一种双歧杆菌结肠溶软胶囊及其制备方法
【专利摘要】一种双歧杆菌结肠溶软胶囊及其制备方法。本发明涉及一种双歧杆菌结肠溶软胶囊及其制备方法，所述的软胶囊包括内容物及胶皮两部分，并对软胶囊囊壳进行处理，使之具有结肠溶性。其中软胶囊的内容物由双歧杆菌冻干粉、植物油、助悬剂和润湿剂经混匀、搅拌制成的稳定的混悬液。另外，通过甲醛浸渍软胶囊，使囊壳具有结肠溶性。本发明将以植物油为载体的双歧杆菌冻干粉软胶囊囊化，并具有结肠溶效果，产品稳定性好，便于运输和保存，延长了保质期，并且将双歧杆菌和植物油共同作用于结肠，改善了肠道菌群紊乱，达到了润肠通便的功效，解决了便秘问题带给人们的痛苦。本发明应用于微生态制剂的制备领域。
【专利说明】
一种双歧杆菌结肠溶软胶囊及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于微生态制剂技术领域，涉及一种双歧杆菌结肠溶软胶囊及其制备方 法。
【背景技术】
[0002] 随着社会生活节奏的加快，饮食精细化和人们精神心理负担重等多方面的影响， 越来越多的人群患有腹泻，便秘，肠易激综合症等肠道问题，其中便秘已成为影响现代人生 活质量的重要因素之一。因此，便秘的治疗和研究显得日益重要。
[0003] 便秘属于一种常见的胃肠功能失调症，主要是指排便次数减少、粪便量减少、排便 费力等，是许多慢性病的诱因，也是身体提早衰老的表现。
[0004] 目前为止，对于便秘的治疗方法多种多样，在传统临床上常采用泻药治疗，可快速 缓解便秘症状，但是可能会伴随腹痛，腹胀等不良反应。长期使用容易产生药物依赖性，甚 至会加重便秘。
[0005] 根据研究表明通过增加膳食中的膳食纤维和益生菌可有效地减缓便秘症状，便秘 的发生与肠道菌群失调有很大关系。肠道菌群失调时，肠道内有害菌数量的增加容易导致 便秘，腹泻等症状的发生，而当使用微生态制剂人为补充适量的益生菌时，能够改善此类症 状，且未发现其不良反应，但是由于活性菌不耐胃酸，胆汁酸，消化酶等的作用而极易失活。 因此为改善便秘找到一种让患者没有痛苦，而且可以从根本上解决便秘的方法是迫切需要 的。
[0006] 目前市场上微生态制剂产品多为颗粒、液体等类型，普遍存在货架期短，不易贮存 和运输，很难保证药品中的活菌数量，药品到达肠道后难以经过胃酸等消化道环境，到达肠 道后，菌体大量死亡，无法发挥益生菌的生理作用。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是开发一种治疗便秘疗效好，作用明显，安全，副作用小微生态制剂 保健产品，从物理和生物两方面改善便秘的症状，解决便秘问题带给人们的痛苦。通过一系 列研究，为社会提供安全健康的改善缓解便秘的科研产品，使类似的产品升级换代，进而改 善现代人的健康状况，增强人们的身体素质，来提高人们的生活质量，为人类的健康做出贡 献。
[0008] 本发明研究一种具有结肠溶性的青春双岐杆菌软胶囊，它包括软胶囊内容物和软 胶囊胶皮;所述的软胶囊内容物是由双歧杆菌冻干粉、植物油、助悬剂和润湿剂制成;所述 的软胶囊胶皮是由食用明胶、甘油和水比例按质量比为1:0.5:1制成;所述的软胶囊在制成 后用甲醛溶液浸渍后，得双歧杆菌结肠溶软胶囊。
[0009] 本发明制备方法主要方案如下：
[0010] -种双歧杆菌结肠溶软胶囊的制备方法，其特征在于:双歧杆菌软胶囊的组成包 括软胶囊内容物和软胶囊胶皮，其中内容物为由双歧杆菌冻干粉、植物油、助悬剂、润湿剂 经混匀、搅拌制成的稳定的混悬液。另外，使用一定浓度的甲醛溶液浸渍软胶囊一段时间， 得到结肠溶性软胶囊。
[0011] 本发明的一种双歧杆菌结肠溶软胶囊的制备方法，它是按照以下步骤进行的：
[0012] 一、软胶囊内容物的制备：
[0013] 取发酵后的双歧杆菌的发酵液，将发酵液在4500r下离心15min，得到双歧杆菌的 菌泥，收集菌泥，并称重，按质量比1:3与冻干保护剂混合，混合后在-20°C下预冻8h，再真空 冷冻干燥12h取出，得到双歧杆菌冻干菌粉；
[0014] 将冻干后的菌粉过120目筛，混悬液中各成分的质量比为双歧杆菌冻干粉:大豆油 为1:3,其中添加的助悬剂和润湿剂的添加量为：以大豆油的质量为标准，蜂蜡添加4%，大 豆磷脂添加6 %。
[0015] 二、软胶囊内容物混悬液的制备:取步骤一的双歧杆菌冻干菌粉过120目筛，备用； [0016]先将植物油加热，倒入助悬剂，使助悬剂完全熔融后，停止加热，室温冷却到30°C， 再加入润湿剂，边加边搅拌，混合均匀至无沉淀，再加入过筛后的双歧杆菌冻干菌粉，混合 均匀，得软胶囊内容物混悬液，将软胶囊内容物混悬液置于30°C温度下备用;所述的双歧杆 菌冻干粉:植物油的质量比为1:3;助悬剂的添加量(质量比）为植物油的4%，润湿剂的添加 量(质量比）为植物油的6% ;
[0017] 三、胶液的配制：
[0018] 将明胶、甘油和水按照质量比为1:0.5:1的比例称量;将称取的水倒入化胶罐中， 然后再加入甘油，随后加热到70°C并搅拌均匀，再加入称好的明胶，75°C温度下搅拌3h，抽 真空除去气泡，60°C保温，备用；
[0019] 四、压制软胶囊：
[0020] 压制过程中，软胶囊内容物需处于30°C恒温状态，并控制软胶囊机的操作参数为： 胶盒温度为50-55°C，胶皮厚度为0.8-0.9mm，喷体温度为40-43°C，然后依照上述参数压制 软胶囊；
[0021] 五、定型和干燥：
[0022]软胶囊压制成功后，经过干燥机进行初步干燥4h，取出后，用无水乙醇清洗软胶囊 的表面，除去油渍，然后放在托盘中继续进行干燥12~15h，控制软胶囊囊皮的水分在9%~ 10%，既得双歧杆菌软胶囊。
[0023]六、结肠溶化软胶囊得处理
[0024]将制得的软胶囊浸渍在体积浓度为10%的甲醛溶液中lh，取出后用无水乙醇反复 清洗直至无甲醛味为止，晾干，既得双歧杆菌结肠溶软胶囊。
[0025] 得到的软胶囊中的活菌含量为lX109cfu/g~10X109cfu/g。
[0026] 所述的内容物的温度保持在30°C，使混悬液一直呈液体状态不凝固，且要密封，最 大程度保护菌体的活性。
[0027] 青春双歧杆菌软胶囊的工艺流程中，主要注意内容物的温度，即不能过高破坏菌 的活力，又不能太低，导致混悬液凝固，造成机器堵塞，装量不均，压不出胶囊，还要注意各 成分之间的比例，防止混悬液的状态不均匀造成机器堵塞。在操作过程中各参数的设置也 决定了软胶囊是否能压制成功。
[0028]本发明包括以下有益效果：
[0029] 1、本发明将双歧杆菌与植物油混合制备成软胶囊，便于贮存于运输，并且两者可 共同作用于肠道，通过对肠道菌群的调节作用与植物油对肠道的润滑作用相结合，从生物 和物理两方面产生通便效果，治疗便秘。
[0030] 2、本发明中软胶囊被处理成结肠溶性，使双歧杆菌顺利到达结肠后崩解，释放出 双歧杆菌，避免了胃酸胆汁等消化道环境对双歧杆菌的破坏作用，顺利的在肠道发挥生理 功能，起到调节肠道菌群的作用，尤其对便秘的治疗有较好的效果。而且菌体在通过冷冻干 燥后，可以使软胶囊中保持较高的活菌数量，增强菌体对外界环境的抵抗能力，显著地提高 了菌体在低温的保质期和到达肠道的存活率。
【附图说明】
[0031]图1为10%浓度的甲醛溶液处理的软胶囊保存30天的肠溶崩解时间图；
[0032]图2为不同温度下90天对照冻干菌粉中活菌数量变化图，其中，A为_18°C的活菌数 量变化图，B为4°C的活菌数量变化图，C为25°C的活菌数量变化图；
[0033]图3为不同温度下90天双歧杆菌结肠溶软胶囊中活菌数量变化图，其中，A为_18°C 的活菌数量变化图，B为4°C的活菌数量变化图，C为25°C的活菌数量变化图；
[0034]图4为正常家兔粪便形态观察图；
[0035]图5为便秘家兔粪便形态观察图；
[0036] 图6为灌喂软胶囊组家兔粪便形态观察图；
[0037] 图7为阳性对照组家兔家兔粪便形态观察图。
【具体实施方式】
[0038]为了更好的阐释和说明本发明的特点，在下面的具体实施例中具体的进行说明， 但本发明不受以下实施例的限制。
【具体实施方式】 [0039] 一:本实施方式的一种双歧杆菌结肠溶软胶囊，它包括软胶囊内容 物和软胶囊胶皮;所述的软胶囊内容物是由双歧杆菌冻干粉、植物油、助悬剂和润湿剂制 成;所述的软胶囊胶皮是由食用明胶、甘油和水比例按质量比为1:1 :〇.5制成;所述的软胶 囊在制成后用甲醛溶液浸渍后，得双歧杆菌结肠溶软胶囊。
【具体实施方式】 [0040] 二:本实施方式与一不同的是:软胶囊内容物各组分 用量为:双歧杆菌冻干粉:植物油的质量比为1: 3，助悬剂的添加量为植物油质量的4 %，润 湿剂的添加量为植物油质量的6%。其它与一相同。
[0041 ]【具体实施方式】三:本实施方式与【具体实施方式】一不同的是:软胶囊中的活菌含量 为1 X 109cfu/g~10 X 109cfu/g。其它与【具体实施方式】一相同。
[0042]【具体实施方式】四：本实施方式与【具体实施方式】一不同的是:所述的甲醛溶液浸渍 是指用体积浓度为10%的甲醛溶液浸渍软胶囊lh，取出用无水乙醇冲洗软胶囊，晾干，除去 甲醛残留，既得双歧杆菌结肠溶软胶囊。其它与【具体实施方式】一相同。
[0043]【具体实施方式】五:本实施方式与【具体实施方式】一不同的是:所述的助悬剂为蜂蜡； 所述的润湿剂为大豆磷脂。其它与【具体实施方式】一相同。
[0044]【具体实施方式】六:本实施方式与【具体实施方式】一不同的是:所述的植物油为大豆 油、椰子油、玉米油、花生油中的一种或几种按质量比为1:1混合的混合物。其它与具体实施 方式一相同。
【具体实施方式】 [0045] 七:本实施方式与一不同的是所述的双歧杆菌为青春 双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)。其它与一相同。
【具体实施方式】 [0046] 八:本实施方式一种双歧杆菌结肠溶软胶囊的制备方法，它是按照 以下步骤进行的：
[0047] 一、软胶囊内容物的制备：
[0048]取发酵后的双歧杆菌的发酵液，将发酵液在4500r下离心15min，得到双歧杆菌的 菌泥，收集菌泥，并称重，按质量比1:3与冻干保护剂混合，混合后在-20°C下预冻8h，再真空 冷冻干燥12h取出，得到双歧杆菌冻干菌粉；
[0049] 将冻干后的菌粉过120目筛，混悬液中各成分的质量比为双歧杆菌冻干粉:大豆油 为1:3,其中添加的助悬剂和润湿剂的添加量为：以大豆油的质量为标准，蜂蜡添加4%，大 豆磷脂添加6 %。
[0050] 二、软胶囊内容物混悬液的制备:取步骤一的双歧杆菌冻干菌粉过120目筛，备用； [00511先将植物油加热，倒入助悬剂，使助悬剂完全熔融后，停止加热，室温冷却到30°C， 再加入润湿剂，边加边搅拌，混合均匀至无沉淀，再加入过筛后的双歧杆菌冻干菌粉，混合 均匀，得软胶囊内容物混悬液，将软胶囊内容物混悬液置于30°C温度下备用;所述的双歧杆 菌冻干粉:植物油的质量比为1:3;助悬剂的添加量(质量比）为植物油的4%，润湿剂的添加 量(质量比）为植物油的6% ;
[0052]三、胶液的配制：
[0053]将明胶、甘油和水按照质量比为1:0.5:1的比例称量;将称取的水倒入化胶罐中， 然后再加入甘油，随后加热到70°C并搅拌均匀，再加入称好的明胶，75°C温度下搅拌3h，抽 真空除去气泡，60°C保温，备用；
[0054]四、压制软胶囊：
[0055]压制过程中，软胶囊内容物需处于30°C恒温状态，并控制软胶囊机的操作参数为： 胶盒温度为50-55°C，胶皮厚度为0.8-0.9mm，喷体温度为40-43°C，然后依照上述参数压制 软胶囊；
[0056] 五、定型和干燥：
[0057]软胶囊压制成功后，经过干燥机进行初步干燥4h，取出后，用无水乙醇清洗软胶囊 的表面，除去油渍，然后放在托盘中继续进行干燥12~15h，控制软胶囊囊皮的水分在9%~ 10%，既得双歧杆菌软胶囊。
[0058]六、结肠溶化软胶囊得处理
[0059]将制得的软胶囊浸渍在体积浓度为10%的甲醛溶液中lh，取出后用无水乙醇反复 清洗直至无甲醛味为止，晾干，既得双歧杆菌结肠溶软胶囊。
【具体实施方式】 [0060] 九:本实施方式与八不同的是:所述的冻干保护剂组 分为：质量百分含量为9.51 %的脱脂乳，质量百分含量为1.93%的甘油，质量百分含量为 9.28%的蔗糖和余量的水。其它与八相同。
【具体实施方式】 [0061] 十:本实施方式与八不同的是:软胶囊中的活菌含量 为1 X 109cfu/g~10 X 109cfu/g。其它与八相同。
[0062]
【具体实施方式】十一:本实施方式与【具体实施方式】八不同的是:所述的甲醛溶液浸 渍是指用体积浓度为10%的甲醛溶液浸渍软胶囊lh，取出用无水乙醇冲洗软胶囊，晾干，除 去甲醛残留，既得双歧杆菌结肠溶软胶囊。其它与【具体实施方式】八相同。
【具体实施方式】 [0063] 十二:本实施方式与八不同的是:所述的助悬剂为蜂 蜡;所述的润湿剂为大豆磷脂。其它与八相同。
【具体实施方式】 [0064] 十三:本实施方式与八不同的是:所述的植物油为大 豆油、椰子油、玉米油、花生油中的一种或几种按质量比为1:1混合的混合物。其它与具体实 施方式八相同。
【具体实施方式】 [0065] 十四：本实施方式与八不同的是所述的双歧杆菌为青 春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)。其它与八相同。
[0066]本发明的整体思路为：
[0067]根据目前市场上双歧杆菌制剂面临的主要问题，将双歧杆菌进行真空冷冻干燥处 理，保持较高的活菌数，与植物油混合制备成软胶囊，并且通过结肠溶化处理得到双歧杆菌 结肠溶软胶囊，使双歧杆菌和植物油顺利通过胃达到结肠后崩解释放出来，发挥双歧杆菌 调节肠道菌群平衡的生理功能和植物油润滑肠道的效果，达到润肠通便、治疗便秘的目的。 解决便秘等肠道疾病带来的困扰。
[0068]通过以下实施例验证本发明的有益效果：
[0069] 实施例一:本实施例的一种双歧杆菌结肠溶软胶囊的制备，软胶囊由内容物和胶 皮组成。
[0070] 所述软胶囊内容物的组成成分为:双歧杆菌与植物油的比例为1:3,助悬剂蜂蜡的 添加量为大豆油的4%，润湿剂大豆磷脂的添加量为大豆油的6%，内容物的活菌含量为2.6 X108cfu/g〇
[0071] 所述软胶囊的胶皮中各组分的比例为：明胶40%、水40%、甘油20%。
[0072] -种双歧杆菌软胶囊的制备方法，主要包括以下步骤：
[0073] 一、内容物的制备：
[0074] 发酵青春双歧杆菌后，将发酵液在4500r下离心15min，得到青春双歧杆菌的菌泥， 收集菌泥，并称重，按质量比1:3与保护剂混合，保护剂配方为:脱脂乳9.51%，甘油1.93%， 蔗糖9.28 %，混合后在冰箱中-20 °C下预冻8h后，在真空冷冻干燥机中冷冻干燥12h取出，得 到青春双歧杆菌冻干菌粉。
[0075] 将冻干后的菌粉过筛，过120目筛。此方法可使菌粉微粒很细足以通过软胶囊机中 的注液口，不会造成堵塞，保证装量均匀，又不会由于外力对青春双歧杆菌的活性造成影 响，是工艺流程中重要步骤之一。
[0076] 混悬液中各成分的质量比为青春双歧杆菌冻干粉:大豆油为1:3,其中添加的助悬 剂和润湿剂的添加量为：以大豆油的质量为标准，蜂蜡添加4%，大豆磷脂添加6%。
[0077] 二、内容物混悬液的制备:按1:3的比例称取双歧杆菌冻干菌粉和大豆油，先将大 豆油加热，倒入4%的蜂蜡，使蜂蜡完全熔融后，停止加热，室温冷却到30°C，再加入6%的大 豆磷脂，边加边搅拌，混合均匀无沉淀，再加入称好的冻干菌粉，混合均匀，内容物制备完 成，保存备用（内容物的温度保持在30°C，使混悬液一直呈液体状态不凝固，且要密封，最大 程度保护菌体的活性）；
[0078]三、胶液的配制：
[0079] 增塑剂为甘油，主料是明胶，将明胶，甘油和水按照质量比1:0.5:1的比例称取所 需的量，先称取所需要量的水倒入化胶罐中，并加入所需量的甘油，加热到70°C并搅拌均 匀，再加入称好的明胶，75°C搅拌3h，使明胶完全膨胀，配制好胶液，抽真空除去气泡，60°C 保温，备用。
[0080] 四、压制软胶囊：
[0081] 压制过程中，内容物需处于30°C恒温状态，并尽量密封，最大程度保证活菌数量， 并控制软胶囊机的操作参数分别为:胶盒温度在50-55°C之间，胶皮厚度在0.8-0.9mm，喷体 温度控制在40-43Γ，防止温度过高影响菌的活性。按此操作参数压制软胶囊。
[0082] 五、定型和干燥：
[0083]软胶囊压制成功后，需经过干燥机进行初步干燥4h，取出后，用无水乙醇清洗软胶 囊的表面，除去油渍，然后放在托盘中继续进行干燥12-15h，控制软胶囊囊皮的水分在9%-10%之间，既得产品。
[0084] 青春双歧杆菌软胶囊的工艺流程中，主要注意内容物的温度，即不能过高破坏菌 的活力，又不能太低，导致混悬液凝固，造成机器堵塞，装量不均，压不出胶囊，还要注意各 成分之间的比例，防止混悬液的状态不均匀造成机器堵塞。在操作过程中各参数的设置也 决定了软胶囊是否能压制成功。
[0085] 本发明双歧杆菌结肠溶软胶囊的相关验证试验结果如下：
[0086] 试验一:双歧杆菌结肠溶软胶囊肠溶性的稳定性考察
[0087] 有研究表明，甲醛溶液浸泡后的软胶囊虽然可以具有肠溶效果，但是随着时间的 推移，肠溶效果可能会有所下降，所以本发明需要对甲醛浸泡后的双歧杆菌软胶囊的肠溶 稳定性进行验证。根据实施例一，将软胶囊保存30天后，考察崩解时间。
[0088] 参见图1可知，在前15天，软胶囊的肠溶崩解时间下降的很慢，保存有较好的结肠 溶性，在第30天，肠溶崩解时间比之前虽然都有所下降，但仍保持在崩解时限300min以上， 仍保留较好的结肠溶效果。
[0089]试验二:双歧杆菌结肠溶软胶囊结肠溶性的验证
[0090] 按照实施例一，随机选取6粒软胶囊放在崩解仪中，先通过人工胃液2h后取出，少 量清水洗净，继续放入到人工小肠液中2h后取出，少量清水洗净，最后放入到人工结肠液 中，直至崩解完全，记录最终崩解时间。
[0091] 表1 6粒软胶囊崩解时间
[0092]
[0093]由结果可知，平均每粒软胶囊的崩解时间为7hl7min，因为药物正常到达人体结肠 部位的时间为5h，所以根据药典中崩解时限的考察，证明双歧杆菌软胶囊可以达到结肠溶 效果。
[0094]试验三:双歧杆菌结肠溶软胶囊不同温度下活菌数的稳定性考察 [0095]使用本发明实施例一中的软胶囊分别放置在-18°C，4°C，20°C三种不同温度下，考 察90天的活菌数变化，采用平板稀释法，选取合适的梯度涂板，每7天测定一次，用HD双歧杆 菌冻干菌粉做对照，每个梯度做3个平行样。
[0096] 结果参见图2和图3,本发明中对照的冻干菌粉中初始活菌数为3.72 X10ncfu/g， 实施例一软胶囊中的初始活菌数为2.96X 108/g。由结果可知，随时间的变化活菌数逐渐降 低。在保存90天后，_18°C下，双歧杆菌软胶囊中活菌数下降了 1.17个数量级，冻干粉中活菌 数下降了2.44个数量级;4°C下，双歧杆菌软胶囊中活菌数下降了 1.52个数量级，冻干粉中 活菌数下降了2.88个数量级;25°C下，双歧杆菌软胶囊中活菌数下降了1.90个数量级，冻干 粉中活菌数下降了4.07个数量级；
[0097] 所以与单纯的冻干菌粉相比，各个温度下软胶囊中菌的稳定性都更好，而且下降 的较缓慢。另外，在_18°C条件下软胶囊具有更好的贮存稳定性。和常温下保存活菌数虽然 有所下降，但依然可以保持长时间的稳定性。
[0098] 试验五:双歧杆菌结肠溶软胶囊对便秘家兔通便效果的研究
[0099]随机选择其中的6只家兔作为空白对照组不做处理，剩余18只家兔作为便秘造模 组，每天灌喂2mL盐酸洛派丁胺溶液(按4. Omg/kg体质量，将盐酸洛派丁胺溶于2mL的质量分 数为0.9%的生理盐水），连续4d制造家兔的便秘模型。最后判断是否造模成功的指标，主要 通过记录造模期间，每只家兔的采食量，饮水量，体质量增加量，排便粒数，粪便含水量五个 指标，与空白对照组对比，如果都下降，证明家兔便秘造模成功。
[0100] 随机将造模后的18只家兔分为3组，每组6只，模型对照组、阳性对照组及双歧杆菌 结肠溶软胶囊组，加上空白对照组共4组，其中空白对照组和模型对照组每天正常喂饲料和 水，其余两组除正常喂饲外，阳性对照组每天喂两粒丽珠肠乐硬胶囊，双歧杆菌结肠溶软胶 囊组每天喂两粒按照实施例一制得的双歧杆菌软胶囊，胶囊中含菌量相同，都为IX 108cfu〇
[0101] 试验结果如下：
[0102] 家兔粪便形态的观察结果：
[0103] 由附图4和附图5可以看出空白对照组正常家兔粪便为球状，大小相似，整齐无异 状，但造模组家兔粪便，由于便秘造成粪便较小，形态不整齐且成条状，这可能是由于便秘 时家兔用力排便，排便费力造成的粪便形状改变。
[0104] 附图6是给予HD双歧杆菌结肠溶软胶囊7天后的家兔粪便，其形状和大小整齐均 匀，几乎和正常家兔无差别，便秘症状消失。附图7是阳性对照组给药后的粪便形态，粪便大 小接近正常，但是还有些条状便存在，便秘症状并没有完全消失，证明其对便秘的治疗效果 比HD双歧杆菌结肠溶软胶囊要差。
[0105] 表2空白对照组和便秘造模组各项指标的比较(:i±s，n = 4)
[0106]
[0107] 注与空白对照组相比，有显著性差异(P<0.05)。**.与空白对照组相比，有极 显著性差异(p<0.01);
[0108] 表2是在制造便秘模型过程中，记录的空白对照组和便秘造模组家兔的生理指标 和排便指标，通过与空白对照组进行对比，判断其是否造模成功。便秘造模组的家兔在采食 量和饮水量上明显减少，因此导致体重也增长缓慢，证明便秘造模组家兔因便秘引起食欲 不振，生长缓慢。而且便秘造模组家兔的排便粒数与粪便含水量与空白对照组相比也显著 降低，证明造模后的家兔可能排便困难，有粪便变干的症状，因此，从这五个指标可以证明 造模成功。
[0109] 表3四组不同饲喂物对便秘家兔采食量、饮水量、体质量增加量的影响(η = 4)
[0110]
[0111] 注：同列不同字母表示差异显著（ρ<0.05)，同列相同字母表示差异不显著（Ρ> 0.05).
[0112] 上表显示了在对各组家兔给药处理7d三项指标的变化结果，可以得到HD双歧杆菌 结肠溶软胶囊组家兔的采食量和饮水量与模型对照组相比显著增加并与空白对照组家兔 无明显差别；与阳性对照组相比，双歧杆菌肠溶软胶囊组的采食量显著增加，但饮水量无显 著差异，其体质量增加量与空白对照组也无显著差异。结果证明HD双歧杆菌结肠溶软胶囊 能够显著改善便秘家兔的饮食和饮水状况，使生活恢复正常，不妨碍家兔生长，体重增加， 使其与正常家兔生活无明显差别。
[0113] 表4四组不同饲喂物对家兔排便粒数和粪便含水量的影响(k:，n = 4)
[0114]
[0115] 注：同行不同字母表示差异显著（P<0.05)，同行相同字母表示差异不显著（P> 0.05).
[0116] 由上表结果可知，与模型对照组相比，阳性对照组和双歧杆菌软胶囊组的排便量 均有显著的增加，其中双歧杆菌软胶囊组的排便量与空白对照组无明显差异，但阳性对照 组与空白对照组相比排便量没有显著增加，还不能恢复正常排便状态。双歧杆菌软胶囊组 能够显著增加便秘家兔的排便粒数和含水量，具有显著的通便效果，且与目前市场上的双 歧杆菌硬胶囊相比效果更显著。
[0117] 表5四组不同饲喂物对便秘模型家兔肠道菌群的影响(?±5，η = 4)
[0118]
[0119]
[0120] 注：同列不同字母表示差异显著（P<0.05)，同列相同字母表示差异不显著（P> 0.05).
[0121] 表5结果显示了在开始实验、造模成功后及喂药后各组家兔肠道中五种肠道菌群 的变化情况。由结果可知，造模前所有家兔的各种肠道菌群数量无明显差异，肠道菌群状态 正常，可开始实验。造模后，除空白组外，在造模家兔肠道菌群中，大肠杆菌数量显著增加， 酵母菌数量有增加的趋势但并不显著，另外双歧杆菌、乳酸杆菌和消化球菌的数量都显著 减少(P<〇.05)，有统计学差异，证明便秘家兔体内肠道菌群发生紊乱，其有害菌增多，有益 菌减少。在各组给药7天后，双歧杆菌结肠溶软胶囊组家兔体内双歧杆菌数量显著增加(P< 0.05)，与空白对照组相比无显著性差异(P>0.05)，消化球菌和乳酸杆菌的数量也都明显 增加与模型对照组相比差异显著，大肠杆菌的数量明显减少，证明双歧杆菌结肠溶软胶囊 对便秘家兔肠道菌群平衡起到调节作用，使有益菌增多，有害菌减少。阳性对照组家兔给予 受试样品后肠道中的双歧杆菌、乳酸杆菌和消化球菌的数量也都有所增加，但差异并不显 著，大肠杆菌的数量减少，但是与双歧杆菌软胶囊组相比，对便秘家兔肠道菌群的调节效果 并不明显，结果证明双歧杆菌结肠溶软胶囊对治疗家兔便秘，调节肠道菌群平衡有显著的 效果。
【主权项】
1. 一种双歧杆菌结肠溶软胶囊，其特征在于它包括软胶囊内容物和软胶囊胶皮;所述 的软胶囊内容物是由双歧杆菌冻干粉、植物油、助悬剂和润湿剂制成;所述的软胶囊胶皮是 由食用明胶、甘油和水比例按质量比为1:0.5:1制成;所述的软胶囊在制成后用甲醛溶液浸 渍后，得双歧杆菌结肠溶软胶囊。2. 根据权利要求1所述的一种双歧杆菌结肠溶软胶囊，其特征在于软胶囊内容物各组 分用量为:双歧杆菌冻干粉:植物油的质量比为1:3，助悬剂的添加量为植物油质量的4%， 润湿剂的添加量为植物油质量的6 %。3. 根据权利要求1所述的一种双歧杆菌结肠溶软胶囊，其特征在于软胶囊中的活菌含 量为 1 X 109cfu/g~10 X 109cfu/g。4. 根据权利要求1所述的一种双歧杆菌结肠溶软胶囊，其特征在于所述的甲醛溶液浸 渍是指用体积浓度为10%的甲醛溶液浸渍软胶囊lh，取出用无水乙醇冲洗软胶囊，晾干，除 去甲醛残留，既得双歧杆菌结肠溶软胶囊。5. 根据权利要求1所述的一种双歧杆菌结肠溶软胶囊，其特征在于所述的助悬剂为蜂 蜡;所述的润湿剂为大豆磷脂。6. 根据权利要求1所述的一种双歧杆菌结肠溶软胶囊，其特征在于所述的植物油为大 豆油、椰子油、玉米油、花生油中的一种或几种按任意比混合的混合物。7. 根据权利要求1所述的一种双歧杆菌结肠溶软胶囊，其特征在于所述的双歧杆菌为 青春双歧杆菌（Bifidobacterium adolescentis)。8. -种双歧杆菌结肠溶软胶囊的制备方法，其特征在于它是按照以下步骤进行的： 一、 软胶囊内容物的制备： 取发酵后的双歧杆菌的发酵液，将发酵液在4500r下离心15min，得到双歧杆菌的菌泥， 收集菌泥，并称重，按质量比1:3与冻干保护剂混合，混合后在-20°C下预冻8h，再真空冷冻 干燥12h取出，得到双歧杆菌冻干菌粉； 将冻干后的菌粉过120目筛，混悬液中各成分的质量比为双歧杆菌冻干粉:大豆油为1: 3，其中添加的助悬剂和润湿剂的添加量为：以大豆油的质量为标准，蜂蜡添加4%，大豆磷 脂添加6 %。 二、 软胶囊内容物混悬液的制备:取步骤一的双歧杆菌冻干菌粉过120目筛，备用； 先将植物油加热，倒入助悬剂，使助悬剂完全熔融后，停止加热，室温冷却到30 °C，再加 入润湿剂，边加边搅拌，混合均匀至无沉淀，再加入过筛后的双歧杆菌冻干菌粉，混合均匀， 得软胶囊内容物混悬液，将软胶囊内容物混悬液置于30°C温度下备用;所述的双歧杆菌冻 干粉:植物油的质量比为1:3;助悬剂的添加量（质量比）为植物油的4%，润湿剂的添加量 (质量比）为植物油的6 %; 三、 胶液的配制： 将明胶、甘油和水按照质量比为1:0.5:1的比例称量;将称取的水倒入化胶罐中，然后 再加入甘油，随后加热到70°C并搅拌均匀，再加入称好的明胶，75°C温度下搅拌3h，抽真空 除去气泡，60°C保温，备用； 四、 压制软胶囊： 压制过程中，软胶囊内容物需处于30°C恒温状态，并控制软胶囊机的操作参数为:胶盒 温度为50_55°C，胶皮厚度为0.8-0.9111111，喷体温度为40-43°(：，然后依照上述参数压制软胶 囊； 五、 定型和干燥： 软胶囊压制成功后，经过干燥机进行初步干燥4h，取出后，用无水乙醇清洗软胶囊的表 面，除去油渍，然后放在托盘中继续进行干燥12~15h，控制软胶囊囊皮的水分在9%~ 10%，既得双歧杆菌软胶囊。 六、 结肠溶化软胶囊得处理 将制得的软胶囊浸渍在体积浓度为10%的甲醛溶液中lh，取出后用无水乙醇反复清洗 直至无甲醛味为止，晾干，既得双歧杆菌结肠溶软胶囊。9. 根据权利要求8所述的一种双歧杆菌结肠溶软胶囊的制备方法，其特征在于所述的 冻干保护剂组分为:质量百分含量为9.51%的脱脂乳，质量百分含量为1.93%的甘油，质量 百分含量为9.28%的蔗糖和余量的水。10. 根据权利要求8所述的一种双歧杆菌结肠溶软胶囊的制备方法，其特征在于甲醛溶 液的质量浓度为10%，浸渍时间为lh。
【文档编号】A61K9/19GK105997926SQ201610330874
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月18日
【发明人】韩德权, 王珍婷, 孙庆申
【申请人】黑龙江大学