二次灌 胃给予，间隔地。染毒后，观察大鼠的一般状况、中毒症状和死亡情况，观察期限两周。试验 结果:样品对雌雄小鼠的急性经口的最大耐受剂量均大于20.0 g/kg体重。
[0047] 小鼠急性经口毒性试验如下:采用最大耐受剂量法，将实施例语7制得的口服液， W20.0g/kg体重剂量对雌雄小鼠（18-22g)各10只经口灌胃染毒。按20mL/kg体重二次灌胃 给予，间隔地。染毒后，观察小鼠的一般状况、中毒症状和死亡情况，观察期限两周。试验结 果:样品对雌雄小鼠的急性经口的最大耐受剂量均大于20.0 g/kg体重。
[0048] 小鼠骨髓细胞微核试验如下：将实施例语7制得的口服液用于做实验组，另设阴 性对照（蒸馈水）和阳性对照组（环憐酷胺60mg/kg体重），每组10只小鼠（25-30g，雌雄各 半），采用间隔24小时给予样品，按20mL/kg体重，分别对各组动物灌胃。每日一次，连续2天。 末次给样品后化处死动物，取其胸骨骨髓制片，甲醇固定，Giemsa染色。样品骨髓细胞微核 试验结果为阴性。
[0049] 精子崎形试验如下:将实施例语7制得的口服液用于做实验组，另设阴性对照(蒸 馈水)和阳性对照组(丝裂霉素 C2. Omg/kg体重），每组10只雄性小鼠（25-30g)。按20mL/kg体 重，分别对各组动物灌胃。每日一次，连续5天。于首次给样后第35天，取二侧副睾剪碎，取滤 液制片。镜检观察，每鼠计数1000个精子的崎形数。样品精子崎形试验结果阴性。
[0050] Ames试验如下：将实施例1至7制得的口服液用于做实验组，选用组氨酸营养缺陷 型鼠伤寒沙口氏菌了497^498^4100^4102，采用平板渗入法，测试剂量为4041/皿、200山/ 皿、100化1/皿、500化1/皿。直接计数培养基上各菌株的回变菌落数。检测重复一次。样品 Ames试验结果为阴性。
[0051] 30天喂养试验如下：将实施例1至7制得的口服液用于做实验，按lOmL/kg体重经口 灌胃给予，连续30天。另设阴性对照(蒸馈水），给予蒸馈水，自由饮食，连续喂养30天。SD大 鼠100只巧5-80g)，雌雄各半，随机分组，单笼饲养。连续观察30天，每周记录体重和进食量， 并计算食物利用率，试验期末颈静脉取血进行血液学检查，断头取血进行血生化检查，对每 只大鼠进行脏器大体观察，同时取肝、肾、脾、睾丸（卵巢)称重并计算脏体比，并取肝、肾、 脾、胃、肠、睾丸（卵巢)进行病理组织学检查。结果:实验动物生长情况良好，血液学检查，生 化学检查，主要脏体比及组织学检查结果与对照组相比，均无明显差异。
[0052] 上述急性毒性试验、微核试验、精子崎形试验、Ames试验、30天喂养试验结果显示 本产品安全无毒。
[0053] 稳定性试验如下:将实施例1至7制得的口服液各取=批样品按市售包装经37~40 °C溫度和75%相对湿度条件下放置3个月，于0月、1月、2月、3月分别对=批样品进行全项目 检测（包括感官指标、鉴别反应、总灰分、崩解时限、酸价、过氧化值、铅神隶、六六六、滴滴 涕、净含量负偏差、菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌、沙口氏菌、志贺氏菌、金黄色葡球菌、 乙型溶血性），检测结果均符合本产品质量标准(企业标准)的规定。
[0054] 2、增强免疫力
[0055] 本中药组合物口服液人体推荐剂量为每日10ml/60kg体重，将实施例1至7制得的 口服液用于做实验组，经口连续给予样品30天，对照组W蒸馈水灌胃。
[0056] 实验结果表明：与对照组比较，受试样品小鼠脾淋己细胞增殖能力均增强，差异均 有显著性(q检验，P<〇.05);与对照组比较，受试样品小鼠腹腔巨隧细胞吞隧鸡红细胞的吞 隧指数均升高，差异均有显著性(q检验，P<〇.05)。与对照组比较，受试样品小鼠腹腔巨隧 细胞吞隧鸡红细胞的吞隧百分率均升高，差异均有显著性(q检验，P<〇.05)，说明本发明具 有增强免疫力功能。
[0057] (3)抗疲劳
[005引将实施例1至7制得的口服液用于做实验，经口连续给予样品30天，对照组W蒸馈 水灌胃。
[0059] 实验结果表明：与对照组比较，受试样品均能明显延长小鼠负重游泳时间，差异均 有显著性(q检验，P<〇.05);受试物均能明显降低小鼠游泳后0分钟血乳酸含量和血乳酸曲 线下面积，差异均有显著性(q检验，P<〇.05)，说明样品具有抗疲劳作用。
[0060] 3、补肾壮阳作用
[0061] (1)对去势雄性大鼠阴茎勃起功能和生殖器官脏器指数的影响
[0062] 将实施例1至7制得的中药组合物口服液分组进行实验，实验剂量0.2g/kg，相当于 人体推荐量的10倍，离乳1个月的雄性大鼠去势后4天经口连续给予样品30天，对照组W蒸 馈水灌胃，末次给药后化，将电刺激器的刺激电极放置于大鼠阴茎部位，给予表面部电刺 激，电流强度4mA，周期50ms，脉宽1ms，脉冲串.10,记录从刺激开始至阴茎勃起时间（勃起潜 伏期）。再将大鼠立即处死并解剖各组大鼠，立即称取包皮腺，精囊腺的重量，计算脏器指 数。
[0063] 实验结果表明：各实验组阴茎勃起潜伏期与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。 各实验组的包皮腺指数与对照组比较均有显著性差异(P<〇.05)，各实验组的精囊腺指数与 对照组比较有显著性差异(P<〇. 05)。
[0064]
[0065] (2)对雄性大鼠交配能力的影响
[0066] 将实施例1至7制得的中药组合物口服液分组进行实验，实验剂量0.2g/kg，相当于 人体推荐量的10倍，成年雄性大鼠经口连续给予样品30天，末次给药后，将雄性大鼠单只放 入笼中使其适应环境30min，然后放入1只雌鼠，开始记录下列指标：自雌鼠投入至雄鼠第一 次扑捉雌鼠的时间（捕捉潜伏期）；自雌鼠投入至雄鼠第一次射精的时间（射精潜伏期）； SOmin内雄鼠扑捉雌鼠的次数及射精次数;30min内各组发生扑捉和射精动物数的扑捉百分 率和射精百分率。
[0067] 实验结果表明：各实验组的捕捉潜伏期与对照组比较均有显著性差异(P<0.05)， 各实验组的射精潜伏期，捕捉次数，射精次数与对照组比较均有显著性差异(P<〇.05)。
[0068] 对雄性大鼠交配能力的影响1
[0071] 对雄性大鼠交配能力的影响2
[0072]
[0073] (3)对雄性大鼠阴茎勃起功能及生殖器官脏器指数的影响
[0074] 雄性大鼠进行交配实验后，将电刺激器的刺激电极放置于大鼠阴茎部位，给予表 面部电刺激，电流强度4mA，周期50ms，脉宽Ims，脉冲串.10，记录从刺激开始至阴茎勃起时 间（勃起潜伏期），再将雄性大鼠拉颈处死，并解剖各组大鼠，立即称取包皮腺，精囊腺，睾丸 及阴茎的重量，计算脏器指数。
[0075] 实验结果表明：各实验组的勃起潜伏期，包皮腺、精囊腺、睾丸指数及阴茎指数与 对照组比较均有显著性差异(P<〇. 05)。
[0076] 对大鼠阴经勃起潜伏期、包皮腺、精囊腺、睾丸和阴经指数的影响
[0079] 实验结果表明本发明的中药组合物具有显著的壮阳补肾，增强性功能的作用。
[0080] 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在 本发明基础上，可W对之作一些修改或改进，运对本领域技术人员而言是显而易见的。因 此，在不偏离本发明精神的基础上所做的运些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
【主权项】
1. 一种壮阳补肾中药组合物，其特征在于，所述中药组合物主要由以下原料制备而成： 牡蛎提取液、海参提取液、铁皮石斛提取液、木糖醇、微晶纤维素； 所述牡蛎提取液的制备方法为:将鲜活牡蛎清洗干净，去壳取其肉，将牡蛎肉绞碎，按 牡蛎肉重量比加入1~2倍的纯净水，然后按总体积比加2%的蛋白酶，恒温36°C，搅拌反应 40~50min，再加入磷酸溶液调PH至5.0~5.5，继续搅拌10~20min，然后迅速降温至5~8 °C，用离心机分离，转速8000rpm/min，时间15~20min，牡滤饼4°C保存备用，滤液用NaOH 调PH至8~9，按体积重量比加入2 %的硅藻土，充分搅拌5~lOmin，过滤，取滤液，减压浓缩 至含固率15~35%，制得牡蛎提取液； 所述海参提取液的制备方法为:将鲜活海参清洗干净，去除内脏，绞碎，加入乙醇进行 超声辅助逆流提取，提取结束后进行过滤，海参滤饼4°C保存备用，滤液进行减压浓缩至含 固率5~30 %，得到海参提取液； 所述铁皮石斛提取液的制备方法为：将铁皮石斛的根部及茎节洗净自然干燥后烘干， 烘干后的铁皮石斛粉碎成20目以下的颗粒，按1~3:1:1的重量比将铁皮石斛颗粒与牡蛎滤 饼、海参滤饼放入容器中，加入总重量1~2倍的食品级无水乙醇，8~10°C条件下搅拌浸泡6 ~8h，然后进行回流提取4~5h，冷却后过滤，取滤液即得。2. 根据权利要求1所述的一种壮阳补肾中药组合物，其特征在于:各组分按以下重量百 分比组成:牡蛎提取液30~36%、海参提取液30~40%、铁皮石斛提取液20~30%、木糖醇5 ~8%、微晶纤维素3~5%。3. 根据权利要求2所述的一种壮阳补肾中药组合物，其特征在于:各组分按以下重量百 分比组成:牡蛎提取液32%、海参提取液34%、铁皮石斛提取液24%、木糖醇6%、微晶纤维 素4%。4. 根据权利要求1至3任一项所述的一种壮阳补肾中药组合物，其特征在于：按比例将 牡蛎提取液、海参提取液、铁皮石斛提取液混匀后，再加入木糖醇、微晶纤维素充分搅匀，过 0.5u微滤膜，灌装、灭菌、检测合格，即制得口服液。
【专利摘要】本发明涉及中药领域，具体涉及一种主要用于壮阳补肾的中药组合物及其制备方法，该中药组合物主要由以下原料制备而成：牡蛎提取液、海参提取液、铁皮石斛提取液、木糖醇、微晶纤维素。该中药组合物可应用制备成各种剂型，如口服液、片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、散剂、酒剂、膏剂等。本发明的有益效果：在改善性功能方面具有显著的效果，实验结果显示，服用本发明组合物的小鼠性活力显著提高，并且服用本发明组合物的正常小鼠和去势小鼠的血清睾丸酮含量也明显增高，可见，本发明中药组合物能够显著提高性能力。本发明中药组合物为天然纯中药制剂，能够减少刺激肠胃引起的不良反应和副作用，并且起效快，能够制成各种剂型方便使用者服用。
【IPC分类】A61P15/00, A61K36/8984, A61K35/618, A61P13/12
【公开号】CN105535541
【申请号】CN201610014722
【发明人】仇保富
【申请人】广西康寿生物科技有限公司
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年1月11日