcDiSol＝交联羧甲基纤维素钠2ProSolv＝硅化微晶纤维素3Povidone＝聚乙烯吡咯烷酮根据以下步骤顺序制备芯片1.将所有成分分别用#20(0.0331英寸)的筛过筛。
2.称取颗粒内部分的乳链菌肽、氯化钠、AcDiSol和ProSolv(成分#1-4)。
合并在合适的玻璃容器中。
3.在Turbula混合器中以50rpm混合15分钟。
4.称取滑石粉(成分#5)。加入到得自步骤3的混合物中。
5.在Turbula混合器中以50rpm混合3分钟。
6.将得自步骤5的混合物在辊式压实器(TF-mini型)中压实，辊压＝100kg/cm2，辊速＝6rpm，螺杆速度＝11rpm。
7.用振动式制粒机使得自步骤6的压实物通过1.0mm筛目(Erweka AR400湿-干式制粒机)。
8.将得自步骤7的颗粒在辊式压实器中压实，辊压＝30kg/cm2，辊速＝8rpm，螺杆速度＝11rpm9.用振动式制粒机使得自步骤8的压实物通过1.0mm筛目。
10.将得自步骤9的颗粒在辊式压实器中压实，辊压＝30kg/cm2，辊速＝8
rpm，螺杆速度＝11rpm11.用振动式制粒机使得自步骤10的压实物通过1.0mm筛目。
12.称取颗粒外部分的氯化钠、AcDiSol、ProSolv和Povidone(成分#6-9)。
加入到步骤11的颗粒中。
13.在Turbula混合器中以50rpm混合10分钟。
14.称取硬脂酸镁(成分#10)。加入到得自步骤13的混合物中。
15.在Turbula混合器中以50rpm混合2分钟。
16.将得自步骤15的混合物在Manesty D3B旋转式压片机(压片压力＝1500磅；速度＝16rpm)中用7.0mm生物凹面站(bioconcave stations)压片。
发现用此方法制得的芯片具有在后面的包衣过程中保持其完整性所需的强度。
(B)包衣片的制备
1分散体是30％固体聚合物(即，30g固体聚合物/100g分散体)。2加水，使分散体为20％(即，50％的Eudragit L30D-55分散体重量)。根据下述步骤制备用于对上面的(A)中制得的芯片进行包衣的分散体1.将Eudragit L30D-55用清洁的筛过筛。2.称取Eudragit L30D-55分散体。3.称取水。边搅拌边往Eudragit分散体中加入约2/3的水。4.称取柠檬酸三乙酯(TEC)。边搅拌边往Eudragit分散体中滴加TEC。用剩余的水(分成2份)清洗TEC容器并加入到混合物中。5.搅拌1小时。6.称取滑石粉。边搅拌边加入到混合物中。7.搅拌1.5小时。根据下述步骤用包衣分散体对芯片进行包衣
1.将芯片放置在流化床Wurster装置中。
2.将包衣分散体放在天平上，从而用磁力搅拌器连续搅拌。
3.用下述包衣条件将芯片包衣喷雾速率 7.0g/min雾化压力 1.5bar进口温度 50℃实施例9包衣厚度对片剂崩解的影响测试Eudragit L30D包衣厚度对经如此包衣的片剂在pH6.8时的崩解和溶出。包衣厚度百分比是包衣重量与芯片重量之比。图2和3所示结果表明，崩解开始时间和完毕时间均基本上与EudragitL30D包衣厚度成正比。图4所示结果表明，片剂与缓冲液的初始接触跟乳链菌肽的初始释放之间的时间滞后与包衣厚度直接关联。因此，可使用足够厚度的Eudragit L30D包衣而赋予足以通过口服将药物释放于结肠的延迟释放特性。而且，可利用包衣厚度改变延迟释放特性。
根据本发明，预期约20-180％(轴向0.15-1.316mm)之间的包衣厚度会使制剂产生所需的延迟释放特性。约40％的厚度(轴向0.371±0.07mm)是目前已知的本发明的最佳实施方式。
实施例10在模拟通过胃肠道的条件下的药物释放用USP II型装置在pH6.8的缓冲液中于37℃以100rpm的搅拌速度制备具有40％Eudragit L30D包衣(包衣厚度轴向为0.371mm)的片剂(6)。用以下方法得出片剂的溶出特性先将片剂置于0.1N盐酸(胃)环境中，然后置于pH6.8的50mM磷酸盐缓冲液(大肠)环境中。图5所示结果表明，可制备具有于人结肠释药所需的滞后时间的能重现地释放乳链菌肽的乳链菌肽片剂。
实施例11证实缓释片剂将乳链菌肽释放于患者结肠用前面的实施例8中所示活性成分与赋形剂的比率(所不同的是，另外，加入了使每片含10mg而所需量的氧化钐)配制含100mg乳链菌肽原料药的芯片。用实施例8中的Eudragit L30D-55将芯片包衣，使包衣重量达到芯片重量的40％(包衣厚度轴向为0.371mm)。在另外的芯片上包以占芯片重量的120％(包衣厚度轴向为0.896mm)和180％(包衣厚度轴向为1.316mm)的包衣。然后对片剂进行中子轰击。这使将一部分非放射性钐(152Sm)转换成放射性153Sm，从而可用闪烁扫描法让片剂在胃肠道中成象〔G.A.Digenis和E.Sandefer，在口服剂型体内评定中的伽马闪烁扫描法和中子活化技术，Crit.Rev.Ther.Drug CarrierSystems，7，309-345(1991)〕。
用12名健康男性受检者进行闪烁扫描法研究。在第一段时间里，6名受检者各服用一片用40％、120％或180％Eudragit包衣(2名受检者服用一种制剂)的经中子活化的片剂。在第二段时间里，4名受检者各服用一片包衣40％的片剂，2名受检者各服用一片包衣120％的片剂。片剂用250ml冰水吞咽。每隔30分钟进行一次成象。
图6-8显示了不同片剂在通过胃肠道时的情况。图6A和6B显示了包衣40％的片剂在一个受检者中的进程，图7A和7B显示了包衣120％的片剂的进程，图8A和8B显示了包衣180％的片剂的进程。在图6A中，可以看到，包衣40％的片剂在胃和空肠中始终是完整的。片剂在5.5小时于近段结肠完全崩解(图6B)。包衣120％的片剂在12小时刚开始分散，此时，它位于横结肠中(图7B)。包衣180％的片剂到达直肠时基本上仍是完整的(图8B)。这些结果表明，片剂在体内和体外分散的时机与包衣厚度关联。
服用包衣40％的片剂的6名受检者的数据归纳在表4中。在6名受检者中的5名中，片剂崩解的开始出现在回肠末端与横结肠之间，在整个结肠中渐进性地分散。
表4 包衣40％的乳链菌肽片剂在受检者中的崩解
在服用该制剂的6名受检者中均未观察到不良反应。
本实施例表明，乳链菌肽可配制成具有局部治疗人结肠疾病所需的合适释放特性的片剂，片剂成分的分散可在人结肠中实现，当用缓释制剂给药于人结肠时，100mg乳链菌肽原料药的剂量完全能被耐受。根据本发明，片剂可含约50-600mg乳链菌肽。在任何给定的治疗中可给与多片片剂(可达4片)，可给予在任何一段24小时的时间里多次治疗(可达4次)。乳链菌肽的日剂量范围可从最小约100mg至最大约6g，最好约为300mg至2g。对于其它羊毛硫抗生素，也可考虑使用类似的片剂剂量和日剂量。
权利要求
1.由结肠细菌感染引起的疾病的治疗方法，它包括给与有效量的羊毛硫抗生素。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述羊毛硫抗生素是乳链菌肽。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述细菌感染由艰难梭菌引起。
4.如权利要求3所述的方法，其中，所述疾病是与抗生素相关的腹泻或假膜性结肠炎。
5.如权利要求1或2所述的方法，其中，给与的羊毛硫抗生素的日剂量范围从最小的100mg至最大的6g。
6.如权利要求5所述的方法，其中，所述日剂量范围为300mg至2g。
7.如权利要求3所述的方法，其中，给与的羊毛硫抗生素的日剂量范围从最小的100mg至最大的6g。
8.如权利要求4所述的方法，其中，给与的羊毛硫抗生素的日剂量范围从最小的100mg至最大的6g。
9.如权利要求7所述的方法，其中，所述日剂量范围为300mg至2g。
10.如权利要求8所述的方法，其中，所述日剂量范围为300mg至2g。
11.定居于大肠的细菌的根除方法，它包括给与有效量的羊毛硫抗生素。
12.如权利要求11所述的方法，其中，所述羊毛硫抗生素是乳链菌肽。
13.如权利要求11或12所述的方法，其中，所述细菌是对万古霉素耐药的肠球菌。
14.如权利要求11或12所述的方法，其中，给与的羊毛硫抗生素的日剂量范围从最小的100mg至最大的6g。
15.如权利要求13所述的方法，其中，给与的羊毛硫抗生素的日剂量范围从最小的100mg至最大的6g。
16.如权利要求14所述的方法，其中，所述日剂量范围为300mg至2g。
17.如权利要求15所述的方法，其中，所述日剂量范围为300mg至2g。
18.如权利要求1或11所述的方法，其中，羊毛硫抗生素经口给与。
19.如权利要求18所述的方法，其中，羊毛硫抗生素以片剂或胶囊的形式给药。
20.如权利要求1或11所述的方法，其中，羊毛硫抗生素是直肠给药。
21.如权利要求20所述的方法，其中，羊毛硫抗生素以栓剂或灌肠剂的形式给药。
全文摘要
本发明涉及由艰难梭菌和对万古霉素耐药的肠球菌引起的结肠感染导致的疾病的治疗方法。该方法使用乳链菌肽和其它含羊毛硫氨酸的细菌素(羊毛硫抗生素)作为活性成分。
文档编号A61K38/00GK1264306SQ98805829
公开日2000年8月23日 申请日期1998年6月8日 优先权日1997年6月9日
发明者B·P·戈登斯坦 申请人:Ambi股份有限公司