一种鹿瓜多肽注射制剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及一种鹿瓜多肽注射制剂。
【背景技术】
[0002] 以鹿骨和甜瓜子为原料的药物制剂，主要是鹿瓜多肽注射制剂，该制剂具有调节 骨代谢、刺激成骨细胞增殖、促进新骨形成的作用，亦可调节钙鳞代谢、增加骨钙沉积、防止 骨质疏松，并具有抗炎、镇痛、抗风湿等作用，已在临床广泛使用。临床应用表明，以鹿骨和 甜瓜子为原料的注射制剂是治疗骨折不愈合、骨质疏松症、风湿、类风湿性关节炎、腕舟状 骨缺血性坏死和软组织损伤等的有效药物，在骨科的应用前景广阔。
[0003] 中国专利CN 02125357. 9公开了以鹿骨和甜瓜子为原料制备注射剂，该专利方法 为：分别对鹿骨和甜瓜子进行提取、酸调pH值、碱调pH值，合并提取液后再超滤制备成注 射制剂；中国专利CN200410013602. 7公开了鹿骨和甜瓜子为原料制备成注射制剂，该专 利的方法为：鹿骨进行提取、酸调pH值、碱调pH值、超滤，甜瓜子提取、超滤，合并提取液 制备成注射剂；中国专利200510108157. 7公开了鹿瓜多肽注射剂的制备方法，该方法为： 鹿骨提取，经过三次超滤，甜瓜子提取、三次超滤，合并提取液，制备成注射剂；中国专利 CN200910167155. 3公开了鹿瓜多肽注射剂的制备方法，该方法为：分别将鹿骨和甜瓜子提 取、酸调PH值、加热后超滤、离心、碱调pH值、离心、调pH值、三步超滤、超滤液制备成注射 剂；中国专利CN201210328858. 1公开了鹿瓜多肽注射剂的制备方法，该方法为：鹿骨提取 后，经过三次超滤，甜瓜子提取后，经过三次超滤，合并提取液制备成注射制剂。上述方法虽 然可以获得鹿瓜多肽注射剂，但都没有充分考虑鹿瓜多肽中无效成分的含量，因此，上述 制备方法有待商榷。
[0004] 鹿瓜多肽注射剂是多组分生化药品，该制剂的活性成分为多肽类成分，将其质量 进一步提高，将会给患者带来巨大的福音。
【发明内容】
[0005] 基于上述原因，申请人通过经过创造性的研究，得到一种新的鹿瓜多肽注射制剂， 该制剂中游离氨基酸以及高分子量物质含量变化较小，通过筛选得到新的工艺方法，该工 艺方法为：该注射制剂是原料为鹿骨和甜瓜子，其中鹿骨提取液制备方法为：取鹿骨，加入 复合酶，采用高温水提取，酸调pH值，加热，20-30°C静置，浓缩后20-30°C静置，碱调pH值， 浓缩后20-30°C静置，酸调pH值，梯度超滤，低温保存，获得鹿骨提取液；其中甜瓜子提取液 制备方法为：取甜瓜子采用高温水提取，酸调PH值，20-30°C静置，浓缩后离心、超滤、碱调 PH值，梯度温度冷冻保存，解冻后浓缩，离心，离心后酸调pH值，梯度超滤，低温保存，获得 甜瓜子提取液；将鹿骨提取液和甜瓜子提取液混合后，超滤，制备成注射制剂。
[0006] 本发明所述的鹿骨提取液的方法优势如下：采用复合酶处理鹿骨原料，提高得率 的基础上，降低提取次数；酸调一定pH值后，通过加热使鹿骨中蛋白质分解成多肽较完全 (提高得率）；酸调pH之后，20-30°C静置，条件温和，避免剧烈条件使无效成分快速沉淀而 裹挟多肽类成分，浓缩后再静置，可以进一步去除无效成分；碱调pH值后，20-30°C静置，条 件温和，避免剧烈条件使无效成分快速沉淀而裹挟多肽类成分；盐酸调至一定PH值后，通 过10万、1万、8千梯度超滤后，在保证多肽类成分的基础上，最大限度的去除高分子量物 质。上述方法是将一定的PH数值与不同方法结合，从而达到去除高分量物质以及游离氨基 酸的目的，并且进一步提尚得率。
[0007] 本发明所述的甜瓜子提取液的方法优势如下：酸调一定pH值，温度25-35Γ离心， 离心液超滤，可以很好的得到目标产物；碱调PH值后，梯度低温冷冻，浓缩后在离心，可以 很好的去除游离氨基酸以及高分子量物质；离心液调至一定pH值，通过10万、1万、8千梯 度超滤后，在保证多肽类成分的基础上，最大限度的去除高分子量物质。上述方法是将一定 PH数值与不同方法有机结合，从而达到去除高分量物质以及游离氨基酸的目的，并且进一 步提尚得率。
[0008] 本发明通过下述技术方案实现的。
[0009] -种鹿骨和甜瓜子为原料的注射制剂，注射制剂包括注射液和粉针剂，该注射 制剂的制备方法为：鹿骨经过提取得到鹿骨提取液，甜瓜子经过提取得到甜瓜子提取液； 其中鹿骨提取液制备方法为：取鹿骨，加入复合酶，采用高温水提取，酸调PH值，加热， 20-30 °C静置，浓缩后20-30 °C静置，碱调pH值，浓缩后20-30 °C静置，酸调pH值，梯度超滤， 低温保存，获得鹿骨提取液；其中甜瓜子提取液制备方法为：取甜瓜子采用高温水提取，酸 调pH值，20-30°C静置，浓缩后离心、超滤、碱调pH值，梯度温度冷冻保存，解冻后浓缩，离 心，离心后酸调pH值，梯度超滤，低温保存，获得甜瓜子提取液；将鹿骨提取液和甜瓜子提 取液混合后，超滤，制备成注射制剂。
[0010] 其中鹿骨提取液的制备方法包括：取鹿骨，去除骨髓，称重，加2-3倍鹿骨投料量 的水，加入鹿骨重量1.5% -2. 5%的复合酶，保存1-2小时，121-130°C提取，保持60分钟， 提取液在除油罐中，静置，撇去上浮油脂，得到鹿骨初提液，鹿骨初提液加1-3摩尔/升盐酸 溶液，调pH值至3. 0-3. 5,加热至80-KKTC，保持25-35分钟，20-30°C静置12小时-18小 时，取上清液，弃去底部沉淀，浓缩至鹿骨投料量的〇. 2-0. 4倍，20-30°C静置12-18小时，取 上清液，弃去底部沉淀，用30 μ m预处理柱过滤，滤液用4-6摩尔/升氢氧化钠溶液调pH值 至8. 5-8. 9,浓缩至鹿骨投料量0. 2-0. 4倍，20-30°C静置12-18小时，取上清液，弃去底部 沉淀，上清液加入1-3摩尔/升盐酸溶液调pH值至6. 0-6. 4后，依次用截取分子量十万超 滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组，进行超滤，保留透过液，得到 鹿骨提取液，转入冷库零下15至零下20°C保存。
[0011] 其中复合酶为木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的重量比为 0. 25-0.40:Io
[0012] 其中甜瓜子提取液制备方法包括：取甜瓜子每次加1-3倍量的水，经121-130°C提 取三次，每次60分钟，合并提取液，得到甜瓜子初提液；甜瓜子初提液加入1-3摩尔/升盐 酸溶液，调pH值至3. 0-3. 5, 20-30°C静置12-18小时，浓缩至甜瓜子投料量的2-4倍，降温 至25-35Γ，用离心机离心，离心液再用截取分子量十万超滤系统超滤，保留透过液，得甜瓜 子酸处理液；甜瓜子酸处理液加4-6摩尔/升氢氧化钠溶液，调pH值至8. 5-8. 9,得甜瓜子 碱处理液，碱处理液先在_25°C至_30°C冷库冻12-18小时，再转入-15°C至_20°C冷库冷 冻保存72-96小时；将甜瓜子碱处理液解冻后，浓缩至投料量的2-4倍，降温至25-35Γ，离 心，离心液中加入1-3摩尔/升盐酸溶液，调pH值至6. 0-6. 4,得甜瓜子中和液；甜瓜子中和 液依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子量一万超滤系统、截取分子量八千超滤机组， 进行超滤，保留透过液，得甜瓜子提取液，转入冷库零下15至零下20°C保存。
[0013] 其中注射液的制备方法为：取鹿骨提取液和甜瓜子提取液解冻后，按照多肽含量 重量比1-3 :0. 5-1混合混合制得鹿瓜多肽提取液，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量 8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0. 22 μ m滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3-6mg/ ml，灌装，得到注射液。
[0014] 其中粉针剂的制备方法为：按照多肽含量重量比1-3 :0. 5-1混合鹿骨提取液和 甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留 透过液，透过液经0. 22 μ m滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3-6mg/ml，灌装，冷冻干燥，得到冻 干粉针剂。
[0015] 本发明所述鹿骨为：为经检疫合格的东北地区成年（年龄2~4年）健康的鹿骨。 本发明所述甜瓜子为：为萌芦科植物甜瓜Cucumis melo L.的干燥成熟种子。
[0016] 本发明所述的木瓜蛋白酶购自上海士锋生物科技有限公司；本发明所述胰蛋白酶 购自上海甄准生物科技有限公司。本发明下述试验是在多次创造性试验基础上，针对本发 明保护的技术方案进行的结论性试验。
[0017] 一、筛选试验
[0018] 试验1组：取鹿骨，去除骨髓，称重，加2. 5倍鹿骨投料量的水，加入鹿骨重量 2. 0 %的木瓜蛋白酶，保存1. 5小时，125°C提取，保持60分钟，提取液在除油罐中，静置，撇 去上浮油脂，得到鹿骨初提液，鹿骨初提液加2摩尔/升盐酸溶液，调pH值至2. 5, (TC静置 16小时，取上清液，弃去底部沉淀，浓缩至鹿骨投料量的0. 3倍，(TC静置16小时，取上清液， 弃去底部沉淀，用30 μ m预处理柱过滤，滤液用5摩尔/升氢氧化钠溶液调pH值至9. 5,浓 缩至鹿骨投料量0. 4倍，(TC静置16小时，取上清液，弃去底部沉淀，上清液加入2摩尔/升 盐酸溶液调PH值至6. 5后，依次用截取分子量十万超滤系统、截取分子