移植用人工真皮及其制造方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及移植用人工真皮及其制造方法。
【背景技术】
[0002] 难治性皮肤溃疡的原因有糖尿病、动脉不全、静脉不全、褥疮、外伤等。特别是近年 来，伴随着糖尿病患者的增加，糖尿病的合并症之一即糖尿病性皮肤溃疡一味地增加。该难 治性皮肤溃疡即使进行保守的治疗等治疗也不会治愈，大多需要皮瓣移植术或四肢切断术 等侵袭性大的手术。
[0003]目前，作为其治疗之一，正在进行使用以胶原等生物降解性材料作为主要成分的 人工真皮的治疗。该人工真皮在真皮再生时作为支架起作用。其结果是，通过来自移植床 的成纤维细胞及血管的侵入及增殖而形成真皮成分（真皮样肉芽组织），随着患者自身的 拟真皮的再生，构成人工真皮的生物降解性材料被降解、吸收。
[0004] 通过将人工真皮的基于生物降解性材料构成的创伤接触层制成多孔质结构，能够 促进该层的基于自身组织的置换。已知有在这样的创伤接触层上层叠有水蒸汽透过调节层 等的人工皮肤（参照日本特开平5-184662号公报及日本特开平5-285211号公报）。
【发明内容】
[0005] 发明所要解决的课题
[0006] 然而，日本特开平5-184662号公报及日本特开平5-285211号公报等中记载的以 往的具有多孔质结构的人工皮肤虽然在皮肤缺损部具有真皮样组织（肉芽样组织）的形成 能力，但期望真皮样组织（肉芽样组织）的形成能力更优异的人工真皮。
[0007] 因此，本发明的目的在于提供皮肤缺损部的真皮样组织（肉芽样组织）的形成能 力优异的移植用人工真皮。
[0008] 此外，本发明的其他目的在于提供所述移植用人工真皮的制造方法。
[0009] 用于解决课题的方案
[0010] 本发明人们为了解决上述课题，对人工真皮继续进行了深入研宄，结果发现，通过 将包含基于生物降解性材料构成的多孔质片材的创伤接触层的多孔质制成特定的形状，从 而人工真皮发挥优异的真皮样组织（肉芽样组织）的形成能力，由此完成本发明。
[0011] 本发明的移植用人工真皮具有创伤接触层，所述创伤接触层包含基于生物降解性 材料构成的多孔质片材，且上述多孔质片材满足下述的式子。
[0012] 式：X2/X1 彡 0.8
[0013] 上述多孔质片材中，以相同长度绘制与创伤接触面平行的直线和垂直的直线时， Xl为上述平行的直线与气孔的壁的交点数，X2为上述垂直的直线与气孔的壁的交点数。
[0014] 本发明的移植用人工真皮的制造方法是制造本发明的移植用人工真皮的方法，在 制造上述多孔质片材时，包含将生物降解性材料的水溶液冷冻的工序。
[0015] 发明效果
[0016] 本发明的移植用人工真皮通过将多孔质片材的多孔质制成特定的形状，从而在皮 肤缺损部具有优异的真皮样组织（肉芽样组织）的形成能力。此外，本发明的移植用人工 真皮的制造方法可以采用公知的制造手段，简便地制造本发明的移植用人工真皮。
【附图说明】
[0017] 图1是将实施例1中由基因重组明胶制作的多孔质片材进行曙红染色，用光学显 微镜观察内部截面结构而得到的图像。
[0018] 图2是将实施例1中由基因重组明胶制作的多孔质片材进行曙红染色，用光学显 微镜观察内部截面结构而得到的图像（1，500 ymX 1，500 ym的放大图）。
[0019] 图3是使用实施例1中由基因重组明胶制作的多孔质片材进行真皮样组织（肉芽 样组织）形成试验，通过HE染色通过组织学方式观察到的图像。
[0020] 图4是将实施例2中由基因重组明胶制作的多孔质片材进行曙红染色，用光学显 微镜观察内部截面结构而得到的图像。
[0021] 图5是将实施例2中由基因重组明胶制作的多孔质片材进行曙红染色，用光学显 微镜观察内部截面结构而得到的图像（1，500 ymX 1，500 ym的放大图）。
[0022] 图6是使用实施例2中由基因重组明胶制作的多孔质片材进行真皮样组织（肉芽 样组织）形成试验，通过HE染色通过组织学方式观察到的图像。
[0023] 图7是将比较例1中由基因重组明胶制作的多孔质片材进行曙红染色，用光学显 微镜观察内部截面结构而得到的图像。
[0024] 图8是将比较例1中由基因重组明胶制作的多孔质片材进行曙红染色，用光学显 微镜观察内部截面结构而得到的图像（1，500 ymX 1，500 ym的放大图）。
[0025] 图9是使用比较例1中由基因重组明胶制作的多孔质片材进行真皮样组织（肉芽 样组织）形成试验，通过HE染色通过组织学方式观察到的图像。
[0026] 图10是将比较例2的多孔质片材进行曙红染色，用光学显微镜观察内部截面结构 而得到的图像。
[0027] 图11是将比较例2的多孔质片材进行曙红染色，用光学显微镜观察内部截面结构 而得到的图像（1，500 y mX 1，500 y m的放大图）。
[0028] 图12是使用比较例2的多孔质片材进行真皮样组织（肉芽样组织）形成试验，通 过HE染色通过组织学方式观察到的图像。
【具体实施方式】
[0029] 以下，对本发明的实施方式进行说明。另外，这些说明及实施例是例示本发明的， 并不限制本发明的范围。
[0030] 本说明书中使用"~"表示的数值范围表示包含"~"的前后记载的数值分别作为 下限值及上限值的范围。
[0031] 本说明书中"工序"这一词语不仅包括独立的工序，在无法与其他工序明确区别的 情况下只要可达成本工序的所期望的作用，也就包含在本用语中。
[0032] 本说明书中，有时将氨基酸序列中的氨基酸残基以本技术领域中周知的单字母表 述（例如，将甘氨酸残基记载为"G"）或三字母表述（例如，将甘氨酸残基记载为"Gly"） 来记载。
[0033] 本发明中，关于蛋白质及多肽的氨基酸序列的" ％"只要没有特别说明，则以氨基 酸残基的个数为基准。
[0034] 本说明书中的关于氨基酸序列的"同源性"可以是指使用BLAST包（参照Ausubel 等、1999Short Protocolsin Molecular Biology、4thEd_Chapterl8)计算的值。例如，相对 于序列号1同源性为80%以上表示BLAST中的Max. Identities的值为80以上。
[0035] 本发明的移植用人工真皮（以下也称为"本发明的人工真皮"。）具有创伤接触层， 所述创伤接触层包含基于生物降解性材料构成的多孔质片材，且上述多孔质片材满足下述 的式子。
[0036]式：X2/X1彡0? 8
[0037] 上述多孔质片材中，以相同长度绘制与创伤接触面平行的直线和垂直的直线时， Xl为上述平行的直线与气孔的壁的交点数，X2为上述垂直的直线与气孔的壁的交点数。
[0038] 为了求出Xl及X2,上述平行的直线及上述垂直的直线优选分别绘制3条，优选1 条直线的长度为1，500 y m，3条直线的合计的长度为4, 500 y m。即，此时，在上述多孔质片 材中，绘制3条与创伤接触面平行的直线（长度为1，500 y m的直线3条。合计为4, 500 y m) 和3条与创伤接触面垂直的直线（长度为1，500 y m的直线3条。合计为4, 500 y m)时，Xl 为上述3条平行的直线与气孔的壁的交点数，X2为上述3条垂直的直线与气孔的壁的交点 数。
[0039] Xl及X2例如可以如下求出：获取以与创伤接触面平行的直线和垂直的直线为边 的1，500 ymXl，500 ym的正方形的截面图像，绘制将该截面图像等分成16个正方形的3 条平行线及3条垂直线，由此求出。即，此时，从上述多孔质片材获取以与创伤接触面平行 的直线和垂直的直线为边的截面图像（1，500 ymX 1，500 ym的正方形），绘制将该截面图 像等分成16个正方形的3条平行线及3条垂直线时，Xl为上述3条平行线与气孔的壁的 交点数，X2为上述3条垂直线与气孔的壁的交点数。1，500 y mX 1，500 y m的正方形的截面 图像优选从多孔质片材的中央部获取。
[0040] Xl及X2更详细而言如下求得。
[0041] 当多孔质片材的创伤接触面为大致平面时，任意地取与该大致平面平行的平面 (以下称为"平行面"。）、及垂直的平面（以下称为"垂直面"。），获取在该平行面及垂直面 具有两条边的1，500 ymX 1，500 ym的正方形的截面图像。按照将获取的正方形的截面图 像的边中通过平行面形成的边、及通过垂直面形成的边分别分割成四等分的方式，相对于 各边沿垂直方向绘制3条分割线。其中，将分割通过平行面形成的边的分割线称为垂直线， 将分割通过垂直面形成的边的分割线称为平行线。该垂直线为与创伤接触面垂直的线，该 平行线为与创伤接触面平行的线。在截面图像中，3条平行线与形成气孔的壁部的交点数的 合计为XI，3条垂直线与形成气孔的壁部的交点数的合计为X2。
[0042] 当多孔质片材的创伤接触面不为大致平面时，在使创伤接触面变形为平面的基础 上，使创伤接触面朝下，将人工真皮置于平面上，任意地取与该平面平行的平面（平行面）、 及垂直的平面（垂直面），获取在该平行面及垂直面具有两条边的1，500 y mX 1，500