一种黄芩苷-pvp共沉淀物及其制剂、制备方法与用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种组合药物，具体涉及黄芩苷-PVP共沉淀物、制剂及其制备方法和 用途。
【背景技术】
[0002] 黄零（RadixScutellariae)为唇形科植物黄零 (ScutellariabaicalensisGeorgi)的干燥根。味苦，性寒。归肺、胆、脾、大肠、小肠经。具 有清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎功效，现代医学用于呼吸道感染，急性胆道感染，泌尿系 统感染，急性细菌性痢疾，病毒性肝炎，猩红热，流脑，高血压等症的治疗。其主要有效成分 为黄酮类化合物，如黄芩苷元、黄芩苷、汉黄芩素、汉黄芩苷、黄芩新素及二氢黄酮苷等。
[0003] 黄芩苷（Baicalin)是从黄芩中分离提纯的天然产物，为一种单体化合物，是黄芩 的有效成分之一。黄芩苷具有多种药理活性：
[0004] 1.黄芩苷具有阻滞钙离子通道的作用。
[0005] 2.黄芩苷对超氧自由基具有明显的清除作用，可有效对抗脂质过氧化损伤。
[0006] 3.黄芩苷对各种实验性肝损伤都有一定的保护作用。
[0007] 4.黄芩苷具有免疫调节作用，可以增加机体的免疫力。
[0008] 5.黄芩苷有抑制醛糖还原酶的作用，可用于糖尿病慢性并发症的治疗。
[0009] 6.黄芩苷具有抗HIV-I的活性，是一种有效的预防和治疗HIV感染的药物。
[0010]7.黄芩苷具有心脑血管的保护作用：黄芩苷有扩张血管及降压作用，抗心律失 常，抑制血管平滑肌细胞增殖，保护心肌缺血再灌注损伤，调节血脂，抗动脉粥样硬化，保护 脑组织损伤。
[0011] 但目前尚未见有黄芩苷在抑制舌鳞癌干细胞生长方面的报道。
[0012] 名词解释：癌症干细胞（CancerStemCel1，CSC)，又称癌干细胞、肿瘤干细胞，是指 具有干细胞（StemCell)性质的癌细胞，也就是具有"自我复制"（Self-Renewal)以及"具 有多细胞分化" (Differentiation)等能力。通常这类的细胞被认为有形成肿瘤，发展成癌 症的潜力。肿瘤干细胞自我更新的特性是造成肿瘤复发的主要原因。
[0013] PVP，即聚乙烯基吡咯烷酮。
【发明内容】
[0014] 本发明首先所要解决的技术问题是提供一种以黄芩苷为主要成分，抑制舌鳞癌症 干细胞生长的药物及其制备方法。
[0015] 为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：
[0016] 一种黄芩苷-PVP共沉淀物，是以含有黄芩苷、聚乙烯基吡咯烷酮的混合溶液为原 料，经过加热，去除混合溶液中的溶剂后所得到的沉淀物；其中混合溶液中的溶剂为有机溶 剂，黄芩苷与聚乙烯基吡咯烷酮的质量比为1 :3。
[0017] 制备黄芩苷-PVP共沉淀物的方法，包括如下步骤：
[0018] 步骤1)取一定量的黄芩苷溶解于有机溶剂中形成溶液，以水浴超声处理该溶液， 并向溶液中加入聚乙烯基吡咯烷酮，其中黄芩苷与聚乙烯基吡咯烷酮的质量比为1 :3 ;
[0019] 步骤2)聚乙烯基吡咯烷酮添加完毕后，将步骤1)所得到的溶液转移到室温环境 下进行充分混合，形成混合溶液；加热混合溶液，使混合溶液内的有机溶剂挥发，这样便有 共沉淀物析出，该共沉淀物即是所要制备的黄芩苷_PVP共沉淀物。
[0020] 经实验验证，采用本发明的技术方案制备的黄芩苷-聚乙烯基吡咯烷酮（PVP)共 沉淀物，可以抑制舌鳞癌症干细胞的生长，逆转肿瘤干细胞高醛脱氢酶活性，降低癌细胞恶 性程度（即高恶性肿瘤转为低恶性肿瘤）。比起现有的单纯以黄芩苷为有效成分的药物， 本发明制备的黄芩苷-PVP共沉淀物更易于溶解，溶解度更高；而且在黄芩苷相对使用量 (质量）同等的情况下，比起现有的单纯以黄芩苷为有效成分的药物，服用本发明制备的黄 芩苷-PVP共沉淀物，服用者的血药浓度（单位体积血液中黄芩苷的含量）要更高，即证明 本发明制备的黄芩苷-PVP共沉淀物具有较强的生物活性。
[0021] 进一步，还包括步骤3)对所得的黄芩苷-PVP共沉淀物进行研磨，并采用筛网进行 筛选，将能通过筛网的粉末颗粒装入空胶囊壳中存放备用。
[0022] 进一步，所述有机溶剂是指无水乙醇，所述加热混合溶液，是将混合溶液放入温度 为65°C，气压90kPa的环境下使混合溶液升温。
[0023] 升温同时降压，是使混合溶液升温，溶剂快速挥发的技术手段，有助于提高制备效 率。
[0024] 本发明还提供了黄芩苷-PVP共沉淀物的制剂，所述黄芩苷-PVP共沉淀物灌封于 胶囊中，形成胶囊剂型。
[0025] 通过胶囊进行药物存放，保质期长，而且便于病人定量口服。
[0026] 本发明另一个要解决的技术问题是提供一种用途，即黄芩苷-PVP共沉淀物用于 制备舌鳞癌症干细胞抑制药的用途。
[0027] 药效机理：
[0028] 通过细胞实验与动物实验发现，增加黄芩苷的有效注入量，会直接影响NF-KB信 号通路，使得舌鳞癌干细胞的醛脱氢酶的表达减少，干细胞生长增殖活性受到抑制，最终导 致舌鳞癌的增殖与侵袭能力得到有效抑制。
【附图说明】
[0029] 图1是采用UV-3105分光光度仪，本发明中黄芩苷-PVP共沉淀物胶囊与活性制药 成分胶囊在4组溶液的溶解度检测图表；A :0.Imol/lHCl溶液；B:pH4. 5的磷酸缓冲液；C: pH6. 8的磷酸缓冲液；D :蒸馏水。
[0030] 图2中口腔给予0. 25g黄芩苷-PVP共沉淀物胶囊与活性制药成分胶囊后不同时 间的血药浓度曲线图。
[0031] 图3为流式细胞术检测舌鳞癌Tca8113细胞系中ALDH+细胞的情况。
[0032] A:ALDH抑制剂DEAB建立的基线荧光；B:无DEAB情况下Tca8113细胞系中ALDH+ 细胞。
[0033] 图4为ALDH+细胞与ALDH-细胞的体外增殖对照表。
[0034] 图5为使用Zeiss倒置显微镜检测的Tca8113细胞形成肿瘤球的检测图。
[0035] A、B、C为ALDH+Tca8113 细胞，D、E、F为ALDH-Tca8113 细胞。
[0036] 图6为采用Aldefluor分析不同浓度黄芩苷作用人舌鳞癌Tca8113细胞48h后 醛脱氢酶活性检测图。从左到右依次是：DMSO溶剂对照组、36. 48ng/ml、364. 8ng/ml及 3648ng/ml黄芩苷组。
[0037] 图7为高醛脱氢酶活性鳞癌细胞及黄芩苷处理后低醛脱氢酶活性细胞分别提取 总RNA经琼脂糖凝胶电泳结果。A与B分别为高醛脱氢酶活性鳞癌细胞与黄芩苷处理后细 胞。
[0038] 图8为采用WesternBlot检测的NF-KB蛋白表达情况对照图（图8右侧的数字 表示实验材料用量水平）。
[0039] 图9为人舌鳞癌裸鼠体内成瘤的宏观观察与解剖后观察。A:0. 25g黄芩苷-PVP共 沉淀物胶囊组，B: "参阳"方72. 8mg+生理盐水至0. 25g组，与C:0. 25g生理盐水对照组。
[0040] 图10为人舌鳞癌裸鼠体内成瘤的HE染色检测肿瘤外Imm处鳞癌细胞浸润情况。 A:0. 25g黄芩苷-PVP共沉淀物胶囊组，B: "参阳"方72. 8mg+生理盐水至0? 25g组，C:0. 25g 生理盐水对照组。
[0041] Coprecipitatecapsule共沉淀胶囊，APIcapsule活性制药成分胶囊。
【具体实施方式】
[0042] 下面结合附图和实施例对本发明技术方案进一步说明：
[0043] 本发明通过实施例研宄表明，黄芩苷-PVP共沉淀物可以抑制与高醛脱氢酶活性 呈正相关的舌鳞癌干细胞的生长。
[0044] 实施例1:黄芩苷-PVP共沉淀物的制备及生物学活性检测。
[0045] 材料与方法：
[0046] 1，采用溶剂法制备黄芩苷-聚乙烯基吡咯烷酮共沉淀物。
[0047] 7g黄芩苷溶解在1050毫升无水乙醇，72 ±2°C水浴超声处理，加入2Ig聚乙烯基吡 咯烷酮，黄芩苷质量：聚乙烯基吡咯烷酮质量=1 :3。将得到的溶液转移到一个圆底烧瓶， 室温下轻轻晃动混合30分钟。在65°C，90kPa下使无水乙醇完全挥发，圆底烧瓶内形成共 沉淀物。共沉淀物在真空干燥器至少干燥24h。研钵内研磨，经80目筛网筛选，能通过80 目筛网的即所述黄芩苷-PVP共沉淀物。
[0048] 2,取0. 500±0. 025g黄芩苷-PVP共沉淀物转入0号空胶囊壳内，即制备含有 0.125g黄芩苷的黄芩苷-PVP共沉淀物胶囊。
[0049] 对照试剂：黄芩苷-活性制药成分（API)胶囊包含0. 250±0. 012gAPI(于武汉能 仁医药有限公司购买得到的纯度为99%的胶囊成品）。本发明的黄芩苷-PVP共沉淀物胶 囊中黄芩苷重量是市面上胶囊内黄芩苷重量的一半。
[0050] 3,把黄芩苷-PVP共沉淀物胶囊溶解于甲醇溶剂，黄芩苷药物纯度在278nm的分 光光度法测定。测定结果：黄芩苷-PVP共沉淀物胶囊中黄芩苷药物纯度为98. 8±0. 5%。
[0051]4,UV-3105分光光度仪检测黄芩苷-PVP共沉淀物胶囊与活性制药成分胶囊在4 组溶液的溶解度情况。A:0.lmol/LHCl溶液；B:pH4.5的磷酸缓冲液；C:pH6.8的磷酸缓冲 液；D:蒸馏水。如图1所示，黄芩苷-PVP共沉淀物胶囊在不同溶液的溶解度均较活性制药 成分胶囊（即现有的黄芩苷药物）溶解度有显著地提高与改善。
[0052] 5,高效液相色谱仪检测给予6只比格犬随机分为2组口服0. 25g黄芩苷-PVP共 沉淀物胶囊与活性制药成分胶囊；检测不同时间的血药浓度。相隔2周的间隔期后，动物分 组调换分别接受0. 25g活性制药成分胶囊与黄芩苷-PVP共沉淀物胶囊处理；并检测不同时 间的血药浓度。如图2所示黄芩苷-PVP共沉淀物在黄芩苷使用量仅为现有的黄芩苷药物 一半的情况，依然具有较强的生物学活性。
[0053] 结论1，黄芩苷-PVP共沉淀物胶囊较活性制药成分胶囊具有更好的溶解度与生物 学活性。
[0054] 实施例2 :黄芩苷抑制人舌鳞癌的动物实验研宄
[0055] 材料与方法：
[0056] 1，（N0D/SCID)裸鼠购买于重庆医科大学生命科学研宄中心实验室。4周龄，雌 性，18只，体重约17_20g。SPF以上级环境培养。
[0057] 2,TCA8113细胞系购买于重庆医科大学生命科学研宄中心实验室。体外培养 IXlO6细胞/ml，接种Iml于裸鼠的右侧背部皮下。每3天观察一次。
[0058] 3,实验分组：分为0? 25g生理盐水对照组、"参阳"方72. 8mg+生理盐水至0? 25g 组，与0. 25g黄芩苷-PVP共沉淀物胶囊组（n= 6)。接种后第8