皮肤保湿用组合物的制作方法
【专利摘要】本说明书的一个方面提供一种包含竹汁液和甜菜碱(Betaine)作为有效成分的皮肤保湿用组合物，具体而言，所述组合物旨在提供一种调节天然保湿因子(Natural Moisturizing Factors,NMFs)、表现出皮肤保湿效果、对皮肤保湿有效的化妆品组合物、药物组合物或健康食品组合物。
【专利说明】
皮肤保湿用组合物
技术领域
[0001 ]本发明的一个方面公开一种对皮肤保湿有效的组合物。
【背景技术】
[0002] 皮肤作为存在于身体的最外侧并具有保护人体的功能的器官，阻止我们身体损失 水分和电解质，保护不受外部异物浸透。皮肤分为表皮层、真皮层和皮下脂肪层。表皮层由 角质细胞构成，表皮层的最外侧的角质层对物质的透过发挥极其重要的作用。
[0003] 表皮由基底层、有棘层、颗粒层以及角质层构成。角质层由角质细胞与细胞间基质 构成，角质层阻止水分流失到外部，另外，只有保持适当的水分，才能执行适宜的功能。位于 角质层的皮肤壁皇由神经酰胺、脂肪酸、胆固醇构成，具有抑制外部异物的浸透，并阻止经 表皮水分流失（Transepidermal Water Loss ;TEWL)的功能。而且，天然保湿因子(Natural Moisturizing Factor:NMF)存在于角质层，被认为对皮肤的保湿承担重要作用。如果考查 表皮层的水分含量，在基底层与有棘层中存在约70%的水分含量，在颗粒层存在30~50% 的水分含量，在角质层存在15~30%的水分含量（Journal of Investigative Dermatology, 116,434442,2001)。即，表皮内水分含量显示出越向上部越逐渐减少的皮肤 水分梯度（skin water gradient)。
[0004] 另外，皮肤由于存在于人体的最外层，因而慢性地暴露于大气污染、干燥环境、紫 外线、风、化学物质等。这种条件使皮肤暴露于持续的渗透压威胁，促进了更加干燥的皮肤。 最近，随着拥有干燥皮肤的人的增加，保湿剂的必要性呈正在增加的趋势。
[0005] 现有技术文献
[0006] 专利文献
[0007] 专利文献1:韩国注册专利第10-0439868号
【发明内容】
[0008] 本说明书的一个方面旨在提供一种对皮肤保湿有效的皮肤保湿用组合物。
[0009] 本说明书的另一方面旨在提供一种调节天然保湿因子(Natural Moisturizing Factors，NMFs)的组合物。
[0010] 本说明书的另一方面旨在提供一种通过增加聚丝蛋白（filaggrin)基因表达量和 增加聚丝蛋白分解酶(博莱霉素水解酶(bleomycin hydrolase))基因表达量中一种以上而 调节天然保湿因子的组合物。
[0011] 另外，本说明书的另一方面旨在提供一种对皮肤保湿有效的化妆品组合物、药物 组合物或健康食品组合物。
[0012] 在此基础上，本说明书的另一方面旨在提供一种皮肤保湿用套装，包括:包含竹汁 液的第一组合物;及包含甜菜碱的第二组合物。
[0013] 本发明的一个方面旨在提供一种皮肤保湿用组合物，其中，包含竹汁液和甜菜碱 (Betaine)作为有效成分。
[0014] 本发明的另一方面旨在提供一种天然保湿因子（Natural Moisturizing Factors，NMFs)调节用组合物，其中，包含竹汁液和甜菜碱(Betaine)作为有效成分。具体而 言，所述有效成分通过增加聚丝蛋白（filaggrin)基因表达量和增加聚丝蛋白分解酶(博莱 霉素水解酶(bleomycin hydrolase))基因表达量中的一种以上而调节天然保湿因子。
[0015] 本发明的再一方面旨在提供一种组合物，其中，所述竹汁液为斑竹 (Phyllostachys bambusoides)、毛金竹（Phyllostachys nigra var.henonis)和毛竹 (Phyllostachys pubescens)中的任一种以上的树液。
[0016] 本发明的再一方面旨在提供一种组合物，其中，所述甜菜碱为甘氨酸甜菜碱。
[0017] 本发明的再一方面旨在提供一种组合物，其中，所述作为有效成分的竹汁液与甜 菜碱的重量比为1:0.1~1:10。
[0018] 本发明的再一方面旨在提供一种组合物，其中，以组合物总重量为基础，所述竹汁 液与甜菜碱分别为0.001~80重量％。
[0019] 本发明的再一方面旨在提供一种组合物，其中，所述组合物为化妆品组合物、药物 组合物或健康食品组合物。具体而言，旨在提供一种组合物，其中，所述药物组合物用于特 应性皮炎、皮肤干燥症、干性湿疹、干癣和着色性干皮症中的任一种以上的皮肤干燥疾病的 治疗或预防。
[0020] 本发明的再一方面旨在提供一种皮肤保湿用套装，其中包括:包含竹汁液的第一 组合物;及包含甜菜碱的第二组合物。
[0021] 本发明的一个方面的组合物对皮肤保湿具有显著效果。
[0022] 本发明的一个方面的组合物具有调节天然保湿因子（Natural Moisturizing Factors，NMFs)的效果。
[0023]本发明的一个方面的组合物具有使聚丝蛋白（filaggrin)基因表达量增加的效 果。
[0024] 本发明的一个方面的组合物具有使聚丝蛋白分解酶(bleomycin hydrolase)基因 表达量增加的效果。
【附图说明】
[0025] 图1比较了同时处理竹汁液与甜菜碱(Betaine)后角质形成细胞的聚丝蛋白和聚 丝蛋白分解酶(bleomycin hydrolase ;BH)的基因表达量。
[0026] 图2比较了同时处理竹汁液与甜菜碱(Betaine)后角质形成细胞的天然保湿因子 (NMF)的量。
[0027]图3测量了将含有竹汁液和甜菜碱(betaine)的剂型涂布于皮肤后的水分量。
【具体实施方式】
[0028]角质层的主要功能是担负阻止皮肤的水的蒸发或阻止来自外部的有害物质的浸 透而保护皮肤的功能。特别是角质层存在大致相当于干燥重量约30%的水，其中20%存在 于角质细胞(corneocyte)内，10%存在于细胞间基质。角质细胞(corneocyte)内的水与聚 丝蛋白分解的天然保湿因子(Natural moisturezing Factors，NMFs)结合而存在。特别是 聚丝蛋白为了转换成NMF所需的酶为博来霉素水解酶(bleomycin hydrolase)，该酶在特应 性皮炎与干燥皮肤中减少。
[0029] 竹汁液与甜菜碱(betaine)在本发明中用作保湿原料。在此基础上，本发明观察 到，当在竹汁液中一同使用甜菜碱(betaine)时，使角质层的NMF成分显著增加，与单独使用 时相比，角质层的水分量更加显著增加。
[0030] 即，本发明在一个方面发现，复合性地提高竹汁液的促进聚丝蛋白生成的功能与 甜菜碱(betaine)的活化聚丝蛋白分解酶(bleomycin hydrolase)的功能，对保湿具有显著 效果。
[0031] 在本发明的一种观点中，涉及一种皮肤保湿用组合物，其中，包含竹汁液与甜菜碱 (Betaine)作为有效成分。
[0032] 在本发明的一种观点中，涉及竹汁液与甜菜碱(Betaine)在制造用于增进皮肤保 湿的组合物中的应用。
[0033] 在本发明的一种观点中，涉及一种天然保湿因子（Natural Moisturizing Factors，NMFs)调节用组合物，其中，包含竹汁液与甜菜碱(Betaine)作为有效成分。
[0034] 在本发明的一种观点中，涉及竹汁液与甜菜碱(Betaine)在制造用于调节天然保 湿因子(Natural Moisturizing Factors,NMFs)的组合物中的应用。
[0035] 具体而言，涉及一种天然保湿因子(Natural Moisturizing Factors，NMFs)调节 用组合物，其中，所述有效成分通过增加聚丝蛋白（filaggrin)基因表达量和增加聚丝蛋白 分解酶(bleomycin hydrolase)基因表达量中的某一者以上而调节天然保湿因子。
[0036] -般而言，竹汁液是在竹子栽培过程中，为了帮助生长而周期性地切割期间，作为 副产物而生成的，含有成分组成比一般因栽培的地区或竹子的种类、采集时期等环境因素 而异，但已知含有蛋白质(0.08~0.7%)丐(422mg/l)、糖（1.6~2.7g/l)和氨基酸(7.6~ 3〇11^/1)等4!1约为4.5左右。
[0037] 在本发明的另一观点中，所述竹汁液可以从所有竹子中获得，但从收率方面而言， 优选从作为采集量相对较多的有用竹种的斑竹(Phyllostachys bambusoides)、毛金竹 (Phyllostachys nigra var.henonis)和毛竹（Phyllostachys pubescens)中米集。米集方 法正如通常所知，在竹子根部，截断第一节或第二节(高度：10~20cm)的节紧上方部位，附 着容器进行采集，可以用过滤布对其进行过滤而使用。所述过滤物可以进行灭菌处理而用 于化妆品组合物。另外，还可以直接使用或制成粉末而使用。竹汁液的采集优选在5~6月左 右进行。
[0038] 另一方面，预处理方法可以是将刚采集后的竹汁液用具有0.001~0.45μπι孔径大 小(pore size)的滤膜，优选用具有0.2μπι孔径大小的滤膜过滤后，在滤液中，按7.0重量％ 以上的量，优选按7.0~50重量％的量添加无水乙醇。此时，当滤膜的孔径大小不足0. ΟΟΙμπι 时，过滤所需时间耗时长，当超过0.45μπι时，过滤效率下降，存在不够有效的问题。
[0039] 即，借助于利用滤膜进行过滤，去除竹汁液中存在的菌、微生物和因微生物而使得 营养成分长期保存时有沉淀、变性可能性的大分子量蛋白质后，添加无水乙醇，抑制酶的活 性，防止变色和变臭。
[0040] 预处理的竹汁液在氮气氛围下密封，使得防止外部的菌或微生物的侵入后，在实 际使用时开封使用。
[0041] 在本发明中，可以将该竹汁液直接用作皮肤保湿用化妆品或药物组合物的有效成 分，或在使用前首先进行预处理而使得在保管时不变色和不变臭，然后用作有效成分。
[0042]以所述方法进行预处理的竹汁液可以用作皮肤保湿用组合物的有效成分。
[0043]在本发明的另一观点中，甜菜碱(Betaine)是对在一个分子内具有作为阳离子的 季铵和酸特别是羧酸的阴离子的分子内盐的一般名称。但是，在溶液中或结合状态下，实际 上以两性离子存在，被认为是具有羧酸的氢氧化季铵化合物的脱水物。在本发明中，水合物 也有被称为甜菜碱的情形。甜菜碱一般为熔点或分解点较高的结晶，由于具有极性，因而为 水溶性。易溶于水，水溶液(1-20)的pH为5 · 0~7 · 0。作为鱿鱼、章鱼等的鲜味（口1 )成分 而在水产加工品中用作调味品。甜菜碱广泛分布于动植物界，在鱼类的肌肉中存在0.1%以 下，但在作为无脊椎动物的鱿鱼、章鱼、虾等的肌肉中，比鱼类含量多，此外，也在甜菜或豆 类、萝卜、枸杞等中含有。作为甜菜碱的主要功能，具有抗脂肪肝作用与降血压、降血糖作用、 恢复视力、解毒作用、细胞复制功能等。特别是刺激胰腺的胰岛，促进胰岛素分泌，除治疗因 酒精而损伤的脂肪肝的抗脂肪肝作用外，还生成肉毒碱(carnitine)，发挥保护肾脏的作 用。另外，阻碍如果血液内含量升高则诱发心脏疾病的高半胱氨酸(homocysteine )，预防诸 如粥样动脉硬化(atherosclerosis)的心血管系统疾病。
[0044] 在本发明的一个方面，甜菜碱根据氨基酸的种类而可以分类为甘氨酸甜菜碱、组 氨酸甜菜碱、脯氨酸甜菜碱、酪氨酸甜菜碱、苯丙氨酸甜菜碱、色氨酸甜菜碱、亮氨酸甜菜 碱、异亮氨酸甜菜碱、缬氨酸甜菜碱、丙氨酸甜菜碱、甜菜碱谷氨酸盐、甜菜碱天冬氨酸盐、 赖氨酸甜菜碱、甜菜碱精氨酸等并进行使用。
[0045] 在一个方面，本发明中使用的甜菜碱可以使用烷基甜菜碱类、烷基酰胺甜菜碱类、 烷基磺基甜菜碱类、咪唑啉甜菜碱类等。具体而言，可以使用烷基-N-甜菜碱、烷基-N-磺基 甜菜碱、酰基-N-甜菜碱、烷基-N-取代氨基丙酸和烷基咪唑啉甜菜碱等。
[0046] 优选地，可以使用甘氨酸甜菜碱，即三甲基甘氨酸。
[0047] 另外，在一个方面，本发明可以包括所述甜菜碱的衍生物。例如，可以使用有机酸 盐、无机酸盐、碱基盐等。具体而言，可以使用甜菜碱盐酸盐、甜菜碱氢溴酸盐、甜菜碱氢碘 酸盐、甜菜碱氯金酸盐、甜菜碱酰肼盐酸盐等。
[0048] 在本发明的又一观点中，其特征在于，所述混合物的竹汁液与甜菜碱的重量比为 1:0.1 ~1:10〇
[0049] 在一种观点中，竹汁液与甜菜碱的重量比可以为1:0.1以上、1:0.2以上、1:0.3以 上、1:0.4 以上、1:0.5 以上、1:0.6 以上、1:0.7 以上、1:0.8 以上、1:0.85 以上、1:0.90 以上、1: 0.92以上、1:0.94以上、1:0.96以上、1:0.98以上或1:1以上。
[0050] 在一种观点中，竹汁液与甜菜碱的重量比可以为1:1以下、1:9以下、1:8以下、1:7 以下、1:6以下、1:5以下、1:4以下、1:3以下、1:2以下、1:1.8以下、1:1.6以下、1:1.4以下、1: 1.2以下或1:1.0以下。
[0051] 当竹汁液与甜菜碱的重量比为所述范围内时，与竹汁液或甜菜碱单独使用的情形 相比，皮肤保湿效果显著优秀，特别是天然保湿因子(Natural Moisturizing Factors， NMFs)显著增加。
[0052] 本发明的组合物可以在多样的领域无特殊限制地利用，例如，可以制剂成皮肤外 用剂，具体而言，可以制剂成化妆品或药物组合物的形态。
[0053]以组合物总重量为基础，本发明一个方面的组合物可以包含0.001重量％~80重 量％，具体而言，可以包含0.005重量％~60重量％，更具体而言，可以包含0.01重量％~30 重量％的竹汁液与甜菜碱的混合物。当以所述范围包含时，不仅适合于显示本发明所追求 的效果，而且可以全部满足组合物的稳定性和剂型安全性，在相对于费用的效果方面，以所 述范围包含也会适合。具体而言，当竹汁液与甜菜碱的混合物不足0.001重量％时，无法获 得充分的皮肤保湿效果，当超过80重量％时，安全性和剂型稳定性会下降。
[0054] 本发明的一个方面提供一种包含竹汁液与甜菜碱的混合物作为有效成分的化妆 品组合物。所述化妆品组合物可以增进皮肤保湿效果，包括功能性化妆品组合物。
[0055] 本发明的化妆品组合物可以制剂成在油或水性介质中形成溶液、悬浮液或乳化液 的形态，或在使用之前用无菌、去除了发热物质的水进行溶解而使用的干燥粉末的形态。油 包水型乳化液是以诸如橄榄油的植物性油或诸如液态石蜡的矿物性油为油相，将大豆卵磷 脂等自然产磷脂和像失水山梨醇单油酸酯那样来源于己糖醇酐或脂肪酸的酯者、像聚氧乙 烯山梨醇单油酸酯
那样将来源于己糖醇 酐和脂肪酸的部分酯与环氧乙烷缩合的化合物用作乳化剂，使活性成分乳化。
[0056] 在一个实施例中，在本发明的化妆品组合物中，以组合物总重量为基准，竹汁液与 甜菜碱混合物的含量可以为〇 . 〇〇1~80重量％。在提取物的含量不足0.001重量％的情况 下，皮肤保湿效果微弱，在超过80重量％时，因添加混合物导致效率性下降，会诱发剂型稳 定性等问题。
[0057]各剂型的化妆品组合物除有效成分之外，所属领域的技术人员可以根据剂型或使 用目的，毫无困难地适当选定相应领域通常使用的成分进行配合，当与其它原料同时应用 时，会出现协同效应。
[0058] 在所述组合物制剂成化妆品的形态的情况下，可以用作皮肤保湿的目的。所述化 妆品剂型不特别限定，例如，可以是柔软化妆水、营养化妆水、按摩霜、营养霜、面膜、凝胶或 具有皮肤贴附型化妆品的剂型的化妆品组合物，另外，也可以是诸如乳液、软膏、凝胶、霜、 贴片或喷雾剂的透皮型剂型。另外，在各个剂型中，不同成分可以根据其它化妆品组合物的 种类或使用目的等，由所属领域的技术人员毫无困难地适当选定进行配合。
[0059] 本发明的一个方面提供一种包含竹汁液与甜菜碱的混合物作为有效成分的药物 组合物。所述药物组合物对多样的皮肤干燥性疾病有效果。具体而言，所述药物组合物可以 用于特应性皮炎、皮肤干燥症、干性湿疹、干癣和着色性干皮症等中的任一种以上，但本发 明的治疗用途并非限定于此，只要是与皮肤干燥相关的皮肤疾病则均可使用，这是所属领 域的技术人员不言而喻的。
[0060] 本发明一个方面的药物组合物可以通过口服、非口服、直肠、局部、透皮、静脉内、 肌肉内、腹腔内、皮下等给药。
[0061] 用于口服给药的剂型可以为片剂、丸剂、软质和硬质胶囊剂、颗粒剂、散剂、微粒 剂、液剂、乳浊剂或颗粒剂，但并非限定于此。这些剂型除有效成分之外，还可以含有稀释剂 (例:乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、纤维素或甘氨酸）、润滑剂(例:二氧化硅、滑石、 硬脂酸或聚乙二醇)或结合剂(例:硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤 维素钠或聚乙烯吡咯烷酮）。根据情况，可以含有崩解剂、吸收剂、着色剂、香味剂或甜味剂 等药剂学的添加剂。所述片剂可以借助于通常的混合、颗粒化或涂布方法而制造。
[0062] 用于非口服给药的制剂可以是注射剂、点滴剂、乳液、软膏、凝胶、霜、悬浮剂、乳 剂、栓剂、贴片或喷雾剂，但并非限定于此。
[0063] 本发明一个方面的药物组合物的有效成分，根据给药对象的年龄、姓别、体重、病 理状态及其严重度、给药途径或处方者的判断而异。基于这种因素来决定适用量，是所属领 域的技术人员水平之内的，其1日给药用量例如可以为〇. lmg/kg/日~500mg/kg/日，更具体 而言，可以为5mg/kg/日~100mg/kg/日，但并非限定于此。
[0064] 本发明的一个方面提供包含竹汁液与甜菜碱的混合物作为有效成分的健康食品 组合物。
[0065] 作为本发明的有效成分的竹汁液与甜菜碱，可以出于皮肤保湿目的而添加于健康 食品，当将所述竹汁液与甜菜碱用作食品添加物时，可以直接添加竹汁液与甜菜碱，或与其 它食品或食品成分一同使用，可以根据通常的方法而适当使用。有效成分的混合量可以根 据使用目的（预防、健康或治疗性处置)而适当决定。一般而言，在食品或饮料的制造时，相 对于原料，作为本发明有效成分的甜菜碱添加80重量％以下的量，优选地添加50重量％以 下的量。但是，在以健康和卫生为目的或以健康调节为目的的长期摄取的情况下，添加量可 以为所述范围以下，只要在安全性方面没有问题，有效成分也可以使用所述范围以上的量。
[0066] 在所述食品的种类中，没有特殊限制。作为可以添加所述物质的食品的示例，有肉 类、香肠、面包、巧克力、糖果类、零食类、点心类、披萨、方便面、其它面类、口香糖类、包括冰 淇淋类的乳制品、各种汤、饮料、茶、口服液、酒精性饮料和维生素复合剂等，通常意义上的 健康食品全部包括。
[0067] 本发明的健康饮料组合物像通常的饮料一样，作为追加成分，可以含有多种香味 剂或天然碳水化合物等。在所述天然碳水化合物中，有诸如葡萄糖、果糖的单糖，诸如麦芽 糖、蔗糖的双糖，以及诸如糊精、环糊精的多糖，木糖醇、山梨醇、赤藓醇等糖醇。作为甜味 剂，可以使用诸如索马甜、甜叶菊提取物的天然甜味剂，或诸如糖精、阿斯巴甜的合成甜味 剂等。
[0068] 除所述之外，本发明的健康食品可以含有多种营养剂、维生素、电解质、风味剂、着 色剂、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护性胶质增粘剂、pH调节剂、稳定化剂、防腐 剂、甘油、乙醇、碳酸饮料中使用的碳酸化剂等。此外，本发明的健康食品可以含有用于制造 天然果汁、果汁饮料和蔬菜饮料的果肉。这种成分可以独立或组合使用。这种添加剂的比率 不太重要，但相对于作为本发明有效成分的甜菜碱100重量份，一般在0.1-30重量份的范围 内选择。
[0069] 所述有效成分的给予量的决定是所属领域的技术人员水平之内的，其1日给予量 例如可以为〇· lmg/kg/日~5000mg/kg/日，更具体而言，可以为50mg/kg/日~500mg/kg/日， 但不限定于此，可以根据要给予的对象的年龄、健康状态、并发症等多样的因素而异。
[0070] 在本发明的另一观点中，提供一种皮肤保湿用套装，包括:包含竹汁液的第一组合 物;及包含甜菜碱的第二组合物。优选所述套装的竹汁液与甜菜碱的浓度以第一组合物与 第二组合物总重量为基准，分别为0.001~80重量％。所述套装可以包括说明书，在说明书 中，可以包括将包含竹汁液的第一组合物与包含甜菜碱的第二组合物的重量比按1 :〇. 1~ 1:10投入的说明。所述包含竹汁液的第一组合物与包含甜菜碱的第二组合物可以同时或某 一者依次应用于使用者。
[0071] 下面列举实施例和实验例，更具体地说明本发明的构成和效果。但是，这些实施例 和实验例只是为了有助于对本发明的理解而出于示例的目的提供的，本发明的范畴和范围 并非由其限定。
[0072]实施例1.竹汁液
[0073]截断竹子根部的第一节或第二节(高度：10~20cm)紧上方部位，附着容器，采集了 竹汁液。将其用200目过滤布进行过滤，获得了竹汁液。将如此获得的竹汁液100g，按照通常 的减压浓缩方法进行粉末化，获得了0.21g的粉末。细胞实验时，以粉末形态使用，在制造例 制造时，以树液形态使用。
[0074]实施例2.甜菜碱
[0075]甜菜碱为甘氨酸甜菜碱，使用了丹尼斯克(DANISC0)公司的三甲基甘氨酸(CAS编 号107-43-7)白色粉末。
[0076]实施例3.竹汁液与甜菜碱的混合物
[0077]将所述竹汁液与所述三甲基甘氨酸按1比1的重量比混合。
[0078] 制造例1~3和比较例1
[0079] 使用所述实施例1的竹汁液，按下表1的成分比（重量％)制造了制造例1的组合物。
[0080] 使用所述实施例2的甜菜碱，按下表1的成分比制造了制造例2的组合物。
[0081] 将所述竹汁液与甜菜碱按1比1的比率混合的实施例3,按下表1的成分比制造了制 造例3。
[0082] 另一方面，作为对照组，不添加有效成分而按表1的成分比，制造了比较例1。
[0083] 【表1】
[0084]
[0085] 实验例1.聚丝蛋白和聚丝蛋白分解酶(bleomycin hydrolase,BH)的基因增加实 验(RNA分离和RT-PCR)
[0086] 将新生儿的角质形成细胞(keratinocyte)(Lonza公司），使用KGM培养基(Lonza公 司，作为培养基成分，含有人类表皮生长因子(human epidermal growth factor)、胰岛素 (insulin)、BPE(bovine pituitary extract，牛垂体提取物）、氢化可的松 (hydrocortisone)、肾上腺素（epinephrine)、转铁蛋白（transferrin)和庆大霉素 (gentamicin)/两性霉素 B(amphotericin B))，在60mm细胞培养皿（cell culture dish) 中，按1.25 X 106ce 11 s/di sh的密度分株后，在37 °C、5 % C02培养器中，培养至80 %左右融合 (confluency)。然后，使用实施例1的竹汁液提取物、实施例2的甜菜碱(betaine)和实施例3 的竹汁液与甜菜碱(betaine)混合物，分别按lOOppm、lOOppm、100 (50+50) ppm的浓度，对细 胞进行处理，培养了 4天时间。
[0087] 培养后，去除培养基，添加 Trizol (使用Invitrogen公司）1ml，按照Invitrogen公 司的RNA分离法而分离了RNA。利用紫外线检测仪(HEWLETT PACKARD)，在260nm下对RNA进行 定量后，实施RT-PCR(Reverse transcription-polymerase chain reaction，逆车专录-聚合 酶链反应）。为了对各样本的基因分析，以作为互补性基因的RPL13A为基准进行了补正。 [00 88]实验结果，将竹汁液与甜菜碱(Betaine)的混合物各50ppm(共lOOpprn)加入角质形 成细胞(keratinocyte)并处理4天时间后，分离mRNA，然后与单独处理竹汁液和甜菜碱的情 形进行比较的结果，聚丝蛋白和分解酶(bleomycin hydrolase)各自的基因表达量比单独 处理时分别增加了约20~30%左右。实验结果图示于图1中。
[0089] 实验例2.天然保湿因子(NMFs)的定量试验
[0090] 将新生儿的角质形成细胞，使用KGM培养基，在60mm细胞培养皿（cell culture dish)中按1.25\10%118/(^11的密度分株后，在37°(：、5%〇) 2培养器中培养至80%左右融 合(confluency)。然后，使用实施例的竹汁液提取物、甜菜碱(betaine)和竹汁液与甜菜碱 (betaine)复合物，分别按100ppm、100ppm、100 (50+50 )ppm的浓度，对细胞进行处理，培养了 4天时间。培养后，去除培养基，使用细胞溶出液使细胞溶出后，针对各个样本，利用HPLC对 NMF量进行了定量。
[0091 ]实验结果，将竹汁液与甜菜碱(Betaine)的混合物各50ppm(共lOOpprn)加入角质形 成细胞(keratinocyte)并处理4天时间后，溶出细胞，比较所得的天然保湿因子的量与单独 处理竹汁液和甜菜碱时的天然保湿因子的量，结果，分别比单独处理时增加约20~30%左 右。图2是将总天然保湿因子(total NMF)的量与对照组和单独处理组比较。
[0092]实验例3.皮肤水分量评价
[0093]为了了解所述比较例1和实施例1、2、3的皮肤保湿力，进行了如下评价。
[0094] 将30-40岁女性40名分别分为每10名一组，早晚每天2次，为期8周，将比较例1和实 施例1、2、3涂布于脸部后，利用皮肤水分含量测定仪(Corneometer，德国），测量了皮肤的水 分含量，将其结果显示于图3。图3的结果值意味着皮肤水分含量。
[0095] 实验结果，竹汁液和甜菜碱单独的实施例1~2与未进行有效成分处理的对照组相 比，皮肤水分含量只增加8~13%。相反，作为竹汁液与甜菜碱混合物的实施例3,与未进行 有效成分处理的对照组相比，皮肤水分含量增加47%，评价为皮肤保湿效果比对照组和实 施例1~2显著优秀。因此显示出，将竹汁液与甜菜碱的混合物当作有效成分的组合物，适合 用作用于皮肤保湿的化妆品组合物或用于干性皮肤疾病的药物组合物。
[0096] 下面说明所述组合物的剂型例，但并非要限定本发明，而只是意在具体说明。
[0097][剂型例1]软质胶囊的制造
[0098]混合竹汁液与甜菜碱混合物80mg、维生素 E 9mg、维生素 C 9mg、棕榈油2mg、植物性 硬化油8mg、黄蜡4mg和卵磷脂9mg，按照通常的方法混合，制造了软质胶囊填充液。每1胶囊 填充400mg，制造了软质胶囊。而且，独立于上述方法，按明胶66重量份、甘油24重量份和山 梨醇液10重量份的比率制造软质胶囊包衣，使所述填充液填充，制造了含有本发明组合物 400mg的软质胶囊。
[0099][剂型例2]片剂的制造
[0100] 混合竹汁液与甜菜碱的混合物80mg、维生素 E 9mg、维生素 C 9mg、低聚半乳糖 200mg、乳糖60mg和麦芽糖140mg，利用流化床干燥机制成颗粒后，添加糖酯（sugar ester) 6mg。将这些组合物504mg利用通常的方法打片，制造了片剂。
[0101][剂型例3] 口服液的制造
[0102]混合竹汁液与甜菜碱的混合物80mg、维生素 E 9mg、维生素 C 9mg、葡萄糖10g、梓檬 酸0.6g和液态低聚糖25g后，加入精制水300ml，每瓶填充200ml。填充于瓶后，在130°C下杀 菌4~5秒，制造了饮料。
[0103][剂型例4]颗粒的制造
[0104]混合竹汁液与甜菜碱的混合物80mg、维生素 E 9mg、维生素 C 9mg、无水结晶葡萄糖 250mg和淀粉550mg，使用流动床颗粒机成型为颗粒后，填充于袋内进行了制造。
[0105][剂型例5 ]柔软化妆水(润肤露)的制造
[0106] 针对精制水255mg、竹汁液与甜菜碱的混合物0.3mg、丁二醇6 .Omg、丙二醇6 .Omg、 羧基乙稀聚合物0.3mg、PEG_12壬基苯醚0.6mg、聚山梨醇酯80 1.2mg、乙醇30.0 mg、三乙醇 胺〇.3mg、以及防腐剂、色素、香料各少量，按照通常的柔软化妆水的制造方法，将所述成分 按提示的含量添加，并均匀混合后，制造了所需的柔软化妆水。
[0107][剂型例6 ]营养化妆水(乳液)的制造
[0108] 针对精制水234mg、竹汁液与甜菜碱的混合物0.3mg、蜜蜡12. Omg、聚山梨醇酯60 4·5mg、失水山梨醇倍半油酸酯4·5mg、液体石錯1 ·5mg、Montana 202(制造商：Seppic)l5mg、 甘油9.Omg、丁二醇9.Omg、丙二醇9.Omg、羧基乙稀聚合物0.3mg、三乙醇胺0.6mg、以及防腐 剂、色素、香料各少量，按照通常的营养化妆水的制造方法，将所述成分按提示的含量添加， 并均匀混合后，制造了所需的营养化妆水。
[0109] [剂型例7]按摩霜的制造
[0110] 针对精制水70mg、竹汁液与甜菜碱的混合物0.3mg、蜜蜡30 . Omg、聚山梨醇酯60 4.5mg、PEG-60硬化蓖麻油6. Omg、失水山梨醇倍半油酸酯2.4mg、液体石蜡120.0 mg、角鲨烷 15·Omg、Montana 202(制造商：Seppic) 12·Omg、甘油 15·Omg、丁二醇12.Omg、丙二醇12·Omg、 三乙醇胺〇.6mg、以及防腐剂、色素、香料各少量，按照通常的按摩霜的制造方法，将所述成 分按提示的含量添加，并均匀混合后，制造了所需的按摩霜。
[0111] [剂型例8]面膜的制造
[0112] 针对竹汁液与甜菜碱的混合物0.5mg、i3-l，3-葡聚糖1.Omg、聚乙烯醇13.Omg、羧甲 基纤维素钠〇. 2mg、甘油5. Omg、尿囊素0. lmg、乙醇6.0mg、PEG-12壬基苯醚0.3mg、聚山梨醇 酯60 0.3mg、以及防腐剂、色素、香料各少量，添加精制水，按照通常的面膜的制造方法，将 所述成分按提示的含量添加，并均匀混合后，制造了所需的面膜。
[0113] [剂型例9]凝胶的制造
[0114] 针对竹汁液与甜菜碱的混合物〇.〇51^、0-1，3-葡聚糖〇.111^、乙二胺四乙酸二钠 (主々]：L|巨吾）〇.〇5mg、甘油5.0mg、羧基乙烯聚合物〇. 3mg、乙醇 5.0mg、PEG-60硬化蓖麻油0.5mg、三乙醇胺0.3mg、以及防腐剂、色素、香料各少量，添加精制 水，按照通常的凝胶的制造方法，将所述成分按提示的含量添加，并均匀混合后，制造了所 需的凝胶。
[0115][剂型例10]皮肤外用剂中的软膏
[0116] 针对竹汁液与甜菜碱的混合物2 · 0mg、i3-l，3-葡聚糖10 · Omg、蜜蜡10 · Omg、聚山梨 醇酯60 5.0mg、PEG-60硬化蓖麻油2. Omg、失水山梨醇倍半油酸酯0.5mg、凡士林5. Omg、液体 石錯10 .Omg、角藍烧5 .Omg、乳木果油3 .Omg、辛酸/癸酸甘油三酯5.0mg、甘油10mg、丙二醇 10.2mg、三乙醇胺0.2mg、以及防腐剂、色素、香料各少量，添加精制水，按照通常的软膏剂的 制造方法，将所述成分按提示的含量添加，并均匀混合后，制造了所需的软膏剂。
[0117][剂型例11]局部给药用药剂(贴剂)的制造
[0118] 针对竹汁液与甜菜碱的混合物1.0mg、i3-l，3-葡聚糖3. Omg、己二醇20.0 mg、二乙胺 0.711^、聚丙稀酸（〇31'13(^〇1 934?)1.〇11^、亚硫酸钠0.111^、聚氧乙稀十二烷基醚化.0 = 9) 1 .Omg、聚羟基乙稀鲸錯硬脂醚（聚西托醇1000(Cetomacrogol 1000) )1 .Omg、粘性石錯油 2.5mg、辛酸酯/癸酸酯(Cetiol LC)2.5mg、聚乙二醇400 3.0mg，添加精制水，按照通常的贴 剂的制造方法，将所述成分按提示的含量添加，并均匀混合后，制造了所需的贴剂。
[0119]只要是本发明所属技术领域的技术人员，便能够以所述内容为基础，在本发明的 范畴内进行多样的应用和变形。
【主权项】
1. 竹汁液和甜菜碱在制造用于增进皮肤保湿的组合物中的应用。2. 竹汁液和甜菜碱在制造用于调节天然保湿因子的组合物中的应用。3. 根据权利要求2所述的竹汁液和甜菜碱的应用，其特征在于，所述竹汁液和甜菜碱通 过增加聚丝蛋白基因表达量和增加聚丝蛋白分解酶基因表达量中的一种以上而调节天然 保湿因子。4. 根据权利要求1~3中任一项所述的应用，其特征在于，所述竹汁液为斑竹、毛金竹和 毛竹中的任一种以上的树液。5. 根据权利要求1~3中任一项所述的应用，其特征在于，所述甜菜碱为甘氨酸甜菜碱。6. 根据权利要求1~3中任一项所述的应用，其特征在于，所述竹汁液与甜菜碱的重量 比为 1:0.1 ~1:10。7. 根据权利要求1~3中任一项所述的应用，其特征在于，以组合物总重量为基础，所述 竹汁液为〇. 001~80重量％。8. 根据权利要求1~3中任一项所述的应用，其特征在于，以组合物总重量为基础，所述 甜菜碱为〇. 001~80重量％。9. 根据权利要求1~3中任一项所述的应用，其特征在于，所述组合物为化妆品组合物。10. 根据权利要求1~3中任一项所述的应用，其特征在于，所述组合物为药物组合物。11. 根据权利要求1~3中任一项所述的应用，其特征在于，所述组合物为健康食品组合 物。12. 根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述药物组合物用于特应性皮炎、皮肤 干燥症、干性湿疹、干癣和着色性干皮症中的任一种以上的皮肤干燥疾病的治疗或预防。13. -种皮肤保湿用套装，其特征在于，包括： 包含竹汁液的第一组合物;及 包含甜菜碱的第二组合物。14. 根据权利要求13所述的皮肤保湿用套装，其特征在于，以第一组合物总重量为基 准，所述竹汁液的浓度为0.001~80重量％，以第二组合物总重量为基准，所述甜菜碱的浓 度为0.001~80重量％。15. 根据权利要求13所述的皮肤保湿用套装，其特征在于，所述套装还包括说明书。16. 根据权利要求15所述的皮肤保湿用套装，其特征在于，在所述说明书中，包括将第 一组合物与第二组合物按重量比1:0.1~1:10投入的说明。
【文档编号】A61P31/10GK105997602SQ201610182396
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年3月28日
【发明人】孙义东, 姜显瑞, 金炫廷, 金润京, 曹恩敬
【申请人】株式会社爱茉莉太平洋