专利名称：含有人参皂甙Rb的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有人参皂甙Rb1、其代谢物或其盐的药物组合物，这些组合物用于预防、处置或治疗由于神经组织损伤或脊髓损伤引起的疾病。更具体的，本发明涉及用于预防、处置或治疗下述障碍的药物组合物由神经组织损伤、脊髓损伤、头部损伤、神经组织或脊髓的创伤引起的神经组织继发性变性所引起的疾病，和由神经组织损伤或脊髓损伤引起的脱髓鞘疾病。进一步地，本发明还涉及含有人参皂甙Rb1、其代谢物或其盐的用于促进血管的再生和/或再造的药物组合物，或涉及含有人参皂甙Rb1、其代谢物或其盐的用于抑制少突胶质细胞的编程性细胞死亡或类编程性细胞死亡的细胞死亡的药物组合物。本发明还涉及用作血管的再生和/或再造促进剂或用作继发性神经组织变性的人参皂甙Rb1或其盐。
本发明还涉及静脉用制剂，该制剂用于预防、处置或治疗上述疾病或障碍。本发明还涉及人参皂甙Rb1或其代谢物作为探索参与预防、处置或治疗神经组织或脊髓疾病的新的活性组分或化合物的先导化合物的应用，或作为探索新的脑细胞保护剂或新的神经保护剂的先导化合物的应用。
背景技术：
最初，脑中风(大脑血管疾病)的治疗方法不同于脑梗塞(脑栓塞或脑血栓形成)、脑出血、短暂局部缺血发作和蜘蛛膜下腔出血的治疗。严格地说，除了进行脑CT检查之外，没有有效的对策。例如，血栓溶解剂可用于治疗短暂局部缺血发作或脑梗塞(脑栓塞或脑血栓形成)，但禁用于治疗脑出血。但是，脑中风是可能导致更高级功能性脑活动永久性障碍的严重疾病，如果不尽可能在早期对损害部位进行保护神经细胞或神经元的治疗，会威胁患者的生命。因此，对脑中风的治疗不能有片刻的迟缓，应该立即开始。甚至对脑进行CT检查的时间也是脑中风患者恢复的可能性减少的一个重要的因素。的确，急性脑中风的治疗不仅是与脑中风损伤的斗争，而且由发病开始也是与时间的竞赛。不幸的是，目前不论是哪种类型的脑中风(脑梗塞、脑血栓形成、脑栓塞、脑出血、蜘蛛膜下腔出血或短暂局部缺血发作)，事实上，即使是在脑中风发作后及时给药，也没有多少已知的药物有很强的效力。
对于脑中风的治疗而言，重要的事并本总是涉及到急性期。尽管施用某些有效的神经保护剂可暂时阻止脑细胞(包括神经胶质细胞)或神经细胞的坏死或类编程性细胞死亡的细胞死亡；除非其后在损伤部位可以发生脑血管的再生和/或再造，否则同一位置的脑细胞和神经细胞(神经元)在长时间内都可能发生变性。但是已知目前几乎没有药物能够刺激脑血管的再生和/或再造。用由单侧大脑中动脉(MCA)皮质分枝的永久性阻塞所引起的脑梗塞损伤损伤的实例可更详细地说明这些事实。当MCA永久性阻塞时，在此部位上的、只能通过MCA供应营养的神经细胞或神经元(即缺血部位的神经细胞或神经元)就会坏死和形成脑梗塞损伤，除非MCA迅速地被再贯通和再灌输。因此，没有药物能够挽救缺血部位的脑细胞，如以前的JP98/365560和PCT/JP/02550(含人参皂甙Rb1的脑细胞或神经细胞保护剂)和本发明的说明书所述，渐进性神经细胞死亡不同于坏死，被定义为“神经细胞的编程性细胞死亡”或“神经细胞的类编程性细胞死亡的细胞死亡”。
在缺血半影部分，由于来自MCA的血流的供应被截断，和在这一损伤处的血管网络显著减少；以及由于由大脑前动脉和大脑后动脉皮质分支至少部分地继续供应血流，因此在临界条件下，缺血半影部位的神经细胞和神经元在永久性MCA阻塞之后还有可能短期恢复。已经知道，如果不进行测量，缺血半影部分的神经细胞(神经元)类编程性细胞死亡的细胞死亡会逐渐发展，最初的损伤(缺血半影)完全并急剧地发展成为脑梗塞损伤。由临床的观点看，挽救最初缺血半影中的神经细胞或神经元是需要做的最重要的事。但是，即使使用上述强神经保护剂使缺血半影损伤处的神经细胞或神经元只能够暂时存活，除非在此损伤中由于永久性的MCA阻塞所造成的已经断裂或减少的血管网络能够再生和/或再造，否则在此损伤区域内神经细胞可能最终会死亡。因此，对于需要神经保护剂的病症，除了直接的神经保护作用以外，刺激缺血半影中已经断裂的血管网络的再生和/或再造也是基本的。
治疗脑中风的另一问题是脑的组织学特征和特性。因为脑的各个区域通过突触的相互作用与其它部分构成复杂的情报网络，如果一个区域损伤了，通过突触与最初损坏的区域相连接(有时突触连接是指纤维连接)的其它有关部分就会以交替的顺序再逐个损坏。例如，有报告说当脑梗塞损伤(原发性损害)在单侧大脑半球发展时，稍后引起同一大脑半球的丘脑中的神经细胞死亡(继发性变性)，这一部分与脑梗塞损伤部分有紧密的突触连接。接下来，随着单侧丘脑萎缩或变性，患者的病情恶化成脑血管痴呆。另外，如果由于单侧丘脑萎缩而使丘脑的功能损坏，在与丘脑有突触连接的另一些区域开始三发性变性；然后，患有脑中风的患者的脑功能随着时间的推移继续恶化。为了打断由脑的这些组织学特征和特性产生的恶性循环，重要的是需要能够抑制上述继发性神经变性的药物。
人参皂甙Rb1是具有下式(1)化学结构的化合物 人参皂甙Rb1是已知的化合物，参见Shibata等人文献(Shibata等人，经济和药用植物研究，世界科学(World Scientific)，Philadelphia，pp.217-284，1985)。
人参皂甙Rb1经腹膜内给药已有报道，它具有使脑镇静的作用(Yoshimura H.等人，欧洲药理学杂志(Eur.J.Pharmacol.)，146，291-197，1988)，但没有说明作用机制。在中枢神经系统，人参皂甙Rb1和人参皂甙Rg1的混合物，或人参皂甙Rb1或人参皂甙Rg1(在细胞外的浓度为10-6M-10-7M)可用于治疗阿尔茨海默氏症，其作用是激活含乙酰胆碱的神经细胞(USP 5,137,878治疗老年痴呆的组合物和方法)。但因为不能认为阿尔茨海默氏症的主要原因是含乙酰胆碱的神经细胞有功能障碍，这种假设还存在许多需要解决的问题。而且，上述US专利没有说明人参皂甙Rb1是否有助于含有乙酰胆碱的神经细胞的存活的问题，也就是说，没有说明人参皂甙Rb1是否可以保护含有乙酰胆碱的神经细胞的问题。
在本发明的发明人(Sakanaka和Tanaka)开始研究人参皂甙Rb1之前，几乎没有人提到过人参皂甙Rb1具有神经细胞保护或神经保护作用。到目前为止，本发明的发明人(Sakanaka和Tanaka)用沙鼠前脑暂时缺血模型研究了人参皂甙Rb1对神经的保护作用。这就证明了在此前脑暂时缺血的模型里，颈总动脉双边阻塞3-5分钟，同时保持脑温37℃时，根据损伤时间的不同在缺血一周内会导致海马CA1锥体细胞神经元(不含乙酰胆碱)的神经元损伤(此事件被称为延迟的神经元死亡)，缺血动物的学习行为功能受到破坏(Wen T.-C.等人，神经病理学学报(Acta Neuropathol.)，91，15-22，1996)。这些事实说明在沙鼠前脑暂时缺血模型里反映了人的暂时缺血发作(TIA)所出现的病理症状。
本发明的发明人之一(Sakanaka)证明了给沙鼠腹膜腔每天一次施用人参皂甙Rb1(10mg/kg/天或20mg/kg/天以大约70g的沙鼠的体重计算，大约是0.7mg/天或1.4mg/天)，共施用一周时，可明显预防由于颈总动脉阻塞5分钟所引起的延迟的神经元死亡和学习能力缺失(Wen T.-C.等人，神经病理学学报(Acta Neuropathol.)，91，15-22，1996)。但是，在颈总动脉发生阻塞3或5分钟后在腹膜内施用人参皂甙Rb1没有作用(Wen T.-C.等人，神经病理学学报(ActaNeuropathol.)，91，15-22，1996；Lim J.-H.等人，神经系统科学研究(Neurosci.Res.)，28，191-200，1997)。结果，由于在脑的外周(腹膜内)施用人参皂甙Rb1后转移的速度和后送的速度非常慢，因此，在此阶段就保护海马CA1锥体细胞神经元而言，人参皂甙Rb1没有临床应用价值。
我们(Sakanaka和Tanaka)已经报道了在颈总动脉发生阻塞3或5分钟后立即开始在脑室内灌输人参皂甙Rb1，而不是如上文所述由外周(腹膜内)给药，可压制延迟的神经元死亡和学习能力缺失(LimJ.-H.等人，神经系统科学研究(Neurosci.Res.)，28，191-200，1997)。我们(Sakanaka和Tanaka)还报道了，给单侧大脑中动脉(MCA)皮质分支永久阻塞的自发高血压脑中风(SH-SP)大鼠(大鼠的脑梗塞模型)在发生MCA永久阻塞后立即由脑室内灌输人参皂甙Rb1，可大大减少大脑皮质上的梗塞面积，并且可改善由缺血引起动物的位置导向失能(Zhang B.等人，J.Stroke Cerebrovasc.Dis.，7，1-9，1998)。
即使向脑室内直接灌输人参皂甙Rb1是有效的，但似乎也不可能用人参皂甙Rb1治疗人的暂时大脑缺血发作(TIA)和脑梗塞，和其它肽生长因子类似，这是因为给药途径的问题(Sakanaka M.等人，美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，95，4635-4640，1998；Wen T.-C.等人，实验医学杂志(J.Exp.Med.)，188，635-649，1998)。
关于由外周(腹膜内)给药人参皂甙Rb1的神经保护机理，我们(Sakanaka和Tanaka)的报告提到在与低浓度(1-100fg/ml)的人参皂甙Rb1混合前，培养介质可减少由羟基自由基诱导剂(硫酸亚铁)引起的神经元坏死(Lim J.-H.等人，神经系统科学研究(Neurosci.Res.)，28，191-200，1997；Zhang B.等人，J.Stroke Cerebrovasc.Dis.，7，1-9，1998)。我们首先推测人参皂甙Rb1可因排除羟基自由基而减少细胞膜脂质过氧化物，以保护培养的神经细胞，但是在我们最近的研究(JP98/365560，PCT/JP99/02550“含人参皂甙Rb1的脑细胞或神经细胞保护剂”)基础上，已经发现这一假设并不总是正确的。
某些人报道了在培养试验中人参皂甙Rb1具有神经保护作用。例如，高浓度(0.11-11μg/ml)人参皂甙Rb1可减少谷氨酸盐介导的神经毒性，从而可防止神经元细胞死亡(Kim Y.-C.，等人，神经系统科学研究杂志(J.Neurosci.Res.)，53，426-432，1998)，500μM左右的高浓度(550μg/ml)人参皂甙Rb1能够防止类编程性细胞死亡的细胞死亡的神经细胞死亡(Tanaka T.等人，人参综述(The Ginseng Review)，24，61-65，1998；Takino I.等人，同上，25，44-50，1998)。但是，按照我们(Sakanaka和Tanaka)的培养试验结果，高浓度的人参皂甙Rb1显示出神经毒性提高(Lim J.-H.等人，神经系统科学研究(Neurosci.Res.)，28，191-200，1997；Zhang B.等人，J.Stroke Cerebrovasc.Dis.，7，1-9，1998)。
另外，还不了解体内细胞外液中的这些高浓度的人参皂甙Rb1，据我们推论给体内大量的人参皂甙Rb1以保持细胞外的高人参皂甙Rb1浓度不可能有多大价值和不利效果。实际上，由我们(Sakanaka和Tanaka)的试验结果看，高剂量的人参皂甙Rb1并不是总能够得到较好的效力和有效性(Zhang B.等人，J.Stroke Cerebrovasc.Dis.，7，1-9，1998)。
我们的目的是阐明人参皂甙Rb1的神经保护作用的机理，以及与所述化合物的新的效果和应用有关的本发明，到目前为止我们已经证明了低浓度人参皂甙Rb1对神经细胞死亡的抑制作用(JP98/365560，PCT/JP99/02550“含人参皂甙Rb1的脑细胞或神经细胞保护剂”)。其结果是，我们发现人参皂甙Rb1在1fg/ml-100fg/ml如此低的浓度范围内(在世界上从来没有人报道过)，通过提高细胞死亡抑制性基因产物Bcl-XL的表达来抑制类编程性细胞死亡的神经细胞死亡。
也就是说，我们发现人参皂甙Rb1是世界上仅有的非肽类Bc1-XL表达促进剂。虽然浓度为100fg/ml的人参皂甙Rb1对脂质过氧化物的形成略有抑制作用，但是在更低的浓度范围内没有观察到这种作用。因此，此前所谈及的有关人参皂甙Rb1的作用机理的假设，即人参皂甙Rb1因除去羟基自由基而减少细胞膜脂质过氧化物以保护神经细胞的假设是不适当的。
我们还发现，将人参皂甙Rb1静脉内给药，显示了出乎意料的对抗脑梗塞的优异效果，并可改善由梗塞所引起的位置导向失能(JP98/365560，PCT/JP99/02550“含人参皂甙Rb1的脑细胞或神经细胞保护剂”)。
但是，如果在因人参皂甙Rb1用药而使脑梗塞倾向得以缓解的缺血脑组织，即缺血半影处不出现血管的再生和再造，则即使在结束静脉施用人参皂甙Rb1之后，仍很有可能在结束施用人参皂甙Rb1后在脑部的同一位置出现新的损伤。此外，即使脑皮质的原发性梗塞损伤通过静脉施用人参皂甙Rb1后缓解，除非抑制丘脑的继发性变性，否则经静脉施用的人参皂甙Rb1的作用和效力不能完全发挥出来，所述的丘脑具有与脑皮质紧密的突触连接。
我们发现，静脉施用人参皂甙Rb1促进缺血半影部位的血管网络的再生和/或再造，从而完成了本发明。我们还发现，静脉施用人参皂甙Rb1可抑制脑皮质梗塞后发生的继发性丘脑变性和脊髓损伤后发生的神经继发性组织变性，从而完成了本发明。
发明的公开本发明的目的是提供了药物组合物或产品，该组合物或产品在脑中风之后，可通过静脉施用人参皂甙Rb1，以良好的方式促进脑血管再生和再造，以及通过长期抑制神经组织的继发性变性来长时间地保护被损伤或损害的脑。
本发明的另一目的是提供适合于给药的有效制剂，其中含有可作为脑血管再生和/或再造促进剂和继发性神经组织变性抑制剂的人参皂甙Rb1或其盐。更具体地，本发明提供了用于促进脑血管再生和/或再造的含有人参皂甙Rb1或其盐的药物组合物，或用于抑制神经组织继发性变性的含有人参皂甙Rb1或其盐的药物组合物。本发明另一目的是提供用于静脉施用，以长期治疗、预防或处置脑或神经疾病的制剂，该制剂含有人参皂甙Rb1或其盐。
图2是用人参皂甙Rb1静脉输注的大鼠的大脑皮质梗塞比例的图示。数据以平均值±SE表示。统计学分析用Mann-Whitney’s U-试验进行。
图3是显示大脑皮质梗塞损伤的照片，而不是图片。A用生理盐水灌输的MCA阻塞大鼠；和B用人参皂甙Rb1灌输的MCA阻塞大鼠。
图4是综合实施例1、2和3试验结果的图示。
图5是显示原5μm的脑切片中用于测量顶叶未梗塞缺血半影中的脑血管面积的区域的图示。
图6是微分干涉相差图像而不是图片，显示了缺血一侧半影部分(即缺血半影)的显微照片，和未受损伤一侧(对照侧)相应区域的显微照片。
图7是显示丘脑的VP核的显微照片，而不是图。A假性操作动物；B仅给予生理盐水的缺血动物；C施用人参皂甙Rb1(60μg/天)的缺血动物。柱状为100μm。
图8是显示脊髓(较低的胸髓)损伤2天后的大鼠的照片，而不是图。
图9显示了脊髓(较低的胸髓)损伤7天后施用生理盐水的大鼠和施用人参皂甙Rb1(12μg/天和60μg/天)的大鼠的BBB评分。
本发明的人参皂甙Rb1、其代谢物或其盐具有促进血管再生和/或再造的作用，或具有抑制少突胶质细胞的编程性细胞死亡或类编程性细胞死亡的细胞死亡的作用。因此，本发明还涉及血管再生和/或再造的促进剂，优选涉及脑中风后血管再生和/或再造的促进剂，本发明还涉及继发性神经组织变性的抑制剂，或少突胶质细胞的编程性细胞死亡或类编程性细胞死亡的细胞死亡的抑制剂。
本发明还涉及含有人参皂甙Rb1、其代谢物或其盐的药物组合物，该组合物通过促进血管再生和/或再造，优选在脑中风后促进脑血管再生和/或再造，或通过抑制少突胶质细胞的编程性细胞死亡或类编程性细胞死亡的细胞死亡，来预防和治疗由神经组织或脊髓损伤所引起的疾病。
另外，本发明还涉及含有人参皂甙Rb1、其代谢物或其盐，用于促进血管再生和/或再造的组合物，用于预防、处置或治疗神经组织继发性变性的药物组合物，用于预防、处置或治疗神经组织或脊髓创伤的药物组合物，抑制少突胶质细胞的编程性细胞死亡或类编程性细胞死亡的细胞死亡的药物组合物，预防、处置或治疗脊髓损伤的药物组合物，和预防、处置或治疗脱髓鞘的药物组合物。
本发明的发明人发现人参皂甙Rb1或其代谢物对预防、处置或治疗神经组织或脊髓疾病是极为有效的。因此，本发明涉及用人参皂甙Rb1或其代谢物作为先导化合物，探索用于预防、处置或治疗神经组织或脊髓疾病的新活性化合物或组分的方法。
本发明还涉及人参皂甙Rb1或其代谢物作为先导化合物，探索用于预防、处置或治疗神经组织或脊髓疾病的新活性化合物或组分的应用，涉及人参皂甙Rb1或其代谢物作为先导化合物，探索新的脑细胞保护剂或新的神经保护剂的应用。本发明还涉及通过上述的方法或应用得到的预防、处置或治疗神经组织或脊髓疾病的组合物。
本发明涉及人参皂甙Rb1、其代谢物或其盐在制备预防、处置或治疗由神经组织或脊髓损伤引起的疾病的药物组合物中的应用。本发明还涉及人参皂甙Rb1、其代谢物或其盐在生产用于促进血管再生和/或再造的药物组合物，用于预防、处置或治疗神经组织的继发性变性的药物组合物，用于预防、处置或治疗神经组织或脊髓创伤的药物组合物，用于抑制少突胶质细胞的编程性细胞死亡或类编程性细胞死亡的细胞死亡的药物组合物，用于预防、处置或治疗脊髓损伤的药物组合物，和用于预防、处置或治疗脱髓鞘的药物组合物中的应用。
本发明的药物组合物优选含有低浓度的人参皂甙Rb1、其代谢物或其盐。本发明的药物组合物优选以肠胃外给药如静脉内给药或黏膜给药的方式施用。更具体而言，本发明的药物组合物优选含有低浓度的人参皂甙Rb1、其代谢物或其盐，以肠胃外给药的方式施用。
本发明进一步涉及用于预防、处置或治疗上述疾病的，适于肠胃外给药的，含有人参皂甙Rb1、其代谢物或其盐的制剂，优选静脉内给药的制剂，优选含有低浓度的人参皂甙Rb1、其代谢物或其盐。
本发明的药物组合物优选用作静脉内给药的制剂，并可选择任意给药途径，例如局部应用于损伤部位的、在损伤部位局部注射的外用制剂，口服制剂，鼻滴剂，滴眼剂，栓剂，皮下注射剂，皮内注射剂，肌内注射剂，吸入剂，舌下制剂和经皮吸收的制剂。
本发明涉及各类制剂，如静脉给药制剂和局部用于损伤部位的外用制剂，其用于长期预防、治疗或处置脑和神经疾病，是脑血管再生和再造的促进剂或继发性神经组织变性的抑制剂。
本发明的发明人首次发现，人参皂甙Rb1或其代谢物，可促进血管再生和/或再造，特别有助于脑中风后的脑血管再生和/或再造，或抑制少突胶质细胞的编程性细胞死亡或类编程性细胞死亡的细胞死亡。因而，本发明提出了如下的可能性，即人参皂甙Rb1或其代谢物，可作为先导化合物用于探索预防、处置或治疗由神经组织损伤或脊髓损伤所引起的疾病的其他新型活性化合物或组分。而且，通过改变人参皂甙Rb1化学结构的某(些)部分而制备成前药后，可选择任何的给药方式。另外，通过确定人参皂甙Rb1或其代谢物的靶分子，可以合成可改变靶分子功能的新化合物，从而导致用于处置脊髓损伤、神经创伤或创伤性损伤的药物的发展。
因而，本发明提供人参皂甙Rb1或其代谢物，作为先导化合物用于探索预防、处置或治疗上述疾病的新活性化合物或组分。
本发明的人参皂甙Rb1是上文化学结构式表示的化合物。用Shibata等人所述的方法(Shibata等人，Economic and medicinal plantresearch，世界科学(World Scientific)，Philadelphia，pp.217-284，1985)可分离或纯化人参皂甙Rb1。用此方法纯化的人参皂甙Rb1的纯度大于98％，可用薄层色谱或核磁共振谱确认(Kawashima Y.和SamukawaK.，医学药理协会杂志(J.Med.Pharmacol.Soc.)Wakan-Yaku，3，235-236，1986)。
本发明的人参皂甙Rb1可以其游离的形式使用，也可以其适当的盐的形式使用。也可使用其溶剂化物如水合物。
如JP98/365560和PCT/JP99/02550中所述(含人参皂甙Rb1的脑细胞或神经细胞保护剂)，本发明使用的人参皂甙Rb1的浓度优选的是低浓度，更具体地，在损伤处细胞外液中的浓度是1ng/ml或更低，优选1pg/ml或更低，更优选100pg/ml或更低。优选对本发明人参皂甙Rb1的静脉用制剂进行调节，以使人参皂甙Rb1在患者损伤组织的细胞外液中的浓度保持在上述浓度范围内。本发明药物组合物或制剂在患者损伤组织的细胞外液中的浓度即使只有1-100fg/ml，也足以能够达到很好的效果。
已经发现，将人参皂甙Rb1以静脉内给药不同于由外周(腹膜内)给药人参皂甙Rb1，它可快速转移至中枢神经系统(JP98/365560和PCT/JP99/02550含人参皂甙Rb1的脑细胞或神经细胞保护剂)。本发明的静脉内给药制剂可以任选是直接用于血管内，优选用于静脉内的制剂。该制剂可以一次性静脉输液，或在将本发明的药物组合物用生理盐水、蒸馏水、磷酸盐缓冲剂、葡萄糖溶液、脂质体或脂质微球体溶解后进行连续的静脉输液。该制剂也可以制成一种剂型，其可通过将如滴注输液的组合物加入静脉给药制剂来得以使用。进一步的，可以对人参皂甙Rb1的部分化学结构进行修饰以制备前药，并可选择适当的给药途径或适当的给药方法。例如，将人参皂甙Rb1上的羟基酯化以制备前药，所得到的前药似乎可以通过血脑屏障，接着用内源性酯酶水解，由此增加脑内转移的人参皂甙Rb1的量。
如JP98/365560和PCT/JP99/02550中所述(“含人参皂甙Rb1的脑细胞或神经细胞保护剂”)，和非给药对照组相比，人参皂甙Rb1的静脉内给药可将梗塞面积减少到大约1/4，以及具有独特的作用机制，即可提高细胞死亡抑制因子Bcl-XL的表达。也可保护脑中的神经细胞或神经元。因此，可用作神经保护剂，不仅可用于急性或慢性的脑中风(脑血栓形成或脑栓塞)，而且可用于脑出血急性期或慢性期和蜘蛛膜下腔出血或短暂脑缺血发作。也就是说，不促进出血倾向的人参皂甙Rb1是可以静脉内给药的药物或药物组合物，可在救护车中给疑有脑中风的患者滴注。在溶栓治疗之前给脑中风患者施用人参皂甙Rb1可改善患者的预后状况。
此外，本发明的人参皂甙Rb1不仅可使梗塞区域在静脉注射给药最多28天后减少到大约1/4，而且还可使在缺血半影中损伤和减少的血管网络恢复到差不多正常状态。因而，静脉注射人参皂甙Rb1，有助于再生和/或再造在中风后损伤和/或减少的脑血管网络，而且，一旦由静脉注射人参皂甙Rb1实施了营救，则即使在终止静脉注射该药物组合物或药物之后，缺血半影中的脑组织也可以以正常的方式发挥很好的功能。本发明的人参皂甙Rb1，通过间接和长期的有助于脑血管网络再生和再造的保护机理，预期可保护创伤或损伤的大脑，而且通过增加Bcl-XL蛋白的表达和抑制神经细胞的类编程性细胞死亡的细胞死亡，对神经细胞还提供直接的保护作用。因此，在世界范围内，人参皂甙Rb1似乎是经静脉注射可减少梗塞区域到大约1/4的第一个化合物，这不仅是发生在脑梗塞的急性期，而且也发生在脑梗塞发作后一个月的时候。因而，在将来，对脑细胞和神经细胞的各种保护剂，可利用人参皂甙Rb1或其代谢物作为先导化合物不断地开发出来。
在一般的临床领域，在第一次脑梗塞后即使再没有发现新的局部缺血脑发作，更高的神经功能也会连续恶化，这种情况是很多的。特别是对于那些脑中风后有连续恶化的后遗症的情况。其原因，可能是由脑中风发作(大脑发作)所引起的损伤或减少的脑血管网络的再生或再造不充分之故。人参皂甙Rb1的静脉注射给药或经鼻给药，在改善脑中风后的这种后遗症方面，预期会有显著作用。
因为本发明的人参皂甙Rb1静脉注射给药在促进血管再生和/或再造方面表现出新的作用和效能，所以它对于治疗具有血流紊乱症状的其他疾病(如主动脉炎综合症、急性外周动脉栓塞、血栓闭塞性脉管炎、闭塞性动脉硬化、雷诺病或雷诺综合症)也是有效的。应当记住，人参皂甙Rb1对遭受血流紊乱的组织中和具有这些血流紊乱主要症状的疾病中细胞死亡有抑制效能。因而，预期人参皂甙Rb1至少通过两种作用机理减少由外周组织的血液流通紊乱所导致的组织损伤。
因为包含人参皂甙Rb1的药物组合物，在与原发性脑损伤有突触连接的脑区域内，抑制继发性损伤的发展，所以它也具有预防许多神经变性疾病(如阿尔茨海默氏症、皮克病、脊髓小脑的退化、帕金森症、舞蹈病、多谷氨酰胺病、肌萎缩侧索硬化或多发性硬化)继发性损伤的效能，由于能减少由这些疾病所引起的较高神经功能紊乱的发展，预期还能改善病人的QOL(生活质量)。如JP98/365560和PCT/JP99/02550(“含人参皂甙Rb1的脑细胞或神经细胞保护剂”)中所述，包含人参皂甙Rb1的药物组合物，由于它们对神经细胞的类编程性细胞死亡的细胞死亡有抑制作用，并能上调Bcl-XL的表达，所以它们对治疗这些神经变性疾病的原发性损害是有效的。
进一步的，将本发明的人参皂甙Rb1静脉注射给药显著改善脊髓损伤动物的瘫痪状态。众所周知，对于创伤来说，神经组织比其他任何外周组织更易受损。包含人参皂甙Rb1药物组合物对治疗和处置脊髓损伤明显有效的事实表明，人参皂甙Rb1对于处置外周组织和中枢神经组织的创伤是有效的。如下述实施例4所示，在加压至较低的胸部脊髓而形成脊髓损伤的大鼠中，静脉注射人参皂甙Rb1改善了两个下肢(下身麻痹)的瘫痪，使大鼠在脊髓损伤后站立了起来。仅仅给予生理盐水(即赋形剂)的脊髓损伤的大鼠，两个下肢仍然瘫痪，不能站立。另外，静脉注射给药Solu-Medol(甲基脱氢皮质醇)，即目前用于处置脊髓损伤的一种药，不能改善脊髓损伤大鼠的两个下肢(下身麻痹)的瘫痪。根据这些发现，人参皂甙Rb1对脊髓损伤的治疗作用，在目前所考察到的这些化合物中被认为是最强的。因而，可以预期，在将来，人参皂甙Rb1或其代谢物一定会成为开发各种用于治疗脊髓损伤、神经创伤和创伤性损伤的药物的先导化合物。
另一方面，包含本发明人参皂甙Rb1的药物制剂或组合物的一个不应被忽视的特定特点是，它没有任何的副作用。例如，如JP98/365560和PCT/JP99/02550(“含人参皂甙Rb1的脑细胞或神经细胞保护剂”)中所述，即使将人参皂甙Rb1加入到没有经氧化氮一氧化物供体硝普酸钠(SNP)处理的正常培养神经细胞或神经元中，它也不对正常的代谢活性产生影响。而且，在低胞外浓度(1-100fg/ml)的人参皂甙Rb1仅仅保护神经细胞不受由SNP诱导的损伤。因而，人参皂甙Rb1并不影响正常神经元的功能，但可对损伤组织有良好的效果。在目前正在开发的神经保护剂，这一点可被强调为人参皂甙Rb1比谷氨酸盐受体拮抗剂有更优越的性能。
还有报告提出，并没有观察到人参皂甙Rb1的脑室内给药对脑温度、脑血流和血压的影响(Lim J.-H.et al.神经系统科学研究(Neurosci.Res.)，28，191-200，1997；Zhang B.等人，J.Stroke Cerebrovasc.Dis.，7，1-9，1998)。我们证实，人参皂甙Rb1以60μg/天的剂量静脉注射到大鼠内，不会影响其脑的血液流动。我们还认识到，人参皂甙Rb1并不增进出血倾向。在对施以本发明人参皂甙Rb1的动物进行细心观察的过程内，没有发现任何副作用。
如JP98/365560和PCT/JP99/02550(“含人参皂甙Rb1的脑细胞或神经细胞保护剂”)中所述，在以每天6μg或60μg给发生MCA永久阻塞的大鼠(体重大约为300g)使用本发明的人参皂甙Rb1时，减少了脑梗塞面积和改善了由于缺血引起的位置导向失能(脑血管痴呆)。进一步地，等量施用本发明的人参皂甙Rb1时，促进发生MCA永久阻塞的大鼠的非梗塞缺血半影部分的脑血管再生和/或再造，以及除了减少脑皮质梗塞损伤(原发性缺血损伤)之外，还能够显著抑制丘脑的继发性损伤(继发性丘脑变性)。给脊髓(较低的胸髓)损伤的大鼠以每天60μg或12μg施用人参皂甙Rb1可显著缓解麻痹和截瘫。
在此试验的基础上，计算出给脑中风人类患者(体重60kg)施用人参皂甙Rb1的剂量范围是1.2mg-12mg/天。结果是，给脑中风或脊髓损伤的人类患者施用本发明的药物组合物的日剂量虽然依赖于个体的差异和患者疾病的严重程度，但其范围是0.1mg或更多，优选1mg或更多，更优选10mg或更多。但通常随着动物体重的增加，单位体重所需要的剂量减少，因此，对人来说，上述剂量的1/10或更少时就可显示出足够的效力。当把人参皂甙Rb1用于预防、处置或治疗除中枢神经系统(CNS)疾病以外的疾病时，优选选择与上述相当的剂量，或是该剂量的1/10-1/100,000。由于本发明的药物组合物只有较小的副作用，因此可以其剂量的上限等大剂量施用，剂量的上限是每天1g或更少，优选每天0.1g或更少。
本发明药物组合物的施用方法是血管内施用，优选静脉内施用，施用量如上，可连续或重复施用。本发明的活性组合物或组分人参皂甙Rb1是一种皂甙，可按照常规方法配制。例如，通过将冻干的人参皂甙Rb1结晶或粉末溶解于生理盐水、蒸馏水、磷酸盐缓冲溶液或葡萄糖溶液，可将本发明的含水药物组合物制成静脉内给药制剂。也可以使用脂质微球体或脂质体制剂。静脉内使用的制剂中，含有人参皂甙Rb1或其盐的药物组合物的浓度可任选调节得很高，例如0.01-10mg/ml，优选0.1-1mg/ml，除非已达到这样的高浓度。
在本发明的动物实验中，在动物发生左大脑中动脉的皮质分枝的永久阻塞(MCA)之后，连续经静脉内给药28天。在急性脑中风的真实病例中，除非在脑中风发作后进行了任何处理，否则可发现中风发生后二周内在缺血半影部分会出现脑血管损伤、脱落和变性的快速发展。其结果是，由于原发性的损伤以及继发性的损伤(缺血半影)变得不可逆转而使中风损伤扩展。因此，如果至少是在此期间内施用人参皂甙Rb1，它对于损伤的缺血半影处的血管网络再生和再造是有用的，并可抑制继发性的损伤。
本发明首次提出通过静脉施用人参皂甙Rb1，使损伤的和变性的脑血管再生和/或再造。人参皂甙Rb1可促进脑血管再生和再造的事实说明，人参皂甙Rb1不仅对促进神经组织中血管的再生和再造是有效的，而且对促进外周组织中血管的再生和再造也是有效的。具体地说，预期人参皂甙Rb1对下述疾病有效心肌梗塞、心绞痛、主动脉炎综合症、急性外周动脉阻塞、闭塞性血栓脉管炎、闭塞性动脉硬化、雷诺病和雷诺综合症。下面将用心肌梗塞的实例进行更详细的说明。如果冠状动脉的分枝发生永久性阻塞，并且不能再灌输，则只能通过永久性阻塞的冠状动脉供应营养的心肌细胞就会坏死。
但是，在坏死(梗塞)附近的心肌细胞(肌细胞)，如部分由其他冠状动脉分支供血的细胞，可存活下来，其原因是静脉输注的人参皂甙Rb1介导细胞死亡(编程性细胞死亡)的增量调节-抑制基因(Bcl-XL)的表达(JP98/365560和PCT/JP99/02550(“含人参皂甙Rb1的脑细胞或神经细胞保护剂”)。因而，由于人参皂甙Rb1在相同位置上诱导血管再生和再造，所以可持久地避免心肌细胞发生细胞死亡。人参皂甙Rb1保护患有心肌梗塞、但可惜没有接受冠状动脉搭桥或PTCA(经皮的冠状动脉血管成形术)的病人。这至少是由于上述两种不同的作用，预期可有助于减少梗塞损伤。勿需赘言，如果将人参皂甙Rb1静脉注射给在进行过冠状动脉搭桥或PTCA之前已发展为心肌梗塞的病人，病人的预后会显著改善。而且，对于患有外周组织疾病的病人，人参皂甙Rb1可在与脑疾病所用剂量相同的剂量或甚至在这些剂量的1/10到1/100,000下发挥作用和效能。
在这方面，不应忘记的是，在许多患有心肌梗塞的病人中，心脏的博动功能已经减弱，不能引起足够的大脑血液流动。这有时会导致不可逆转的脑损伤。静脉注射人参皂甙Rb1可改善心肌梗塞病人的QOL(生活质量)，因为它保护脑细胞和神经细胞免受脑血流衰竭，如JP98/365560和PCT/JP99/02550(“含人参皂甙Rb1的脑细胞或神经细胞保护剂”)所述。
下面，详细地说明静脉注射人参皂甙Rb1的作用。
首先，我们考察了静脉点滴人参皂甙Rb1的作用。例如，为此目的，选用了雄性SH-SP大鼠，重250-300g，年龄12-13周。将这些动物饲养在12∶12小时明喑循环的空调房间中，随意地供给水和食物。在吸入麻醉条件下使左中脑动脉(MCA)的脑皮层分支凝固，并切下。在MCA永久阻塞后立即单次静脉注射溶解在生理盐水中的人参皂甙Rb1(6μg或60μg)，此后，利用Alza微型渗透泵连续静脉注射人参皂甙Rb1共28天(6μg/天或60μg/天)。
患有MCA阻塞的对照动物(局部缺血对照动物)和假性操作动物都给予相同剂量的生理盐水。
在MCA永久阻塞后，按照本发明者(Sakanaka和Tanaka)的方法(Igase，K.等人，脑血流代谢杂志(J.Cereb.Blood Flow Metab.)，19，298-306，1999；Zhang B.等人，J.Stroke Cerebrovasc.Dis.，7，1-9，1998)，分别在第二周和第四周进行4天的水迷宫试验，测定SH-SP大鼠的位置导向能力。
结果示于
图1。图1的左图表示在MCA永久阻塞后第二周的结果，右图表示永久MCA阻塞后第四周的结果。在图1中，实心圆(●)表示假性操作大鼠的结果；空心圆(○)表示仅施用生理盐水的MCA阻塞大鼠的结果；实心方块(■)表示以6μg/天的剂量施用人参皂甙Rb1的MCA阻塞大鼠的结果；空心方块(□)表示以60μg/天的剂量施用人参皂甙Rb1的MCA阻塞大鼠的结果。
如图1所示，与给予生理盐水的脑梗塞组动物相比较，用人参皂甙Rb1给药的脑梗塞组，由于注入人参皂甙Rb1，在MCA永久阻塞(脑梗塞)后的位置导向失能得到明显改善。特别是在MCA阻塞后第2周和第4周进行的水迷宫试验中，低人参皂甙Rb1剂量组在MCA阻塞后的第3天和第4天，高人参皂甙Rb1剂量组在第2周的第3天和第4周的第3和第4天显著改善学习失能。高剂量和低剂量组在第4周的第1天各自都有显著的影响。在SH-SP大鼠的游泳速度试验中，四个组没有显著差别。
在第4周水迷宫实验后，将SH-SP大鼠用水合氯醛麻醉，用含有4％多聚甲醛的0.1mol磷酸盐缓冲溶液穿心灌输和固定，切下脑，并将发生梗塞的脑皮质部分照相。用图象分析仪测量照片上的左大脑半球的面积和左脑皮质梗塞的损伤面积。左脑皮质梗塞面积除以左大脑半球面积，可计算出脑皮质梗塞的比率(％)。结果如图2所示。
如图2所示，将静脉给药人参皂甙Rb1的脑梗塞组和只给生理盐水的脑梗塞组相比，前者脑梗塞的比率显著降低。由于脑皮质梗塞的比率是以梗塞面积为基础进行计算的，与只给生理盐水的试验组相比，使用静脉给药人参皂甙Rb1的试验组梗塞比率的平均值减少到50％或更低，静脉给药人参皂甙Rb1的试验组梗塞实际体积的减少大约是1/4。
图3A和图3B分别给出了施用生理盐水的试验组，和施用人参皂甙Rb1(6μg/天)的试验组的脑梗塞的实际情况。
图4是归纳了本发明试验结果的图示。施用生理盐水的大鼠，残留的梗塞面积大，在水迷宫试验中大鼠逃逸到终点平台上需要较长时间。相反，在给以本发明人参皂甙Rb1的试验组，梗塞的面积减少，其结果是，在水迷宫试验中仅用短时间大鼠就可逃逸至终点平台。
根据本发明人(Sakanaka)以前的报告，用沙鼠的短暂前脑缺血模型(Wen T.-C.，等人，神经病理学学报(Acta Neuropathol.)，91，15-22，1996)，即使是在缺血之前用人参皂甙Rb1腹膜内给药(10mg/kg/天或20mg/kg/天)，也只有大约30％的海马CA1锥体神经元能够免除伤害。另外，在缺血损伤后将人参皂甙Rb1腹膜内给药没有效果。而且，根据沙鼠体重(大约70g)进行测量，经腹膜内联合给药人参皂甙Rb1时的日剂量可高达0.7mg-1.4mg，从人参皂甙Rb1给药的效力和效果的观点考虑，与腹膜内用药相比，将人参皂甙Rb1由静脉内给药是最好的方法，并且很容易给人实施。正如我们所知道的，腹膜内用药并不是常常给人使用的方法，只有少数除外(如腹膜灌洗等)。
本发明实施例中所使用的永久性MCA阻塞动物(脑梗塞大鼠或脑栓塞大鼠)比短暂前脑缺血的沙鼠模型显然更为严格，它们提供了更接近人类脑梗塞疾病的模型。因此，在脑血管阻塞后开始静脉灌注人参皂甙Rb1，对永久性MCA阻塞大鼠显示出显著的优异效果，这清楚地说明了以低剂量静脉灌注人参皂甙Rb1具有有效、便利和经济的优点。
另一方面，在本发明的发明人(Sakanaka和Tanaka)以前的报告中，人参皂甙Rb1可直接注入永久性MCA阻塞动物的脑室(Zhang B.，等人，J.Stroke Cerebrovasc.Dis.，7，1-9，1998)，在永久性MCA阻塞发生后，只有以每天0.6μg的剂量连续注入脑室才能观察到对脑梗塞有明显的抑制作用；与本发明实施例中所述的静脉内给药人参皂甙Rb1的作用相等或略小。在前述将人参皂甙Rb1在脑室内用药的报告中，当在永久性MCA阻塞发生后以另外剂量(每天6μg或0.06μg)的人参皂甙Rb1连续注入脑室时，没有观察到对脑梗塞的治疗效果。因此，在脑室内施用人参皂甙Rb1的有效剂量范围很窄，其实际临床应用很困难。而且，将危险性和所能得到的利益综合考虑，将人参皂甙Rb1注入脑室的方法似乎也不可能用于人。
一般来说，将药物直接用于脑室或用于脑主质时神经保护因子或药剂有最好的效果，而在静脉或腹膜内用药时，由于阻止神经保护剂进入脑主质的血脑屏障的作用，或由于所述药物的代谢分解，其效果和效力大大减少或完全消失。因此，基于腹膜内或脑室内施用人参皂甙Rb1的试验结果，在静脉内施用人参皂甙Rb1的效果和效力是完全无法预料的。
但正如本发明所阐明的，在静脉内施用人参皂甙Rb1可有效地减少永久性MCA阻塞大鼠的脑梗塞的面积，其剂量范围比在脑室内用药时更宽，并可改善MCA阻塞动物的学习功能。人参皂甙Rb1是纯化的皂甙，含于药用人参，但是由于其口服用药后无法由血液中测出，人参皂甙Rb1的药物作用基本是被否定的(Kobashi等人，药用人参’95(Medicinal ginseng’95)，pp 213-221，Kumagai A.编辑，KyoritsuPubl.)。但是，按照本发明的实例(如JP98/365560和PCT/JP99/02550(“含有人参皂甙Rb1的脑细胞或神经细胞保护剂”)所述)，清楚地说明了在静脉内施用人参皂甙Rb1是有效的，其效力和应用不依赖于药用人参。
下面，我们制备石蜡切片，5μm厚，获自在前囟点后大约2.8mm的水平上的大脑样品。而后，测量在顶叶中每1.27mm2非梗塞缺血半影中的脑血管面积。对每一个静脉注射了人参皂甙Rb1(即大脑组织已由施用人参皂甙Rb1得以救治)(图5)的动物组大脑半球都这样做。四幅不同的微分干涉相差显微照片被用来测定(图6)，并计算脑血管面积的比率(表1)。
表1
也对对照组的脑半球(未受损侧)进行这种脑血管面积比率的测定。表1给出了以6μg/天和60μg/天的剂量给予人参皂甙Rb1后，未受损侧同缺血(损伤)侧的脑血管面积的比率。数据被表示为平均值±SE。通过ANOVA＋Fisher’s PLSD进行统计分析。如表1指出的那样，对照侧与局部缺血侧之间这种脑血管面积的比率并没有显著的差异。这表明，由于在MCA永久阻塞后的28天内静脉注射给予人参皂甙Rb1，缺血半影中的大脑皮层血管网络已差不多完全进行了再生和再造。此外，同未受损侧比较，在一发生MCA永久阻塞后，在顶叶的缺血半影中的脑血管面积的比率就十分自然地显著减少。
此外，将由前囟点后3.6mm水平上的大脑样品制备的石蜡切片进行尼氏染色，测定在相同水平上左丘脑面积与右丘脑面积(局部缺血侧/未受损侧×100)的比率。给予了人参皂甙Rb1的组比给予了赋形剂(生理盐水)的局部缺血组显示出明显较高的值，它们所显示的数值接近假性操作组的值。这些数据表明，在大脑皮层梗塞后产生的丘脑继发性萎缩差不多完全由静脉注射人参皂甙Rb1抑制了。此外，我们还研究了与大脑皮层的局部缺血核心交互突触连接(纤维连接)的丘脑腹后核(VP丘脑核)的组织学模式。图7A显示假性操作动物的丘脑VP核；图7B显示给予了生理盐水的局部缺血动物的丘脑VP核；图7C显示给予了人参皂甙Rb1(60μg/天)的局部缺血动物的丘脑VP核。注射了生理盐水的局部缺血动物(图7B)同静脉输注了人参皂甙Rb1的局部缺血动物(图7C)的比较揭示，在用人参皂甙Rb1处理过的VP丘脑核中大量的神经细胞(神经元)得到了很好的救治，而无继发性变性。因而，这表明静脉注射人参皂甙Rb1能抑制丘脑的继发性变性。
我们还进一步研究了静脉注射人参皂甙Rb1对脊髓损伤的影响，这是一种能引起神经组织继发性变性的难对付的疾病。当将压力加到脊髓节段如低胸髓上时，不仅这个节段的灰质的神经细胞，还有白质中的纤维束或通路都遭到损伤。白质中最初的损伤还向远侧区(尾区)发展，并引起已损伤的纤维束或通路的传出神经元或起点，即受损的上神经细胞体(即传出神经元或起点)的继发性变性，所述上神经细胞体将神经纤维投射到纤维束或通路。因而，由加压负荷引起的低胸髓中白质的纤维束或通路的损伤，造成了两后肢的截瘫。这样，这种截瘫的出现，是由于投射到胸髓中纤维束或通路的原发性损害处的传出神经元或起点(神经细胞体)的继发性变性，和由于低胸髓(即腰髓和骶髓)远端的纤维束或通路的继发性变性。而且，低胸髓的损伤中断上部大脑到腰髓和骶髓的神经支配。因此，腰髓和骶髓中灰质的神经细胞或神经元的继发性变性加重，结果使两后肢的截瘫成为不可逆的。我们使用的是Wistar大鼠(重大约300g)作为脊髓损伤的动物模型，向其低胸髓加以20g的压力，达20分钟。
通过吸入在氧化亚氮和氧的混合物中的氟烷使大鼠麻醉，并将20g的压力加到其低胸髓20分钟。超过30分钟后，将溶解在生理盐水中的人参皂甙Rb1一次输注到左股静脉中(12μg或60μg)。接着用Alza微型渗透泵连续静脉输注人参皂甙Rb17天(12μg/天或60μg/天)。向对照动物和假性操作动物给予相同量的生理盐水(赋形剂)。在脊髓损伤前、在脊髓损伤的那天和脊髓损伤后的第1天到第7天，测定开阔场的运动成绩[Basso，Bettie和Bresnakan(BBB)成绩]，以便确定运动功能指数(Basso D.M.等人，神经创伤杂志(J.Neurotrauma)，13，343-359，1996)。假性操作大鼠(正常大鼠)的BBB成绩是20-21。
图8A给出了在脊髓损伤后第2天用生理盐水处理的对照大鼠的结果。图8B给出了在脊髓损伤后第2天用人参皂甙Rb1(60μg/天)给药的大鼠的结果。如图8A所示，给予生理盐水和将20g压力加于低胸髓20分钟的大鼠，明显表现出两后肢截瘫。但是，当在将20g压力加于低胸髓20分钟之后用人参皂甙Rb1(60μg/天)静脉注射时，两后肢的截瘫在2天后显著改善，如图8B所示。用人参皂甙Rb1处理的大鼠还能借助于支撑棒站立起来。
图9是利用在脊髓损伤后第7天的BBB成绩给出的大鼠运动能力的定量化图。如图9所示，由静脉给予人参皂甙Rb1的脊髓损伤大鼠以剂量依赖方式明显地改善了运动能力。数据表示为平均值±SE。统计分析由Mann-Whitney U-试验进行。
Solu-Medrol(甲基脱氢皮质醇)，是在临床上以30mg/公斤的剂量治疗脊髓损伤的药品，利用本发明人为给予人参皂甙Rb1所采用的相同方式，将其静脉输注到受到脊髓损伤的大鼠的股静脉中。但是，并没有看到对截瘫的明显改善。在给予了Solu-Medrol的大鼠中，背皮切口的伤口愈合，与给予了生理盐水的大鼠相比明显地推迟。但是，在给予了人参皂甙Rb1情况中，就没有看到这种副作用。这个事实说明，人参皂甙Rb1是比Solu-Medrol更好的用于治疗脊髓损伤和神经组织的创伤性损伤的药品。而且，所需要的人参皂甙Rb1剂量要小于Solu-Medrol的剂量。此外，与Solu-Medrol不同，人参皂甙Rb1既没有免疫抑制作用，也没有溃疡诱发作用。因而，人参皂甙Rb1预期是一种用于脊髓损伤和神经创伤性损伤的十分安全的药品。
根据本发明利用脊髓损伤大鼠的实验结果，含有人参皂甙Rb1的静脉给药制剂对脊髓损伤的治疗作用，被认为在世界范围内在历史上是最强的。人参皂甙Rb1或其代谢物，对于改善脊髓损伤的症状，可具有非常强的治疗作用。这就支持了以下的观点，即人参皂甙Rb1或其代谢物可以是用来治疗脊髓损伤或神经创伤性损伤(神经创伤)的先导化合物。
众所周知，神经组织比其他外周组织更易受到创伤。含有人参皂甙Rb1的药物组合物对于治疗和处置脊髓损伤具有重要作用的事实说明，人参皂甙Rb1对于治疗外周组织的创伤性损伤也是有效的。
既然人参皂甙Rb1对脊髓损伤或神经创伤性损伤(神经创伤)的治疗作用是深入的，新的治疗脊髓损伤的药用化合物就可利用人参皂甙Rb1或其代谢物作为先导化合物合成出来。而且，由于对人参皂甙Rb1或其代谢物靶分子的鉴定，就能合成出可改变靶分子功能的新型化合物。这样，就可以对治疗脊髓损伤、神经创伤性损伤和创伤性损伤的药品的开发给予指导。
此外，神经胶质细胞特别是少突胶质细胞，在脊髓损伤的情况下被认为进入编程性细胞死亡。因此，脱髓鞘作用的发生恶化或加重了与脊髓损伤相关联的神经症状(Crowe，M.J.等人，自然医学(NatureMed.)3，73-76，1997；Emery，E.等人，神经外科学杂志(J.Neurosurg.)89，911-920，1998)。静脉给予人参皂甙Rb1，显著地改善了脊髓损伤大鼠的两个后肢的麻痹和截瘫，这些实验结果表明，人参皂甙Rb1抑制少突胶质细胞的编程性细胞死亡或类编程性细胞死亡的细胞死亡，因而改善脊髓损伤的症状。因此，本发明的人参皂甙Rb1被认为可用于预防、治疗和处置伴随有脱髓鞘作用的脑和神经疾病(多发性硬化、宾斯旺格痴呆等)。而且，静脉注射给予人参皂甙Rb1改善了脊髓损伤大鼠(截瘫)两后肢麻痹的实验结果表明，受损伤的神经纤维或神经组织，由于给予了人参皂甙Rb1而可以再生。
上述实验结果已证明，包含人参皂甙Rb1或其盐的静脉用制剂，可以诱导在脑中风情况下损伤或减少的脑血管网络的再生和/或再造。这些制剂还显示具有对脑细胞(包括神经胶质细胞)的保护作用和对神经细胞的保护作用(JP98/365560和PCT/JP99/02550(“含人参皂甙Rb1的脑细胞或神经细胞保护剂”)。因而，这些制剂保护脑组织。还已证明，包含人参皂甙Rb1或其盐的静脉用制剂，不仅能抑制神经组织的原发性损害，而且还抑制脑区域中与原发性损害具有突触连接(纤维连接)的继发性损伤。此外，包含人参皂甙Rb1的药物组合物，预期是一种用于治疗脊髓损伤和神经创伤性损伤(神经创伤)的划时代的药物，它对外周组织的创伤也有效。
我们知道，人参皂甙Rb1或其盐，是药用人参的组分，毒性很低。
在MCA永久阻塞后，立即在左股静脉一次性注射含有浓度为1μg/μl或0.1μg/μl人参皂甙Rb1的60μl生理盐水；然后用导管连接到Alza微型渗透真空泵，该泵植入每只动物背部皮下，由一次性注射人参皂甙Rb1的部位插入相同的静脉。在所述的微型渗透真空泵中预先充满含有人参皂甙Rb1的生理盐水，将人参皂甙Rb1以60μg/天或6μg/天的剂量通过置于左股静脉的导管连续输入血液，共28天。含有人参皂甙Rb1的溶液的流速是每小时0.25μl。MCA永久阻塞的对照动物(缺血对照动物)和假性操作动物施用相同剂量的生理盐水。
结果如图1所示。图1的左图是永久MCA阻塞后第二周试验的结果；右图是永久MCA阻塞后第四周试验的结果。图1中，实心圈(●)表示假性操作大鼠的结果；空心圈(○)表示仅施用生理盐水的MCA阻塞大鼠的结果；实心方块(■)表示每天给以6μg剂量施用人参皂甙Rb1的MCA阻塞大鼠的试验结果；空心方块(口)表示每天以60μg剂量施用人参皂甙Rb1的MCA阻塞大鼠的试验结果。数据以平均值±SE表示。统计学分析用ANOVA-Fisher’s PLSD进行。
在SH-SP大鼠的游泳速度试验中，四个实验组没有显著差别。实施例3(损伤比率的测定)在第4周的水迷宫试验结束后，将SH-SP大鼠用水合氯醛麻醉，用含有4％多聚甲醛的0.1mol磷酸盐缓冲溶液穿心灌输和固定，切下脑，并将发生梗塞的脑皮质部分照相。用图象分析仪测量照片上的左大脑半球的面积和左脑皮质梗塞的损伤面积。左脑皮质梗塞面积除以左大脑半球面积，可计算出脑皮质梗塞的比率(％)。结果如图2所示。数据以平均值±SE表示，统计学分析按照Mann-Whitney U-试验方法进行。
图3A和图3B分别给出了施用生理盐水的试验组，和施用人参皂甙Rb1(6μg/天)的试验组的脑梗塞的实际情况。
图4是归纳了本发明试验结果的图示。施用生理盐水的大鼠，残留的梗塞面积大，在水迷宫试验中大鼠逃逸到终点平台上需要较长时间。相反，在给以本发明人参皂甙Rb1的试验组，梗塞的面积可以复原或减少，其结果是，在水迷宫试验中仅用短时间大鼠就可逃逸至终点平台。
将分离的脑包埋在石腊中，制备在前囟点后大约2.8mm水平上的包括脑皮质梗塞损伤区的石腊切片，厚度5μm。然后，测量每1.27mm2用静脉注射人参皂甙Rb1处理的缺血半影中的脑血管面积。对每一个静脉注射了人参皂甙Rb1(即大脑组织已由施用人参皂甙Rb1得以救治)(图5)的动物组大脑半球都这样做。四幅不同的微分干涉相差显微照片被用来测定(图6)，并计算脑血管面积的比率(表1)。也对对照组的脑半球(未受损侧)进行这种脑血管面积比率的测定。正如表1所指出的，未受损侧和缺血侧脑血管面积的比率没有显著差别。
图5是在5μm厚的脑切片上用于测量顶叶的非梗塞缺血半影中血管面积的区域的图示。在图5中，用长方形圈起的部分是指测量血管面积的区域顶叶的脑皮质层II-IV；图5中涂黑的部分是施用人参皂甙Rb1时的梗塞损伤区域；图5中的灰色部分是施用生理盐水时的梗塞损伤部分。
图6是照片而不是图片，显示了在缺血的一侧脑皮质的非梗塞缺血半影部分的血管网络，和在未受损一侧相应的脑皮质上的血管网络。较上面的是未受损的一侧，较下面的是缺血的一侧。
表1显示了在5μm厚的脑切片上，顶叶的非梗塞缺血半影中血管面积的比率。数据以平均值±SE表示。统计学分析用ANOVA-Fisher’s PLSD进行，N＝5。
另外，将用前囟点后3.6mm水平上的脑样品制备的石腊切片用尼氏染色法染色，测量在同一水平上的左丘脑面积与右丘脑面积之比(缺血一侧/未受损一侧×100)。结果指出，与只施用赋形剂(生理盐水)的缺血组相比，施用人参皂甙Rb1的组的数值明显较高，它们的数值与假性操作组接近。
结果如表2所示。
表2
表2说明左丘脑面积与右丘脑面积之比，和在0.099mm2丘脑腹后核上的神经细胞(神经元)数目。数据以平均值±SE表示。统计学分析用Mann-Whitney U-试验进行。表2中，*p＜0.05，**p＜0.01。另外，丘脑的腹后核(VP丘脑核)与缺血核心有紧密的突触连接(纤维连接)，与只由静脉施用了赋形剂(生理盐水)的缺血组相比，静脉施用了人参皂甙Rb1的缺血组有大量的神经细胞存活且没有发生继发性变性。实施例4(静脉输注人参皂甙Rb1对脊髓损伤的大鼠的影响)通过吸入在氧化亚氮和氧的混合物中的氟烷使大鼠麻醉，并将20g的压力加到其低胸髓20分钟。超过30分钟后，将溶解在生理盐水中的人参皂甙Rb1一次注射到左股静脉中(12μg或60μg)。接着用Alza微型渗透泵连续静脉输注人参皂甙Rb17天(12μg/天或60μg/天)。向对照动物和假性操作动物给予相同量的生理盐水(赋形剂)。在脊髓损伤前、在脊髓损伤的那天和脊髓损伤后的第1天到第7天，测定开阔场的运动成绩[Basso，Bettie和Bresnakan(BBB)成绩]，用作运动功能的指数(Basso D.M.等人，神经创伤杂志(J.Neurotrauma)，13，343-359，1996)。假性操作大鼠(正常大鼠)的BBB成绩是20-21。
图8A给出了在脊髓损伤后第2天用生理盐水给药的对照大鼠的结果。图8B给出了在脊髓损伤后第2天用人参皂甙Rb1(60μg/天)给药的大鼠的结果。如图8A所示，给予生理盐水和将20g压力加于低胸髓20分钟的大鼠，明显表现出两后肢截瘫。但是，当在将20g压力加于低胸髓20分钟之后用人参皂甙Rb1(60μg/天)静脉注射时，两后肢的截瘫在2天后显著改善，如图8B所示。用人参皂甙Rb1处理的大鼠还能借助于支撑棒站立起来。
图9是利用在脊髓损伤后第7天的BBB成绩给出的大鼠运动能力的定量化图。如图9所示，由静脉给予人参皂甙Rb1的脊髓损伤大鼠以剂量依赖方式明显地改善了运动能力。数据表示为平均值±SE。统计分析由Mann-Whitney U-试验进行。*p＜0.01，**p＜0.005。实施例5(用人参皂甙Rb1预防、治疗或处置褥疮)卧床不起的患者和老年患者的褥疮导致全身性疾病加重和QOL(生活质量)的显著恶化。在褥疮的早期，损坏的皮肤发展成皮肤发红或显红色。事实上几乎没有外用制剂经外部施用后对损坏的局部皮肤显效，这在皮肤病学领域是个大问题。
在有和没有葡萄糖的情况下，将人参皂甙Rb1与水溶性基质或脂溶性基质混合，制成皮肤外用制剂(乳膏或油膏)。将该制剂局部施用于褥疮的损伤部位和其周围区域(半影)，直到褥疮的损伤被治愈、减轻或不再发生变化。在此情况下，人参皂甙Rb1在基质中的量应调节到使损伤部位人参皂甙Rb1于细胞外的浓度保持在1ng/ml或更少，优选10pg/ml或更少，更优选100fg/ml或更少。如果经局部施用含有人参皂甙Rb1的皮肤外用制剂不能达到足够的效果，则可以和静脉施用人参皂甙Rb1结合使用。实施例6(用人参皂甙Rb1预防、治疗或处置角膜损伤)众所周知，佩戴隐形眼镜时或用准分子激光进行近视眼校正手术后可能伤害角膜，到目前为止，几乎没有一种滴眼剂可以保护角膜组织。
将用人参皂甙Rb1与任意一种眼科用基底溶液混合可制备滴眼液。将该滴眼液给角膜损伤的患者连续施用必要的次数，直到改善或治愈所述的角膜损伤。在此情况下，人参皂甙Rb1在基底溶液中的量应调节到使受损伤的角膜组织中的细胞外人参皂甙Rb1浓度保持在1ng/ml或更少，优选10pg/ml或更少，更优选100fg/ml或更少。实施例7(用人参皂甙Rb1保护用于移植的角膜)在眼科学领域常常进行角膜成形术，它是移植医学领域在成功率最高的治疗方法。但是，由于在为进行角膜成形术而从供者切下角膜组织之后的时间里，用于移植的角膜组织中的细胞必然要死亡，因此这段时间是角膜移植成功的限速因素。在收集用于移植的角膜后，将人参皂甙Rb1与常用的角膜保存液混合以保护移植用角膜，人参皂甙Rb1的浓度为1ng/ml或更少，优选10pg/ml或更少，更优选100fg/ml或更少。实施例8(用人参皂甙Rb1预防、治疗或处置舞蹈病)在神经变性疾病中，舞蹈病(享延顿舞蹈病)是有代表性的单一遗传性疾病，编码多谷氨酰胺的CAG重复似乎是舞蹈病的病因，但是没有研究出治疗方法。将舞蹈病致病基因、huntingtin突变体转染到培养的纹状体起源的神经元细胞中，会引起神经元细胞的类编程性细胞死亡的细胞死亡。但是，如果Bel-XL与huntingtin突变体一起在培养的神经细胞中超量表达，细胞的死亡几乎完全可以被抑制(Saudou，F.等人，细胞(Cell)，95，55-66，1988)。因此，正如我们在JP98/365560和PCT/JP99/02550(“含人参皂甙Rb1的脑细胞或神经细胞保护剂”)中所发现的，如果在舞蹈病发作之前或之后将上调脑组织中Bcl-XL蛋白质表达的人参皂甙Rb1通过鼻内或静脉内用药，其发挥效力和作用是预料之中的。为了治疗舞蹈病以外的多谷氨酰胺病(马-约病，detatorubral-pallidoluysian萎缩等)，通过鼻内或静脉内施用人参皂甙Rb1似乎是有效的。另外，如本发明所发现的，预期人参皂甙Rb1能够抑制继发性变性从舞蹈病原发性损伤(纹状体损伤)区发展到与纹状体经纤维连接的其它脑区域。
对经基因诊断确诊未来将患有舞蹈病或其它多谷氨酰胺病的人(以体重为60kg计)，或是对已患有舞蹈病或其它聚谷多酰胺病的人(以体重为60kg计)来说，通过鼻内或静脉内施用优选量的人参皂甙Rb1，直至使病理症状得到改善或稳定。治疗多谷氨酰胺病时静脉施用人参皂甙Rb1的量与治疗急性脑中风时需要施用的量相当。鼻内用药的量可调节到使血液中的人参皂甙Rb1水平与静脉内施用时相当。实施例9(用人参皂甙Rb1预防、治疗或处置扩张性心肌病)扩张性心肌病是一种表现出因非病因性心肌细胞死亡(心肌细胞变性)所造成的心脏功能减弱和心脏扩张的疾病。心脏功能减弱是逐渐恶化的过程，并且会发展成心脏衰竭甚至死亡。当发展到心脏衰竭时，除了心脏移植外，没有其他治疗方法。可能，当患有扩张性心肌病的患者的心肌细胞将要死亡时，大量含在心肌细胞中的细胞保护性基因产物Bcl-XL蛋白可能会减少。因此，由静脉内或鼻内施用人参皂甙Rb1可使Bcl-XL蛋白的减少终止(JP98/365560和PCT/JP99/02550“含人参皂甙Rb1的脑细胞或神经细胞保护剂”)，并可抑制患者的心肌细胞死亡，患者的心脏功能可长时间保持。
对于被确诊患有扩张性心肌病的患者(以体重为60kg计)，将适当量的人参皂甙Rb1迅速通过鼻内或静脉内施用，直到患者的病理症状得到改善或情况不再恶化。为了治疗心肌病和心脏衰竭，可联合施用人参皂甙Rb1和其它口服药物如β-阻断剂、钙拮抗剂、ACE-抑制剂、利尿剂。当给患有外周器官疾病如心脏病的患者施用人参皂甙Rb1时，人参皂甙Rb1的施用量与用于中枢神经系统(CNS)疾病患者的施用量相同，或优先选择所述量的1/10-1/100,000。
工业实用性本发明提供了有效的脑血管再生和/或再造促进剂，其中包括用于静脉内施用低浓度人参皂甙Rb1的制剂，该制剂可在脑中风(包括脑出血、蛛网膜下出血、脑梗塞、脑血栓形成、脑栓塞、暂时性脑缺血发作)后使用。也就是说，与人参皂甙Rb1有关的本发明提供了药物或药物组合物，它们可给急救车中的被怀疑患有脑中风的患者使用。在急性脑中风的实际情况中，病理症状通常在发作后两周内恶化，因此，如果在此期间施用本发明的人参皂甙Rb1，则可达到足够的效果。
进一步地，由于本发明的药物组合物对血管再生和/或再造显示了新的作用和效果，它们对主要症状是血流障碍的疾病(主动脉炎综合症，胶原蛋白疾病，急性外周动脉阻塞疾病，闭塞性血栓脉管炎，闭塞性动脉硬化，血栓性静脉炎，糖尿病性视网膜炎，糖尿病性肾病，视网膜栓塞，雷诺病，雷诺综合症，心肌梗塞，褥疮，外周循环衰竭，心绞痛，缺血再灌输引起的肝、肾或心脏损伤等)是有效的。如JP98/365560和PCT/JP99/02550(“含人参皂甙Rb1的脑细胞或神经细胞保护剂”)中所述，在血流障碍性疾病中，人参皂甙Rb1具有抑制患有血流障碍的组织的死亡的作用，这不应被忽视。因此，对于不管是中枢或是外周组织发生的以血流障碍为主要症状的疾病，人参皂甙Rb1至少可以通过两种作用机制减少患有血流障碍的组织或细胞受到的损害或损伤。
一般来说，神经或脑疾病的原发性损害的病因在各种病之间是各不相同的。例如，脑中风是由于脑血管阻塞或血流衰竭所引起的。神经变性疾病是由于基因异常、环境因素和生活习惯混合影响下发展的，因此，通常不容易通过确定其原发性原因和排除这些原因来防止各种神经变性疾病原发性损害的发展。另一方面，不论脑中风和神经变性疾病中原发性损害形成的原因是什么，一旦形成原发性损害，与原发性损害位置有突触连接(纤维连接)的各个脑区域会发展成继发性变性。在与这些突触连接(纤维连接)有关的继发性神经组织变性中，至少可能有一部分涉及某些共同的机制。在本发明中，通过静脉内施用低浓度的人参皂甙Rb1可有效抑制脑皮质梗塞后丘脑的继发性变性，以及抑制脊髓损伤后神经组织的继发性变性。以此为基础，静脉内或鼻内施用人参皂甙Rb1可有效地抑制在其它类型的脑中风原发性损害后的继发性神经组织变性，以及其它脑或神经疾病(阿尔茨海默氏症、皮克病、脊髓小脑的退化、帕金森氏病、脱髓鞘疾病、舞蹈病、多谷氨酰胺病、脑瘫、肌萎缩侧索硬化、青光眼、老年性黄斑变性、AIDS性脑病、肝性脑病、脑炎、进行性核上麻痹、多发性硬化症、糖尿病性视网膜炎、糖尿病性神经病、视网膜脱离、视网膜色素变性、一氧化碳中毒、新生儿窒息、周围神经损伤、痉挛性截瘫、进行性核上麻痹、脊髓中的血管损伤、线粒体脑病、脑膜炎等)的原发性损害后的继发性神经组织变性。进一步地，施用人参皂甙Rb1可有效地压迫或麻痹伴有椎间盘突出、椎管狭窄、脊椎骨脱离、滑行疾病、颈部椎骨脱离和后纵韧带骨化的脊髓和/或其根。它对于面部神经的麻痹也是有效的。人参皂甙Rb1的这些效果和作用可延缓患有难治的脑或神经疾病的患者病理症状的恶化，并可改善QOL(生活质量)。
可以预期人参皂甙Rb1能够保护处于急性和慢性肝炎或肾炎情况下的肝细胞(肝实质细胞)和肾细胞。此外，通过促使由肝炎和肾炎所破坏的血管网络的再生和/或再造，它可改善肝炎病人和肾炎病人的预后状况。而且，人参皂甙Rb1通过其细胞保护作用和促进血管再生和再造的作用，对治愈褥疮或创伤显示出作用和效能。在此情况下，人参皂甙Rb1不仅可用作静脉给药的药剂，而且可用作在损伤部位外部施用的和局部注射的药剂。进一步地，人参皂甙Rb1的给药方法可在例如下述各种给药途径中选择例如，皮下注射、肌内注射、滴眼剂、鼻内施用、吸入、栓剂、口服给药、舌下给药、经皮施用等。在人参皂甙Rb1口服给药的情况下，将人参皂甙Rb1单独施用达不到良好的效果，可将人参皂甙Rb1与载体联合、装入其中或与之结合而进行口服给药，这些载体可以抑制其在消化道中的分解，或促进其在消化道中的吸收。如果与人参皂甙Rb1相比，人参皂甙Rb1的代谢物显示出相同或更好的作用或效力，则这些代谢物可经常规方法给患有上述疾病的患者施用，对于这些患者而言，预期人参皂甙Rb1的施用是有效的。在用本发明的人参皂甙Rb1与任意的聚合化合物制成分散剂以后，该混合物可通过任意给药途径施给患者。用聚合物微粒包覆的人参皂甙Rb1可以选择任何途径给药。
人参皂甙Rb1被认为可有效地保护和/或保持培养的皮肤移植用角质细胞片。在进行移植手术之前，用含有低浓度人参皂甙Rb1的溶液浸泡或洒在移植器官上，可抑制移植器官(肝、肾、心脏、脾脏、肺、消化道、角膜、血管等)的细胞损伤和血管网络的破坏，因此可改善器官移植的结果(JP98/365560和PCT/JP99/02550“含人参皂甙Rb1的脑细胞或神经细胞保护剂”)。另外，人参皂甙Rb1被认为可有效地保护和/或保持血细胞组分和血小板，以及有效地保护和/或保持冷冻的卵子或精子。
静脉内施用本发明的人参皂甙Rb1可显著改善脊髓受损伤的动物的截瘫。众所周知，与其它外周组织相比，在发生损伤时，神经组织显得更脆弱。事实上，含有人参皂甙Rb1的本发明药物组合物对治疗和处置脊髓损伤有良好的效果，因此说明，人参皂甙Rb1在处理外周组织和中枢神经组织的创伤也是有效的。如实施例4所示，对于在其低胸髓进行负重压迫的脊髓受损伤的大鼠，在受伤后给大鼠静脉施用人参皂甙Rb1的结果是大鼠仍可站立。给脊髓受伤的大鼠注入生理盐水(即赋形剂)的，大鼠不能站立，表现出两后肢截瘫。在这些事实的基础上，可以认为，就我们所知，用人参皂甙Rb1治疗脊髓损伤，其治疗效果是最强的。因此，预期将来可用人参皂甙Rb1或其代谢物作为先导化合物，开发用于脊髓损伤和神经组织创伤的各种药物。对人参皂甙Rb1的靶分子进行鉴定的结果是，可以合成能够改进靶分子功能的新化合物。如此，本发明对于开发治疗脊髓损伤和神经元创伤(神经创伤)的药品是必要的，所述这些疾病一直在威胁着人类。
一旦大脑的主要血管如MCA被永久阻塞，即使在局部缺血半影中的神经细胞最初被强有力的神经保护剂所营救，且如果大脑血管的再生和/或再造不能实现，则其间曾经被挽救了的局部缺血半影中的神经细胞也有可能死亡。因而，脑梗塞损伤的扩大常常出现在MCA永久阻塞后一个月之内。在临床领域常常观察到脑梗塞损害的这种时间依赖性扩展，这就是脑梗塞患者最差的预后状况的病理学基础。十分遗憾的是，还没有任何药物，即使在急性期和大脑梗塞发生后一个月之内，通过在MCA永久阻塞后静脉注射给药，与未给药组的损伤区域相比较，能够将损伤的区域减少到大约1/4。在本发明中，与非给药组相比，在脑梗塞发生后静脉给予人参皂甙Rb1，在MCA永久阻塞后一个月，可使该损伤减少到大约1/4。基于这个事实，人参皂甙Rb1似乎是人类历史上最有效的神经细胞保护剂。因而，各种神经细胞和脑细胞保护剂可通过利用人参皂甙Rb1或其代谢物作为先导化合物开发出来。此外，对人参皂甙Rb1化学结构的一部分或几部分进行修饰以制备其前药，其结果是，如上所述的任何给药途径和任何给药方案都是可以选择的。最后，本发明的药物组合物几乎没有什么副作用，因而，本发明提供了十分安全的药物。
权利要求
1.用于预防、处置或治疗由于神经组织损伤或脊髓损伤所引起的疾病的药物组合物，该组合物含有人参皂甙Rb1、其代谢物或其盐。
2.权利要求1的用于预防、处置或治疗的药物组合物，其中包括抑制由于神经组织损伤引起的神经组织继发性变性的物质。
3.权利要求2的用于预防、处置或治疗的药物组合物，其中发生继发性变性的神经组织是大脑皮层梗塞后的丘脑。
4.权利要求2或3的用于预防、处置或治疗的药物组合物，其中引起神经组织继发性变性的疾病是脊髓损伤。
5.权利要求1的用于预防、处置或治疗的药物组合物，其中所述的预防、处置或治疗是通过受损伤神经组织或脊髓的血管再生和/或再造来实现的。
6.权利要求5的用于预防、处置或治疗的药物组合物，其中所述的血管是脑血管。
7.权利要求1的用于预防、处置或治疗的药物组合物，其中所述由于神经组织损伤或脊髓损伤引起的疾病是创伤性损伤。
8.权利要求1的用于预防、处置或治疗的药物组合物，其中所述由于神经组织损伤或脊髓损伤引起的疾病是脱髓鞘作用。
9.权利要求1的用于预防、处置或治疗的药物组合物，其中所述由于神经组织损伤或脊髓损伤引起的疾病是脊髓损伤。
10.权利要求8或9的用于预防、处置或治疗的药物组合物，其中包括抑制少突胶质细胞的编程性细胞死亡或类编程性细胞死亡的细胞死亡的物质。
11.权利要求1-10中任意一项所述的用于预防、处置或治疗的药物组合物，其中包括用于静脉用药的制剂。
12.权利要求1-10中任意一项所述的用于预防、处置或治疗的药物组合物，其中包括用于单次静脉输注的制剂，或用于连续静脉给药的制剂。
13.用于促进血管再生和/或再造的药物组合物，该组合物含有人参皂甙Rb1、其代谢物或其盐。
14.用于预防、处置或治疗神经组织继发性变性的药物组合物，该组合物含有人参皂甙Rb1、其代谢物或其盐。
15.用于预防神经组织或脊髓创伤性损伤恶化，或用于处置或治疗神经组织或脊髓创伤性损伤的药物组合物，该组合物含有人参皂甙Rb1、其代谢物或其盐。
16.权利要求15的药物组合物，其中的创伤性损伤是脊髓损伤、神经创伤或头部损伤。
17.用于抑制少突胶质细胞的编程性细胞死亡或类编程性细胞死亡的细胞死亡的药物组合物，该组合物含有人参皂甙Rb1、其代谢物或其盐。
18.权利要求17的药物组合物，其中引起少突胶质细胞的编程性细胞死亡或类编程性细胞死亡的细胞死亡的疾病是脊髓损伤。
19.用于预防、处置或治疗脱髓鞘的药物组合物，该组合物含有人参皂甙Rb1、其代谢物或其盐。
20.权利要求19的药物组合物，其中所述引起脱髓鞘的疾病是脊髓损伤。
21.探索用于预防、处置或治疗神经组织或脊髓疾病的新活性化合物或组合物的方法，该方法包括使用人参皂甙Rb1或其代谢物作为先导化合物。
22.权利要求21的方法，其中所述的神经组织或脊髓的疾病是由于神经组织损伤或脊髓损伤所引起的疾病。
23.权利要求21或22的方法，其中所述的神经组织或脊髓疾病是脊髓损伤或神经创伤。
24.用于预防、处置或治疗神经组织或脊髓疾病的药物组合物，该组合物是按照权利要求21-23中任意一项的方法得到的。
25.人参皂甙Rb1或其代谢物作为先导化合物用于探索新的用于预防、处置或治疗神经组织或脊髓疾病的活性化合物或组合物的应用。
26.人参皂甙Rb1或其代谢物作为先导化合物用于探索新的脑细胞保护剂或神经细胞保护剂的应用。
27.人参皂苷Rb1、其代谢物或其盐在制备药物组合物中的应用，所述药物组合物用于预防、处置或治疗由神经组织或脊髓损伤引起的疾病。
全文摘要
本发明提供了有效的制剂,该制剂是含有人参皂甙Rb
文档编号A61P9/00GK1334738SQ99816228
公开日2002年2月6日 申请日期1999年12月3日 优先权日1999年2月19日
发明者阪中雅广, 田中润也, 佐藤康二 申请人:科学技术振兴事业团