一种鸡气分证模型的构建方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种鸡疾病模型的构建方法，具体地说是一种鸡气分证模型的构建方 法。
【背景技术】
[0002] 随着集约化养鸡业的发展，养殖规模不断扩大，饲养密度逐渐提高，料肉比不断降 低，鸡群发病率逐年提高，用于疾病防控的化学药物不断增加，食品药物残留和微生物耐药 性有逐年增加的趋势。中药在预防和治疗鸡病方面具有灵活配伍、随症加减、标本兼治、低 毒、高效等特点，是预防和治疗鸡病的首选药物，是减少药物残留，提高禽产品质量，保证人 类健康的绿色、高效的新兽药。中药是祖国医学的重要组成部分，对证下药是保证药效的首 要前提。因此构建科学合理的病证模型是中药研究的重要任务，否则一切均无从谈起。
[0003] 由于鸡呼吸系统特有的气囊结构，外界空气可直接进入体内，病原菌极易感染呼 吸系统，而出现以甩鼻、流鼻液、眼泪、呼噜、气喘等为主要症状的外感温热病的初期和中期 症状。外感温热病是鸡常见的疾病，卫分证是外感温热病的初期症状，若卫分证不解，即可 以发展为气分证。由于鸡气囊分布全身，鸡舍内空气质量较差，病情如不能及时控制，极易 转为营血证，出现高热、拉稀、组织器官严重出血、神经症状，甚至导致严重死亡，因此鸡卫 分证阶段和气分证阶段的治疗非常重要，中药研制尤为迫切。同时由于鸡卫分证阶段持续 时间较短，治疗时一般处在气分证阶段或者是从卫分证到气分证的转化阶段，因此，建立气 分证模型更为重要。
[0004] 构建鸡气分证模型首先想到的是鸡传染性支气管炎病毒（Infectious Bronchitis of Chickems, IBV)，但单纯感染病毒鸡群不发病，无卫分证特征。用新城疫病 毒构建模型，弱毒株不发病，无临床症状；中等毒力和强毒株，由于毒力较强，卫、气分证时 间持续较短，很快转入营血证，死亡率极高，不适于气分证阶段的治疗。构建鸡气分证的模 型已成为制约相关中药研究的瓶颈。
【发明内容】
[0005] 本发明克服了上述现有技术的不足，提供了一种鸡气分证模型的构建方法。本发 明采用20_23°C的饲养温度（正常饲养温度为30°C左右）可造成冷应激，降低雏鸡机体的 抵抗力，再通过滴鼻方式（外感）感染以呼吸道症状为主的传染性支气管炎病毒M41株，成 功构建稳定的气分证模型，为预防和治疗鸡气分证中药的研究提供可靠的疾病模型。
[0006] 本发明的技术方案是：一种鸡气分证模型的构建方法，其特征是，以饲养于SPF鸡 隔离器中的海兰褐雏公鸡或SPF雏鸡为样本；将鸡隔离器温度控制在20_23°C (冷应激）， 再采用鸡传染性支气管炎病毒M41株两侧鼻孔滴鼻的方式进行病毒感染；病毒感染后凡出 现流鼻液或鼻孔黏液堵塞的均判为发病；病毒感染后雏鸡100%发病，病程持续6天以上， 以后逐渐好转直至自然痊愈的判定为鸡气分证模型构建成功。
[0007] 优选的，所述鸡传染性支气管炎病毒M41株病毒液的EID50为I X 10-6. 5/0. lmL， 用量为0. 2~0. 4mL/只，更优选的用量为0. 3mL/只。
[0008] 优选的，选用7~11日龄的海兰褐雏公鸡或SPF雏鸡为样本的，更优选的选用11 日龄的海兰褐雏公鸡或SPF雏鸡为样本。
[0009] 构建成功的模型鸡表现出：精神沉郁一一甩鼻一一喷嚏一一流鼻液（如图1所 不） 鼻孔黏液堵塞（如图2所不） 自然疫愈（一般10天左右）的疾病进程。
[0010] 本发明所选鸡传染性支气管炎病毒M41株的病原学特性如下：鸡传染性支气管 炎病毒（IBV)至少有14个血清型，M41是引起呼吸性传染性支气管炎的美国标准株之一。 可通过呼吸、直接接触感染家禽及污染的垫料、设备或其他污染物传播，主要侵害鸡呼吸系 统，出现打喷嚏、流鼻液、咳嗽、呼吸困难、气管啰音、鼻孔黏液堵塞等症状。
[0011] 本发明的有益效果是：
[0012] (1)雏鸡正常饲养温度为30°C左右，而本发明20-23°C的饲养温度可造成冷应激， 降低机体的抵抗力，通过滴鼻方式（外感）感染以呼吸道症状为主的传染性支气管炎病毒 M41株，成功构建稳定的气分证模型；
[0013] (2)本发明的鸡气分证模型构建方法简单、易操作，构建的模型临床症状明显、发 病迅速、发病率高（100%)、病程长（气分证维持时间6天以上），模型稳定、可靠（气分证 后逐渐好转直至自然痊愈，不会出现进一步恶化，如营血证、死亡等），适合于鸡气分证防治 用中药的研究。
【附图说明】
[0014] 图1为感染鸡鼻流黏液图；其中A图自然状态下鸡鼻流黏液图，B图为经挤压后黏 液大量流出图。
[0015] 图2为感染鸡黏液堵塞鼻孔图。
【具体实施方式】
[0016] 实施例1海兰褐雏鸡气分证模型的构建
[0017] 1材料和方法
[0018] I. 1雏鸡，饲养于SPF鸡隔离器中的7日龄、11日龄海兰褐公鸡；SPF鸡隔离器，江 苏常熟生产。
[0019] I. 2 IBV :M41 株尿囊液，EID50 为 I X 10 6.5/0. lmL。
[0020] 1. 3分组：雏鸡随机分为病毒液0. 2mL组/只和0. 3mL组/只，每组30只。
[0021] 1. 4接种方法：双侧滴鼻。
[0022] 1. 5温度控制：通过控制舍内温度或鸡群喷冷水将SPF鸡隔离器内温度控制在 20-23。。。
[0023] 1. 6判断标准：感染后凡出现流鼻液或鼻孔黏液堵塞者均判为发病。
[0024] 2 结果
[0025] 2. 1临床症状：维鸡感染表现精神沉郁一甩鼻一喷嚏一流鼻液一鼻孔黏液堵塞一 喷嚏一自然痊愈的疾病进程。
[0026] 2. 2从表1中可见，0. 2mL组发病率均低于0. 3ml组，同等感染剂量11日龄组发病 率均高于7日龄组。以11日龄雏鸡攻毒0. 3mL/只所构建模型最理想。
[0027] 表1不同日龄、不同感染量对发病率的影响（％ )
[0028]
[0029] 3 结论
[0030] 选用EID50为1X10 6'5/0.1 mL的IBV M41病毒，0. 3ml/只侧鼻孔滴鼻感染11日 龄海兰褐公雏鸡，能成功构建鸡气分证模型。
[0031] 实施例2 :SPF鸡气分证模型的构建
[0032] 1试验材料与方法
[0033] I. I SPF雏鸡，饲养于SPF鸡隔离器的11日龄SPF雏鸡，由山东省昊泰实验动物中 心提供；SPF鸡隔离器，江苏常熟生产。
[0034] I. 2 IBV :IBV-M41，EID50 为 1 X 10 6 5/0. lmL。
[0035] 1. 3 方法
[0036] 1. 3. 1感染剂量与途径：每只鸡两侧鼻孔滴IBV-M41尿囊液0. 3mL。
[0037] 1. 3. 2温度控制：通过控制舍内温度或鸡群喷冷水将SPF鸡隔离器内温度控制在 20-23。。。
[0038] 1. 3. 3判断标准：凡出现流鼻液、气喘或气管罗音、鼻孔黏液堵塞均判为发病。
[0039] 2试验结果
[0040] 2. 1临床症状：雏鸡攻毒后表现精神沉郁一甩鼻一喷嚏一流鼻液一鼻孔黏液堵 塞一喷嚏一自然痊愈的临床症状和疾病进程。
[0041] 2. 2从表2可以看出：攻毒24h发病率至73. 3%，72h可达100%，93. 3%以上发 病率可持续至192h。
[0042] 表2攻毒模型发病率
[0044] 3 结论
[0045]选用EID50为1X10 6'5/0.1 mL IBV M41病毒，0. 3ml/只侧鼻孔滴鼻感染11日龄 SPF雏鸡，能成功构建鸡气分证模型。
【主权项】
1. 一种鸡气分证模型的构建方法，其特征是，以饲养于SPF鸡隔离器中的海兰褐雏公 鸡或SPF雏鸡为样本；将鸡隔离器温度控制在20-23°C，再采用鸡传染性支气管炎病毒M41 株病毒液，两侧鼻孔滴鼻的方式进行病毒感染；病毒感染后凡出现流鼻液或鼻孔黏液堵塞 的均判为发病；病毒感染后雏鸡100%发病，病程持续6天以上，以后逐渐好转直至自然痊 愈的判定为鸡气分证模型构建成功。2. 如权利要求1所述的一种鸡气分证模型的构建方法，其特征是，所述鸡传染性支气 管炎病毒M41株病毒液的EID50为I X 10 6'5/0. lmL，用量为0. 2~0. 4mL/只。3. 如权利要求2所述的一种鸡气分证模型的构建方法，其特征是，所述鸡传染性支气 管炎病毒M41株病毒液的用量为0. 3mL/只。4. 如权利要求2或3所述的一种鸡气分证模型的构建方法，其特征是，选用7~11日 龄的海兰褐雏公鸡或SPF雏鸡为样本。5. 如权利要求4所述的一种鸡气分证模型的构建方法，其特征是，选用11日龄的海兰 褐雏公鸡或SPF雏鸡为样本。
【专利摘要】本发明公开了一种鸡气分证模型的构建方法。它是以饲养于SPF鸡隔离器中的海兰褐雏公鸡或SPF雏鸡为样本；将SPF鸡隔离器中的温度控制在20-23℃，再采用鸡传染性支气管炎病毒M41株病毒液两侧鼻孔滴鼻的方式进行病毒感染；感染后凡出现流鼻液或鼻孔黏液堵塞的均判为发病；感染后雏鸡100％发病，病程持续6天以上，以后逐渐好转直至自然痊愈的判定为模型构建成功。模型鸡表现出：精神沉郁——甩鼻——喷嚏——流鼻液——鼻孔黏液堵塞——自然痊愈的疾病进程。本发明的模型构建方法简单、易操作，构建的模型临床症状明显、发病迅速、发病率高、病程长，模型稳定、可靠，适合于鸡气分证防治用中药的研究。
【IPC分类】A61K35/76, A61K49/00, A01K31/18
【公开号】CN105031667
【申请号】CN201510481690
【发明人】林树乾, 黄中利, 宋敏训, 赵增成, 傅剑, 李桂明, 冯敏燕
【申请人】山东省农业科学院家禽研究所
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年8月3日