甲烷-乙醇(10:1)洗脱部分经C18反相ODS色谱分离(以甲醇-水(5% ~100%)梯度洗脱)，收集35%的甲醇洗脱部位，经葡聚糖凝胶S印hadexLH-20分离(以甲醇-水(5% ~100%)梯度洗脱；洗脱液流速lml/min)，收集50%甲醇洗脱馏分，回收溶剂后，溶解于乙醇溶液中，一 4°C重结晶得化合物延胡索丁素109mg ；
实施例4延胡索总生物碱片剂的制备
处方:延胡索总生物碱0.5g，淀粉150g，糊精100g，硫酸钙200g，硬脂酸镁2g。
[0032]制法:取延胡索总生物碱，加淀粉、糊精、硫酸钙，硬脂酸镁，混合均匀，制成颗粒，压片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0033]实施例5 延胡索丁素片剂的制备
处方:延胡索丁素20mg，淀粉150g，糊精100g，硫酸钙200g，硬脂酸镁2g。
[0034]制法:取延胡索丁素，加淀粉、糊精、硫酸钙，硬脂酸镁，混合均匀，制成颗粒，压片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0035]
实施例6延胡索总生物碱、延胡索丁素对胆结石的作用
C57BL / 6小鼠，雄性，10周龄。分笼饲养，控制光照12h (06:00AM 一 18:00PM)，
普通饲料饲养2周后，随机分为组(每组各10只)。
[0036]对照组:每日喂普通颗粒饲料，同时给予等量空白液灌胃；
结石组:每日喂饲15%脂肪、1%胆固醇、0.5%胆酸饲料，同时给予等量空白液灌胃；阳性药组:每日喂饲15%脂肪、I %胆固醇、0.5%胆酸饲料，同时给予消炎利胆片50mg / kg 灌胃。
[0037]延胡索总生物碱组:每日喂饲15%脂肪、I %胆固醇、0.5%胆酸饲料，同时给予延胡索总生物碱50mg / kg灌胃。
[0038]延胡索丁素组:每日喂饲15%脂肪、I %胆固醇、0.5%胆酸饲料，同时给予延胡索丁素5mg / kg灌胃。
[0039]持续四周，实验前，动物禁食12h，3%戊巴比妥(35mg / kg)麻醉，剖腹，结扎胆囊管，迅速取肝组织置液氮中冷冻，一 80°C冰箱内保存备用。
[0040]摘取胆囊，观察成石情况，抽取胆汁，观察结晶形成，剩余胆汁经lOOOOr/min高速离心 30min 后，加 I % (v / v) I mmol / L苯甲基横酸氟(Phenylmethylsulfonylfluoride,PMSF)和0.02%叠氮钠使其在胆汁中的终浓度为2% (V / V)，保存于一 20°C备用。
[0041]胆脂测定:胆汁中的总胆固醇、磷脂、胆汁酸应用全自动生化分析仪上测定。胆固醇饱和指数(Cholesterol saturat1n index, CSI)通过 Carey 表计算。
[0042]结石观测:结石判断标准:肉眼观察胆汁内成形粗大颗粒，光镜见致密大团块胆固醇结晶。结石成分用红外光谱分光光度计定性。
[0043]统计分析:采用SPSS统计程序，做成组t检验，P〈0.05为有统计学意义。
[0044]结果
成石情况
结石组8 / 10出现胆囊结石，10 / 10出现胆固醇结晶，
延胡索总生物碱、延胡索丁素组和阳性药组无结石和结晶。
[0045]溴化钾压片红外光谱结果显示，在波长2856.6,2927.8,3383.2 CM-1、到胆固醇特征吸收峰，证实为胆固醇结石，没有见到胆色素吸收峰。
[0046]胆脂水平
显示，结石组CSI>1，为胆固醇过饱和胆汁，对照组CSK1，胆汁酸和磷脂的含量变化差异不大，与结石组相比，延胡索总生物碱、延胡索丁素组的胆汁中总胆固醇及CSI均明显低于结石组(P〈0.05)。
[0047]TC:总胆固醇(mmol/L) ;PL:磷月旨(mmol/L) ;BS:胆汁酸(mmol/L) ;TL:总脂(g/dL) ；CS1:胆固醇饱和指数
组别，TC，PL,BS,TL,CSI
空白组，4.12±0.15， 19.58±4.71， 52.36±11.14， 5.03±0.65， 0.67±0.08 胆石组，15.36±0.97，55.3±3.16， 91.25±12.36， 8.91±0.27， 1.73±0.65 阳性药组，7.56±0.17， 35.7±2.18， 78.4± 11.56，8.29±0.53， 0.98±0.28 延胡索总生物碱，9.24±0.83,26.1±4.15,65.2±10.13，7.21±0.14,0.85±0.14 延胡索丁素，6.61±0.42，23.7±3.41， 61.3±12.12， 7.13±0.51， 0.76±0.23
实施例7延胡索总生物碱、延胡索丁素对对醋酸刺激胆结石小鼠疼痛的作用 C57BL / 6小鼠，雄性，10周龄。分笼饲养，控制光照12h (06:00AM 一 18:00PM)， 普通饲料饲养2周后，随机分为组(每组各10只)。
[0048]对照组:每日喂普通颗粒饲料，同时给予等量空白液灌胃；
结石组:每日喂饲15%脂肪、1%胆固醇、0.5%胆酸饲料，同时给予等量空白液灌胃；阳性药组:每日喂饲15%脂肪、I %胆固醇、0.5%胆酸饲料，同时给予消炎利胆片50mg / kg 灌胃。
[0049]延胡索总生物碱组:每日喂饲15%脂肪、I %胆固醇、0.5%胆酸饲料，同时给予延胡索总生物碱50mg / kg灌胃。
[0050]延胡索丁素组:每日喂饲15%脂肪、I %胆固醇、0.5%胆酸饲料，同时给予延胡索丁素5mg / kg灌胃。
[0051]持续四周，实验前，动物禁食12h，各小鼠均腹腔注射0.6%醋酸溶液1ml / kg。观察注射15min内小鼠扭体次数，以腹部内凹、躯干与后腿伸张为观察指标。
[0052]组别，扭体反应次数空白组， 10.5±8.4 胆石组， 28.7±10.5 阳性药组， 27.5 ±9.8 延胡索总生物碱， 21.4±7.3 延胡索丁素， 17.8±9.2
与空白组比较，延胡索总生物碱及延胡索丁素组15min都能明显降低小鼠扭体反应次数，差异有显著性意义
实施例8薄层色谱法:
吸附剂:硅胶G薄层预制板(青岛)；
展开剂:乙酸乙酯-异丙醇-乙醇-氨水(10: 4: 5: 3: 1)，
实施例2样品I μ L点板，
展开温度室温，展开前预饱和15min,展距1cm,
取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。
[0053]6.1cm仅出现唯一的斑点。
[0054]实施例9高效液相色谱法:
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；岛津液相仪流动相为乙腈-1 %乙酸水溶液(20: 80体积比)，等度洗脱；
流速1.0mL/min ;柱温30°C ;检测波长280nm。
[0055]在上述条件下，分别吸取去实施例2样品(流动相溶液)10 μ L，注入高效液相色谱仪进行分析，
该图谱中I个色谱峰，出峰时间19.34分钟，峰面积639867.24AU。
【主权项】
1.玄胡索的新用途，玄胡索在制备治疗胆结石药物中的应用。
2.延胡索总生物碱在制备治疗胆结石药物中的应用。
3.延胡索总生物碱的制药用途，延胡索总生物碱在制备抗胆结石疼痛药物中的应用。
4.一种延胡索总生物碱的制药用途，所述的延胡索丁素来源于延胡索总生物碱。
5.一种延胡索总生物碱的制药用途，取延胡索生药，加入盐酸溶液加热提取，合并提取液，过滤，减压浓缩，调节pH值至碱性，继而用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯层，回收溶剂至干，精制，得延胡索丁素。
6.一种延胡索总生物碱的制药用途，是由有效量的延胡索丁素为活性成分，加上药学上课接受的辅料或辅助性成分制备成常用的药物制剂。
【专利摘要】本发明提供了玄胡索治疗胆结石的用途。
【IPC分类】A61P29-00, A61K36-66, A61P1-16
【公开号】CN104644762
【申请号】CN201510035016
【发明人】汪甬娜
【申请人】汪甬娜
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2015年1月25日