多醣类、含有多醣类的组合物、以及免疫赋活剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及来源于昆虫且具有免疫赋活作用的多醣类、含有该多醣类的组合物、 以及以该多醣类作为有效成分的免疫赋活剂。
【背景技术】
[0002] 迄今为止已发现多种具有免疫赋活作用的多醣类。作为具有免疫赋活作用的多醣 的相关技术，例如有酸性粘多醣（参照专利文献1)、脂多糖及β-葡聚糖（参照专利文献 2)、来源于厚叶解曼藻（Kjellmaniella crassifolia)的粘性多醣类（参照专利文献3)、除 了 L-岩藻糖和D-木糖之外还以D-葡萄糖醛酸作为主要组成成分的硫酸多醣即岩衣藻蛋 白（ascophyllan)(参照专利文献4)、具有β-1，3-键的甘露聚糖（参照专利文献5)等。 但是，具有免疫赋活作用的多醣大多数都是来源于菌类或来源于植物，并未发现来源于动 物的多醣。
[0003] 另一方面，昆虫作为易于人工生产的动物性蛋白质而受到重视，也尝试将昆虫的 幼虫或蛹作为畜产用或水产用的饲料原料使用（参照专利文献6和专利文献7)。
[0004] 现有技术文献 专利文献 专利文献1 :日本特开2012-031089号公报 专利文献2 :日本特开2012-082156号公报 专利文献3 :日本特开2009-227618号公报 专利文献4 :日本特开2008-120707号公报 专利文献5 :日本特开2006-060288号公报 专利文献6 :国际公开第2011/007867号小册子 专利文献7 :日本特开2003-210071号公报。
【发明内容】
[0005] 发明要解决的问题 迄今为止，具有免疫赋活作用的多醣类可作为药物或健康食品、畜产用或水产用的饲 料添加物使用，但是显示出充分的免疫赋活效果的多醣类很少。因此，需要开发成本低而免 疫赋活效果强的组合物。
[0006] 用于解决问题的手段 即，本发明是一种来源于昆虫且具有免疫赋活作用的多醣类、以及含有该多醣类的组 合物。另外，在本发明的其他方面，具有免疫赋活作用的多醣类至少含有鼠李糖作为组成 糖。
[0007] 本发明的其他方面是来源于选自双翅目、鳞翅目、鞘翅目、膜翅目、半翅目、直翅目 和蜻蜓目中的一种或多种的昆虫的多糖类。另外，本发明的其他方面是来源于选自双翅目、 鳞翅目和鞘翅目中的一种或多种的昆虫的多糖类。进而，本发明的其他方面涉及的多醣类 来源于至少对植物表现出食性的昆虫。
[0008] 进而，本发明的其他方面中的具有免疫赋活作用的多醣类具有耐热性或耐高温高 压特性。在该情况下，即使在制造或加工阶段对本发明的多醣类实施热处理或高温高压处 理的情况下，免疫赋活作用也不会消失，较为优选。
[0009] 进而，本发明的其他方面中的具有免疫赋活作用的多醣类的平均分子量为约 1.0 X 105~约1.0 X 107。另外，多醣类的免疫赋活作用至少可经由Toll样受体4 (Toll-like Receptor 4)实现。
[0010] 另外，本发明的其他方面是一种含有来源于昆虫且具有免疫赋活作用的多糖类的 组合物。并且，本发明的组合物可以为选自昆虫的卵、幼虫、蛹和成虫中的一种或多种的粉 末；从选自昆虫的卵、幼虫、蛹和成虫中的一种或多种中提取出的提取物；或者从选自昆虫 的卵、幼虫、蛹和成虫中的一种或多种中所得的醇不溶性固形物。
[0011] 进而，本发明提供以来源于昆虫且具有免疫赋活作用的多糖类作为有效成分的免 疫赋活剂。
[0012] 发明的效果 本发明是一种来源于昆虫的具有免疫赋活作用的多醣类、含有该多醣类的组合物、以 及将该多醣类作为有效成分的免疫赋活剂。通过向人或畜产动物、水产动物、宠物等给药本 发明，能够得到较高的免疫赋活作用。另外，由于昆虫作为食用或饲料用的动物性资源价值 很高，因此能够作为具有免疫赋活作用的健康食品、或具有免疫赋活作用的畜产用或水产 用饲料原料使用。
【附图说明】
[0013] 图1是表示从昆虫中得到的上清部分㈧、甲醇提取部分（B)、以及水提取部分（C) 的免疫赋活作用的图。
[0014] 图2是表示从昆虫中得到的上清部分（A)的免疫赋活作用在蛋白酶K处理下未发 生变化的图。
[0015] 图3是表示自属于双翅目的昆虫中得到的水提取部分的阴离子交换色谱分析结 果的图。
[0016] 图4是表示利用凝胶过滤色谱法对来源于属于双翅目的昆虫的多醣类进行纯化 的图。
[0017] 图5是表示利用高效液相色谱法对来源于属于双翅目的昆虫的多醣类的分子量 进行测定的图。
[0018] 图6是表示来源于属于双翅目的昆虫的多醣的组成糖分析中的总离子色谱图。
[0019] 图7是表示利用凝胶过滤色谱法对来源于属于双翅目的昆虫的多醣类进行纯化 的图。
[0020] 图8是表示自属于鳞翅目的昆虫中得到的水提取部分的阴离子交换色谱分析结 果（总糖量和氯化钠洗脱浓度）的图。
[0021] 图9是表示自属于鳞翅目的昆虫中得到的水提取部分的阴离子交换色谱分析结 果（总糖量及免疫赋活作用）的图。
[0022] 图10是表示利用凝胶过滤色谱法对来源于属于鳞翅目的昆虫的多醣类进行纯化 的图。
[0023] 图11是表示利用高效液相色谱法对来源于属于鳞翅目的昆虫的多醣类的分子量 进行测定的图。
[0024] 图12是表示来源于属于鳞翅目的昆虫的多醣的组成糖分析中的总离子色谱图。
[0025] 图13是表示自属于鳞翅目的昆虫中得到的水提取部分的阴离子交换色谱分析结 果（总糖量和氯化钠洗脱浓度）的图。
[0026] 图14是表示自属于鳞翅目的昆虫中得到的水提取部分的阴离子交换色谱分析结 果（总糖量和免疫赋活作用）的图。
[0027] 图15是表示利用凝胶过滤色谱法对来源于属于鳞翅目的昆虫的多醣类进行纯化 的图。
[0028] 图16是表示自属于鞘翅目的昆虫中得到的上清部分的免疫赋活作用的图。
[0029] 图17是来源于属于双翅目的昆虫的多醣的免疫赋活作用与脂多糖比较的图。
[0030] 图18是表示本发明的多醣类的耐热性的图。
[0031] 图19是表示本发明的多醣类所具有的免疫赋活作用在昆虫的变态阶段中的变化 的图。
[0032] 图20是表示在抗TLR2抗体或抗TLR4抗体的存在下本发明的多醣类的免疫赋活 作用的图。
[0033] 图21是表示通过本发明的多醣类的免疫赋活作用使得真鯛的抗病性提高的图。
【具体实施方式】
[0034] 本发明提供来源于昆虫且具有免疫赋活作用的多醣类、含有多醣类的组合物、以 及将多醣类作为有效成分的免疫赋活剂。
[0035] 本发明的多醣类来源于昆虫。本发明人发现了属于多个种别的昆虫含有具免疫赋 活作用的多醣类，从而完成了本发明。进而，明确了属于非常广范围种别的昆虫含有具免疫 赋活作用的多醣。只要是含有具免疫赋活作用的多醣类的昆虫，即可用于本发明。
[0036] 昆虫在动物界中属于节肢动物门（Arthropoda)，是被分类为昆虫纲（Insecta)的 生物的总称。昆虫纲（Insecta)分类为无翅亚纲（Apterygota)和有翅亚纲（Pterygota)。无 翅亚纲（Apterygota)分类为弹尾目（Collembola)、原尾目（Protura)、缨尾目（Thysanura) 等。另外，有翅亚纲（Pterygota)分类为蛘峨目（Ephemeroptera)、櫝翅目（Plecoptera)、 蜻蜓目（Odonata)、纺脚目（Embioptera)、直翅目（Orthoptera)、革翅目（Dermaptera)、等 翅目（白蚁目）（Isoptera)、纺足目（拟白蚁目）（Empioptera)、嗤虫目（Psocoptera)、食 毛目（Mallophaga)、風目（Anoplura)、缕翅目（Thysanoptera)、半翅目（Hemiptera)、膜翅 目（Hymenoptera)、捻翅目（Strepsiptera)、鞘翅目（Coleoptera)、脉翅目（Neuroptera)、 长翅目（Mecoptera)、毛翅目（Trichoptera)、鱗翅目（Lepidoptera)、双翅目（Diptera)、隐 翅目（Aphaniptera)等。
[0037] 在上述分类中，对蜻蜓目、网翅目（Dictyoptera)、直翅目、半翅目、脉翅目、膜翅 目、鞘翅目、双翅目以及鳞翅目进一步进行详细说明。
[0038] 作为属于蜻蜓目的昆虫，可以列举出蜻蜓等。蜻蜓目进一步分类为珈 總科（Calopterygidae)、幽總科（Euphaeidae)、细總科（Coenagrionidae)、螨 總科（Megapodagrionidae)、丝總科（Lestidae)、琵總科（Platycnemididae)、 春蜓科（Gomphidae)、總蜓科（Epiophlebiidae)、古蜓科（Petaluridae)、钩蜓 科（Cordulegasteridae)、晏蜓科（Aeschnidae)、弓蜓科（Corduliidae)、山蜻蛉科 (Macromiidae)、蜻蜓科（Libellulidae)等。
[0039] 作为属于网翅目的昆虫，可以列举出螳螂和蟑螂等。螳螂亚目（Mantodea)进一 步分类为幢螂科（Mantidae)、姬幢螂科（Acromantidae)等，蜚蠊目（Blattodea)进一步 分类为幢螂科（Blattidae)、光蠊科（Epilampridae)、薦蠊科（Pycnoscelidae)、姬蠊科 (Blattellidae)、硬蜚臟科（Panesthiidae)等。
[0040] 作为属于直翅目的昆虫，可以列举出蝗虫、螽斯、蟋蟀、蝼蛄、骆驼蟋蟀 等D直翅目进一步分类为穴蟲科（Rhaphidophoridae)、螺蟲科（Gryl Iacridae)、蟲 蟹科（Tettigoniidae)、螺蟀科（Gryllidae)、蚁螺科（Myrmecophilidae)、蚤蝼科 (Tridactylidae)、蝼蛄科（Gryllotalpidae)、菱幢科（Tetrigidae)、幢虫科（Locustidae) 等。
[0041] 作为属于半翅目的昆虫，可以列举出蝽、田鳖、水黾、蝉、浮尘子、蚜虫等。半翅 目异翅亚目（Heteroptera)进一步分类为土蝽科（Cydnidae)、龟蝽科（Plataspidae)、 畴科（Pentatomidae)、同畴科（Acanthosomatidae)、异畴科（Urostylidae)、缘畴科 (Coreidae)、长畴科（Lygaeidae)、大红畴科（Largidae)、红畴科（Pyrrhocoridae)、锤角畴 科（Berytidae)、扁畴科（Aradidae)、姬畴科（Nabidae)、猎畴科（Reduviidae)、小钱虫科 (Naucoridae)、负畴科（Belostomatidae)、竭畴科（Nepidae)、奇畴科（Enicocephalidae)、 网畴科（Tingidae)、花畴科（Anthocoridae)、臭虫科（Cimicidae)、盲畴科（Miridae)、邑畴 科（Gerridae)、尺畴科（Hydrometridae)、宽肩畴科（Veliidae)、膜畴科（Hebridae)、水畴 科（Mesoveliidae)、鞭畴科（Dipsocoridae)、跳畴科（Saldidae)、餘畴科（Octheridae)、 盖畴科（Aphelocheiridae)、仰畴科（Notonectidae)、固头畴科（Pleidae)、圣畴科 (Helotrephidae)、划畴科（Corixidae)等D
[0042] 半翅目同翅亚目（Homoptera)分类为?单科（Cicadidae)、角?单科（Membracidae)、 沫轉科（Cercopidae)、广胸漠轉科（Tomaspididae)、刺沫轉科（Machaerotidae)、