一种血栓的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种血栓的制备方法。
【背景技术】
[0002] 随着人们生活水平的不断提高，心脑血管病的发病率正在不断提高，而造成心脑 血管病的重要原因是由于血栓的形成，因此攻克血栓是国家的一项重大攻关课题。而血栓 机制的研究、血栓性疾病的治疗、溶栓性药物的研制和开发，都需要有一个可靠的动物模型 的支持，因此，建立动物血栓模型是必要的前提，而建立动物血栓模型时，制备得到凝固效 果好、成型效果好、稳定性好的血栓是前提。
[0003] 目前，制备血栓的方法有如下六种：
[0004] 一、用5支20mL注射器抽取新鲜动脉血100mL，顺导管推注生理盐水150mL加 青霉素80万u，（每支注射器内与1.2mL氨基己酸混匀）；室温下静置30min，待其自 凝后，放入70°C水浴箱内水浴lOmin，然后放入冰箱冷藏。将冷藏的血栓切成大小约为 长条状，弃除血清后装入IOmL注射器。注射器注射乳头用剪刀修剪后，把 乳头内径扩大至3mm左右，经修剪后的注射器注射出的血栓呈圆柱状。此方法制备的血栓 无法有效成型，还需要人工切成长条状，再手工修剪注射器，繁琐耗时。
[0005] 二、动脉采血60~100mL，加入含凝血酶2000U的玻璃平皿中，静置凝固2hr ;用刀 片将血栓纵横切成小块，大小约有10*10*5mm3 (长*宽*厚）；弃血清后装入50mL注射器 中备用。此方法的成型效果也不佳，手工切成的血栓大小不易控制，很难做到切成的血栓块 形状规则一致，且繁琐耗时。
[0006] 三、动物自体静脉采血20mL ;注入3段长7cm，内径约4. 5mm及2段长约5cm，内径 约5. 5cm的无菌塑胶管中；室温静置8小时后，将管内血栓柱冲出，生理盐水冲洗3遍；将上 述3段或5段血栓柱吸入另一根长约25cm，内径约5. 5mm的塑胶导管；将导管置于生理盐 水中备用。此方法制备的血栓柱凝集不完全，成形较差，用生理盐水冲洗过程中，血栓柱容 易被分散，血栓形状不易维持。
[0007] 四、取自体动脉血50mL ;常温下置于试管中2小时；将血栓置于玻璃平皿中，切成 直径为l-2mm大小的栓块；用生理盐水反复冲洗后，放入IOmL生理盐水中备用。此方法的 凝固效果较差；手工切成的血栓大小不易控制，很难做到切成的血栓块形状规则一致；用 生理盐水冲洗过程中，血栓柱容易被分散，血栓形状不易维持。
[0008] 五、无菌条件下动脉插管取血0.5mL，迅速推入细聚乙烯导管中；室温静置 25_30min凝固，推入生理盐水，制成直径约为0. 6-0. 8mm自体血栓；无菌手术刀切成长 3-4mm栓块，生理盐水反复冲洗后备用。此方法的凝固效果较差；手工切成的血栓大小不易 控制，很难做到切成的血栓块形状规则一致；用生理盐水冲洗过程中，血栓柱容易被分散， 血栓形状不易维持，稳定性差。
[0009] 六、自体静脉采血lmL，注入无菌试管中；室温静置20-30min，凝固后，60-70°C水 浴10-15min，再静置冰箱中冷藏；用手术刀将血凝块切成直径为l-2mm，长为4-5mm的柱形 血栓块备用。此方法的成型不好，手工切成的血栓大小不易控制，很难做到切成的血栓块形 状规则一致，且繁琐耗时。
[0010] 因此，需要提供一种新的凝固效果好、成型效果好、稳定性好的血栓制备方法。
【发明内容】
[0011] 本发明的目的在于提供一种新的凝固效果好、成型效果好、稳定性好的血栓的制 备方法。
[0012] 本发明血栓的制备方法，它包括如下步骤：
[0013] (1)取血液，加入凝血酶，凝血酶的量为血液的10~50/3倍U/mL，得混合液；
[0014] (2)将步骤（1)的混合液注入内径为1mm的毛细塑料管中，封口，37°C放置30min， 再置于2~8°C放置12-16小时，即可。
[0015] 本发明还提供了前述方法制备的血栓。
[0016] 本发明还提供了前述血栓在制备动物血栓模型中的用途。
[0017] 本发明还提供了一种肺动脉栓塞模型的制备方法，它包括如下步骤：
[0018] 1)在动物股静脉穿刺，引入5F导管鞘后，插入5F导引导管，在导丝导引下超选入 左肺动脉；
[0019] 2)选择左肺动脉主干，将权利要求2所述血栓经5F导引导管注入，每次注入3mL 血栓，注射三次，造成肺动脉栓塞。
[0020] 步骤1)中，所述穿刺的方法是Seldinger法。
[0021] 所述1)，所述导丝时超硬亲水导丝。
[0022] 与现有方法相比，本发明通过选择特定直径的毛细塑料管，在特定条件下制备血 栓的方法，具备以下优势：
[0023] 1、方便易行，可以形成柱状规则的血栓条块，成型效果好；
[0024] 2、通过37°C放置30min，再置于2~8°C放置12~16h的方式，使得血栓充分凝集 成形，凝固效果好。
[0025] 3、血栓栓块注入动物血管后，不易崩解，能较长时间维持规则的血栓条块，稳定性 好。
[0026] 本发明方法制备的血栓凝固性好、成型佳、稳定性好，用于肺动脉造影时，可视化 程度高，更方便实时观测及评判堵塞面积，应用前景良好。
[0027] 下面通过【具体实施方式】对本发明做进一步详细说明，但是并不是对本发明的限 制，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述 基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
【附图说明】
[0028] 图1血栓形成DSA照影结果比较，A :本发明方法制备血栓肺动脉血栓DSA照影 (犬）；B :文献（陈永利等，"实验性急性血栓性肺栓塞动物模型的建立"，天津医科大学学报 2003第9卷第1期）报道的方法制备血栓肺动脉血栓DSA照影（兔）；
[0029] 图2犬肺动脉照影结果。
【具体实施方式】
[0030] 实验材料和仪器
[0031] 实验材料和仪器：
[0033] 实验例1本发明血栓制备方法
[0034] 1)动物自体静脉采血30-50mL ;
[0035] 2)吸入含500U凝血酶的注射器中；
[0036] 3)用注射器注入无菌毛细塑料管（内径为1mm)中，制备长度5cm，直径Imm的血 栓；
[0037] 4)封 口后，37°C水浴放置 30min ;
[0038] 5)再置于2~8°C过夜（12-16小时）；
[0039] 6)吸入注射器（20mL)备用。
[0040] 实施例2犬肺动脉栓塞模型的建立和评价
[0041] 1、犬肺动脉栓塞模型的建立
[0042] 1)使用丙泊酚经静脉对犬进行全身麻醉；
[0043] 2)麻醉后在犬右（或左）股动脉通过留置针置入压力传感器导管，监测循环动脉 压；
[0044] 3)在犬右（或左）股静脉以Seldinger法穿刺，引入5F导管鞘后，插入5F导引导 管，在超硬亲水导丝导引下超选入左肺动脉。确定5F导引导管到达位置后，接入压力传感 器；
[0045] 4)选择单侧左肺动脉主干，将实施例1制备的血栓经5F导引导管注入，每次注入 3mL大小的血栓，共注射三次，总体积9mL，造成单侧肺动脉栓塞。
[0046] 2、犬肺动脉栓塞模型的评价
[0047] 1)栓塞部位肺动脉造影：注栓后1小时、给药后2小时进行肺动脉造影，评价肺动 脉堵塞面积百分比；
[0048] 2)肺动脉收缩压：注栓后1小时、给药后2小时检测肺动脉收缩压。
[0049] 3、评价结果
[0050] 3· 1血栓形成DSA照影结果比较
[0051] 图1中A显影结果显示，本法发明方法制备的血栓注入犬肺主动脉后，形成的血管 栓塞呈规则的圆柱柱状，且堵塞部分界限清晰；
[0052] 图1中B为文献（_陈永利等，"实验性急性血栓性肺栓塞动物模型的建立"，天津 医科大学学报2003第9卷第1期）报道兔肺动脉注栓后显影结果，右肺上叶和部分中叶有 堵塞出现，堵塞部分血管显影轮廓不清晰，注入的血栓形状不规则；
[0053] 对比可知，本发明法制备的血栓形状更规则，栓块很集中，未弥漫分散，说明本发 明法制备的血栓凝固效果好、成型效果佳，稳定性好。
[0054] 3. 2肺栓塞模型药效评价结果
[0055] 表1.犬肺动脉堵塞面积百分比
[0057] 注：数据以平均值土标准误表示^与模型对照组比较有统计学意义（p〈0. 05)。
[0058] 表2.肺动脉收缩压变化
[0060] 注：数据以平均值土标准误表示；
[0061] #与假手术组比较有统计学意义（p〈0. 05) ^与模型对照组比较有统计学意义 (p〈0. 05)。
[0062] 由图2、表1和表2可以看出：
[0063] 本发明方法制备的自体血栓植入犬肺动脉1小时后，能形成稳定的肺动脉栓塞；
[0064] 犬肺动脉栓塞造模成功后，给予溶栓药物2小时，与模型对照组比较，肺动脉堵塞 面积明显减少；
[0065] 犬肺动脉栓塞造模成功后，肺动脉收缩压明显高于假手术组，给予溶栓药物后2 小时后，肺动脉收缩压恢复至假手术组水平。
[0066] 实验结果说明，本发明方法制备的血栓凝固性好、成型佳、稳定性好，可建立稳定 的肺动脉栓塞动物模型，应用于溶血栓药物的筛选和药效评价，应用前景良好。
【主权项】
1. 一种血栓的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤： (1) 取血液，加入凝血酶，凝血酶的量为血液的10~50/3倍U/mL，得混合液； (2) 将步骤（1)的混合液注入内径为1mm的毛细塑料管中，封口，37°C放置30min，再置 于2~8°C放置12-16小时，即可。2. 权利要求1的方法制备的血栓。3. 权利要求2所述血栓在制备动物栓塞模型中的用途。4. 一种肺动脉栓塞模型的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤： 1) 在动物股静脉穿刺，引入5F导管鞘后，插入5F导引导管，在导丝导引下超选入左肺 动脉； 2) 选择左肺动脉主干，将权利要求2所述血栓经5F导引导管注入，每次注入3mL血栓， 注射三次，造成肺动脉栓塞。5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤1)中，所述穿刺的方法是Seldinger 法。6. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述1)，所述导丝时超硬亲水导丝。
【专利摘要】本发明公开了一种血栓的制备方法，它包括如下步骤：(1)取血液，加入凝血酶，凝血酶的量为血液的10～50/3倍U/mL，得混合液；(2)将步骤(1)的混合液注入内径为1mm的毛细塑料管中，封口，37℃放置30min，再置于2～8℃放置12-16小时，即可。本发明方法制备的血栓凝固性好、成型佳、稳定性好，用于肺动脉造影时，可视化程度高，更方便实时观测及评判堵塞面积，应用前景良好。
【IPC分类】A61D1/00
【公开号】CN105326577
【申请号】CN201510603386
【发明人】钟治晖, 王欣, 张印兵, 叶雪飞
【申请人】四川康城生物科技有限公司
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2015年9月21日