缩液用体积分数为78%的乙醇进行醇沉，除去 淀粉、粘液质、树胶、蛋白质、油脂、脂溶性色素、多糖、无机盐、鞣质等杂质。醇沉进行4小时 后，离心收集滤液，得到酸枣提取物，提取率为4%。
[0061] 实施例4
[0062] (1)酸枣仁提取物中酸枣仁皂苷D、E的定性
[0063] 以甲醇为溶剂，分别配制成浓度lmg/mL的酸枣仁皂苷D和酸枣仁皂苷E (均购自 中国药品生物制品检定所）的溶液，作为对照品溶液1和对照品溶液2。
[0064] 照薄层色谱法（《中国药典》2005版一部）试验，吸取供试品溶液（实施例1、2和 3制备得到的酸枣仁提取物）和空白对照液（甲醇）各10yL，对照品溶液1、2各5yL，分 别点于同一硅胶G薄层板上，以水饱和的正丁醇溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷上1% (质量百分比）的香草醛硫酸溶液，立即检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置 上，显示相同颜色的斑点，从而证明了实施例1、2和3制备得到的酸枣仁提取物中的有效成 分为酸枣仁皂苷D、E。
[0065] (2)酸枣仁提取物中皂苷类物质的定量实验：
[0066] 标准曲线的制备：精密称取干燥恒重的人参皂苷Rbl对照品（购自中国药品生物 制品检定所）5. Omg，移至IOmL容量瓶，以无水乙醇定容，配制成0. 5mg/mL的对照品溶液。 精密吸取人参皂普 Rbl 对照品溶液（C = 0. 5mg/mL) 0、0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5、0. 6ml 于 IOmL 具塞磨口试管中，在烘箱中挥干试剂，加入5% (质量百分比）香草醛-冰醋酸溶液0.2mL 和高氯酸〇. 8mL，摇匀，60°C水浴加热20min，冰水浴中冷却3min，加入冰醋酸5mL，摇匀，随 行试剂作空白，用分光光度计在545nm处测定吸光度值，以人参皂苷Rbl浓度为横坐标，吸 收度值为纵坐标，绘制标准曲线，结果发现人参皂苷Rbl在0. 01-0. 05mg/mL范围内呈良好 线性关系，得回归方程 y = 17. 925x-0. 0498, R2= 0. 9988。
[0067] 精密吸取实施例1、2和3制备得到的酸枣仁提取物各0.5mL，置于IOmL具塞磨 口试管中，按照"标准曲线的制备"操作，通过上述标准曲线，求得皂苷类物质的含量：实 施例1、2和3制备得到酸枣仁提取物中皂苷类物质的含量分别为0. 382mg/g、0. 365mg/g、 0. 370mg/g〇
[0068] (3)酸枣仁提取物中黄酮类物质的定量实验：
[0069] 标准曲线的制备：精密吸取芦丁标准溶液（购自中国药品生物制品检定所）（C = 0· 2mg/mL) 0、2、4、6、8、IOmL于50mL的容量瓶中，加蒸馏水稀释至10mL，然后加入5 % (质 量百分比）NaNO2溶液2mL，摇匀，静置6min ;再加10% (质量百分比）Al (NO3)3溶液2mL，摇 匀，静置6min ;最后加入4% (质量百分比）NaOH溶液20mL，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，静 置15min，用分光光度计在510nm处测定吸光度值。以芦丁对照品的浓度为横坐标，吸光度 值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程y = 13. 113x-0. 0177, R2= 0. 9994。
[0070] 精密吸取上述实施例1、2和3制备得到的酸枣仁提取物各2mL，置于50mL容量瓶 中，按照"标准曲线的制备"操作，通过上述标准曲线，求得黄酮类物质的含量：实施例1、2 和3制备得到酸枣仁提取物中黄酮类物质的含量分别为0. 594mg/g、0. 576mg/g、0. 580mg/ g°
[0071] 实施例5含有酸枣仁提取物的健脑助眠口服液的制备
[0072] (1)勾调：将实施例1制备得到的酸枣仁提取物、蜂蜜和水勾调混合；其中，酸枣仁 提取物、蜂蜜和水的质量百分比分别为20%、8%、72% ;
[0073] (2)分装和灭菌：将步骤（1)勾调后的混合液进行管装，每支小瓶装10毫升。用 巴斯德灭菌器进行消毒，80°C下消毒25min，再进行一次细菌数量卫生指标检验（参照标准 是食品卫生质量标准），合格贴标。每10支装一盒，每50盒装一箱。
[0074] 成品贮存在低温、通风、干燥处，或贮存在4°C冰箱中，保质期长达6个月以上。
[0075] 实施例6含有酸枣仁提取物的健脑助眠口服液的制备
[0076] (1)勾调：将实施例1制备得到的酸枣仁提取物、蜂蜜和水勾调混合；其中，酸枣仁 提取物、蜂蜜和水的质量百分比分别为21 %、9 %、70 % ;
[0077] (2)分装和灭菌：将步骤（1)勾调后的混合液进行管装，每支小瓶装10毫升。用 巴斯德灭菌器进行消毒，78°C下消毒24min，再进行一次细菌数量卫生指标检验（参照标 准是食品卫生质量标准），合格贴标。每10支装一盒，每50盒装一箱。
[0078] 成品贮存在低温、通风、干燥处，或贮存在4°C冰箱中，保质期长达6个月以上。
[0079] 实施例7含有酸枣仁提取物的健脑助眠口服液的制备
[0080] (1)勾调：将实施例1制备得到的酸枣仁提取物、蜂蜜和水勾调混合；其中，酸枣仁 提取物、蜂蜜和水的质量百分比分别为22%、10%、68% ;
[0081] (2)分装和灭菌：将步骤（1)勾调后的混合液进行管装，每支小瓶装10毫升。用 巴斯德灭菌器进行消毒，79°C下消毒20min，再进行一次细菌数量卫生指标检验（参照标准 是食品卫生质量标准），合格贴标。每10支装一盒，每50盒装一箱。
[0082] 成品贮存在低温、通风、干燥处，或贮存在4°C冰箱中，保质期长达6个月以上。
[0083] 实施例8酸枣仁提取物的直接睡眠作用
[0084] 小鼠（购自广州市实验动物中心）40只，雌雄各半，随机分为4组。其中试验组3 组，即健脑助眠口服液高（30mL/kg)、中（20mL/kg)、低（lOmL/kg)剂量组。其余一组为正常 对照组，健脑助眠口服液由实施例5制备得到。灌胃口服液后以小鼠翻正反射消失达40秒 以上为入睡，以翻正反射恢复为苏醒，记录并计算每组小鼠睡眠的只数、入睡率、入睡时间 和睡眠持续时间。结果如表1所不。
[0085] 结果表明，正常对照组小鼠未出现睡眠，活动正常。各剂量健脑助眠口服液均可使 小鼠出现睡眠（表1)。
[0086] 表1健脑助眠口服液直接睡眠试验
[0087]
【主权项】
1. 一种酸枣仁提取物的制备方法，其特征在于包含如下步骤： (1) 酸枣仁粉碎，得到酸枣仁粉；酸枣仁粉用热水浸提活性物质，过滤，得到滤液1和滤 渣1 ; (2) 步骤（1)制备得到的滤渣1用pH 1~5的酸性溶液浸泡，过滤，得到滤液2和滤渣 2 ;滤渣2再用pH 8~10的碱性溶液浸泡，过滤，得到滤液3和滤渣3 ; (3) 合并步骤（1)和步骤（2)制备得到的滤液1、2和3,浓缩，得到浓缩液； (4) 将步骤（3)中制备得到的浓缩液用乙醇进行醇沉，离心，收集滤液，得到酸枣仁提 取物。
2. 根据权利要求1所述的酸枣仁提取物的制备方法，其特征在于： 步骤（1)中所述的热水浸提的温度为75~80°C，热水浸提的时间为2~4h。
3. 根据权利要求1所述的酸枣仁提取物的制备方法，其特征在于： 步骤⑵中所述的酸性溶液的pH值为5。
4. 根据权利要求1所述的酸枣仁提取物的制备方法，其特征在于： 步骤（2)中所述的碱性溶液的pH值为8. 2。
5. 根据权利要求1所述的酸枣仁提取物的制备方法，其特征在于： 步骤（2)中所述的酸性溶液或碱性溶液浸泡的时间为2~4h。
6. 根据权利要求1所述的酸枣仁提取物的制备方法，其特征在于： 步骤（3)中所述的浓缩为减压浓缩或冷冻浓缩。
7. 根据权利要求1所述的酸枣仁提取物的制备方法，其特征在于： 步骤（4)中所述的乙醇的体积分数为75%~80% ; 步骤（4)中所述的醇沉的时间为3~4h。
8. -种酸枣仁提取物，其特征在于通过权利要求1~7任一项所述的制备方法制备得 到。
9. 一种含有酸枣仁提取物的健脑助眠口服液，其特征在于包含如下按质量百分比计的 组分： 权利要求8所述的酸枣仁提取物 20%~22% ; 蜂蜜 8%~10% ; 水 补足100%。
10. 权利要求9所述的含有酸枣仁提取物的健脑助眠口服液的制备方法，其特征在于 包含如下步骤：将权利要求9所述的含有酸枣仁提取物的健脑助眠口服液的各组分进行勾 调，灭菌，得到含有酸枣仁提取物的健脑助眠口服液。
【专利摘要】本发明属于生物医药领域，具体涉及一种酸枣仁提取物及含有酸枣仁提取物的健脑助眠口服液。所述的酸枣仁提取物的制备方法包含如下步骤：枣仁粉碎、活性物质水提、半仿生提取、浓缩、醇沉法去杂质，得到酸枣仁提取物。本发明进一步以酸枣仁提取物为原料，与蜂蜜等其他组分勾调制备得到含有酸枣仁提取物的健脑助眠口服液。该口服液含有酸枣仁助眠安神有效成分，包括酸枣仁黄酮物质、酸枣仁生物碱、酸枣仁皂甙D和E，具有安神、健脑、催眠、益智功效。
【IPC分类】A61P25-20, A61K131-00, A61K36-725, A61P25-22, A61K9-08
【公开号】CN104666474
【申请号】CN201510042001
【发明人】姜建国, 张恬恬, 石嫚嫚, 黄小娟
【申请人】华南理工大学
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2015年1月27日