具有提高的治疗指数的两性霉素b衍生物的制作方法

具有提高的治疗指数的两性霉素b衍生物的制作方法
【专利摘要】提供了两性霉素B(AmB)的某些衍生物，其特征在于降低的毒性和保留的抗真菌活性。某些衍生物是AmB的C16脲衍生物。某些衍生物是AmB的C3、C5、C8、C9、C11、C13或C15脱氧衍生物。某些衍生物包括AmB的海藻糖胺附加基团的C3’或C4’修饰。还提供了制备本发明的AmB衍生物的方法，包含本发明的AmB衍生物的药物组合物，和本发明的AmB衍生物的使用方法。
【专利说明】具有提高的治疗指数的两性霉素 B衍生物
[0001] 相关申请 本申请要求2013年10月7日提交的美国临时专利申请号61/887,729和2014年9月4日提 交的美国临时专利申请号62/045，956的权益。
【背景技术】
[0002] 超过半个世纪以来，两性霉素 B (AmB)已经充当治疗全身性真菌感染的黄金标准。 AmB具有广谱活性，是杀真菌的，并且甚至对于抗多种其它药剂的真菌菌株也是有效的[1]。 令人惊奇的是，临床上显著的微生物抗性已经保持特别罕见 [2]，尽管对下一代抗真菌药的 抗性已经在它们的临床引入后仅几年内就出现[2e，3]。不幸的是，AmB也是高毒性的 [4]。因 而，全身性真菌感染的有效治疗时常受到阻碍，不是受阻于效力的缺乏，而是受阻于限制剂 量的副作用 [5]。使用脂质体递送系统已经取得了一些进展[6]，但是这些治疗受阻于昂贵[7] 且仍有显著的毒性[8]。因而，低毒性的、但是同样有效的AmB衍生物仍然对人健康具有重大 影响。

【发明内容】

[0003] 本发明的一个方面是AmBMU或其药学上可接受的盐
[0004] 本发明的一个方面是AmBAU或其药学上可接受的盐
[0005] 本发明的一个方面是AmB⑶或其药学上可接受的盐
[0006] 本发明的一个方面是C3de0AmB或其药学上可接受的盐
[0007] 本发明的一个方面是C9de0AmB或其药学上可接受的盐
[0008] 本发明的一个方面是C5de0AmB或其药学上可接受的盐
[0009] 本发明的一个方面是C8de0AmB或其药学上可接受的盐
[0010] 本发明的一个方面是Cl IdeOAmB或其药学上可接受的盐
[0011] 本发明的一个方面是C13de0AmB或其药学上可接受的盐
[0012] 本发明的一个方面是C15de0AmB或其药学上可接受的盐
[0013] 本发明的一个方面是C3'deNH2AmB (C3'去氨基AmB;C3'deAAmB)或其药学上可接 受的盐
[0014]本发明的一个方面是C4'deOAmB或其药学上可接受的盐
[0015]本发明的一个方面是化合物X
[0016]本发明的一个方面是化合物1
[0017] 本发明的一个方面是如在说明书和附图中公开的制备化合物1的方法。
[0018] 本发明的一个方面是根据方案2中所示的六种转化中的任一种制备两性霉素 B的 C16脲衍生物的方法：
且每个R独立地选自氢、卤素、直链或支链烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、芳基、杂 芳基、芳烷基、杂芳烷基、羟基、巯基、羧基、氨基、酰氨基、叠氮基、硝基、氰基、氨基烷基和烷 氧基。
[0019] 本发明的一个方面是如在说明书和附图中公开的制备AmBMU的方法。
[0020] 本发明的一个方面是如在说明书和附图中公开的制备AmBAU的方法。
[0021 ]本发明的一个方面是如在说明书和附图中公开的制备AmBCU的方法。
[0022]本发明的一个方面是如在说明书和附图中公开的制备C3de0AmB的方法。
[0023]本发明的一个方面是如在说明书和附图中公开的制备C9de0AmB的方法。
[0024]本发明的一个方面是如在说明书和附图中公开的制备C5de0AmB的方法。
[0025]本发明的一个方面是如在说明书和附图中公开的制备C8de0AmB的方法。
[0026]本发明的一个方面是如在说明书和附图中公开的制备Cl IdeOAmB的方法。
[0027]本发明的一个方面是如在说明书和附图中公开的制备C13de0AmB的方法。
[0028]本发明的一个方面是如在说明书和附图中公开的制备C15de0AmB的方法。
[0029]本发明的一个方面是如在说明书和附图中公开的制备C3 ' deNH2AmB的方法。
[0030] 本发明的一个方面是如在说明书和附图中公开的制备C4 ' deOAmB的方法。
[0031] 本发明的一个方面是一种抑制真菌的生长的方法，所述方法包括使真菌与有效量 的化合物接触，所述化合物选自 AmBMU、AmBAU、AmBCU、C3de0AmB、C5de0AmB、C8de0AmB、 C9de0AmB、Cl 1 deOAmB、Cl 3de0AmB、C15de0AmB、C3 ' deNH2AmB 和 C4 ' deOAmB、及其药学上可接 受的盐。
[0032] 本发明的一个方面是一种治疗对象中的真菌感染的方法，所述方法包括给有此需 要的对象施用治疗有效量的化合物，所述化合物选自AmBMU、AmBAU、AmBCU、C3de0AmB、 C5de0AmB、C8de0AmB、C9de0AmB、Cl 1deOAmB、C13de0AmB、C15de0AmB、C3 ' deNH2AmB和C4 ' deOAmB、及其药学上可接受的盐。
[0033] 在一个实施方案中，口服地或静脉内地施用所述化合物。
[0034] 在一个实施方案中，口服地施用所述化合物。
[0035] 在一个实施方案中，静脉内地施用所述化合物。
[0036] 本发明的一个方面是一种药物组合物，其包含选自AmBMU、AmBAU、AmBCU、 C3de0AmB、C5de0AmB、C8de0AmB、C9de0AmB、ClIdeOAmB、Cl3de0AmB、Cl5de0AmB、C3 ' deMfcAmB 和C4 ' deOAmB、及其药学上可接受的盐的化合物和药学上可接受的载体。
[0037] 在一个实施方案中，所述药物组合物是口服或静脉内剂型。
[0038] 在一个实施方案中，所述药物组合物是口服剂型。
[0039] 在一个实施方案中，所述药物组合物是静脉内剂型。
【附图说明】
[0040] 图1描绘了 AmB及其某些衍生物的结构式。
[0041] 图2描绘了许多通过使脲1与宽范围的杂原子亲核体中的任一种反应来制备C16氨 基AmB衍生物的合成方案。
[0042]图3A描绘了基于使用四个结构单元BB1、BB2、BB3和BB4的迭代交叉偶联策略的AmB 的逆合成分析。
[0043]图3B描绘了BB1向两个较小片段的逆合成分析的一个方案。
[0044]图4A描绘了 BB1的立体选择性硼氢化以安装Cl 1立构中心的一个方案。
[0045]图4B描绘了 C9-脱氧BB1的硼氢化的一个方案，其产生在C11处的非对映异构体的 混合物。
[0046] 图5描绘了使用降解策略的C5de0Amb的一种通用合成。
[0047] 图6描绘了通过迭代交叉偶联实现的AmB的全合成。
[0048] 图7A描绘了产生四个结构单元BB1、BB2、BB3和BB4的C5de0AmB的逆合成分析。
[0049]图7B描绘了 C5de0BBl向两个较小片段的逆合成分析的一个方案。
[0050] 图8A描绘了产生四个结构单元BB1、BB2、BB3和BB4的C8de0AmB的逆合成分析。
[00511图8B描绘了基于47的还原的C8de0BBl的逆合成分析的一个方案。
[0052] 图9A描绘了产生四个结构单元BB1、BB2、BB3和BB4的C9de0AmB的逆合成分析。
[0053]图9B描绘了 C9de0BBl向两个较小片段的逆合成分析的一个方案。
[0054] 图10A描绘了产生四个结构单元BB1、BB2、BB3和BB4的ClldeOAmB的逆合成分析。
[0055] 图10B描绘了 ClldeOBBl向两个较小片段的逆合成分析的一个方案。
[0056]图11描绘了合成C13de0Amb的降解策略。
[0057]图12描绘了用于合成C15de0AmB的基于迭代交叉偶联的策略。
[0058] 图13描绘了用于合成C15de0AmB的选择性酰化策略。
[0059] 图14描绘了使用混合糖苷化策略合成C3'-去氨基AmB (C3'deAAmB)的一个方案。
[0060] 图15描绘了通过混合糖基化策略合成C4 ' deOAmB的一个方案。
[00611图16描绘了方案3,朝向C3-脱氧AmB (C3de0Amb)的合成努力的一个方案。
[0062]图17描绘了方案4,用于合成BB1的左一半和将BB1与BB2有效偶联的一个方案。 [0063]图18描绘了方案5,用于合成含有适当氧化态和在每个碳处的立体化学的C9-脱氧 AmB的一个方案。
[0064]图19描绘了根据实施例1的方案6。
[0065]图20描绘了根据实施例2的方案7。
[0066]图21描绘了根据实施例2的方案8。
[0067]图22描绘了根据实施例2的方案9。
[0068]图23描绘了根据实施例2的方案10。
[0069]图24描绘了根据实施例2的方案11。
[0070]图25描绘了根据实施例2的方案12。
[0071]图26描绘了根据实施例3的方案14。
[0072]图27描绘了根据实施例4的方案15。
[0073]图28描绘了根据实施例4的方案16。
[0074]图29描绘了根据实施例5的方案17。
[0075]图30描绘了根据实施例5的方案18。
[0076]图31描绘了根据实施例6的方案20。
[0077]图32描绘了根据实施例7的方案21。
[0078]图33描绘了根据实施例8的方案22。
[0079]图34描绘了根据实施例8的方案23。
[0080]图35描绘了根据实施例8的方案24。
[0081 ]图36描绘了根据实施例9的方案25。
[0082]图37描绘了根据实施例10的方案26。
[0083]图38描绘了根据实施例11的方案27。
[0084]图39的一组三个图描绘了中性白细胞减少症小鼠中的肾真菌负荷（菌落形成单 位，cfu)，所述小鼠静脉内地接种白假丝酵母菌(C. albicans)，然后在2小时以后用媒介 物对照、AmB、AmBMU或AmBAU的单次腹膜内给药进行治疗。图39A，1 mg/kg AmB、AmBMU或 AmBAU。图39B，4 mg/kg AmB、AmBMU或AmBAU。图39C，16 mg/kg AmB、AmBMU或AmBAU。
[0085]图40的图描绘了以指示的剂量单次静脉内施用AmB、AmBMU或AmBAU的健康小鼠中 的致死率。
【具体实施方式】
[0086] 关于AmB对酵母和人细胞有毒的机理（一种或多种）的理解的缺乏，迄今已经阻碍 了临床上成功的衍生物的理性开发。长期接受的AmB的作用机理已经是在细胞的膜内的离 子通道形成，其导致电化学梯度破坏并最终导致细胞死亡 [2d，9]。该模型提示，低毒性衍生 物的开发要求相对于人细胞而言在酵母中的选择性离子通道形成 [1()]。与该长期存在的模 型相反，我们的小组最近发现，AmB的主要作用机理不是离子通道形成，而是简单的麦角固 醇结合[n^Gray, KC等人，Proc Natl Acad Sci USA 109:2234 (2012)。酵母和人细胞分 别具有不同的留醇:麦角固醇和胆固醇。因此，该新模型提示通向提高的治疗指数的更简单 的且更可行的路标；即，低毒性AmB衍生物应当保留有效的麦角固醇结合能力，但是缺乏结 合胆固醇的能力。最近，我们的小组报道了 C2'羟基从海藻糖胺糖的除去会产生一种衍生物 C2'de0AmB (图1)，其令人惊讶地保留麦角固醇结合能力，但是没有显示与胆固醇的结合。 Wilcock，BC等人，J Am Chem Soc 135:8488 (2013)。与该优先甾醇结合假设相一致，体 外研究证实，C2 ' deOAmB对酵母是有毒的，但是对人细胞是无毒的。
[0087]为了解释为什么C2'醇的除去导致胆固醇结合能力的丧失、同时维持有效的麦角 固醇结合，我们假定AmB结构以能够结合两种留醇的基态构象存在。C2'醇的除去可能导致 AmB结构的构象变化，其保留麦角固醇结合能力，但是不能结合胆固醇。一种通用分子能够 结合共同结合位点中的两种不同配体。在结合口袋远侧的位点处的修饰会改变结合位点构 象。该变构修饰的原理造成一种配体超过其它配体的优先结合。据我们所知，以前没有在小 分子-小分子相互作用中观察到这样的配体选择性的变构效应。鼓舞人心的是，已经在结合 共同结合位点中的多种配体的蛋白中观察到配体选择性的变构修饰 [13]。我们因而假定， C2'醇的除去会变构地修饰甾醇结合口袋，从而造成胆固醇结合能力的下降。
[0088]令人感兴趣的是，我们在以前得到的N-碘酰基AmB的X-射线晶体结构中注意到将 C2 '醇与C13半缩酮连接的显著的水桥连氢键[14]。我们认识到，如果这样的水桥连氢键有助 于AmB的基态构象的刚性，那么C2'醇的除去会消除该相互作用并由此可能实现对胆固醇和 麦角固醇具有改变的亲和力的替代性基态构象异构体的采用。受晶体结构的可能推理出我 们用C2'de0AmB得到的观察结果的这种能力启发，我们假定该晶体结构可能代表能够结合 麦角固醇和胆固醇的AmB的基态构象。按照该逻辑，我们提出了在晶体结构中观察到的任意 其它刚性特征的破坏或除去可能类似地允许获得替代性基态构象并由此改变AmB留醇结合 特性。受该逻辑指引，X-射线晶体结构的小心检查揭示了三个另外的具有使AmB基态稳定化 的潜力的分子内刚性特征：1)在C41羧化物(carboxy 1 at e )和C3 '铵之间的盐桥，2)在C1羰基 0、C3和C5醇之间的1，3,5氢键合网络，和3)在C9、C11和C13醇之间的1，3,5氢键合网络。我们 因而开始系统地研究扰乱这些分子内稳定特征中的每一个的后果，以试验变构修饰模型作 为合理地获得具有提高的治疗指数的AmB衍生物的新途径的有效性。
[0089]新变构位点#1: C41-C3'羧化物 盐桥相互作用是提出的刚性特征中的能量上最强者。因而，靶向附加至C16碳的基团的 系统修饰作为第一系列衍生物，以进一步探究该变构修饰模型。已经报告了多种修饰C41羧 化物的AmB衍生物，尤其包括酯类和酰胺类[1()~lfc，15]。但是，所有以前的AmB衍生物维持附 加至C16碳的碳原子。我们假定将杂原子附加至C16碳会对盐桥相互作用具有巨大影响。因 此，我们寻求了一种有效的、化学选择性的合成策略来获得这样的衍生物。使这样的目标复 杂化的是，AmB具有复杂的且敏感的官能团的稠密阵列，从而使得难以直接合成衍生物。
[0090] 根据本发明，我们发现，Fmoc保护、甲基缩酮形成和Curtius重排（由二苯基磷酰叠 氮化物促进)的短的三步顺序会提供中间体异氰酸酯，其被分子内地捕获以产生噁唑烷酮1 (方案 1) [16]。
[0091] 方案1:C16 AmB衍生物的合成
该便捷的顺序快速地以化学选择性的方式从AmB产生克量级的通用中间体1。用多种胺 亲核体截断1会有效地打开噁唑烷酮，同时伴随地切割Fmoc保护基。例如，使1暴露于乙二 胺，随后在酸性水中进行甲基缩酮水解，以42%收率产生氨基乙基脲(AmBAU) 2[17]。类似地， 利用甲基胺，以36%收率从1得到甲基脲(AmBMU) 3。使1暴露于β-丙氨酸烯丙酯，随后用Pd (PPh3)4和硫代水杨酸除去烯丙基，产生乙基羧化物脲(AmBCU) 4。该通用合成策略允许有效 地获得多种AmB脲衍生物，且由于它的合成效率能够产生大量脲衍生物。
[0092] 由于对该新颖的AmB化学型的有效获得，在体外抗真菌和人细胞毒性筛查中将脲 2-4与AmB和一系列以前报道的AmB衍生物进行对比。用针对酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae)的肉汤微量稀释测定，测量酵母毒性(MIC)。通过确定造成人红细胞的90%溶血 所需的化合物的量(EH 9Q)，研究人细胞毒性。这些结果总结在表1中。两性霉素 B在0.5 μΜ时 抑制酿酒酵母生长，而90%红血细胞裂解发生在仅10.4 μΜ。海藻糖胺(AmdeB)的除去在酵母 和人细胞测定中完全消除了杀死细胞的活性[15~ 18]。甲基酯化(AmBME)在0.25 μΜ时保持对 酿酒酵母的抗真菌活性，同时将溶血浓度降低至用AmB观察的值的1/3。与AmBME类似，C41甲 基AmB表现出0.5 μΜ的MIC，同时在22.0 μΜ时造成溶血[15e' 18]。如以前观察到的，简单的酰 胺化以形成氨基酰胺AmB衍生物AmBAA或甲基酰胺AmBMA会使对酵母的效能分别增加至0.03 μΜ和0.25 μΜ。溶血活性保持类似于AmBME和C41MeAmB。以前证实了双氨基烷基化的酰胺衍 生物AmBNR2会适度地提高治疗指数[19]。与先例相一致，AmBNR2显示出与AmB相比增加的抗真 菌活性，同时要求升高的浓度以在48.5 μΜ时才能造成溶血。
[0093] 表l:AmB衍生物的体外生物活性
[0094]脲衍生物2-4在0.125 μΜ至3 μΜ范围内维持对酿酒酵母的有效抗真菌活性。令人 惊奇的是，2-4对红血细胞具有急剧下降的毒性。AmBMU和AmBAU甚至在500 μΜ时（比用AmB观 察到的值大45倍)都没有达到EHiAmB⑶需要324 μΜ(ΑπιΒ所需值的超过30倍)才能造成红血 细胞的90%溶血。受该初步治疗指数筛查的鼓舞，针对临床上有关的真菌细胞系白假丝酵母 菌(Candida albicans)进一步试验了脲系列。白假丝酵母菌是最常见的人真菌感染。AmB在 0.25 μΜ时抑制白假丝酵母菌的酵母生长。类似于用酿酒酵母观察到的趋势，脲衍生物3-5 的效能随着阳离子特性的量的增加而增加。AmBAU、AmBMU和AmBCU分别需要0.25、0.5和1 μΜ (表 2)。
[0095]表2:AmB脲衍生物对白假丝酵母菌的体外抗真菌活性
[0096]按照变构修饰模型，假定脲2-4维持有效的麦角固醇结合能力，但是已经丧失结合 胆固醇的能力。为了试验该假设，目前正在进行固态NMR测定以确定AmBMU(作为新颖的脲类 别的代表)与麦角固醇和胆固醇的结合常数。
[0097]上述策略可以用于获得多种具有附加至C16位置的胺的AmB衍生物。用多种亲核体 (例如，胺类、醇类和酚类)打开噁唑烷酮1，可以有效地获得宽范围的脲或氨基甲酸酯衍生 物。在方案2 (图2)中概述了可能的可获得的衍生物的一个小子集。噁唑烷酮1可以用伯胺 截断（intercept)以产生伯脲，用仲胺截断以产生仲脲，和用具有α分支的伯胺截断以产生 具有在α位置引入的立体化学的脲。另外，噁唑烷酮1可以用苯胺类打开以产生芳基脲类，用 酚类打开以产生氨基甲酸芳基酯类，或用醇类打开以产生氨基甲酸烷基酯类。
[0098]胺的例子包括、但不限于，1-(1-萘基）乙胺；1-(2-萘基）乙胺；1-(4-溴苯基）乙胺； 1，1-二苯基-2-氨基丙烷；1，2，2-三苯基乙胺；1，2，3，4-四氢-1-萘基胺；1，2-双(2-羟基苯 基）乙二胺；1 _氨基_2_节氧基环戊烧；1-氨基讳满；1-苄基-2，2-二苯基乙胺；1-环丙基乙 胺；1 _苯基丁胺;2_( 3-氯-2，2-二甲基-丙酰基氨基)-3-甲基丁醇;2_(二苄基氨基)丙醛;2， 2-二甲基-5-甲基氨基-4-苯基-1，3-二氧杂环己烷；2-氨基-1-氟-4-甲基-1，1-二苯基戊 烧;2-氨基-3，3-二甲基-1，1-二苯基丁烧;2-氨基_3_甲基-1，1-二苯基丁烧;2-氨基_3_甲 基丁烧;2-氨基-4-甲基-1，1-二苯基戊烧;2-氨基庚烧;2-氨基己烧;2-氨基壬烧;2-氨基辛 烷;2-氯-6-氟苄胺;2-甲氧基-α-甲基苄胺;2-甲基-1-丁胺;2-甲基丁胺;3,3_二甲基-2-丁 胺;3,4_二甲氧基-α-甲基苄胺;3-氨基-2-(羟基甲基)丙酸;3-溴-α-甲基苄胺;3-氯-α-甲 基苄胺;4-氯-α-甲基苄胺;4-环己烯-1，2-二胺;4-氟-α-甲基苄胺;4-甲氧基-α-甲基苄胺； 氨基 _5，6，7，8-四氢-2-萘酸;双[1-苯基乙基]胺;冰片基胺;顺式-2-氨基环戊醇盐酸盐； 顺式-桃金娘基胺(cis-Myrtanylamine);顺式-N-Boc-2-氨基环戊醇；异松薇基胺;L-醛赖 氨酸缩乙二醇;3-氨基丁酸甲酯对甲苯磺酸盐;N，g-二甲基_1，1~联萘二胺;N，N-二甲基-1 _( 1_萘基）乙胺;N，N_二甲基-1-苯基乙胺;Ν，α-二甲基节胺;N-稀丙基-α-甲基节胺;N-节 基-α-甲基苄胺；仲丁胺;反式-2-(氨基甲基)环己醇;反式-2-氨基-1，2-二氢-1-萘酚盐酸 盐;反式 _2_节氧基环己胺;α, 4_二甲基节胺;α-乙基节胺;α-甲基节胺;和β-甲基苯乙胺。 [0099] 新变构位点#2:C1羰基0、C3和C5醇氢键合网络 在已经引人注目地开发了第二组支持变构修饰模型的衍生物作为开发低毒性AmB衍生 物的引导后，靶向了多元醇氢键合框架。理想地，C3或C11醇的简单除去会完全消除观察到 的延伸的氢键合网络。任一种脱氧衍生物的化学选择性的降解合成是一种挑战性的合成任 务，因为化学选择性地靶向存在于AmB框架上的9个仲醇之一不是一件简单的事。一种反应 副产物提示，由于它相对于Cl羰基的m立置，C3醇可能被化学选择性地靶向。受该初步结果 的鼓舞，进行了 C3脱氧AmB的合成。
[0100]从AmB快速地产生了一种合适的完全保护的中间体(方案3,图16)。该顺序包括胺 的Alloc保护、C3/C5和C9/C11P-甲氧基苯基缩醛形成、剩余的醇的TES甲硅烷基化、和最后 C16羧化物的TMSE形成以形成完全保护的中间体5。在低温使5暴露于NaHMDS会顺利地消除 C3醇，从而产生α-β不饱和的内酯。该中间体的Stryker还原会有效地降低不饱和度从而产 生6,仅剩下去保护顺序以产生CSdeOAmBA向HF的暴露会干净地除去TES基团，随后是TBAF 保护的TMSE除去。用HC1在酸性条件下伴随地实现甲基缩酮和PMP缩酮水解。目前正在进行 努力以实现7的最终Alloc去保护和合成C3de0AmB。
[0101] 新变构位点#3: C9、Cl 1、Cl 3氢键合网络 尽管可以使用天然产物降解获得多种AmB衍生物，但是许多衍生物从该平台不可容易 地获得。一种有效的且灵活的全合成会补充降解合成作为用于获得AmB衍生物的平台[2()]。 例如，全合成是能够产生C9或C11脱氧AmB以探究变构修饰的最终提议位点的策略。在心中 记住该目标，开发了一种依赖于有效的且灵活的迭代Suzuki-Miyaura交叉偶联（ICC)平台 的全合成策略 [21]。如在图3A中所示，将AmB逆合成地分成四个结构单元(BB卜4)。仅仅以迭 代方式使用Suzuki-Miyaura交叉偶联，我们的目标是在结构单元1和2之间、2和3之间、以及 3和4之间形成键。随后的大环内酯化和整体去保护将由此完成全合成。使用该策略，通过简 单地用C11脱氧BB1取代BB1，保留合成的其它部分不变，可以实现C11脱氧AmB的合成。
[0102] 为了实现该挑战性的合成任务，BB1的合成优选地将是有效的、可缩放的，且能够 长期贮存。如在图3B中所示，我们计划通过连接片段10和11来产生受保护的BB1 (9) dBBN-硼烷对9的硼氢化使它准备好与BB2进行Suzuki偶联。对该全合成努力已经做出两个关键性 贡献。首先，设计了得到关键片段10的可缩放途径。然后，在BB1的合成结束后，研究了在模 型系统中BB1与BB2的交叉偶联。
[0103] 10的最初合成的三个方面导致了改善[22]。现有的途径以3%总收率进行，要求大规 模使用有毒试剂，并且通过不适合长期贮存的中间体来进行。开发了 10的第二代合成(方案 4，图17)来解决这些问题。在有钛/BIN0L复合物存在下Chan氏二烯和肉桂醛的化合实现了 对映选择性的延长的轻醛反应 [23]。然后，同步还原（syn reduction)、缩酮化和臭氧解的顺 序产生期望的醛10,从12开始具有40%的总收率。该合成消除了多个步骤，同时避免了不希 望的有毒化学物质。10的苯乙烯前体被证实是高度结晶性的。该性质被证实是有利的，因为 它可以在没有分解的情况下储存延长的时间段。
[0104] 在建立了向10的有效获得的情况下，与β-酮膦酸酯11化合，随后进行5-步顺序，产 生硼烷14。得到14后，靶向可再现的与ΒΒ2的交叉偶联。预测该转化是ICC顺序中最困难的， 因为它是唯一的sp2-sp3交叉偶联。在无水条件下，我们没有观察到14和BB2替代物15之间 的产生性的偶联，其中糖用Μ0Μ基团来模仿。但是，3当量的水(与碱等摩尔）的添加会促进期 望的键形成。在BB2上的MIDA硼酸酯对这些半水性的反应条件是稳定的。这些条件转移至 BB1与糖基化的BB2的偶联，收率为60-70%。当前的努力聚焦于完成ICC顺序、大环内酯化和 去保护。
[0105] 使用ICC策略的AmB的衍生物合成仅包括所述结构单元之一对合适的脱氧的结构 单元的简单对换。作为该固有灵活性的一个示范，已经做出努力来合成C9脱氧BB1。通过立 体选择性的9BBN硼氢化来实现BB1 14的Cl 1立构中心的安装，其通过椅子样过渡态进行，从 而产生仅一种观察到的立体化学结果（图4A)。如果C9醇不存在，则椅子样过渡态是不可能 的。因此，硼氢化会产生非对映异构体的混合物。为了克服该限制，从MIDA硼酸酯开始以线 性方式立体选择性地组装9-脱氧BB1。该途径利用MIDA硼酸酯耐受多种常见合成转化的能 力[24]。
[0106] 从烯丙基MIDA硼酸酯17开始，臭氧解、Brown烯丙基化、TBS保护和硼氢化/氧化的 短顺序产生醛18 (方案5，图18)。在该最初的顺序中发现，最初的Brown烯丙基化产物的漂 白剂(而不是典型的过氧化氢/氢氧化钠)氧化后处理有效地氧化碳-硼键，而没有MIDA硼酸 酯的分解。使18暴露于锂化的甲基膦酸二甲酯，随后进行Dess-Martin氧化，产生β-酮膦酸 酯19。证实了 ΒΒ1合成策略的会聚性质后，在Horner-Wadswor th-Emmons偶联中19与10(用于 完全氧化的BB1的相同醛）的化合得到α-β不饱和的酯20。用(R)-CBS催化剂还原羰基，随后 催化氢化，产生21。该C9脱氧BB1中间体含有处于正确氧化态的完整碳框架，其具有预安装 的所有立体化学。仅需要TBS保护来实现C9脱氧BB1类似物，其准备好MIDA硼酸酯去保护和 与BB2偶联。
[0107] 本发明的化合物 本发明的一个方面是AmBMU或其药学上可接受的盐
[0108] 本发明的一个方面是AmBAU或其药学上可接受的盐
[0109] 本发明的一个方面是AmB⑶或其药学上可接受的盐
[0110] 本发明的一个方面是C3de0AmB或其药学上可接受的盐
[0111] 本发明的一个方面是C9de0AmB或其药学上可接受的盐
[0112] 本发明的一个方面是C5de0AmB或其药学上可接受的盐
[0113] 本发明的一个方面是C8de0AmB或其药学上可接受的盐
[0114] 本发明的一个方面是Cl IdeOAmB或其药学上可接受的盐
[0115] 本发明的一个方面是C13de0AmB或其药学上可接受的盐
[0116] 本发明的一个方面是C15de0AmB或其药学上可接受的盐
[0117] 本发明的一个方面是C3'deNH2AmB (C3'去氨基AmB;C3'deAAmB)或其药学上可接 受的盐
[0118] 本发明的一个方面是C4 ' deOAmB或其药学上可接受的盐
[0119] 本发明的一个方面是化合物X
[0120] 本发明的一个方面是化合物1
[0121] 本发明的一个方面是根据方案2中所示的六种转化中的任一种制备两性霉素 B的 C16脲衍生物的方法：
R的每个例子独立地选自氢、卤素、直链和支链烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、芳 基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、羟基、巯基、羧基、氨基、酰氨基、叠氮基、硝基、氰基、氨基烷 基和烷氧基。
[0122]术语"烷基"是本领域公知的，包括饱和脂族基因，包括直链烷基、支链烷基、环烷 (脂环)基、烷基取代的环烷基和环烷基取代的烷基。在某些实施方案中，直链或支链烷基在 它的主链中具有约30个或更少的碳原子(例如，对于直链，&-C30;对于支链，C 3-C3Q)，且可替 换地，约20个或更少。同样，环烷基在其环结构中具有约3个至约10个碳原子，且可替换地， 在环结构中具有约5、约6或约7个碳。
[0123]术语"烯基"和"炔基"是本领域公知的，且表示其长度和可能的取代类似于上述烷 基的不饱和脂族基团，但分别包含至少一个双键或三键。
[0124] 除非另外指定碳数目，否则"低级烷基"是指如上定义的烷基，但在其主链结构中 具有1至约10个碳，或者具有1至约6个碳原子。同样，"低级烯基"和"低级炔基"具有相似的 链长度。
[0125] 术语"芳烷基"是本领域公知的，且表示被芳基（即，芳族或杂芳族基团）取代的烷 基。
[0126] 术语"芳基"是本领域公知的，且表示5_、6_和7-元单环芳族基团，其可包含0-4个 杂原子，例如，苯、萘、蒽、芘、吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、三唑、吡唑、吡啶、吡嗪、哒 嗪和嘧啶等。在环结构中具有杂原子的那些芳基还可被称为"芳杂环"或"杂芳族"。芳族环 可以在一个或多个环位置被诸如以下取代基取代:例如，卤素、叠氮化物、烷基、芳烷基、烯 基、炔基、环烷基、羟基、烷氧基、氣基、硝基、疏基、亚氣基、醜氣基、勝酸醋、次勝酸醋、幾基、 羧基、甲硅烷基、醚、烷硫基、磺酰基、磺酰氨基、酮、醛、酯、杂环基、芳族或杂芳族基团、_ cf3、-cn等。术语"芳基"还包括具有两个或更多个环的多环环系，其中两个或更多个碳为两 个相连环(这些环为"稠合环"）共有，其中至少一个环是芳族的，例如其它环可以是环烷基、 环烯基、环炔基、芳基和/或杂环基。
[0127] 术语"杂原子"是本领域公知的，且表示碳或氢以外的任意元素的原子。示例性的 杂原子包括硼、氮、氧、磷、硫和硒。
[0128] 术语"硝基"是本领域公知的，且表示-N〇2。
[0129] 术语"卤素"是本领域公知的，且表示-F、_C1、_Br或-I。
[0130] 术语"巯基"是本领域公知的，且表示-SH。
[0131 ] 术语"羟基"是本领域公知的，且表示-OH。
[0132] 术语"磺酰基"是本领域公知的，且表示-S02'
[0133] 术语"胺"和"氨基"是本领域公知的，且表示未取代和取代的胺，例如可由以下通 式表不的基团：
其中R50、R51和R52各自独立地代表氢、烷基、烯基、-(CH2)m_R61，或R50和R51与它们所 连的N原子一起构成在环结构中具有4-8个原子的杂环;R61代表芳基、环烷基、环烯基、杂环 或多环;且m是0或在1-8的范围内的整数。在其它实施方案中，R50和R51(以及任选的R52)各 自独立地代表氢、烷基、烯基或_(CH 2)m-R61。由此，术语"烷基胺"包括如上定义的胺基团，其 具有与之连接的取代或未取代烷基，即，R50和R51中的至少一个是烷基。
[0134] 术语"酰氨基"被本领域公认为氨基取代的羰基，且包括可以由以下通式代表的基 团：
其中R50和R51如上面所定义。本发明中的酰胺的某些实施方案将不包括可能不稳定的 酰亚胺。
[0135] 术语"烷氧基"或"烷基氧基"是本领域公知的，且表示具有与其相连的氧基的如上 定乂的烷基。代表性的烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基等。
[0136] 还提供了药物组合物，其包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可 接受的载体。还提供了一种用于制备这样的药物组合物的方法。所述方法包括将本发明的 化合物或其药学上可接受的盐放在药学上可接受的载体中。
[0137] 本发明的化合物和本发明的药物组合物可用于抑制真菌的生长。在一个实施方案 中，使有效量的本发明的化合物与真菌接触，由此抑制真菌的生长。在一个实施方案中，将 本发明的化合物或其药学上可接受的盐加入或包含在组织培养基中。
[0138] 本发明的化合物和本发明的药物组合物可用于治疗对象中的真菌感染。在一个实 施方案中，将治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐施用给有此需要的对 象，由此治疗真菌感染。
[0139] 真菌是归类在真菌界中的真核生物。真菌包括酵母、霉菌和较大的生物体，包括蘑 菇。酵母和霉菌作为传染性病原体具有临床关联性。
[0140] 酵母是归类在真菌界中的真核生物。酵母通常被描述为出芽形式的真菌。关于本 发明特别重要的是可以在哺乳动物宿主中造成感染的酵母物种。这样的感染最常发生在免 疫受损的宿主中，包括具有受损的感染屏障的宿主(例如，烧伤受害者)和具有受损的免疫 系统的宿主(例如，接受化学疗法或免疫抑制疗法的宿主，和被HIV感染的宿主）。病原性酵 母包括、但不限于，假丝酵母菌属(Candida)以及隐球菌属(Cryptococcus)的各个种。在假 丝酵母菌属的病原性酵母中特别指出的是白假丝酵母菌(C. albicans)、热带假丝酵母菌 (C. tropicalis)、类星形假丝酵母菌（C. stellatoidea)、光滑假丝酵母菌（C. glabrata)、克柔假丝酵母菌(C. krusei)、近平滑假丝酵母菌(C. parapsilosis)、季也蒙 假丝酵母菌(C. guilliermondii)、维斯假丝酵母菌(C. viswanathii)和葡萄牙假丝酵母 菌(C. lusitaniae)。隐球菌属具体地包括新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)。酵母 可以造成粘膜的感染，例如人类的口腔、食管和阴道感染，以及骨、血液、泌尿生殖道和中枢 神经系统的感染。该列表是示例性的，且不以任何方式进行限制。
[0141] 许多真菌(除了酵母以外)可以在哺乳动物宿主中造成感染。这样的感染最常发生 在免疫受损的宿主中，包括具有受损的感染屏障的宿主(例如，烧伤受害者)和具有受损的 免疫系统的宿主(例如，接受化学疗法或免疫抑制疗法的宿主，和被HIV感染的宿主）。病原 性真菌(除了酵母以外)包括、但不限于，曲霉菌属(Aspergillus)、根霉菌属(Rhizopus)、毛 霉菌属(Mucor)、组织胞衆菌属（Histoplasma)、球孢子菌属（Coccidioides)、芽生菌属 (Blastomyces)、毛癣菌属（Trichophyton)、小抱子菌属（Microsporum)和表皮癣菌属 (Epidermophyton)的种。在前述种中特别指出的是烟曲霉（A. fumigatus)、黄曲霉（A. flavus)、黑曲霉(A. niger)、荚膜组织胞衆菌(H. capsulatum)、粗球孢子菌（C. immitis) 和皮炎芽生菌(B. dermatitidis)。真菌可以在肺、骨、血液、泌尿生殖道和中枢神经系统中 造成全身性感染和深度组织感染，仅举几个例子。一些真菌会引起皮肤和指甲的感染。
[0142] 本文中使用的"抑制"是指与对照相比减小客观上可测量的量或程度。在一个实施 方案中，抑制是指与对照相比减小至少统计上显著的量。在一个实施方案中，抑制是指与对 照相比减小至少5%。在不同的各个实施方案中，抑制是指与对照相比减小至少10%、15%、 20%、25%、30%、33%、40%、50%、60%、67%、70%、75%、80%、90 %或95%。
[0143] 本文中使用的术语"治疗"表示执行干预，所述干预导致：（a)阻止病症或疾病在对 象中发生，所述对象可能处于发生所述病症或疾病的风险中或易患所述病症或疾病，但是 尚未诊断为具有它；（b)抑制病症或疾病，例如，减慢或阻止它的发展;或(c)缓解或改善病 症或疾病，例如，造成病症或疾病的消退。在一个实施方案中，术语"治疗"表示执行干预，所 述干预导致：（a)抑制病症或疾病，例如，减慢或阻止它的发展;或(b)缓解或改善病症或疾 病，例如，造成病症或疾病的消退。
[0144] 本文中使用的"真菌感染"表示如本文中定义的真菌在对象中或对对象的感染。在 一个实施方案中，术语"真菌感染"包括酵母感染。本文中使用的"酵母感染"表示如本文中 定义的酵母在对象中或对对象的感染。
[0145] 本文中使用的"对象"表示活的哺乳动物。在不同的实施方案中，对象是非人哺乳 动物，包括、但不限于，小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、兔、绵羊、山羊、猫、狗、猪、马、牛或非人灵长 类动物。在一个实施方案中，对象是人。
[0146] 本文中使用的"具有酵母或真菌感染的对象"表示表现出酵母或真菌感染的至少 一种客观表现的对象。在一个实施方案中，具有酵母或真菌感染的对象是已经被诊断为具 有酵母或真菌感染且需要治疗它的对象。诊断酵母或真菌感染的方法是众所周知的，且不 需要在这里进行任何详细地描述。
[0147] 本文中使用的"施用"具有它的通常含义，且包括通过任意合适的施用途径来施 用，包括、但不限于，静脉内、肌肉内、腹膜内、鞘内、眼内（例如，玻璃体内）、皮下、直接注射 (例如，注射进肿瘤中）、粘膜、吸入、口服和局部。
[0148] 在一个实施方案中，所述施用是静脉内的。
[0149] 在一个实施方案中，所述施用是口服的。
[0150] 本文中使用的短语"有效量"表示足以实现期望的生物学效应的任何量。
[0151] 本文中使用的短语"治疗有效量"表示足以实现期望的治疗效果（例如，治疗酵母 或真菌感染)的量。
[0152] 本发明的化合物可以与其它治疗剂组合。本发明的化合物和其它治疗剂可以同时 或依次施用。当同时施用其它治疗剂时，它们可以在相同或单独的制剂中施用，但是它们基 本上在相同的时间施用。当其它治疗剂和本发明的化合物的施用在时间上分离时，其它治 疗剂彼此依次施用且与本发明的化合物依次施用。这些化合物的施用之间在时间上的分离 可以是几分钟，或它可以是更久。
[0153] 其它治疗剂的例子包括其它抗真菌剂(包括AmB)、以及其它抗生素、抗病毒剂、抗 炎剂、免疫抑制剂和抗癌剂。
[0154] 如上所述，"有效量"表示足以实现期望的生物学效应的任何量。结合本文提供的 教导，通过选择各种活性化合物和加权因子诸如效能、相对的生物利用度、患者体重、不利 副作用的严重程度和优选的施用模式，可以计划有效的预防性或治疗性处理方案，其不会 造成实质性的不希望的毒性且仍然有效地治疗特定对象。用于任何特定应用的有效量可以 根据诸如以下因素变化:正在治疗的疾病或病症、要施用的本发明的特定化合物、对象的大 小、或疾病或病症的严重程度。本领域普通技术人员可以根据经验确定本发明的特定化合 物和/或其它治疗剂的有效量，无需过度实验。一般而言优选是使用最大剂量，也就是说，根 据某些医学判断的最高安全剂量。可以预见到每日多次剂量以达到化合物的适当全身水 平。通过例如测量患者的药物的峰值或持续的血浆水平，可以确定适当的全身水平。"剂"和 "剂量"在本文中可互换地使用。
[0155] 通常，对于人对象而言，活性化合物的每日口服剂量将是约0.01毫克/kg/天至 1000毫克/kg/天。预见到，以每天一次或几次施用的在0.5-50毫克/kg范围内的口服剂量将 产生期望的结果。可以适当地调节剂量以实现期望的局部或全身药物水平，这取决于施用 模式。例如，预见到，静脉内施用将是每天1个数量级至几个数量级的较低剂量。在对象中的 应答在这样的剂量是不足够的情况下，可以采用甚至更高的剂量(或通过不同的更局限的 递送途径递送的有效的更高剂量），只要患者耐受性允许。预见到每天多次剂量会实现化合 物的适当全身水平。
[0156]在一个实施方案中，本发明的化合物的静脉内施用通常可以是0.1 mg/kg/天至20 mg/kg/天。静脉内给药因而可以类似于，或有利地，可以超过AmB的最大耐受剂量。
[0157] 对于本文描述的任何化合物，可以从动物模型初步确定治疗有效量。对于已经在 人类中试验的本发明的化合物和对于已知表现出类似药理学活性的化合物，诸如其它有关 的活性剂，还可以从人数据确定治疗有效剂量。对于胃肠外施用，可能需要较高的剂量。基 于施用的化合物的相对生物利用度和效能，可以调节应用的剂量。基于上述方法和本领域 众所周知的其它方法调节剂量以实现最大效力，完全是在普通技术人员的能力内。
[0158] 在药学上可接受的溶液中施用本发明的制剂，所述溶液可以常规地含有药学上可 接受的浓度的盐、缓冲剂、防腐剂、相容的载体、辅剂和任选的其它治疗成分。
[0159] 两性霉素 B可以以许多制剂的形式商购得到，包括基于脱氧胆酸盐的制剂和基于 脂质的（包括脂质体)制剂。可以类似地配制本发明的两性霉素 B衍生物化合物，例如，且但 不限于，作为基于脱氧胆酸盐的制剂和基于脂质的(包括脂质体)制剂。
[0160] 就用于治疗而言，通过将本发明的化合物递送至期望的表面的任何模式，可以将 有效量的本发明的化合物施用给对象。通过技术人员已知的任何方式，可以施用本发明的 药物组合物。施用途径包括、但不限于口服、静脉内、肌肉内、腹膜内、皮下、直接注射(例如， 注射进肿瘤或脓肿中）、粘膜、吸入和局部。
[0161]就口服施用而言，通过使活性化合物(一种或多种)与本领域众所周知的药学上可 接受的载体组合，可以容易地配制所述化合物（即，本发明的化合物，和其它治疗剂）。这样 的载体使得可以将本发明的化合物配制为片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊剂、液体、凝胶剂、糖浆 剂、浆液、混悬液等，供要治疗的对象口服摄入。可以如下得到用于口服使用的药物制剂：固 体赋形剂，任选地碾磨所得的混合物，并加工颗粒的混合物，在加入合适的助剂(如果需要 的话）以后，得到片剂或糖衣丸芯。合适的赋形剂具体地是，填充剂诸如糖，包括乳糖、蔗糖、 甘露醇或山梨醇;纤维素制剂，例如，玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍 胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需 要的话，可以加入崩解剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐例如海藻酸钠。 任选地，口服制剂还可以在盐水或缓冲液(例如，用于中和内部酸条件的m)TA)中配制，或可 以在没有任何载体的情况下施用。
[0162] 还具体地预见到以上一种或多种组分的口服剂型。可将所述一种或多种组分化学 修饰，使得所述衍生物的口服递送是有效的。通常，预见到的化学修饰是给所述组分分子本 身增添至少一个基团，其中所述基团允许(a)抑制酸水解;和(b)从胃或肠吸收到血流中。也 期望增加所述一种或多种组分的总稳定性和延长在体内的循环时间。这样的基团的例子包 括:聚乙二醇、乙二醇和丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷 酮和聚腫氨酸。Abuchowski和Davis, "Soluble Polymer-Enzyme Adducts"，见：Enzymes as Drugs, Hocenberg和Roberts，编，ffiley-Interscience, New York, N.Y.,第367-383页（1981); Newmark等人，J Appl Biochem 4:185-9 (1982)。可以使用的其它聚合物 是聚-1，3-二氧杂环戊烷和聚-1，3,6-三氧杂环辛烷。如上面指出的，对于药用而言，优选的 是聚乙二醇基团。
[0163] 对于组分（或衍生物），释放的位置可以是胃、小肠（十二指肠、空肠或回肠）或大 肠。本领域技术人员可获得不会溶解于胃、然而会在十二指肠或肠的其它地方释放所述物 质的制剂。优选地，要么通过本发明的化合物(或衍生物)的保护，要么通过生物活性物质在 胃环境以后(诸如在肠中）的释放，所述释放将避免胃环境的有害影响。
[0164] 为了确保完全胃抗性，对至少pH 5.0不可渗透的包衣是必需的。用作肠溶包衣的 更常见惰性成分的例子是醋酸纤维素偏苯三酸酯(CAT)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯 (HPMCP)、HPMCP 50、HPMCP 55、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯（PVAP)、Eudragit L30D、 Aquateric、邻苯二甲酸乙酸纤维素(CAP)、Eudragit L、Eudragit S和紫胶。这些包衣可以 用作混合膜。
[0165] 包衣或包衣的混合物还可以用在片剂上，所述片剂不希望针对胃进行保护。这可 以包括糖包衣，或使得片剂更易于吞咽的包衣。胶囊剂可以由用于递送干燥治疗剂（例如， 粉末）的硬壳(诸如明胶)组成;对于液体形式，可以使用软明胶壳。扁囊剂的壳材料可以是 厚淀粉或其它可食用的纸。对于丸剂、锭剂、模铸片剂或模印片，可以使用湿法成块技术。
[0166] 所述治疗剂可以作为细小的多微粒包含在制剂中，所述多微粒呈约1 mm的粒度的 颗粒或团粒的形式。用于胶囊施用的材料的制剂也可以作为粉末、稍微压制的塞或甚至作 为片剂。所述治疗剂可以通过压制来制备。
[0167] 着色剂和矫味剂都可以被包括。例如，可以配制(诸如通过脂质体或微球包囊)本 发明的化合物(或衍生物），并然后进一步包含在可食用的产品（诸如含有着色剂和矫味剂 的冷藏饮料)中。
[0168] 可以用惰性材料稀释或增加治疗剂的体积。这些稀释剂可以包括碳水化合物，特 别是甘露醇、乳糖、无水乳糖、纤维素、蔗糖、改性的葡聚糖和淀粉。某些无机盐也可以用 作填充剂，包括三磷酸钙、碳酸镁和氯化钠。一些商购可得的稀释剂是Fast-Fl 〇、EmdeX、 STA-Rx 1500、Emcompress和Avicell〇
[0169] 在将治疗剂配制成固体剂型时，可以包括崩解剂。用作崩解剂的材料包括、但不限 于淀粉，包括市售的基于淀粉的崩解剂Explotab。淀粉轻乙酸钠 、Amber 1 i te、羧甲纤维素 钠、超支链淀粉、海藻酸钠、明胶、橙皮、酸性羧甲基纤维素、天然海绵和皂粘土都可以使用。 另一种形式的崩解剂是不溶性的阳离子交换树脂。粉末状树胶可以用作崩解剂和粘合剂， 且这些可以包括粉末状树胶诸如琼脂、卡拉牙胶或黄蓍胶。海藻酸和它的钠盐也可用作崩 解剂。
[0170] 粘合剂可以用于将治疗剂保持在一起以形成硬片剂，且包括来自天然产物的材料 诸如阿拉伯胶、黄蓍胶、淀粉和明胶。其它包括甲基纤维素(MC)、乙基纤维素(EC)和羧甲基 纤维素(CMC)。聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和羟丙基甲基纤维素(HPMC)二者可以用在醇溶液中以 将治疗剂造粒。
[0171] 可以在治疗剂的制剂中包含抗摩擦剂以防止在配制工艺中粘结。润滑剂可以用作 治疗剂和模具壁之间的层，且这些可以包括但不限于:硬脂酸，包括它的镁和钙盐，聚四氟 乙烯(PTFE)，液状石蜡，植物油和蜡类。还可以使用可溶性的润滑剂，诸如月桂基硫酸钠、月 桂基硫酸镁、不同分子量的聚乙二醇、碳蜡4000和6000。
[0172] 可能添加助流剂，其可能改善药物在配制过程中的流动性能和辅助在压制过程中 的重排。所述助流剂可以包括淀粉、滑石、热解硅胶和水合的硅铝酸盐。
[0173] 为了辅助治疗剂溶解在水性环境中，可能加入表面活性剂作为润湿剂。表面活性 剂可以包括阴离子型去污剂诸如月桂基硫酸钠、磺基琥珀酸二辛酯钠和磺酸二辛酯钠。可 以使用阳离子型去污剂，且可以包括苯扎氯铵和苄索氯铵。可以作为表面活性剂包含在制 剂中的潜在非离子型去污剂包括聚桂醇400、聚氧乙烯40硬脂酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油 10、50和60、单硬脂酸甘油酯、聚山梨酯40、60、65和80、鹿糖脂肪酸酯、甲基纤维素和羧甲基 纤维素。这些表面活性剂可以单独地或者作为混合物以不同比例存在于本发明的化合物或 衍生物的制剂中。
[0174] 可以口服使用的药物制剂包括：由明胶制成的推入-配合式胶囊剂以及由明胶和 塑化剂(诸如甘油或山梨醇）制成的软密封胶囊剂。所述推入-配合式胶囊剂可以含有与下 列成分混合的活性成分:填充剂，例如乳糖;粘合剂，例如淀粉;和/或润滑剂，例如滑石或硬 脂酸镁;和任选的稳定剂。在软胶囊剂中，可以将活性化合物溶解或悬浮在合适的液体中， 例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。另外，可以加入稳定剂。还可以使用为口服施用配 制的微球。这样的微球已经在本领域中明确地定义。用于口服施用的所有制剂应当呈适合 于这样的施用的剂量。
[0175] 对于含服施用，所述组合物可以采取按常规方式配制的片剂或锭剂的形式。
[0176]对于吸入施用，使用合适的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙 烷、二氧化碳或其它合适的气体，可以以气溶胶喷雾递送形式从增压包或喷雾器方便地递 送根据本发明使用的化合物。在增压气溶胶的情况下，通过提供阀门来递送计量的量，可以 确定剂量单位。用在吸入器或吹入器中的胶囊和药筒(例如由明胶制成)可以被配制成含有 化合物与合适的粉末基质(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
[0177]在本文中也预见到本发明的化合物(或其衍生物）的肺递送。当吸气时将本发明的 化合物(或衍生物)递送至哺乳动物的肺，并穿过肺上皮层到达血流。吸入的分子的其它报 道包括Adjei等人，Pharm Res 7:565-569 (1990); Adjei等人，Int J Pharmaceutics 63:135-144 (1990)(醋酸亮丙瑞林）；Braquet等人，J Cardiovasc Pharmacol 13(增刊 5):143-146 (1989)(内皮缩血管肽-l);Hubbard 等人，Annal Int Med 3:206-212 (1989) (α?-抗胰蛋白酶）；Smith等人，1989，J Clin Invest 84:1145-1146 (a-1-蛋白 水解酶）；〇swein等人，1990，"Aerosolization of Proteins"，Proceedings of Symposium on Respiratory Drug Delivery II，Keystone, Colorado, March,(重组人 生长激素）；Debs等人，1988，J Immunol 140:3482-3488 (干扰素-γ和肿瘤坏死因子α) 和Platz等人，美国专利号5,284,656 (粒细胞集落刺激因子）。为了全身效应进行药物的 肺递送的方法和组合物描述在1995年9月19日授权给Wong等人的美国专利号5，451，569中。
[0178] 预见到用于实践本发明的是被设计成用于治疗产品的肺递送的宽范围的机械装 置，包括、但不限于喷雾器、计量剂量吸入器和粉末吸入器，它们都是本领域技术人员熟知 的。
[0179] 适合用于实践本发明的商购可得的装置的一些具体例子是:Ultravent喷雾器，由 Mallinckrodt，Inc.，St. Louis, Μο·制造 ；Acorn II 喷雾器，由Marquest Medical Products, Englewood, Colo.制造；Ventolin计量剂量吸入器，由Glaxo Inc.，Research Triangle Park, North Carolina制造；和Spinhaler粉末吸入器，由Fisons Corp·， Bedford, Mass制造。
[0180] 所有这样的装置需要使用适合用于分配本发明的化合物（或衍生物）的制剂。通 常，每种制剂对采用的装置的类型具有特异性，且可能涉及除了在治疗中有用的平常稀释 剂、辅剂和/或载体以外适当的推进剂物质的应用。并且，预见到脂质体、微胶囊或微球、包 合络合物或其它类型的载体的应用。本发明的化学修饰的化合物还可以制备在不同的制剂 中，这取决于化学修饰的类型或采用的装置的类型。
[0181] 适合与喷射或超声喷雾器一起使用的制剂通常包含以每mL溶液约0.1-25 mg本发 明的生物活性化合物的浓度溶解在水中的本发明的化合物(或衍生物）。所述制剂还可以包 括缓冲剂和单糖(例如，用于稳定本发明的化合物和调节渗透压）。所述喷雾器制剂还可以 含有表面活性剂，以减小或阻止表面诱导的本发明的化合物的聚集，所述聚集由形成气溶 胶时溶液的雾化造成。
[0182] 用于与计量剂量吸入器装置一起使用的制剂通常包含借助于表面活性剂悬浮于 推进剂中的含有本发明的化合物(或衍生物)的精细粉碎的粉末。所述推进剂可以是为此目 的采用的任何常规材料，诸如含氯氟烃、氢氯氟烃、氢氟烃或烃，包括三氯氟甲烷、二氯二氟 甲烷、二氯四氟乙醇、和1，1，1，2_四氟乙烷或它们的组合。合适的表面活性剂包括脱水山梨 糖醇三油酸酯和大豆卵磷脂。油酸也可以用作表面活性剂。
[0183] 用于从粉末吸入器装置分配的制剂将包含含有本发明的化合物(或衍生物）的精 细粉碎的干粉，且也可以包括促进粉末从装置分散的量(例如，所述制剂的50_90重量％)的 填充剂，诸如乳糖、山梨醇、蔗糖或甘露醇。本发明的化合物(或衍生物)应当有利地以微粒 形式制备以最有效地递送至深肺，所述微粒具有小于10微米（μπι)、最优选0.5-5 μπι的平均 粒度。
[0184] 也预见到本发明的药物组合物的鼻递送。鼻递送允许在将治疗产品施用至鼻以后 直接将本发明的药物组合物传送至血流，而不需要将产品沉积在肺中。用于鼻递送的制剂 包括含有葡聚糖或环葡聚糖的那些。
[0185] 对于鼻施用，一种有用的装置是具有与其连接的计量剂量喷雾器的小硬瓶。在一 个实施方案中，如下递送计量剂量:将本发明的药物组合物溶液抽入确定容积的室中，所述 室具有孔口，所述孔口的尺寸适合在所述室内的液体受到压迫时通过形成喷雾而使气溶胶 制剂气雾化。压迫所述室以施用本发明的药物组合物。在一个具体实施方案中，所述室是活 塞布置。这样的装置是商购可得的。
[0186] 可替换地，使用具有孔口或开口的塑料挤压瓶，所述孔口或开口的尺寸通过在受 到挤压时形成喷雾而将气溶胶制剂气雾化。所述开口经常建立在瓶子的顶部，且所述顶部 通常逐渐变细以部分地装配在鼻道中以便有效地施用气溶胶制剂。优选地，鼻吸入器将提 供计量的量的气溶胶制剂，以便施用测量的剂量的药物。
[0187] 当需要全身性地递送它们时，可以将化合物配制成用于通过注射(例如，通过快速 浓注或连续输注)来胃肠外施用。注射制剂可以呈现为单位剂型，例如在安瓿中或在多剂量 容器中，含有加入的防腐剂。所述组合物可以采取诸如在油性或水性媒介物中的混悬液、溶 液或乳剂等的形式，并且可以含有配制剂，诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。
[0188] 用于肠胃外施用的药物制剂包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。另外，可以 将活性化合物的混悬液制成适当的油性注射混悬液。合适的亲脂性溶剂或媒介物包括脂肪 油(例如芝麻油)或合成脂肪酸酯（例如油酸乙酯或甘油三酯)或者脂质体。水性注射混悬液 可以含有增加混悬液的粘度的物质，诸如羧甲纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。任选地，所述混 悬液也可以含有合适的稳定剂或者增加所述化合物溶解度的试剂，以便制备高度浓缩的溶 液。
[0189] 可替换地，所述活性化合物可以呈粉末形式，其用于在使用前用合适的媒介物(例 如，无菌的无热原的水)构造。
[0190] 所述化合物也可以配制在直肠或阴道组合物中，所述组合物是诸如栓剂或保留灌 肠剂，例如，含有常规栓剂基质诸如可可脂或其它甘油酯。
[0191] 除了上述制剂以外，所述化合物也可以配制成贮库制剂。这样的长效制剂可以与 合适的聚合材料或疏水材料(例如作为在可接受的油中的乳剂)或者离子交换树脂一起配 制，或作为略溶性的衍生物，例如作为略溶性的盐。
[0192] 所述药物组合物也可以包含合适的固体或凝胶相载体或赋形剂。这样的载体或赋 形剂的例子包括、但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物诸 如聚乙二醇。
[0193] 合适的液体或固体药物制剂形式是，例如，用于吸入的水或盐水溶液，微囊化的、 螺卷化的（encochleated)、包被在微小金颗粒表面上的、包含在脂质体中的、雾化的、气溶 胶、用于植入皮肤的团粒、或在干燥到要刮入皮肤中的锋利物体上。所述药物组合物还包括 颗粒、粉剂、片剂、包衣片剂、（微)胶囊剂、栓剂、糖浆剂、乳剂、混悬液、乳膏剂、滴剂或延长 活性化合物释放的制剂，在它们的制备中，赋形剂和添加剂和/或助剂诸如崩解剂、粘合剂、 包衣剂、膨胀剂、润滑剂、调味剂、甜味剂或增溶剂如上所述按惯例使用。所述药物组合物适 合用于多种药物递送系统。关于药物递送的方法的简要综述，参见Langer R，Science 249:1527-33 (1990)，其通过引用并入本文。
[0194] 本发明的化合物和任选的其它治疗剂可以以其本身（纯的）施用或以药学上可接 受的盐的形式施用。当用在药品中时，所述盐应当是药学上可接受的，但是非药学上可接受 的盐可以方便地用于制备其药学上可接受的盐。这样的盐包括、但不限于从以下酸制备的 那些盐:盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、对甲苯磺酸、酒石酸、柠檬 酸、甲磺酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸、萘-2-磺酸和苯磺酸。并且，这样的盐可以制备为碱金属 或碱土金属盐，诸如羧酸基团的钠、钾或钙盐。
[0195] 合适的缓冲剂包括：乙酸和盐（l-2%w/v);柠檬酸和盐（l-3%w/v);硼酸和盐(0.5-2.5%w/v);以及磷酸和盐(0.8-2%w/v)。合适的防腐剂包括苯扎氯铵(0.003-0.03%w/v);三 氯叔丁醇(〇. 3-0.9%w/v);对羟基苯甲酸酯(0.01 -0.25%w/v)和硫柳汞(0.004-0.02%w/v)。
[0196] 本发明的药物组合物含有被包含在药学上可接受的载体中的有效量的本发明的 化合物和任选的治疗剂。术语"药学上可接受的载体"是指适合用于施用给人或其它脊椎动 物的一种或多种相容的固体或液体填充剂、稀释剂或包囊物质。术语"载体"表示天然的或 合成的有机或无机成分，活性成分与所述成分组合以促进应用。药物组合物的组分还能够 以以下方式与本发明的化合物混合和彼此混合:所述方式使得不存在实质上损害期望的药 物效率的相互作用。
[0197] 可以以颗粒形式提供治疗剂(一种或多种），具体地包括、但不限于本发明的化合 物。本文中使用的颗粒是指可以完全地或部分地由如本文中所述的本发明的化合物或其它 治疗剂(一种或多种)组成的纳米粒或微粒(或在某些情况下，更大的颗粒）。所述颗粒可以 含有在芯中的治疗剂（一种或多种），所述芯被包衣(包括、但不限于，肠溶包衣)包围。所述 治疗剂（一种或多种）还可以分散遍及颗粒。所述治疗剂（一种或多种）还可以吸附在颗粒 中。所述颗粒可以具有任何等级释放动力学，包括零级释放、一级释放、二级释放、延迟释 放、持续释放、立即释放和它们的任意组合等。除了治疗剂(一种或多种）以外，所述颗粒还 可以包括在药学和医学领域中常用的那些材料中的任一种，所述材料包括、但不限于可蚀 解的、不可蚀解的、可生物降解的或不可生物降解的材料或它们的组合。所述颗粒可以是微 胶囊，其含有呈溶液或呈半固态的本发明的化合物。所述颗粒可以具有基本上任何形状。
[0198] 不可生物降解的和可生物降解的聚合材料都可以用于制备递送治疗剂(一种或多 种)所用的颗粒。这样的聚合物可以是天然的或合成的聚合物。基于期望释放的时间段来选 择聚合物。特别重要的生物粘附聚合物包括在Sawhney H S等人（1993) Macromolecules 26:581-7(其教导并入本文中）中描述的可生物蚀解的水凝胶。这些包括聚透明质酸、酪蛋 白、明胶、明胶蛋白、聚酐、聚丙烯酸、海藻酸盐、壳聚糖、聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸 乙酯、聚甲基丙烯酸丁酯、聚甲基丙烯酸异丁酯、聚甲基丙烯酸己酯、聚甲基丙烯酸异癸酯、 聚甲基丙烯酸月桂基酯、聚甲基丙烯酸苯酯、聚丙烯酸甲酯、聚丙烯酸异丙酯、聚丙烯酸异 丁酯和聚丙烯酸十八烷基酯。
[0199] 在控释系统中可以含有治疗剂(一种或多种）。术语"控释"意图表示其中控制药物 从制剂释放的方式和特性的任何含有药物的制剂。这表示立即释放以及非立即释放制剂， 其中非立即释放制剂包括、但不限于持续释放和延迟释放制剂。术语"持续释放"（也被称作 "延长释放"）以它的常规含义用于表示这样的药物制剂:其在延长的时间段内提供药物的 逐渐释放，并且优选地，尽管非必然地，导致药物在延长的时间段内基本上恒定的血液水 平。术语"延迟释放"以它的常规含义用于表示这样的药物制剂:其中在制剂的施用和药物 从其释放之间存在时间延迟。"延迟释放"可能涉及或不涉及药物在延长的时间段内的逐渐 释放，且因而可能是或可能不是"持续释放"。
[0200] 长期持续释放植入物的应用可能特别适合用于治疗慢性病症。本文中使用的"长 期"释放是指，将植入物构造和布置成递送治疗水平的活性成分达至少7天，且优选30-60 天。长期持续释放植入物是本领域普通技术人员众所周知的，且包括一些上述的释放系统。
[0201] 相关领域中的普通技术人员会理解，考虑到普通技术人员已知的信息从本文所含 的发明描述会容易地明白对本文描述的组合物和方法的其它合适的改变和改进，并且可以 在不脱离本发明的范围或其任何实施方案的情况下做出。现在已经详细描述了本发明，通 过参考下述实施例会更清楚地理解本发明，下述实施例仅仅为了举例说明的目的一起包 含，且不意图成为本发明的限制。 实施例
[0202] 实施例1. C5-脱氧AmB 降解合成 参见方案6，图19。
[0203] 获得C5-脱氧AmB (C5de0AmB)的一个潜在合成策略是从天然产物AmB开始的降解 合成。使用完全保护的中间体5作为起始点，在消除C3醇后，产生α-β不饱和的酯9。0_碳的亲 核氧化会在C-3处重新安装必要的羟基，剩下C-5醇作为在AmB框架上的唯一未保护的醇。从 这里，Barton-McCombie型脱氧可以除去C-5醇。然后，短去保护顺序可以得到C5de0AmB。 [0204]特别地，我们预期使用中间体3,即使用与C3-脱氧AmB的合成中利用的顺序类似的 顺序可得到的一种中间体。将5暴露于NaHMDS，会以54%收率干净地消除C-3醇。使用铜催化 剂催化的B2Pin2的亲核加成可以在β位置处选择性地硼基化(bory late)。随后用过硼酸钠氧 化，然后TBS甲硅烷基化，可能以保护形式在C-3处重新安装氧化。然后，使用硫代羰基二咪 唑形成硫代羰基，随后用三丁基氢化锡和偶氮二异丁腈进行基团脱氧，可以产生C-5脱氧的 AmB框架11。包括以下内容的去保护顺序可以快速地产生C5de0AmB:用HF-吡啶除去甲硅烷 基，随后在THF:H 20 2:1中用CSA进行缩酮水解，最后伴随地除去烯丙基酯和alloc氨基甲酸 酯。
[0205] 实施例2X5-脱氧AmB 双重13C标记的AmB大环内酯的全合成 参见方案7-12，图20-25。
[0206] 预见到依赖于有效的且灵活的迭代Suzuki-Miyaura交叉偶联（ICC)平台的全合成 策略。ICC策略利用双功能的B-保护的卤代硼酸，其可以暴露于合适的硼酸配偶体并在 Suzuki-Miyaura交叉偶联条件下仅在卤化物末端选择性地反应。使用碱性水解成游离硼酸 的对MIDA配体的去保护会使结构单元准备好下一个交叉偶联循环。如在图3A中所示，将AmB 逆合成地分成四个结构单元(BB1-BB4)。仅以迭代方式使用Suzuki-Miyaura交叉偶联，我们 的目标是形成结构单元1和2之间、2和3之间、以及3和4之间的键。随后的大环内酯化和总体 去保护将由此完成全合成。使用该策略，脱氧的衍生物的合成仅需要合成新的脱氧的结构 单元，保留合成的其它部分不变。例如，通过简单地用C-5脱氧BB1取代BB1，可以实现C5-脱 氧AmB的合成。
[0207] BB1的合成起源于两个较小片段醛14和β-酮膦酸酯17的偶联。醛14的合成开始于 在有钛/BIN0L复合物存在下Chan氏二烯12和肉桂醛13的化合，其实现对映选择性的延长的 羟醛反应。然后，同步还原、缩酮化和臭氧解的顺序以40%的总收率从12产生期望的醛14。 C5de0AmB的右一半的合成开始于(R)-苹果酸的选择性酯化，随后是缩酮化以提供亚环戊基 缩酮15。使15暴露于Petasis氏试剂，随后在暴露于锂化的甲基膦酸二甲酯16后形成酮，得 到酮膦酸酯17。
[0208] 在产生ΒΒ1的左一半和右一半后，Horner-Wadsworth-Emmons偶联连接起片段14和 17。随后的Stryker还原则产生酮18。使18暴露于三仲丁基硼氢化锂引起非对映选择性的酮 还原，随后将得到的醇酰化，最终将亚甲基二氧杂环己烷硼氢化，使C5de0AmB准备好与BB2 的Suzuki-Miyaura交叉偶联。
[0209]类似于BB1，也将BB2分成两个较小片段。糖供体24和糖基受体33将在非对映选择 性的糖基化反应中连接起来。首先，必须合成两个较小片段。24的合成开始于2-呋喃基甲基 酮。将该酮还原，随后用NBS促进Achmatowitcz反应，然后Boc保护，产生二氢吡喃20。接着， 将Boc缩醛交换为对-甲氧基苄基缩醛，随后在Luche条件下进行酮还原，得到烯丙型醇21。 然后使用烯丙型醇控制mCPBA环氧化的面选择性，然后将它用TBSC1和咪唑进行甲硅烷基 化。然后通过用二乙基叠氮化错复合物(deithylalumminumazide complex)开环，实现环氧 化物的位点选择性的开环，以产生叠氮基醇22。接着，将游离的醇用EDC、DMAP和TDMBA酯化。 最后，在暴露于DDQ后实现PMB醇的还原，且随后的三氯乙酰亚氨酸酯形成实现完全保护的 C2'-表海藻糖胺糖供体24的合成，准备好用烯丙型醇33糖基化。
[0210] 从L-(-)-阿糖醇开始，二缩酮化、随后IBX对醇的氧化和Wittig烯化作用会提供1， 1-二取代的烯烃25。将25硼氢化，随后苄基化，并将两种乙基缩酮进行酸裂解，产生能够环 化以产生二-环氧化物26的中间体。在有18-冠-6存在下用TMSCN和KCN将二-环氧化物26开 环，产生二-氰基二醇，其在水解成二-甲酸以后经历分子内非对映异位的基团选择性的内 酯化以提供内酯27。简单的甲基酯化和TBS甲硅烷基化然后提供内酯28。使28暴露于炭载钯 和氢以后进行脱苄基，随后进行Pinnick氧化，然后与TMS-乙醇进行Mi tsunobu反应，得到一 种不同地取代的二-酯，其能够用氢氧化钠选择性地皂化以提供酸29。29与草酰氯形成酰基 氯，随后与二-金属化的烯烃31进行Stille偶联，得到α-β不饱和的酮32。用CBS还原实现酮 32向烯丙型醇33的非对映选择性还原，准备好用24糖基化。
[0211] 利用用于受控β-糖基化的邻接基促进作用平台，在有缓冲的氯-甲基吡啶鑰三氟 甲基磺酸盐存在下24和33的化合给34提供大于20:1的β: α选择性。TDMB导向基团然后在六 氟异丙醇、叔丁醇和二氯甲烷中暴露于CSA后除去，从而显露游离的醇35。氧化、得到的酮的 还原和甲娃烷基化的三步顺序产生TBS醚36。碘-degermylation，随后暴露于二苯基磷酰氯 和LiHMDS，得到乙烯酮缩醛膦酸酯38。与三丁基锡烷39的选择性Stille偶联实现BB2的合 成。
[0212]碘-三烯BB3是四个结构单元中的复杂性最低者。它的合成从反式-乙烯基碘MIDA 硼酸酯40开始在四步中实现。使用Pd(PPh3)4和CUTC进行与31的Stille偶联，随后进行碘-degermylation，得到二稀41。然后通过与31的第二个Stille偶联用另一个乙烯基延伸稀经 网络，并随后进行碘-degermylation，得到BB3。按照我们的小组的在前文献Lee，SJ等人， J Am Chem Soc 130:466 (2008) ;Paterson，I等人，J Am Chem Soc 123:9535 (2001)， 快速地实现BB4的合成。
[0213]得到所有四个结构单元后，现在可以使用迭代交叉偶联平台装配它们以迅速地产 生AmB大环内酯。用Buchwald氏第2代SPhos环钯配合物、磷酸钾和3当量的水使BB1和BB2化 合，实现Suzuki-Miyaura交叉偶联以形成BB1-BB2二聚体43。进行MIDA硼酸酯的频哪醇交 换，随后与BB3进行第二个Suzuki偶联(这次使用XPhos-第2代环钯配合物），形成五烯44。在 有钯第2代XPhos环钯配合物存在下用氢氧化钠使MIDA硼酸酯原位释放出游离硼酸，形成 AmB的所有碳直链的框架45。用氢氧化锂将甲基酯45皂化以后，大环内酯化然后得到AmB的 双13C标记的大环内酯46。一系列保护基除去应当会实现AmB- 13C2的合成，所述保护基除去包 括用TBAF-tBuOH复合物实现TMSE去保护、用HF-吡啶实现总体去甲硅烷基化、用三氟乙酸实 现脱缩酮化和用三甲基膦对C3 '叠氮化物的Staudinger还原。
[0214] 实施例3. C5-脱氧AmB C5de0AmB的全合成
方案13。
[0215]得到C5-脱氧AmB的一个替代合成策略是通过全合成努力。我们预见到C5de0BBl的 合成起源于两个较小片段醛47和β-酮膦酸酯17的偶联。醛47的合成开始于β-酮酯48,其可 在乙酰乙酸甲酯的烷基化以后得到。将48进行Noyori氢化，随后进行TBS甲硅烷基化，得到 甲娃烷基酿49。从49，仅保留臭氧解以完成C5de0AmB的左一半。
[0216] 在产生C5de0AmB的左一半和右一半以后，我们预见到Horner-Wadsworth-Emmons 偶联来连接片段47和17。随后的Stryker还原则产生酮50。50向三仲丁基硼氢化锂的暴露产 生非对映选择性的酮还原，随后将得到的醇酰化，最终硼氢化，使C5de0BBl准备好与BB2进 行Suzuki-Miyaura交叉偶联。
[0217] 参见方案14，图26。
[0218] 得到所有四个结构单元后，现在可以使用迭代交叉偶联平台装配它们以快速地产 生C5de0AmB大环内酯。我们预见到，用Buchwald氏第2代SPhos环钯配合物、磷酸钾和3当量 的水使C5de0BBl和BB2化合，实现Suzuki-Miyaura交叉偶联以形成C5de0BBl-BB2二聚体51。 进行MIDA硼酸酯的频哪醇交换，随后与BB3进行第二个Suzuki偶联(这次用XPhos-第2代环 钯配合物），形成五烯52。在有钯第2代XPhos环钯配合物存在下用氢氧化钠使MIDA硼酸酯原 位释放出游离硼酸，形成C5de0AmB的所有碳直链的框架53。用氢氧化锂将甲基酯53皂化以 后，大环内酯化应当会然后得到大环内酯54。一系列保护基除去应当会实现C5de0AmB的合 成，所述保护基除去包括用TBAF-tBuOH复合物实现TMSE去保护、用HF-吡啶实现总体去甲硅 烷基化、用三氟乙酸实现脱缩酮化和用三甲基膦对C3'叠氮化物的Staudinger还原。
[0219] 实施例4. C8-脱氧AmB C8de0AmB的全合成 参见方案15，图27。
[0220]类似于得到AmB的策略，我们预见到起源于全合成努力的C8-脱氧AmB的合成。为了 实现该合成，需要做的对AmB合成的唯一变化是用C8de0BBl替代C5de0BBl。我们预见到起源 于α-β不饱和酮55的还原的C8de0BBl的合成，所述α-β不饱和酮55可以从醛47和β-酮膦酸酯 17 的Horner-Wadsworth-Emmons偶联得到。
[0221 ]进行47和17之间的HWE稀化作用，随后进行得到的α-β不饱和的羰基的Stryker还 原，得到酮56。我们然后预见到将所述酮用硼氢化钠还原成醇，并活化所述醇用于作为硫代 酸酯57除去。然后在暴露于三丁基氢化锡和AIBN后实现基团介导的C8-硫代酸酯的除去。将 亚甲基二氧杂环己烷用9BBNH进行硼氢化，则使CSdeOAmB准备好进入ICC顺序。
[0222] 参见方案16，图28。
[0223] 得到所有四个结构单元后，现在可以使用迭代交叉偶联平台装配它们以快速地产 生C8de0AmB大环内酯。我们预见到用Buchwald氏第2代SPhos环钯配合物、磷酸钾和3当量的 水使C8de0BBl和BB2化合，实现Suzuki-Miyaura交叉偶联以形成BB1-BB2二聚体58。进行 MIDA硼酸酯的频哪醇交换，随后与BB3进行第二个Suzuki偶联(这次用XPhos-第2代环钯配 合物），形成五烯59。在有钯第2代XPhos环钯配合物存在下用氢氧化钠使MIDA硼酸酯原位释 放出游离硼酸，形成CSdeOAmB的所有碳直链的框架56。用氢氧化锂将甲基酯60皂化以后，大 环内酯化应当会然后得到大环内酯61。一系列保护基除去应当会实现CSdeOAmB的合成，所 述保护基除去包括用TBAF-tBuOH复合物实现TMSE去保护、用HF-吡啶实现总体去甲硅烷基 化、用三氟乙酸实现脱缩酮化和用三甲基膦对C3'叠氮化物的Staudinger还原。
[0224] 实施例5. C9-脱氧AmB C9de0AmB的全合成 参见方案17，图29。
[0225] 类似于得到AmB的策略，我们预见到起源于全合成努力的C9-脱氧AmB的合成。为了 实现该合成，需要做的对AmB合成策略的唯一变化是用C9de0BBl替代BB1。我们预见到起源 于酸14和β-酮勝酸酯62的Horner-Wadsworth-Emmons偶联的C9de0BBl合成。C_11立构中心 不可通过非对映选择性的硼氢化来安装，因此为了克服该限制，从MIDA硼酸酯开始以线性 方式立体选择性地组装9-脱氧BB1。该途径利用MIDA硼酸酯的耐受多种常见合成转化的能 力。
[0226] 从烯丙基MIDA硼酸酯63开始，臭氧解、Brown烯丙基化、TBS保护和硼氢化/氧化的 短顺序产生醛64。在该最初的顺序中发现，最初的Brown烯丙基化产物的漂白剂(而不是典 型的过氧化氢/氢氧化钠)氧化后处理有效地氧化碳-硼键，而没有MIDA硼酸酯的分解。使64 暴露于锂化的甲基膦酸二甲酯，随后进行Dess-Martin氧化，产生β-酮膦酸酯65。证实了 BB1 合成策略的会聚性质后，在Horner-Wadsworth-Emmons偶联中14与62的化合得到α-β不饱和 的酯66。用(R)-CBS催化剂还原羰基，随后催化氢化，产生67。该C-9脱氧ΒΒ1中间体含有处于 正确氧化态的整个碳框架，其具有预安装的所有立体化学。仅需要TBS保护来实现C9脱氧 BB1类似物，其准备好进行MIDA硼酸酯去保护和与BB2偶联。
[0227] 参见方案18，图30。
[0228] 得到所有四个结构单元后，现在可以使用迭代交叉偶联平台装配它们以快速地产 生C9de0AmB大环内酯。我们预见到用Buchwald氏第2代SPhos环钯配合物、磷酸钾和3当量的 水使C9de0AmB(在用NaOH水解MIDA硼酸酯以后）与BB2化合会实现Suzuki-Miyaura交叉偶联 以形成BB1-BB2二聚体68。进行MIDA硼酸酯的频哪醇交换，随后与BB3进行第二个Suzuki偶 联(这次用XPhos-第2代环钯配合物），形成五烯69。在有钯第2代XPhos环钯配合物存在下用 氢氧化钠使MIDA硼酸酯原位释放出游离硼酸，形成C9deOAmB的所有碳直链的框架70。用氢 氧化锂将甲基酯70皂化以后，大环内酯化应当会然后得到大环内酯71。一系列保护基除去 应当会实现C9deOAmB的合成，所述保护基除去包括用TBAF-tBuOH复合物实现TMSE去保护、 用HF-吡啶实现总体去甲硅烷基化、用三氟乙酸实现脱缩酮化和用三甲基膦对C3'叠氮化物 的 Staudinger 还原。
[0229] 实施例6. C11-脱氧AmB ClldeOAmB的全合成
方案19。
[0230] 类似于得到AmB的策略，我们预见到起源于全合成努力的C8-脱氧AmB的合成。为了 实现该合成，需要做的对AmB合成的唯一变化是用ClldeOBBl替代BB1。我们预见到起源于醛 14 和β-酮勝酸酯 72 的Horner-Wadsworth-Emmons偶联的 ClldeOBBl 合成。
[0231] 我们预见到从α-羟基酯73的TBS甲硅烷基化开始合成ClldeOBBl。将锂化的甲基膦 酸二甲酯17加入该酯应当会得到β-酮膦酸酯72。在Horner-Wadsworth-Emmons偶联条件下， 72应当会与醛14反应。随后用Stryker氏试剂进行产生的α-β不饱和的羰基的还原，应当会 得到酮75。使75暴露于三仲丁基硼氢化锂进行非对映选择性的酮还原，随后将得到的醇酰 化，并将亚甲基二氧杂环己烧硼氢化，使ClldeOAmB准备好与ΒΒ2的Suzuki-Miyaura交叉偶 联。
[0232] 参见方案20，图31。
[0233] 得到所有四个结构单元后，现在可以使用迭代交叉偶联平台装配它们以快速地产 生ClldeOAmB大环内酯。我们预见到用Buchwald氏第2代SPhos环钯配合物、磷酸钾和3当量 的水使ClldeOBBl和BB2化合，实现Suzuki-Miyaura交叉偶联以形成BB1-BB2二聚体76。进行 MIDA硼酸酯的频哪醇交换，随后与BB3进行第二个Suzuki偶联(这次用XPhos-第2代环钯配 合物），形成五烯77。在有钯第2代XPhos环钯配合物存在下用氢氧化钠使MIDA硼酸酯原位释 放出游离硼酸，形成ClldeOAmB的所有碳直链的框架78。用氢氧化锂将甲基酯78皂化以后， 大环内酯化应当会然后得到大环内酯79。一系列保护基除去应当会实现ClldeOAmB的合成， 所述保护基除去包括用TBAF-tBuOH复合物实现TMSE去保护、用HF-吡啶实现总体去甲硅烷 基化、用三氟乙酸实现脱缩酮化和用三甲基膦对C3'叠氮化物的Staudinger还原。
[0234] 实施例7. C13-脱氧AmB C13de0AmB的全合成 参见方案21，图32。
[0235]合成C13de0AmB的一个方案呈现在图11中。在产生适当地保护的中间体后，可以将 C-13醇活化以用于通过转化成另一种缩酮一一硫代缩酮或消除成C-13，C-14二氢吡喃来还 原。在活化C-13醇后，然后可以将它还原成简单的氢原子。然后，一系列保护基除去会完成 C13de0AmB 的合成。
[0236] C13de0AmB的合成开始于海藻糖胺氮的Fmoc保护、所有醇的全甲硅烷基化（除了 C13缩酮作为TES甲硅烷基醚以外）和最后TMSE酯的Misunobu安装，以提供完全保护的中间 体80。然后，将C-13位置用乙硫醇和酸容易地转化成乙基硫代缩酮81。用mCPBA氧化81得到 亚砜，其可以在还原条件下用三乙基硅烷在DCM中除去。得到82后，一系列保护基除去可以 得到C13de0AmB，所述保护基除去包括用四丁基氟化铵实现的TMSE除去、用HF-吡啶复合物 实现的总体TES去甲硅烷基化、和用哌啶实现的最终Fmoc去保护。
[0237] 实施例8. C15-脱氧AmB C15de0AmB的全合成 参见方案22，图33。
[0238] 类似于得到AmB的策略，我们预见到起源于全合成努力的C15-脱氧AmB的合成。为 了实现该合成，需要做的对AmB合成策略的唯一变化是用C15de0AmB替代BB2。我们预见到起 源于用海藻糖胺糖供体24将烯丙型醇83(缺少C15醇)糖基化的C15de0BBl合成。
[0239]烯丙型醇83的合成开始于L-(-)_阿糖醇，并通过与BB2相同的合成顺序进行，一路 穿过非对映异位的基团选择性的内酯化，从而产生内酯86。从该分支点开始，甲基酯化，随 后活化C15-醇用于作为硫代羰基除去，并且被三丁基氢化锡和AIBN促进的得到的Barton-McCombie型脱氧应当会提供脱氧的内酯87。
[0240] 得到内酯87以后，在将87暴露于炭载钯和氢后，脱苄基，随后进行Pinnick氧化，然 后与TMS-乙醇进行Mitsunobu反应，应当会得到不同地取代的二-酯，其能够用氢氧化钠选 择性地皂化以提供酸88。88与草酰氯形成酰基氯，随后与双金属化的烯烃进行Stil le偶联， 应当会得到α_β不饱和的酮90。可以用CBS还原实现酮90至烯丙型醇83的非对映选择性还 原，准备好用于用24糖基化。利用受控的β-糖基化的邻接基促进作用平台，在有缓冲的氯_ 甲基吡啶鑰三氟甲基磺酸盐存在下使83和24化合，应当会得到具有优良的β选择性的91。 TDMB导向基团可以然后在六氟异丙醇、叔丁醇和二氯甲烷中暴露于CSA以后除去，从而显露 出游离的醇92。氧化、将得到的酮还原和甲硅烷基化的三步顺序应当会得到TBS醚93。碘-degermylation，随后暴露于二苯基磷酰氯和LiHMDS，可以得到乙稀酮缩醛膦酸酯95。与三 丁基锡烷的选择性Stille偶联应当会实现C15de0BB2的合成。
[0241] 参见方案23，图34;和方案24，图35。
[0242] 得到所有四个结构单元后，现在可以使用迭代交叉偶联平台装配它们以快速地产 生C15de0AmB大环内酯。我们预见到用Buchwald氏第2代SPhos环钯配合物、磷酸钾和3当量 的水使BB1和C15de0BB2化合，实现Suzuki-Miyaura交叉偶联以形成BB1-BB2二聚体96。进行 MIDA硼酸酯的频哪醇交换，随后与BB3进行第二个Suzuki偶联(这次用XPhos-第2代环钯配 合物），形成五烯97。在有钯第2代XPhos环钯配合物存在下用氢氧化钠使MIDA硼酸酯原位释 放出游离硼酸，形成C15de0AmB的所有碳直链的框架98。用氢氧化锂将甲基酯98皂化以后， 大环内酯化应当会然后得到大环内酯99。一系列保护基除去应当会实现C15de0AmB的合成， 所述保护基除去包括用TBAF-tBuOH复合物实现TMSE去保护、用HF-吡啶实现总体去甲硅烷 基化、用三氟乙酸实现脱缩酮化和用三甲基膦对C3'叠氮化物的Staudinger还原。
[0243] 实施例9. C15-脱氧AmB 选择性的酰化 参见方案25，图36。
[0244] 在图13中概述了可以得到C15de0AmB的第二个策略。在产生适当地保护的中间体 后，选择性的酰化反应可以仅提供C15酰基衍生物。得到该差别地保护的醇后，将剩余醇保 护，随后去酰化和将现在的游离C-15醇脱氧，可以得到中间体，其仅在一系列去保护后得到 C15de0AmB〇
[0245] 如在方案25中所示，从AmB开始，一系列保护基操作得到适当地保护的中间体100， 所述保护基操作包括苯基酰基形成、甲基缩酮形成、使用重氮甲烷的甲基酯化和C，3-C，5二 醇和C，9-C，11二醇选择性形成缩醛(作为对甲氧基苄基缩醛）。由DMAP催化的对硝基苯基酸 酐对100的酰化，会选择性地酰化C-15位置。得到该差别地保护的醇101后，剩余醇的全甲硅 烷基化、随后去酰化、现在游离的C-15醇活化为硫代羰基、和三丁基氢化锡和AIBN促进的基 团脱氧的顺序应当会得到中间体102。用HF-吡啶实现的TES基团除去、随后CSA催化的缩酮 水解、用氢氧化锂实现的甲基酯皂化和最终的酶促去酰化的最终去保护顺序会得到 C15de0AmB〇
[0246] 实施例10. C3 ' -去氨基AmB 混合合成 参见方案26，图37。
[0247] C3'deAAmB的合成是基于我们的小组以前在C2'脱氧AmB的合成中利用的 amphoternolide 103的糖基化策略。Wilcock, BC等人，J Am Chem Soc 135:8488 (2013)。我们预见到用去氨基糖供体104将103糖基化会得到C3'去氨基AmB的全碳框架。随 后的保护基除去应当会提供对该衍生物的有效得到。
[0248] 104的合成开始于PMB醚105,其可如在方案8中所概述的那样得自2-呋喃基甲基 酮。用氢化物将环氧化物105开环，会选择性地产生C2 '醇106。使用EDC和DMAP引入ZDMB导向 基团，随后对剩余醇进行TBS甲硅烷基化，得到吡喃107 JMB保护基的DDQ除去和交换成三氯 乙酰亚氨酸酯产生C3'去氨基糖供体104。得到104后，我们预见到糖基化在缓冲的氯-甲基 吡啶鑰三氟甲基磺酸盐条件下以特别的β选择性进行，得到109。我们然后预见到ZDMB导向 基团在Staudinger条件下用三甲基膦除去。醇110的氧化、还原顺序然后反转在C2'处的立 体化学并提供醇111。用HF-吡啶实现的去甲硅烷基化、用Pd(PPh 3)4和硫代水杨酸实现的烯 丙基酯除去、以及在水和二甲基亚砜(DMS0)中的甲基缩酮水解CSA的去保护顺序应当会得 到C3'deAAmB。
[0249] 实施例11. C4'_脱氧AmB 混合合成 参见方案27，图38。
[0250] C4'deOAmB的合成是基于我们的小组以前在C2'脱氧AmB的合成中利用的 amphoternolide 103的糖基化策略。Wilcock, BC等人，J Am Chem Soc 135:8488 (2013)。我们预见到用脱氧的糖供体112将103糖基化会得到C4'脱氧AmB的全碳框架。随后 的保护基除去应当会提供对该衍生物的有效得到。
[0251] 112的合成开始于PMB醚113,其可如在方案8中所概述的那样得自2-呋喃基甲基 酮。用叠氮化钠将环氧化物113有效地开环，随后使用EDC和DMAP引入ZDMB导向基团，产生 TBS醚114。我们然后预见到用HF处理后的去甲硅烷基化会提供在C4'处的游离醇。C4'醇然 后可以在活化成硫代羰基、随后用三丁基氢化锡和AIBN进行基团脱氧的两步程序以后除 去，得到叠氮化物115 JMB保护基的DDQ除去和交换成三氯乙酰亚氨酸酯然后产生C4'脱氧 糖供体112。得到112后，我们预见到糖基化在缓冲的氯-甲基吡啶鑰三氟甲基磺酸盐条件下 以特别的β选择性进行，得到117。我们然后预见到ZDMB导向基团在Staudinger条件下用三 甲基膦除去，伴随地将C3'叠氮化物还原成胺。用Fmoc-琥珀酰亚胺的再保护然后提供醇 118。醇#的氧化、还原顺序然后反转在C2'处的立体化学并提供醇119。用HF-吡啶实现的去 甲硅烷基化、用Pd(PPh 3)4和硫代水杨酸实现的烯丙基酯除去、以及在水和二甲基亚砜 (DMS0)中的甲基缩酮水解CSA的去保护顺序应当会得到C4' deOAmB。
[0252] 实施例12.生物活性的体外评估 对本文中提出的每种衍生物试验了针对酵母和人细胞的生物活性以确定它的治疗指 数。肉汤微量稀释实验会确定每种衍生物对酿酒酵母和临床上有关的白假丝酵母菌的MIC (最小抑制浓度），由此确立每种新衍生物的抗真菌活性。为了试验对人细胞的毒性，将每种 化合物暴露于针对红血细胞的溶血测定，其确定造成90%的人红血细胞裂解所需的浓度 (EH 9Q)。另外，将每种化合物暴露于人原代肾小管细胞以确定每种化合物对肾细胞的毒性。 这些测定当与AmB对相同细胞系的已知值进行对比时会确定每种化合物的治疗指数的提 尚。
[0253] 实施例13.生物活性的体内评估 在播散性念珠菌病的小鼠模型中试验了AmBMU和AmBAU的抗真菌效力。在该实验中，用 白假丝酵母菌经由尾静脉感染中性白细胞减少症小鼠，然后在感染后2小时，用单次腹膜内 注射的AmB、AmBMU或AmBAU治疗小鼠。然后，在感染后2、6、12和24小时，将小鼠处死，并定量 在它们的肾中存在的真菌负荷。结果显示在图39中。AmBMU和AmBAU在所有三个试验剂量 (即，1、4和16 mg/kg)在减小存在于肾中的真菌负荷方面都比AmB显著地更有效。在接种后 24小时，在16 mg/kg剂量的差异是最显著的。与AmB相比，AmBMU使真菌负荷减小了 1.2个对 数单位(P < 0.001 )，且AmBAU使真菌负荷减小了接近3个对数单位(p < 0.0001)。我们推测， 改善的药理学特性(可能归因于极大地增加的水溶性)可能促进所述新化合物的体内抗真 菌活性的预料不到的且显著的提高。
[0254] 在单独的一组实验中，如下评价了急性毒性:将l、2、4、8、16、32S64mg/kgAmBS 它的衍生物单次静脉内施用给健康的小鼠，随后监测致死率。结果显示在图40中。在4 mg/ kg AmB剂量组中的所有小鼠在几秒内死亡。AmBAU具有显著低的毒性，在64 mg/kg剂量组之 前没有达到>50%致死率。惊人的是，施用64 mg/kg AmBMU的所有小鼠存活，没有可观察到的 毒性。
[0255] 参考文献



【主权项】
1 .AmBMU或其药学上可接受的盐5. C9deOAmB或其药学上可接受的盐9. C13deOAmB或其药学上可接受的盐D13.化合物X15. 如在说明书和附图中公开的制备化合物1的方法。16. 根据方案2中所示的六种转化中的任一种制备两性霉素 B的C16脈衍生物的方法：1;且 R的每个例子独立地选自氨、面素、直链和支链烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、芳 基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、径基、琉基、簇基、氨基、酷氨基、叠氮基、硝基、氯基、氨基烧 基和烷氧基。17. 如在说明书和附图中公开的制备AmBMU的方法。18. 如在说明书和附图中公开的制备AmBAU的方法。19. 如在说明书和附图中公开的制备AmBCU的方法。20. 如在说明书和附图中公开的制备C3deOAmB的方法。21. 如在说明书和附图中公开的制备C9deOAmB的方法。22. 如在说明书和附图中公开的制备巧deOAmB的方法。23. 如在说明书和附图中公开的制备CSdeOAmB的方法。24. 如在说明书和附图中公开的制备ClldeOAmB的方法。25. 如在说明书和附图中公开的制备C13deOAmB的方法。26. 如在说明书和附图中公开的制备C15deOAmB的方法。27. 如在说明书和附图中公开的制备C3 'deN出AmB的方法。28. 如在说明书和附图中公开的制备C4 ' deOAmB的方法。29. -种抑制真菌的生长的方法，所述方法包括使真菌与有效量的权利要求1-12中的 任一项所述的化合物接触。30. -种治疗对象中的真菌感染的方法，所述方法包括给有此需要的对象施用治疗有 效量的权利要求1-12中的任一项所述的化合物。31. 权利要求30所述的方法，其中口服地或静脉内地施用所述化合物。32. 权利要求30所述的方法，其中口服地施用所述化合物。33. 权利要求30所述的方法，其中静脉内地施用所述化合物。34. -种药物组合物，其包含权利要求1-12中的任一项所述的化合物;和药学上可接受 的载体。35. 权利要求34所述的药物组合物，其中所述药物组合物是口服或静脉内剂型。36. 权利要求34所述的药物组合物，其中所述药物组合物是口服剂型。37. 权利要求34所述的药物组合物，其中所述药物组合物是静脉内剂型。
【文档编号】C07H17/08GK105848721SQ201480065533
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2014年10月6日
【发明人】M.D.伯克, S.戴维斯, B.E.尤诺, J.斯特鲁布尔, I.戴利, K.C.格雷, D.M.克纳普, P.王, N.帕尔亚姆
【申请人】伊利诺伊大学评议会