显微镜和观察方法

本发明涉及显微镜和观察方法，特别详细而言，涉及用于冻结试样而进行观察的技术。

背景技术：

1、在生物试样的光学显微镜观察中，为了避免观察中或观察前处理所导致的试样的变化，有时提前固定试样。在该情况下，使用基于交联蛋白质的醛的化学固定或基于有机溶剂的脱水固定。这些固定方法足以维持光学显微镜观察级的形态信息。但是，另一方面，有时根据分子的不同，会被醛氧化，或溶解于有机溶剂中。此外，固定的反应需要数分钟的时间，如果是具有厚度的试样则需要更多的时间对深部进行固定。而且还存在不能固定全部的分子这样的问题。

2、现有技术文献

3、专利文献

4、非专利文献1：fuest,et al.,j.microsc.272,87(2018).

技术实现思路

1、以上述情况为背景，最近，作为新的生物试样固定方法，冻结固定开始受到关注。冻结固定是通过使水冰冻，物理上停止试样中的分子、离子的运动的方法。只要在短时间内进行冻结，就能够将生物试样保持原样地固定。

2、在非专利文献1中，公开了使用散热器和加热器的方法。在该方法中，在由液氮冷却后的散热器上配置有薄的nicr加热器。通过加热器的启动停止控制，可以在任意的时机使设置在加热器上的试样冻结。通过使试样进入微流道，可以减少试样体积。在该方法中，成功以数十微秒冻结线虫。但是，在该现有技术中，冻结速度被加热器的厚度所制约。

3、本实施方式的显微镜具有：物镜，其被照射来自试样的光；以及试样冻结单元，其通过向所述物镜的视野内的所述试样供给冷冻剂或者与所述试样接触，从而使所述试样冻结。

4、在上述的显微镜中，也可以为，能够一边供给所述冷冻剂，一边观察所述试样。

5、在上述显微镜中，也可以为，所述显微镜设置有导入机构，所述导入机构基于来自所述试样的信号或用于刺激所述试样的信号，向所述试样导入所述冷冻剂。

6、在上述显微镜中，也可以为，所述试样冻结单元具有流过所述冷冻剂的供给管，在所述冷冻剂的供给管设置的阀成为所述导入机构。

7、在上述显微镜中，也可以为，所述显微镜还具有对所述试样进行加压的加压单元，一边对所述试样进行加压，一边将所述试样冻结。

8、在上述显微镜中，也可以为，使用对所述试样进行加压的加压单元，一边对所述试样进行加压，一边观察所述试样。

9、在上述显微镜中，也可以为，所述显微镜设置有控制部，所述控制部控制对所述试样进行加压的时机、以及导入所述冷冻剂的时机。

10、在上述显微镜中，也可以为，从所述试样的上方对所述试样供给液体的所述冷冻剂。

11、在上述显微镜中，也可以为，所述显微镜具有对所述试样进行保持的试样保持器，在所述试样保持器设置有储存冷冻剂的冷冻剂储存槽或供冷冻剂流动的流道。

12、在上述显微镜中，也可以为，在所述试样的上侧配置所述物镜，所述试样冻结单元具有从上侧向所述试样喷出所述冷冻剂的喷嘴，在所述物镜的下侧设置有保护所述物镜的壳。

13、在上述显微镜中，也可以为，具有通过向冻结的所述试样照射光而使所述试样的至少一部分融化的功能。

14、本实施方式的观察方法具有：将试样配置在物镜的视野内的步骤；

15、通过将冷冻剂向所述物镜的视野内的所述试样供给或移动，从而使所述试样冻结的步骤；以及观察所述冻结后的所述试样的步骤。

16、在上述观察方法中，也可以为，一边供给所述冷冻剂，一边观察所述试样。

17、在上述观察方法中，也可以为，基于来自所述试样的信号或用于刺激所述试样的信号，向所述试样导入所述冷冻剂。

18、在上述观察方法中，也可以为，设置有流过所述冷冻剂的供给管，通过在所述冷冻剂的供给管设置的阀，调整导入所述冷冻剂的时机。

19、在上述观察方法中，也可以为，通过向冻结后的所述试样照射光而使所述试样的至少一部分融化。

20、根据本发明，可以提供一种能够冻结试样并进行观察的显微镜和观察方法。

技术特征：

1.一种显微镜，其具有：

2.根据权利要求1所述的显微镜，其中，

3.根据权利要求1所述的显微镜，其中，

4.根据权利要求3所述的显微镜，其中，

5.根据权利要求1所述的显微镜，其中，

6.根据权利要求1所述的显微镜，其中，

7.根据权利要求6所述的显微镜，其中，

8.根据权利要求1所述的显微镜，其中，

9.根据权利要求1所述的显微镜，其中，

10.根据权利要求1所述的显微镜，其中，

11.根据权利要求1至10的任一项所述的显微镜，其中，

12.一种观察方法，具有：

13.根据权利要求12所述的观察方法，其中，

14.根据权利要求12所述的观察方法，其中，

15.根据权利要求14所述的观察方法，其中，

技术总结
本实施方式的显微镜(1)具有：物镜(11)，其被照射来自试样(200)的光；试样冻结单元，其通过向物镜(11)的视野内的试样(200)供给冷冻剂(160)或者与试样(200)接触，从而使试样(200)冻结。通过使用该结构的显微镜(1)，能够对物镜(11)的视野内的试样进行冻结并观察。

技术研发人员：藤田克昌,熊本康昭
受保护的技术使用者：国立大学法人大阪大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/4