蜂花粉提取物在制备降血压或保肝药物或保健品中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及蜂花粉提取物，本发明制备的蜂花粉提取物具有降血压和保肝功能。 本技术属于生物技术领域。
【背景技术】
[0002] 蜂花粉是蜂蜜采集有花植物的花粉粒，在采集过程中加上蜂蜜自身的腺上分泌 物、唾液和花蜜而形成。蜂花粉是蜂群生长和繁衍的主要营养来源之一，具有很高的营养价 值。蜂花粉包含蛋白质、碳水化合物、黄酮类化合物、微量元素、酶等多种营养成分，因此蜂 花粉素来就有"天然微型营养库"等美誉。关于蜂花粉的生物活性研究表明，蜂花粉具有改 善心血管疾病、增强免疫力、降血糖、抗氧化、抗衰老、抑制前列腺疾病等功效。
[0003] 文献1(中国专利200610052876.6)公开了用酒精提取破壁蜂花粉活性组分， 该活性组分具有降血脂的功能。文献2(中国专利200810134816. 8)公开了提取蜂花 粉蛋白质并用酶解法制备肽，蜂花粉肽具有血管紧张素转移酶抑制。文献3(中国专利 201010295791. 7)公开了从油菜蜂花粉中得到了一种具有抗炎、镇痛、抑菌活性的提取物的 方法。文献4(中国专利201010169477. 4)公开了一种从蜂花粉中提取油脂类化合物的方 法。文献5(中国专利201110364321. 6)公开了一种从蜂花粉中提取辅酶QlO的方法。文 献6(中国专利200410073514. 6)公开了从油菜花粉中制备具有治疗前列腺肿瘤的有效部 位的方法。文献7(中国专利CN200810007853. 2)公开用不同有机溶剂提取油菜蜂花粉的 有效部位，有效部位在预防酒精性肝损伤的新用途。尽管目前关于蜂花粉活性组分提取的 方法已有很多，但是现有方法都是以蜂花粉中某种单一物质为目标产物。虽然提取得到的 组分具有较好的活性，但是却在提取过程中损失了蜂花粉中其他的活性成分，使蜂花粉仅 仅成为某种成分的原料，而无法体现蜂花粉"全能营养库"的特点。未经加工的蜂花粉作为 功能性食品或者药物时使用时要达到理想的功效所需剂量较大。
[0004] 高血压是我国发病率非常高的常见心血管疾病，是引发心、脑、肾和眼血管等各种 并发症并导致中风、促进动脉粥样硬化、冠心病的一个重要危险因子。高血压早期一般没有 不适症状，直至发生临床现象一心脏发病、脑血管破裂，因此有高血压家族史及轻微症状者 的早期保健就至关重要。
[0005] 化学性肝损伤的起始作用部位为质膜，紧接着在细胞色素 P450的诱导下肝毒物 质产生活性氧（ROS)和一系列中间代谢产物，造成生物膜的脂质过氧化，细胞膜完整性遭 到破坏，细胞器功能受损，最后导致肝细胞凋亡或坏死，造成肝功能损伤。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是以蜂花粉为原料制备蜂花粉提取物，该提前物兼具降血压和保肝 的功能，可应用于药物或功能食品中。
[0007] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
[0008] 具体方法：干燥的蜂花粉按照原料：溶剂=lkg:5~50L的比例加入溶剂， 20-70°C提取1~10小时，提取结束后过滤或离心将提取液与固形物分离分别进行处理：
[0009] (1)提取液的处理方法：提取液经真空浓缩，浓缩样品用体积浓度40-70%乙醇溶 解后上大孔树脂柱,先用2~10倍柱体积的去离子水淋洗，然后再用体积浓度40~90%乙 醇洗柱子并收集流分，将含乙醇洗脱剂洗脱的流分真空浓缩得到组分1。
[0010] (2)固形物处理方法：按照原料：溶液=Ikg :2~IOL的比例加入水或者缓冲液混 合，pH调整混合液在范围2~10,再加入原料质量的0. 001~3%的蛋白水解酶，于20~ 60°C酶解1~48小时；酶解结束后将反应体系温度升至80-100°C保持10-60分钟，使酶失 活，然后离心或过滤，收集滤液浓缩干燥得到组分2。
[0011] 将组分1与组分2再次混合，得到蜂花粉提取物。
[0012] 本发明干燥花粉提取所用的溶剂为：水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲 烷、环己烷、正己烷、石油醚中的一种或二种以上的溶剂混合物
[0013] 本发明固形物酶解中所用的蛋白水解酶为：蛋白水解酶为胃蛋白酶、胰蛋白酶、风 味蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶或中性蛋白酶中的一种或二种以上。
[0014] 本发明所述缓冲液为：磷酸缓冲液、TriS-HCI缓冲液、醋酸缓冲液、去离子水中的 一种。
[0015] 含有本发明的提取物的药物、功能食品、食品可制备成任何形式，例如口服剂型： 粉剂、片剂、胶囊剂、软胶囊剂、水性药物、糖浆剂、酊剂、丸剂、散剂、小包、颗粒剂；局部制 剂：乳膏、软膏、乳液。凝胶。半固体膏、贴剂糊膏。喷雾剂。气雾剂等；注射剂：溶液、悬剂、 乳剂。
[0016] 本发明的特点如下：
[0017] 1.蜂花粉作为微型营养库在我国具有悠久的食用历史，本发明将蜂花粉中的黄酮 类化合物的提取与生物活性肽的制备分开进行，既浓缩又保留了两种主要成分同时又通过 酶解的方法增加新的活性功能，提高了蜂花粉的生物利用率。
[0018] 2.通过本发明所制备的蜂花粉提取物同时具有降血压和保肝的作用。
[0019] 3.具有良好的应用前景。通过本发明制备的蜂花粉提取物具有降血压和保肝的功 能，有可能成为药物或保健功能食品，因此具有良好的应用前景。
【具体实施方式】
[0020] 实施例1
[0021] -、蜂花粉提取物制备方法
[0022] 以油菜花粉为原料，按照以下工艺制备蜂花粉提取物：
[0023] 取干燥的蜂花粉1000克，加入体积浓度70%乙醇5L，20°C提取10小时，提取结束 后过滤将提取液与固形物分离分别进行处理：
[0024] (1)提取液的处理方法：提取液经真空浓缩干燥，浓缩样品用20毫升体积浓度 70%乙醇溶解后上大孔树脂柱，先用5倍柱体积的去离子水淋洗，然后再用3倍柱体积体积 浓度70 %乙醇洗柱子并收集流分，将70 %乙醇所洗的组分真空浓缩干燥得到组分1。
[0025] (2)固形物处理方法：固形物按照原料：溶液=1kg: IOL的比例加入水，IM HCI调 整混合液pH为2,再加入原料质量的0. 2%的胃蛋白酶，于40°C酶解48小时；酶解结束后 将反应体系温度升至90°C保持20分钟，使酶失活，然后离心或过滤，收集滤液浓缩干燥得 到组分2。
[0026] 将组分1与组分2再次混合，得到油菜蜂花粉提取物。
[0027] 二、蜂花粉的降血压功能评价：
[0028] (一）降血压功能评价
[0029] 1.实验部分
[0030] 1. 1实验动物
[0031] 自发性高血压大鼠 SHR(上海斯莱克实验动物有限公司），体重200~220g ;正常 血压SD大鼠（大连医科大学SPF动物实验中心），体重200~250g。
[0032] 1. 2测定方法及仪器
[0033] 血压、心率的测定采用间接测压法一尾脉搏法。尾动脉血压测定仪（上海奥尔科 特生物科技有限公司）。
[0034] 1. 3实验方法
[0035] 所有大鼠分笼喂养，每笼4只，自由饮水，自由取食。饲喂一周无异常情况后用于 实验。随机分组，每组8只。高血压大鼠分组为：空白对照组，阳性对照组，蜂花粉提取物 组。降血压药物Captopril作为阳性对照。剂量分别为：Captopril药物2mg/kg，蜂花粉提 取物 600mg/kg。
[0036] 实验大鼠按照分组剂量灌胃给药，每天给药一次，连续给药4周，
[0037] 表1蜂花粉提取物对原发性高血压大鼠血压的影响
[0039] 每周测血压和脉搏一次。
[0040] 1. 4数据处理和结果判定
[0041] 实验组动物血压明显低于对照组，差异具有显著性，且对实验组动物心率和正常 动物的血压及心率无影响，可判定辅助降血压功能动物实验结果阳性。
[0042] 2.实验结果
[0043] 表1为蜂花粉提取物对原发性高血压大鼠血压的影响，可见从第七天开始给药量 为600mg/kg的蜂花粉提取物，SHR大鼠的舒张压和收缩压均明显下降，与空白对照组相比 有显著性差异（P〈〇. 05)，以卡托普利为对照的阳性组也从第七天开始与空白组有显著性差 异。说明蜂花粉提取物对原发性高血压大鼠具有降血压的功能。
[0044] 表1蜂花粉提取物对原发性高血压大鼠血压的影响（续）
[0045]
[0046] #与空白组相比有显著性差异（P〈0. 05)
[0047] (二）蜂花粉护肝功能评价
[0048] 1.实验部分
[0049] I. 1实验材料
[0050] SPF级昆明种成年雄性小鼠（18_22g) 60只购自大连医科大学动物实验中心，合格 证号：SCXX (辽）2013-0003。
[0051] 1.2实验方法
[0052] 1. 2. 1小鼠亚急性酒精性肝损伤模型的建立
[0053] I. 2. I. 1剂量选择与分组
[0054] 昆明小鼠被随机分为五组，分别是正常组、模型组、蜂花粉提取物组：低剂量组 I. 34g/