菊苣酸在制备防治登革热Ⅱ型病毒感染的药物中的应用
【专利摘要】本发明涉及菊苣酸在制备防治登革热Ⅱ型病毒感染的药物中的应用。该应用中所述的药物由菊苣酸和医学上可接受的辅料组成，其中菊苣酸用在药物中的质量百分含量为10％～60％。本发明所述的药物具有抗Ⅱ型登革热病毒的作用，可用于防治登革热感染。
【专利说明】
菊苣酸在制备防治登革热Π 型病毒感染的药物中的应用
技术领域
[0001] 本发明涉及含有机有效成分的医药制品，具体涉及含酚酸类化合物的药物。
【背景技术】
[0002] 登革病毒在分类上属黄病毒科、黄病毒属。包括4个不同血清型，即I、Π 、m、IV型 登革病毒。在黄病毒科的70多个成员中，登革病毒是流行区域最广、发病最多、危害较大的 一种虫媒病毒，其主要的传播媒介是埃及伊蚊和白纹伊蚊，登革病毒感染多在热带与亚热 带地区流行爆发。登革热由登革病毒(dengue virUS，DV)引起，根据临床表现严重程度的不 同，分为登革热（DF)、登革出血热（DHF)、登革休克综合征(dengue shock syndrome，DSS)三 种临床类型。据世界卫生组织统计，全球每年有50万人感染登革热，死亡约2.5万人，大约有 25-30亿人口处于登革病毒的威胁之下。登革热也是广州市重点防控的传染病之一，2014年 广州省发生大规模的暴发流行，疫情呈现发生早、扩散快、波及范围广等特点。据统计广州 市全年报告病例数为近20年累计病例报告病例的3倍，2015年潮州市登革热疫情也较为严 重。2014年广东省登革热疫情累计报告病例愈四万余人，爆发地疾控部门日均检测需求高 达数千份。该病已经严重影响了我市人民的身体健康和社会经济发展。由于目前尚无登革 热疫苗，也缺乏相应的抗病毒药物，如何应对这一新发传染病已成为医药学界亟需应对的 重大课题。
[0003] 菊苣酸是从菊科植物菊苣干燥全草提取的一种水溶性酚酸类化合物，其分子式为 C22H18O12,熔点为206°C，旋光度为[α]+383·5° (MeOH，C: 1.555mol/l)，密度：1.641g/cm3。易 溶于乙醇、甲醇、二恶烷和丙酮，微溶于乙酸乙酯和醚，不溶于苯和氯仿。在热水中易溶，但 在温度为20°C时，仅有0.5%可溶。具有抗炎、增强免疫功能和诱导细胞凋亡的作用，并能抑 制透明质酸酶，保护胶原蛋白免受可导致降解的自由基的影响，对糖尿病、高血脂、动脉粥 样硬化症、高尿酸血症及脂肪肝等具有改善作用。作为一种非竞争性、可逆的与氨基酸相互 作用的整合酶抑制剂，菊苣酸具有抑制HIV病毒、抗炎、抗病毒、抗癌、抗真菌等作用，尤其对 病毒具有较好的选择性。但是，目前文献报道中还没有出现菊苣酸抗登革热病毒活性的报 道。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决的技术问题是提供菊苣酸的新用途，即在制药中的新应用。
[0005] 上述在制药中的新应用为，菊苣酸在制备防治登革热Π 型病毒感染的药物中的应 用，其中，所述的菊苣酸的化学结构如下式(I)所示：
[0006]
[0007] 上述应用中，所述的菊苣酸可以采用常规的方法从天然植物提取，也可以由合成 或其他方法制得。
[0008] 上述应用中，所述的药物由菊苣酸和医学上可接受的辅料组成，其中，菊苣酸在药 物中的质量百分含量为10%~60%。
[0009] 上述应用中，所述的药物可以是临床上可接受的注射剂、胶囊剂或片剂。
[0010] 本发明所述的注射剂、胶囊剂和片剂具有抗Π 型登革热病毒的作用，可用于防治 登革热感染。
[0011] 本发明用菊苣酸抗登革热病毒是采用细胞病变抑制法测定菊苣酸对登革热Π 型 病毒的抑制作用，观察菊苣酸对BHK-21细胞的毒性作用和对登革热Π 型病毒的抑制作用， 利用CCK-8检测试剂测得受试药物的半数有毒浓度（CC5q)为714.9,半数最大效应浓度 (EC 5q)为8.19，其选择指数SI是87.29，为低毒高效。具体实验方法如下所述。
[0012] 1.实验材料
[0013] 1.1细胞株乳仓鼠肾细胞(BHK-21)，引自武汉病毒研究所，Tll代。本室冻存保种。
[0014] 1.2实验组及其对应的受试药物
[0015]受试样品：取购于上海源叶生物科技有限公司（L0T:P29N3R1)的菊苣酸，加入含 0.5%DMS0的DMEM培养基溶解，制得每毫升含菊苣酸0.85mg的药液。
[0016] 1.3病毒株登革二型病毒引自武汉病毒研究所
[0017] 1.3试剂和仪器新生小牛血清及DMEM培养基(Gibco公司）；DMS0(广州市康洋化工 有限公司）；胰蛋白酶(美国DIFCO公司；上海生工生物工程公司代理）Wlympus PM-6倒置显 微镜（日本OLYMPUS公司）；E-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂）；BP221S电子分析天平 (上海精密仪器表有限公司）。
[0018] 2.方法
[0019] 2.1菊苣酸在BHK-21细胞上毒性浓度的测定
[0020] 将密度为0.5X IO5CelVml BHK-21细胞接种于96孔细胞培养板中，每孔100yL。生 长24h细胞成片(80-90%)贴壁后备用。将药物用细胞维持培养液(含2%血清)从连续2倍梯 度稀释6个梯度，每孔加入所制备的药液100yL，设正常细胞对照，每孔加入IOOyL细胞维持 培养液。设溶剂对照组，于37 °C的5 %⑶2培养箱中培养。加药培养48h后加入含IOOyL 10 % CCK-8试剂的培养基，在37 °C孵育Ih。按照下面方法计算：
[0021] 以450nm检测吸光度，药物对细胞的毒性以细胞的活性表示，计算公式：
[0022] 细胞活率（％ )=(药物组-空白对照)/(细胞对照-空白对照）X 100%。
[0023] 2.2病毒抑制率的测定
[0024]选择生长旺盛、成层良好细胞，倾弃生长液，加入胰酶消化，用生长液分散使细胞 悬液浓度为IO5个/孔。用移液器将细胞悬液加入96孔板中，每孔100uL。将培养板置于培养 箱中培养12~18小时，待细胞在96孔板中长成单层后，吸去培养液，每孔加入IOOul的不同 稀释浓度的药物和IOOuL的IOOTCID 5q病毒液，每一药物浓度设置3个复孔，同时设置空白对 照组、正常细胞对照组、病毒对照组和阳性对照组，置于培养箱中孵育lh，吸去含药培养液 和病毒液。在病毒对照组75 % -100 %病变时吸去维持液，加入IOOyL 10 % CCK-8，在酶标仪 450nm测定吸光度，计算药物的病毒抑制率。
[0025] 病毒抑制率=(试验组平均OD值-病毒对照组平均OD值)/(细胞对照组平均OD值- 病毒对照组平均OD值）X 100%
[0026] 3.结果
[0027] 3.1药物毒性结果见下表1。
lwww」 I . 二 5 口 i^rj y-f^- //χ^ >y^j /y | 上? 二 7幻-外人 ~T·^ /\'J y|/y -<~φ? >y^j \ι y_ 」φ? |J 1J | 卜厂口 〇 ?^Ρ? y 大于2,可用于制备登革热的治疗和预防药物。
【具体实施方式】 [0034]例1:(注射剂）
[0035] 取菊苣酸1000 mg，加枸橡酸1000 mg，枸橡酸钠500mg，氯化钠1800mg，加 1000 ml的注 射用水，搅拌使溶解，除菌滤过，灌封，经100 °C 15分钟流通蒸汽灭菌，制成每支2mg/2ml的注 射液供注射使用。
[0036]例2:(胶囊剂）
[0037] 取菊苣酸5000mg与4000mg微晶纤维素、500mg羧甲基淀粉钠、400mg十二烷基硫酸 钠等辅料充分混合，采用辊压法进行干法制粒，再与适量硬脂酸镁混匀，填充入3#空心胶 囊，制成规格为IOOmg/粒的胶囊剂供口服使用。
[0038]例3:(片剂）
[0039] 取菊苣酸5000mg与4000mg淀粉、200mg交联PVP、300mg羧甲基淀粉钠混合均匀，用 5 % PVP的75 %乙醇溶液作为粘合剂，制软材，以18目筛制粒，60 °C干燥后Ih，20目整粒后加 入适量滑石粉，混匀，压片，制成规格为IOOmg/片的片剂供口服使用。
【主权项】
1. 菊苣酸在制备防治登革热π型病毒感染的药物中的应用，其中，所述的菊苣酸的化 学结构如下式(I)所示：2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于:所述的药物由菊苣酸和医学上可接受的辅 料组成，其中菊苣酸用在药物中的质量百分含量为10%~60%。3. 根据权利要求2所述的应用，其特征是，所述的药物是注射剂、胶囊剂或片剂。
【文档编号】A61K31/216GK105943529SQ201610508441
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年6月29日
【发明人】李耿, 赖小平, 吴建国
【申请人】广州中医药大学