食源性草酸过多草酸钙结石模型的构建方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及动物模型的技术领域，更具体地说，本发明涉及一种食源性草酸过多 草酸钙结石模型的构建方法。
【背景技术】
[0002] 泌尿系结石是一种全球性的常见病，其中草酸钙结石约占泌尿系结石的80%。轻 症患者可以无任何症状，重症患者可能会出现肾功能衰竭，危及患者的生命。近些年，由于 内窥镜技术的发展，对泌尿系结石的手术治疗取得了一定的进展。尽管，现在普遍认为泌尿 结石的形成是遗传、环境和代谢等综合性的因素引起，但泌尿结石形成的机理仍不清楚。因 此，在尿石症基础与临床研宄中，设计和建立泌尿系结石实验动物模型是重要的一环。
[0003] 通过建立泌尿系结石实验动物模型可以：（1)深入了解泌尿系结石形成的过程， 研宄泌尿系结石形成机制；（2)印证或否定某一涉及泌尿系结石成因的代谢问题：（3)筛选 抑制结石生长的中西药物并确认其临床药理等。由于动物实验易于控制实验条件，易重复， 所以在临床与基础研宄中得到了广泛的应用。根据不同的目的和需要，可以设计和建立多 种不同的动物实验模型：（1)按不同结石成分而建立的泌尿系结石实验动物模型，包括草 酸钙、磷酸钙、尿酸盐结石等；（2)据不同病因而建立的实验动物模型，如异物模型、梗阻模 型、高钙或高草酸模型、VitB6缺乏模型、VitD中毒诱导泌尿系结石形成模型等；（3)依不 同病理过程而建立的实验动物模型，如肾钙化模型、肾近端曲管损伤模型、尿晶体黏附模型 等。
[0004] 目前泌尿系结石实验动物模型，大多是在雄性大鼠上建立的，主要方法是通过给 大鼠以草酸或草酸前体，辅以其他一些诱因，如高钙饮食、VitB6缺乏饮食、VitD饮食、异 物、大量抗生素等，以促使大鼠形成肾、膀胱结石，但是仍然存在着肾功能损害较大，成石效 果较差的缺点。
【发明内容】
[0005] 针对现有技术中存在的问题，提供一种食源性草酸过多草酸钙结石模型的构建方 法。
[0006] 为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：
[0007] 一种食源性草酸过多草酸钙结石模型的构建方法，其特征在于：选取体重为8~ l〇Kg，犬龄为1. 5~2. 0岁的雄性小猎兔犬，用犬五联疫苗进行免疫，7天后利用基础犬粮和 草酸进行造模，造模期间所述草酸的添加量为基础犬粮的〇. 8~I. 5wt%。
[0008] 其中，造模时间为25~30天。
[0009] 其中，所述基础犬粮中含有0.50~l.Owt%的羧甲基壳聚糖。
[0010] 其中，所述基础犬粮中主要营养成分中粗蛋白< 22%，粗脂肪< 8%，粗纤维 彡3%，水分彡8%，钙为1. 2%，灰分彡8%，磷彡Ll，W-3. 6. 9彡2. 7%，食盐彡0. 5%，草酸 < 0· 2%〇
[0011] 其中，所述基础犬粮中主要成分有鸡肉粉、牛肉粉、优质玉米、大米、大豆饼、黑芝 麻饼、米糠、维生素、羧甲基壳聚糖、卵磷脂、牛黄酸、硫酸软骨素，葡萄糖胺、海藻和矿物质。
[0012] 其中，于造模期间的第OcU 15d和30天，收集犬尿液，且于4°C保存，待收集24h尿 液后，混匀，测尿比重及pH值，取5ml尿液用浓盐酸酸化至pH为1后冻存，测尿液草酸浓度； 剩余尿液离心后取上清置冰箱保存，测尿游离钙、尿尿素氮和尿肌酐：且在犬前肢外侧静脉 采血，分离血清，于-20°C保存备用，测血钙、血尿素氮和血肌酐。
[0013] 其中，尿液草酸使用离子色谱仪进行测定：环境温度为35°C，载气为氮气，压力为 200kPa，设定泵的最高压力为21 X 103kPa (3000psi)，实际运行时为IL 72 X 103kPa，背景电 导为 28us，流速为 lml/min，进样体积为 IOOul;米用 Dionex I onPac AS23(4X250mm)阴 离子保护柱，IonPac AGllanalytical column(4X50mm)阴离子保护柱；洗脱液为16mmol/ L的碳酸钠和4mmol/L的碳酸氢钠的水溶液；先配制1000mg/L的草酸贮备液，用0. 2um微 孔滤膜过滤，用超纯水稀释成草酸浓度为16、8、4、2、1、0. 5、and 0. 25mg/L的标准液；样 品经低温超速离心并用0. 2um微孔滤膜过滤，离心后取少许按照1 :100用超纯水稀释，过 On-GuardH柱及C18预处理小柱后进样分析。
[0014] 其中，血清尿素测定采用脲酶连续监测法；肌酐测定采用苦味酸法；血清和尿液 中游离钙的测定采用核固红法。
[0015] 与现有技术相比本发明所述的食源性草酸过多草酸钙结石模型的构建方法具有 以下有益效果：
[0016] 本发明采用食源性造模方法，提高了造模的安全性和可重现性，而且造模成功率 尚，效果好。
【附图说明】
[0017] 图1为尿石症发生过程中犬血钙的含量变化；
[0018] 图2为尿石症发生过程中犬血清肌酐的含量变化；
[0019] 图3为尿石症发生过程中犬血清尿素氮的含量变化；
[0020] 图4为尿石症发生过程中犬尿液草酸的含量变化；
[0021] 图5为尿石症发生过程中犬尿钙的含量变化；
[0022] 图6为尿石症发生过程中犬尿肌酐的含量变化；
[0023] 图7为尿石症发生过程中犬尿尿酸氮的含量变化；
[0024] 图8为动物体内草酸的代谢途径。
【具体实施方式】
[0025] 以下将结合具体实施例对本发明所述的食源性草酸过多草酸钙结石模型的构建 方法做进一步的阐述，以帮助本领域的技术人员对本发明的发明构思、技术方案有更完整、 准确和深入的理解。
[0026] 实施例1
[0027] 1.1实验以及分组
[0028] 选取体重为9 ±0. 5Kg，犬龄为1. 5~2. 0岁的雄性小猎兔犬18条，，犬五联疫苗免 疫。一周后将犬随机分为A、B、C三组，预试期为7d，饲喂基础犬粮，预试期结束后进入试验 期。定时定量饲喂商品犬粮，不限水。试验前后所有犬环境条件、基础犬粮（其营养水平和 配方见表）、饲养管理都相同。所述基础犬粮采用常用的犬粮并添加有1.0 wt %的羧甲基壳 聚糖。所述基础犬粮中主要营养成分中粗蛋白< 22%，粗脂肪<8%，粗纤维< 3%，水分 彡8%，钙为L 2%，灰分彡8%，磷彡Ll，W-3. 6. 9彡2. 7%，食盐彡0· 5%，草酸彡0· 2%。A 组为空白对照组，饲喂基础犬粮；B组饲喂基础犬粮加0. 5%的草酸（以基础犬粮的重量为 基准）；C组饲喂基础犬粮加1 %的草酸（以基础犬粮的重量为基准），造模时间为30d，常 规管理。
[0029] 1. 2样品的采集与制备
[0030] L 2. 1尿样采集
[0031] 于试验第0d、15d和30天，采用自制接尿器收集犬尿液。4°C保存，待收集24h尿 液后，混匀，测尿比重及