。之后，在-80°C的冷库内，于在铝块上放置有玻璃板的台上静置1 小时。之后进行冷冻干燥，在160°C下进行3小时热交联，得到由基因重组明胶构成的多孔 质片材（平均厚度为2300 ym)。将所得到的多孔质片材进行曙红染色，用光学显微镜确认 结构（参照图1)。图2为1，500 y mX 1，500 y m的放大图，通过上述的方法，绘制3条平行 线和3条垂直线，分别求出交点数。3条平行线与形成气孔的壁部的交点数的合计即Xl为 98 (平行线1 :交点数37、平行线2 :交点数30、平行线3 :交点数31)，3条垂直线与形成气 孔的壁部的交点数的合计即X2为68 (垂直线1 :交点数19、垂直线2 :交点数25、垂直线3 : 交点数24)，X2/X1为0.7。另外，本实施方式是仅由多孔质片材即创伤接触层构成的人工 真皮。
[0116] (在大鼠背部的真皮样组织（肉芽样组织）形成试验）
[0117] 使用Wistar大鼠（雄、10周龄以后），通过将盐酸氯胺酮和盐酸赛拉嗪分别以 90mg/kg和10mg/kg投与到腹腔内而麻醉。将大鼠的背部脱毛后，制作直径为19mm的 圆形的真皮缺损。将所得到的人工真皮贴附到真皮缺损部后，依次放上带凡士林的纱布 (八0八?1'1(3(注册商标）、]〇11118〇11&]〇11118〇111(.1(.)、湿棉花、及纱布并固定。第2周在麻醉下， 将包含人工真皮的背部组织摘出。将该摘出组织通过(Hematoxylin Eosin)染色并通过 组织学方式进行观察，结果与后述的比较例1及比较例2相比显著确认到真皮样组织（肉 芽样组织）的形成（参照图3)。
[0118] [实施例2]
[0119] (多孔质片材的制作）
[0120] 使用基因重组明胶CBE3,制作3 %明胶水溶液，将该水溶液流入到铝制杯子（直 径53mmX高度37mm)中。之后，在-60°C的冷库内，于在铝块上放置有玻璃板的台上静置1 小时。之后进行冷冻干燥，在160°C下进行3小时热交联，得到由基因重组明胶构成的多孔 质片材（平均厚度为2500 ym)。将所得到的多孔质片材进行曙红染色，用光学显微镜确认 结构（参照图4)。图5为1，500 y mX 1，500 y m的放大图，通过上述的方法，绘制3条平行 线和3条垂直线，分别求出交点数。3条平行线与形成气孔的壁部的交点数的合计即Xl为 108 (平行线I :交点数36、平行线2 :交点数34、平行线3 :交点数38)，3条垂直线与形成气 孔的壁部的交点数的合计即X2为32 (垂直线1:交点数11、垂直线2:交点数7、垂直线3: 交点数14)，X2/X1为0. 3。另外，本实施方式是仅由多孔质片材即创伤接触层构成的人工 真皮。
[0121] (在大鼠背部的真皮样组织（肉芽样组织）形成试验）
[0122] 通过与实施例1同样的方法进行评价（参照图6)。与后述的比较例1及比较例2 相比显著地见到真皮样组织（肉芽样组织）的形成。此外，与实施例1相比见到同等以上 的真皮样组织（肉芽样组织）的形成。
[0123][比较例1]
[0124](多孔质片材的制作）
[0125] 除了将实施例1的"_80°C的冷库内"变更为"_40°C的冷库内"以外，进行与 实施例1同样的操作，得到由基因重组明胶构成的多孔质片材（平均厚度为2200 ym)。 将所得到的多孔质片材进行曙红染色，用光学显微镜确认结构（参照图7)。图8为 1，500 y mX 1，500 y m的放大图，通过上述的方法，绘制3条平行线和3条垂直线，分别求出 交点数。3条平行线与形成气孔的壁部的交点数的合计即Xl为58 (平行线1:交点数19、 平行线2 :交点数18、平行线3 :交点数21)，3条垂直线与形成气孔的壁部的交点数的合计 即X2为57(垂直线1 :交点数20、垂直线2 :交点数19、垂直线3 :交点数18)，X2/X1为1。 另外，本实施方式是仅由多孔质片材即创伤接触层构成的人工真皮。
[0126](在大鼠背部的真皮样组织（肉芽样组织）形成试验）
[0127] 通过与实施例1同样的方法进行评价（参照图9)。可以确认实施例1及实施例2 更明显地形成真皮样组织（肉芽样组织）。
[0128][比较例2]
[0129](多孔质片材的制作）
[0130] 代替实施例1的人工真皮，使用市售的真皮缺损用移植片Terudermis(注册 商标）（Olympus Terumo Biomaterials Corp.)(平均厚度为 3300 y m)，进行同样的 试验。将Terudermis进行曙红染色，用光学显微镜确认结构（参照图10)。图11为 1，500 y mX 1，500 y m的放大图，通过上述的方法，绘制3条平行线和3条垂直线，分别求出 交点数。3条平行线与形成气孔的壁部的交点数的合计即Xl为41 (平行线1:交点数13、 平行线2 :交点数12、平行线3 :交点数16)，3条垂直线与形成气孔的壁部的交点数的合计 即X2为40(垂直线1 :交点数12、垂直线2 :交点数13、垂直线3 :交点数15)，X2/X1为1。 另外，本实施方式是仅由多孔质片材即创伤接触层构成的人工真皮。
[0131](在大鼠背部的真皮样组织（肉芽样组织）形成试验）
[0132] 通过与实施例1同样的方法进行评价（参照图12)。可以确认实施例1及实施例 2更明显地形成真皮样组织（肉芽样组织）。
[0133] 如以上所示的那样，本发明的实施例所述的人工真皮通过将多孔质制成特定的形 状，具有优异的真皮样组织（肉芽样组织）的形成能力。
[0134] 2013年1月25日申请的日本专利申请2013-012626号的公开内容其整体通过参 照纳入本说明书中。
[0135] 本说明书中记载的全部文献、专利申请、及技术标准与具体且分别记载各个文献、 专利申请、及技术标准通过参照纳入的情况相同程度地通过参照纳入本说明书中。
【主权项】
1. 一种移植用人工真皮，其具有创伤接触层，所述创伤接触层包含基于生物降解性材 料构成的多孔质片材，所述多孔质片材满足下述的式子， 式：X2/X1 < 0? 8 在所述多孔质片材中，以相同长度绘制与创伤接触面平行的直线和垂直的直线时，Xl为所述平行的直线与气孔的壁的交点数，X2为所述垂直的直线与气孔的壁的交点数。2. 根据权利要求1所述的移植用人工真皮，其中，所述X2/X1为0. 1以上且0. 8以下。3. 根据权利要求1或2所述的移植用人工真皮，其中，所述生物降解性材料为选自蛋白 质、多肽、聚乳酸、聚乙醇酸、乳酸-乙醇酸共聚物、壳多糖、壳聚糖、纤维素及透明质酸中的 至少1种。4. 根据权利要求1到3中任一项所述的移植用人工真皮，其中，所述生物降解性材料为 选自明胶、纤连蛋白、及层粘连蛋白中的至少1种。5. 根据权利要求1到4中任一项所述的移植用人工真皮，其中，所述生物降解性材料为 基因重组明胶。6. 根据权利要求5所述的移植用人工真皮，其中，所述基因重组明胶具有下述的氨基 酸序列， A- [ (Gly-X-Y) n]m-B A表示1个或2个以上的任意的氨基酸残基，B表示1个或2个以上的任意的氨基酸残 基，n个X分别独立地表示任意的氨基酸残基，n个Y分别独立地表示任意的氨基酸残基，n 表示3以上且100以下的整数，m表示2以上且10以下的整数；n个Gly-X-Y可以全部相 同，也可以部分相同，还可以互不相同。7. 根据权利要求5或6所述的移植用人工真皮，其中，所述基因重组明胶具有下述的氨 基酸序列， Gly-Ala-Pro- [ (Gly-X-Y) 63]3_Gly 63个X分别独立地表示任意的氨基酸残基，63个Y分别独立地表示任意的氨基酸残 基；63个Gly-X-Y可以全部相同，也可以部分相同，还可以互不相同。8. 根据权利要求5到7中任一项所述的移植用人工真皮，其中，所述基因重组明胶为下 述的（1)或（2)， (1) 具有序列号1中记载的氨基酸序列的基因重组明胶； (2) 具有与序列号1中记载的氨基酸序列有80%以上的同源性的氨基酸序列、且具有 生物降解性的基因重组明胶。9. 根据权利要求1到8中任一项所述的移植用人工真皮，其中，所述生物降解性材料经 过了交联。10. -种移植用人工真皮的制造方法，其是权利要求1到9中任一项所述的移植用人工 真皮的制造方法， 在制造所述多孔质片材时，包含将生物降解性材料的水溶液冷冻的工序。
【专利摘要】本发明提供移植用人工真皮，其具有创伤接触层，所述创伤接触层包含基于生物降解性材料构成的多孔质片材，上述多孔质片材满足下述的式子。式：X2/X1≤0.8。在上述多孔质片材中，以相同长度绘制与创伤接触面平行的直线和垂直的直线时，X1为上述平行的直线与气孔的壁的交点数，X2为上述垂直的直线与气孔的壁的交点数。
【IPC分类】A61L15/64
【公开号】CN104902934
【申请号】CN201480003773
【发明人】荻原一隆, 山口雄大, 佐佐木翼, 后藤荣子, 菅原桂, 畠贤一郎
【申请人】富士胶片株式会社, 株式会社日本组织工程
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2014年1月21日
【公告号】EP2949347A1, US20150290359, WO2014115732A1