用于农业应用的杀有害生物微细胞及其组合物的制作方法

本披露涉及杀有害生物微细胞，包括杀有害生物微细胞的组合物，以及制备杀有害生物微细胞的方法。

背景技术：

1、需要能够靶向细胞并递送生物试剂的递送载体；含有这样的递送载体的组合物；以及将所述载体递送至细胞，从而调节包括动物、植物和昆虫细胞、组织和生物体的生物系统的相关方法。特别地，需要既能够作为递送载体又能作为活性成分(例如杀有害生物活性成分)的递送载体。

技术实现思路

1、因此，本披露提供了包括杀有害生物微细胞的组合物。杀有害生物微细胞由杀有害生物亲代细菌产生，可以抑制包括昆虫、真菌和线虫的有害生物。杀有害生物微细胞保留亲代细菌的杀有害生物活性并且是可天然降解的。另外，杀有害生物微细胞可用于产生、扩增和递送多种生物活性成分，包括蛋白质毒素和核酸。本披露进一步提供了通过修饰杀有害生物亲代细菌的细胞分配功能来产生杀有害生物微细胞的方法。

2、本披露的方面包括杀有害生物组合物，其包括液体载剂相；以及分散在该载剂相中的多个杀有害生物微细胞，其中该多个杀有害生物微细胞衍生自多个杀有害生物亲代细菌，该多个杀有害生物亲代细菌包含引起该亲代细菌的细胞分配功能中的修饰的至少一个遗传突变，并且其中当该组合物应用于植物时，该多个杀有害生物微细胞以足以控制在该植物中或在该植物上的至少一种有害生物的颗粒浓度存在。在该方面的一些实施例中，控制包括以下中的至少一个：当与未用组合物处理的对照植物相比时，植物上的有害生物数量减少，并且当与未用组合物处理的对照植物相比时，对植物的物理损坏减少。在该方面的另外的实施例中，有害生物数量的减少是至少10％减少、至少15％减少、至少20％减少、至少25％减少、至少30％减少、至少40％减少、至少50％减少、至少60％减少、至少70％减少、或至少80％减少，并且物理损坏的减少是至少10％减少、至少15％减少、至少20％减少、至少25％减少、至少30％减少、至少40％减少、至少50％减少、至少60％减少、至少70％减少、或至少80％减少。在该方面的其他实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，多个杀有害生物微细胞的至少一部分进一步包括以下中的至少一种：外源杀有害生物蛋白质毒素、外源杀有害生物核酸、和外源杀有害生物活性成分。在该方面的一些实施例中，多个杀有害生物微细胞的部分进一步包括外源表达盒，该外源表达盒被编码以表达该外源杀有害生物蛋白质毒素和该外源杀有害生物核酸中的任一种或两种。在该方面的一些实施例中，外源杀有害生物蛋白质毒素包括pir毒素或cry毒素中的至少一种。在该方面的一些实施例中，外源杀有害生物核酸是双链rna(dsrna)或发夹rna(hprna)。在该方面的一些实施例中，外源杀有害生物活性成分选自以下的组：具有杀真菌活性的成分、具有杀昆虫活性的成分、具有杀线虫活性的成分、具有选择性除草活性的成分、具有杀细菌活性的成分、或具有广谱活性的成分。

3、在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，亲代细菌的细胞分配功能中的修饰包括以下中的至少一种修饰：z-环抑制蛋白、细胞分裂拓扑特异性因子、或隔膜机构组分。在该方面的另外的实施例中，z-环抑制蛋白选自以下的组：minc多肽、mind多肽或mine多肽；其中细胞分裂拓扑特异性因子选自以下的组：mine多肽或diviva多肽，并且其中隔膜机构组分选自以下的组：ftsz多肽或ftsa多肽。

4、在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，杀有害生物亲代细菌选自以下的组：除虫链霉菌(streptomyces avermitilis)、刺糖多孢菌(saccharopolyspora spinose)、苏云金芽孢杆菌(bacillus thuringiensis)、侧孢短芽孢杆菌(brevibacillus laterosporus)、双酶梭菌(clostridium bifermentans)、日本金龟子芽孢杆菌(bacillus popilliae)、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)、发光杆菌(photorhabdus luminescens)、嗜线虫致病杆菌(xenorhabdus nematophila)、嗜虫沙雷氏菌(serratia entomophila)、嗜虫耶尔森氏菌(yersinia entomophaga)、喜昆虫假单胞菌(pseudomonas entomophila)、伯克霍尔德氏菌属物种(burkholderia spp.)、萨布茨格色杆菌(chromobacterium subtsugae)或大肠杆菌(escherichia coli)。在该方面的另外的实施例中，杀有害生物亲代细菌选自以下的组：枯草芽孢杆菌菌株rti477、枯草芽孢杆菌菌株atcc 6633、枯草芽孢杆菌菌株atcc 21332、枯草芽孢杆菌菌株168、枯草芽孢杆菌菌株atcc 9943、枯草芽孢杆菌菌株qst713、和枯草芽孢杆菌菌株ncib 3610，萎缩芽孢杆菌菌株abi02a dsm 32019、萎缩芽孢杆菌菌株abi03 dsm32285、萎缩芽孢杆菌菌株abi05dsm 24918，解淀粉芽孢杆菌菌株rti301、解淀粉芽孢杆菌fzb24、解淀粉芽孢杆菌fzb42、解淀粉芽孢杆菌ba-1、解淀粉芽孢杆菌lmg 5-29032、解淀粉芽孢杆菌mbi600、解淀粉芽孢杆菌cect8836、或解淀粉芽孢杆菌m4(s499)。在该方面的一些实施例中，杀有害生物亲代细菌是发光杆菌，并且其中该杀有害生物微细胞包括外源杀有害生物蛋白质毒素pir。在该方面的一些实施例中，杀有害生物亲代细菌是枯草芽孢杆菌，并且其中杀有害生物微细胞包括外源杀有害生物分子。在该方面的一些实施例中，杀有害生物亲代细菌是经遗传修饰的表达一种或多种外源杀有害生物活性成分的大肠杆菌。

5、在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，组合物作为叶面处理、注射处理、出苗前处理、和出苗后处理中的至少一种应用于植物。在该方面的其他实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，将组合物配制为以下中的至少一种：即用型(rtu)配制品、悬浮液浓缩物、罐混合物、气溶胶、种子处理、根浸渍、土壤处理、灌溉配制品、喷洒配制品、和浸透处理。在该方面的一些实施例中，将组合物配制为种子处理。在该方面的另外的实施例中，组合物以约1x 102至约1x 109颗粒/种子的比率应用，并且其中比率根据种子大小来确定。在该方面的另外的实施例中，组合物以约1x 104颗粒/种子的比率应用。在该方面的其他实施例中，将组合物配制为根浸渍。在该方面的另外的实施例中，组合物以约1x 103至约1x 108颗粒/植物根系的比率应用。该方面的另外的实施例可以与前述实施例中任一项组合，进一步包括农用化学表面活性剂，其中该农用化学表面活性剂改善以下特征中的至少一种：喷雾性、铺展性、和可注射性。在该方面的另外的实施例中，液体载剂相是水性或油性的。

6、该方面的其他实施例可以与前述实施例中任一项组合，进一步包括以下中的至少一种：分散在该载剂相中的外源杀有害生物蛋白质毒素、外源杀有害生物核酸、和外源杀有害生物活性成分。在该方面的一些实施例中，外源杀有害生物蛋白质毒素包括pir毒素或cry毒素。在该方面的一些实施例中，外源杀有害生物核酸是双链rna(dsrna)或其前体、发夹rna(hprna)或其前体、或者微rna(mirna)或其前体。在该方面的一些实施例中，外源杀有害生物活性成分选自以下的组：具有杀真菌活性的成分、具有杀昆虫活性的成分、具有杀线虫活性的成分、具有选择性除草活性的成分、具有杀细菌活性的成分、或具有广谱活性的成分。在该方面的另外的实施例中，将组合物配制为种子处理。在该方面的一些实施例中，分散在载剂相中的外源杀有害生物蛋白质毒素、外源杀有害生物核酸、和外源杀有害生物活性成分以每100kg的种子约1g至约10g的量存在。在该方面的一些实施例中，分散在载剂相中的外源杀有害生物蛋白质毒素、外源杀有害生物核酸、和外源杀有害生物活性成分以约1x 104颗粒/种子的量存在。在该方面的另外的实施例中，将组合物配制为根浸渍。在该方面的一些实施例中，分散在载剂相中的外源杀有害生物蛋白质毒素、外源杀有害生物核酸、和外源杀有害生物活性成分以约25mg至约200mg活性成分/l存在。在该方面的一些实施例中，分散在载剂相中的外源杀有害生物蛋白质毒素、外源杀有害生物核酸、和外源杀有害生物活性成分以约1x 103至约1x 103颗粒/植物根系的量存在。在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，微细胞颗粒浓度的范围为约1x 102至约8x 1014。在该方面的一些实施例中，微细胞的杀有害生物活性以及外源杀有害生物蛋白质毒素、外源杀有害生物核酸或外源杀有害生物活性成分的杀有害生物活性靶向相同的有害生物。在该方面的其他实施例中，微细胞的杀有害生物活性以及外源杀有害生物蛋白质毒素、外源杀有害生物核酸或外源杀有害生物活性成分的杀有害生物活性靶向不同的有害生物。在该方面的一些实施例中，其可以与具有分散在载剂相中的外源组分的前述实施例中任一项组合，外源杀有害生物蛋白质毒素、外源杀有害生物核酸或外源杀有害生物活性成分的杀有害生物活性以及分散在载剂相中的外源杀有害生物蛋白质毒素、外源杀有害生物核酸、和外源杀有害生物活性成分的杀有害生物活性靶向相同的有害生物。在该方面的一些实施例中，其可以与具有分散在载剂相中的外源组分的前述实施例中任一项组合，外源杀有害生物蛋白质毒素、外源杀有害生物核酸或外源杀有害生物活性成分的杀有害生物活性以及分散在载剂相中的外源杀有害生物蛋白质毒素、外源杀有害生物核酸、和外源杀有害生物活性成分的杀有害生物活性靶向不同的有害生物。

7、在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，至少一种有害生物选自以下的组：小菜蛾(diamondback moth)(dbm)、红粉甲虫(red flour beetle)(rfb)、科罗拉多马铃薯甲虫(colorado potato beetle)(cpb)、地中海粉斑螟(mediterraneanflour moth)、秋粘虫(fall armyworm)(faw)、亚洲斑点螟蛉(asian spotted bollworm)、鳞翅目物种(lepidoptera spp.)、鞘翅目物种(coleoptera spp.)、双翅目物种(dipteraspp.)、疫霉属物种(phytophthora spp.)、蜜环菌属物种(armillaria spp.)、炭疽菌属物种(colletotrichum spp.)、葡萄孢属物种(botrytis spp.)、和尾孢属物种(cercosporaspp.)。在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，杀有害生物微细胞保持稳定并且保留杀有害生物活性至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月或至少13个月。

8、本披露的另外的方面包括制备杀有害生物微细胞的方法，这些方法包括以下步骤：(a)提供杀有害生物亲代细菌，该杀有害生物亲代细菌包括引起该亲代细菌的细胞分配功能中的修饰的至少一个遗传突变；(b)使该杀有害生物亲代细菌在允许形成杀有害生物微细胞的条件下生长；以及(c)使用离心、切向流过滤(tff)、或tff和离心将杀有害生物微细胞纯化。在该方面的一些实施例中，步骤(c)产生约1010个杀有害生物微细胞/升、约1011个杀有害生物微细胞/升、约1012个杀有害生物微细胞/升、约1013个杀有害生物微细胞/升、约1014个杀有害生物微细胞/升、约1015个杀有害生物微细胞/升、约1016个杀有害生物微细胞/升、或约1017个杀有害生物微细胞/升。该方面的一些实施例可以与前述实施例中任一项组合，进一步包括步骤(d)使这些杀有害生物微细胞干燥以产生贮存稳定的杀有害生物微细胞组合物。在该方面的一些实施例中，贮存稳定的杀有害生物微细胞组合物保留杀有害生物活性至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月或至少13个月。在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，亲代细菌的细胞分配功能中的修饰包括以下中的至少一种修饰：z-环抑制蛋白、细胞分裂拓扑特异性因子、或隔膜机构组分。在该方面的另外的实施例中，z-环抑制蛋白选自以下的组：minc多肽、mind多肽或mine多肽；其中细胞分裂拓扑特异性因子选自以下的组：mine多肽或diviva多肽，并且其中隔膜机构组分选自以下的组：ftsz多肽或ftsa多肽。

9、本披露的另外的方面包括产生杀有害生物微细胞的亲代细菌，其中(i)杀有害生物亲代细菌包括修饰亲代细菌的细胞分配功能的遗传突变；并且(ii)杀有害生物亲代细菌展现出商业相关的杀有害生物活性，其中对至少一种植物有害生物的ld50少于100mg/kg。在该方面的其他实施例中，修饰亲代细菌的细胞分配功能包括修饰以下中的至少一种的水平或活性：z-环抑制蛋白、细胞分裂拓扑特异性因子、或隔膜机构组分。在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，z-环抑制蛋白选自以下的组：minc多肽、mind多肽或mine多肽；其中细胞分裂拓扑特异性因子选自以下的组：mine多肽或diviva多肽，并且其中隔膜机构组分选自以下的组：ftsz多肽或ftsa多肽。

10、本披露的又另一方面包括控制有害生物的方法，这些方法包括：将如前述实施例中任一项所述的杀有害生物组合物应用于植物或待种植的区域。在该方面的一些实施例中，应用包括以下中的至少一个：注射应用、叶面应用、出苗前应用、或出苗后应用。在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，控制包括以下中的至少一个：当与未用组合物处理的对照植物相比时，植物上的有害生物数量减少，并且当与未用组合物处理的对照植物相比时，对植物的物理损坏减少。在该方面的另外的实施例中，有害生物数量的减少是至少10％减少、至少15％减少、至少20％减少、至少25％减少、至少30％减少、至少40％减少、至少50％减少、至少60％减少、至少70％减少、或至少80％减少，并且物理损坏的减少是至少10％减少、至少15％减少、至少20％减少、至少25％减少、至少30％减少、至少40％减少、至少50％减少、至少60％减少、至少70％减少、或至少80％减少。在该方面的其他实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，将组合物配制为以下中的至少一种：即用型(rtu)配制品、悬浮液浓缩物、罐混合物、气溶胶、种子处理、根浸渍、土壤处理、灌溉配制品、喷洒配制品、或浸透处理。在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，有害生物选自以下的组：小菜蛾(dbm)、红粉甲虫(rfb)、科罗拉多马铃薯甲虫(cpb)、地中海粉斑螟、秋粘虫(faw)、亚洲斑点螟蛉、鳞翅目物种、鞘翅目物种、双翅目物种、疫霉属物种、蜜环菌属物种、炭疽菌属物种、葡萄孢属物种、或尾孢属物种。

11、本披露的仍另一方面包括可湿性粉剂，其包括：衍生自多个杀有害生物亲代细菌的多个干燥的杀有害生物微细胞，该多个杀有害生物亲代细菌包括引起该亲代细菌的细胞分配功能中的修饰的至少一个遗传突变，其中将该可湿性粉剂配置为在水性载剂中分散以产生杀有害生物组合物，用于当组合物应用于植物时控制在该植物中或在该植物上的至少一种有害生物。该方面的一些实施例进一步包括农用化学可接受的固体载剂组分，其包括以下中的至少一种：粘土组分、高岭土组分、滑石组分、白垩组分、方解石组分、石英组分、浮石组分、硅藻土组分、蛭石组分、硅酸盐组分、二氧化硅组分、二氧化硅粉剂组分、铝组分、硫酸铵组分、磷酸铵组分、碳酸钙组分、尿素组分、糖组分、淀粉组分、锯末组分、研磨的椰子壳组分、研磨的玉米芯组分、以及研磨的烟草秆组分。在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，水性载剂包括水。在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，控制包括以下中的至少一个：当与未用组合物处理的对照植物相比时，植物上的有害生物数量减少，并且当与未用组合物处理的对照植物相比时，对植物的物理损坏减少。在该方面的另外的实施例中，有害生物数量的减少是至少10％减少、至少15％减少、至少20％减少、至少25％减少、至少30％减少、至少40％减少、至少50％减少、至少60％减少、至少70％减少、或至少80％减少，并且物理损坏的减少是至少10％减少、至少15％减少、至少20％减少、至少25％减少、至少30％减少、至少40％减少、至少50％减少、至少60％减少、至少70％减少、或至少80％减少。在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，至少一种有害生物选自以下的组：小菜蛾(dbm)、红粉甲虫(rfb)、科罗拉多马铃薯甲虫(cpb)、地中海粉斑螟、秋粘虫(faw)、亚洲斑点螟蛉、鳞翅目物种、鞘翅目物种、双翅目物种、疫霉属物种、蜜环菌属物种、炭疽菌属物种、葡萄孢属物种、或尾孢属物种。在该方面的其他实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，修饰亲代细菌的细胞分配功能包括修饰以下中的至少一种：z-环抑制蛋白、细胞分裂拓扑特异性因子、或隔膜机构组分。在该方面的另外的实施例中，z-环抑制蛋白选自以下的组：minc多肽、mind多肽或mine多肽；其中细胞分裂拓扑特异性因子选自以下的组：mine多肽或diviva多肽，并且其中隔膜机构组分选自以下的组：ftsz多肽或ftsa多肽。

12、本披露的另外的方面包括可种植的组合物，其包括：种子；以及覆盖该种子的涂层，其中该涂层包括衍生自多个杀有害生物亲代细菌的多个杀有害生物微细胞，该多个杀有害生物亲代细菌包括引起该亲代细菌的细胞分配功能中的修饰的至少一个突变，并且其中该多个杀有害生物微细胞以足以对摄食该种子或由此产生的幼苗的至少一种有害生物产生杀有害生物活性的颗粒浓度存在。在该方面的一些实施例中，亲代细菌的细胞分配功能中的修饰包括以下中的至少一种修饰：z-环抑制蛋白、细胞分裂拓扑特异性因子、或隔膜机构组分。在该方面的另外的实施例中，z-环抑制蛋白选自以下的组：minc多肽、mind多肽或mine多肽；其中细胞分裂拓扑特异性因子选自以下的组：mine多肽或diviva多肽，并且其中隔膜机构组分选自以下的组：ftsz多肽或ftsa多肽。在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，杀有害生物亲代细菌选自以下的组：除虫链霉菌、刺糖多孢菌、苏云金芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、双酶梭菌、日本金龟子芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、发光杆菌、嗜线虫致病杆菌、嗜虫沙雷氏菌、嗜虫耶尔森氏菌、喜昆虫假单胞菌、伯克霍尔德氏菌属物种、萨布茨格色杆菌或大肠杆菌。在该方面的另外的实施例中，杀有害生物亲代细菌选自以下的组：枯草芽孢杆菌菌株rti477、枯草芽孢杆菌菌株atcc 6633、枯草芽孢杆菌菌株atcc 21332、枯草芽孢杆菌菌株168、枯草芽孢杆菌菌株atcc 9943、枯草芽孢杆菌菌株qst713、和枯草芽孢杆菌菌株ncib 3610，萎缩芽孢杆菌菌株abi02a dsm32019、萎缩芽孢杆菌菌株abi03 dsm 32285、萎缩芽孢杆菌菌株abi05 dsm 24918，解淀粉芽孢杆菌菌株rti301、解淀粉芽孢杆菌fzb24、解淀粉芽孢杆菌fzb42、解淀粉芽孢杆菌ba-1、解淀粉芽孢杆菌lmg 5-29032、解淀粉芽孢杆菌mbi600、解淀粉芽孢杆菌cect8836、或解淀粉芽孢杆菌m4(s499)。在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，涂层包括约1x 102至约1x 109颗粒/种子的颗粒浓度，并且其中该浓度根据种子大小来确定。在该方面的另外的实施例中，颗粒浓度包括约1x 104颗粒/种子。)。在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，至少一种有害生物选自以下的组：小菜蛾(dbm)、红粉甲虫(rfb)、科罗拉多马铃薯甲虫(cpb)、地中海粉斑螟、秋粘虫(faw)、亚洲斑点螟蛉、鳞翅目物种、鞘翅目物种、双翅目物种、疫霉属物种、蜜环菌属物种、炭疽菌属物种、葡萄孢属物种、或尾孢属物种。在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，种子来自选自以下的组的植物：大豆、草莓、黑醋栗、白醋栗、红醋栗、蓝莓、覆盆子、番茄、胡椒、辣椒、马铃薯、茄子、黄瓜、莴苣、菊苣、芸苔属、玉米、小麦、稻、低芥酸菜籽、甜瓜、羽衣甘蓝、胡萝卜、或豆科植物。

13、本披露的另外的方面包括杀有害生物组合物，其包括：杀有害生物微细胞，其中该杀有害生物微细胞衍生自杀有害生物亲代细菌，该杀有害生物亲代细菌包括引起选自以下的组的一个或多个细胞分配功能因子的水平或活性中的修饰的至少一个遗传突变：minc多肽、mind多肽、mine多肽、ftsz多肽、ftsa多肽、para多肽、parb多肽、diviva多肽、或其组合。在该方面的一些实施例中，杀有害生物微细胞包括以下中的至少一种：外源杀有害生物蛋白质毒素、外源杀有害生物核酸、和外源杀有害生物活性成分。在该方面的一些实施例中，杀有害生物微细胞进一步包括外源表达盒，该外源表达盒被编码以表达该外源杀有害生物蛋白质毒素和该外源杀有害生物核酸中的任一种或两种。在该方面的一些实施例中，外源杀有害生物蛋白质毒素包括pir毒素或cry毒素中的至少一种。在该方面的一些实施例中，外源杀有害生物核酸是双链rna(dsrna)或发夹rna(hprna)。在该方面的一些实施例中，外源杀有害生物活性成分选自以下的组：具有杀真菌活性的成分、具有杀昆虫活性的成分、具有杀线虫活性的成分、具有选择性除草活性的成分、具有杀细菌活性的成分、或具有广谱活性的成分。在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，微细胞的杀有害生物活性以及外源杀有害生物蛋白质毒素、外源杀有害生物核酸或外源杀有害生物活性成分的杀有害生物活性靶向相同的有害生物。在该方面的其他实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，微细胞的杀有害生物活性以及外源杀有害生物蛋白质毒素、外源杀有害生物核酸或外源杀有害生物活性成分的杀有害生物活性靶向不同的有害生物。在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，至少一种有害生物选自以下的组：小菜蛾(dbm)、红粉甲虫(rfb)、科罗拉多马铃薯甲虫(cpb)、地中海粉斑螟、秋粘虫(faw)、亚洲斑点螟蛉、鳞翅目物种、鞘翅目物种、双翅目物种、疫霉属物种、蜜环菌属物种、炭疽菌属物种、葡萄孢属物种、或尾孢属物种。在该方面的一些实施例中，其可以与前述实施例中任一项组合，杀有害生物微细胞保持稳定并且保留杀有害生物活性至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月或至少13个月。

14、本发明的这些和其他方面在以下本发明的描述中更详细地阐述。