pH值。取5ml尿液用浓盐酸酸化至pH为1后冻存，测尿液草酸浓 度；剩余尿液离心后取上清置冰箱保存，测尿游离钙、尿尿素氮和尿肌酐。
[0032] L 2. 2血样采集
[0033] 犬前肢外侧静脉采血，分离血清，于_20°C保存备用。。测血钙、血尿素氮、血肌酐。
[0034] 1.3项目测定和方法
[0035] 1. 3. 1尿液草酸的测定
[0036] 使用离子色谱仪进行测定：环境温度为35°C，载气为氮气，压力200kPa，设定泵的 最高压力为21 X 103kPa (3000psi)，实际运行时为IL 72 X 103kPa左右，背景电导为28us左 右，流速为lml/min，进样体积100ul。
[0037] 采用高亲水性、高柱容量的Dionex I onPac AS23(4X250mm)阴离子保护柱， IonPac AGll analytical column(4X50mm)阴离子保护柱：洗脱液为 16mmol/L 的碳酸钠 和4mmol/L的碳酸氢钠。
[0038] 先配制1000mg/L的草酸贮备液。用0. 2um微孔滤膜过滤，用超纯水稀释成草酸浓 度为 16、8、4、2、1、0· 5and 0· 25mg/L 的标准液。
[0039] 样品经低温超速离心并用0. 2um微孔滤膜过滤，离心后取少许按照1 : 100用超 纯水稀释，过On-GuardH柱及C18预处理小柱后进样分析。
[0040] 1. 3. 2血清、尿样生化指标测定
[0041] L 3. 2. 1血清尿素氮、肌酐含量
[0042] 血清尿素测定采用脲酶连续监测法；肌酐测定采用苦味酸法。采用商品化试剂盒 (中生北控生物科技股份有限公司）在全自动生化分析仪上测定。
[0043] 1. 3. 2. 2尿液尿素、肌酐含量
[0044] 取尿液Iml加入3ml蒸馏水稀释后，按血清尿素、肌酐含量测定方法进行检测，所 得浓度数值乘以尿液相应的稀释倍数作为尿液中尿素、肌酐含量的数值。
[0045] 1. 3. 3血清、尿样中钙的浓度
[0046] 血清、尿液游离钙的测定采用核固红法。采用商品化试剂盒（中生北控生物科技 股份有限公司）在全自动生化分析仪上测定。
[0047] 1. 4统计分析
[0048] 应用SPSS软件进行数据分析，数据结果以mean土S.D.表示，采用单因子方差 (One-Way AN0VA)模式进行分析。
[0049] 2实验结果分析
[0050] 2. 1尿比重及尿pH值检查
[0051] 3组犬的尿比重及尿pH值如表所示。1 %草酸组的尿比重在第15天就显著增高 (p < 0. 05)，0. 5%草酸组的尿比重在第30天显著增高（p < 0. 05)。在饲料中添加草酸后， 0. 5%和1 %实验组的犬，实验第15d尿液pH值均显著减小（p < 0. 05)。结果如表1所示
[0052] 表1造模时期不同组犬尿比重及尿pH值
【主权项】
1. 一种食源性草酸过多草酸钙结石模型的构建方法，其特征在于：选取体重为8~ l〇Kg，犬龄为1. 5~2.O岁的雄性小猎兔犬，用犬五联疫苗进行免疫，7天后利用基础犬粮和 草酸进行造模，造模期间所述草酸的添加量为基础犬粮的〇. 8~I. 5wt%。
2. 根据权利要求1所述的食源性草酸过多草酸钙结石模型的构建方法，其特征在于： 造模时间为25~30天。
3. 根据权利要求1所述的食源性草酸过多草酸钙结石模型的构建方法，其特征在于： 所述基础犬粮中含有0. 50~I.Owt%的羧甲基壳聚糖。
4. 根据权利要求1所述的食源性草酸过多草酸钙结石模型的构建方法，其特征在于： 所述基础犬粮中主要成分有鸡肉粉、牛肉粉、优质玉米、大米、大豆饼、黑芝麻饼、米糠、维生 素、羧甲基壳聚糖、卵磷脂、牛黄酸、硫酸软骨素，葡萄糖胺、海藻和矿物质。
5. 根据权利要求1所述的食源性草酸过多草酸钙结石模型的构建方法，其特征在于： 所述基础犬粮中主要营养成分中粗蛋白< 22%，粗脂肪< 8%，粗纤维< 3%，水分< 8%， 钙为1. 2%，灰分彡8%，磷彡Ll，W-3. 6. 9彡2. 7%，食盐彡0? 5%，草酸彡0? 2%。
6. 根据权利要求1所述的食源性草酸过多草酸钙结石模型的构建方法，其特征在于： 于造模期间的第〇d、15d和30天，收集犬尿液，且于4°C保存，待收集24h尿液后，混匀，测尿 比重及pH值，取5ml尿液用浓盐酸酸化至pH为1后冻存，测尿液草酸浓度；剩余尿液离心 后取上清置冰箱保存，测尿游离钙、尿尿素氮和尿肌酐；且在犬前肢外侧静脉采血，分离血 清，于-20°C保存备用，测血钙、血尿素氮和血肌酐。
7. 根据权利要求6所述的食源性草酸过多草酸钙结石模型的构建方法，其特征在于： 尿液草酸使用离子色谱仪进行测定：环境温度为35°C，载气为氮气，压力为200kPa，设定泵 的最高压力为21X103kPa(3000psi)，实际运行时为11. 72X103kPa，背景电导为28us，流 速为lml/min，进样体积为IOOul;采用DionexIonPacAS23(4X250mm)阴离子保护柱， IonPacAGllanalyticalcolumn(4X50mm)阴离子保护柱；洗脱液为 16mmol/L的碳酸钠 和4mmol/L的碳酸氢钠的水溶液；先配制1000mg/L的草酸贮备液，用0. 2um微孔滤膜过滤， 用超纯水稀释成草酸浓度为16、8、4、2、1、0. 5、and0. 25mg/L的标准液；样品经低温超速离 心并用0.2um微孔滤膜过滤，离心后取少许按照1 : 100用超纯水稀释，过On-GuardH柱及 C18预处理小柱后进样分析。
8. 根据权利要求6所述的食源性草酸过多草酸钙结石模型的构建方法，其特征在于： 血清尿素测定采用脲酶连续监测法；肌酐测定采用苦味酸法；血清和尿液中游离钙的测定 采用核固红法。
【专利摘要】本发明涉及一种食源性草酸过多草酸钙结石模型的构建方法，属于动物造模的技术领域，所述方法选取体重为8～10Kg，犬龄为1.5～2.0岁的雄性小猎兔犬，用犬五联疫苗进行免疫，7天后利用基础犬粮和草酸进行造模，造模期间所述草酸的添加量为基础犬粮的0.8～1.5wt％，造模时间为25～30天。本发明采用食源性造模方法，提高了造模的安全性和可重现性，而且造模成功率高，效果好。
【IPC分类】A61P13-04, A61K31-194
【公开号】CN104840454
【申请号】CN201510114330
【发明人】任志华, 王保, 黄克和, 邓俊良, 彭广能, 左之才, 钟志军, 余树民, 邓惠丹, 邓又天
【申请人】四川农业大学
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年3月17日