本发明属于液体肥料的
技术领域：
，更具体地，涉及一种有效促进蜜宝西瓜保花保果的液体肥料及其制备方法。
背景技术：
：蜜宝西瓜又名台黑，幼果期果面深绿色,隐约呈现绿色条纹,成熟后果面有白色的果粉。单瓜重6～7斤,大者可达12斤左右。皮厚约1.2～1.5,耐贮运。植株生长中等,分枝多,座果力强,系中熟品种。瓜瓤大红色,质地致密，味甜，质好。种子小,浅褐色,但数量较多。因该品种易分枝,座果多,所以在栽培是需要大量营养元素供应。链霉菌属(streptomyces)是放线菌目的一属。基内菌丝不断裂，气生菌丝通常发育良好，形成长(有时短)的孢子丝。孢子不能运动，外鞘上常有疣、刺或毛发等状饰物。链霉菌广泛存在于土壤中，是丝状的革兰氏阳性细菌，主要通过孢子繁殖，绝大多数链霉菌对人体无害。链霉菌是产生各种抗生素的主要来源，源于链霉菌的抗生素包括红霉素、四环素、链霉素、氯霉素、新霉素、制霉菌素、卡那霉素、放线菌酮和两性霉素等，因此，对于链霉菌的已有研究主要集中于菌株产生抗菌活性物质的能力和大小等方面。蜜宝西瓜经常出现开花少、结果少等的现象和生长期间落花落果现象，主要由于栽培过程中植株体缺少营养贮存，因此栽培过程中的营养肥料的施加直接影响果实发育及产量。技术实现要素：本发明要解决的技术问题是克服现有蜜宝西瓜保花保果的问题，提供一种有效促进蜜宝西瓜保花保果的液体肥料及其制备方法。本发明上述目的通过以下技术方案实现：一种有效促进蜜宝西瓜保花保果的液体肥料，由以下重量份的物质组成：活性液体肥基底制剂1000份；氮22～38份、钾22～36份、磷10～20份、硫11～20份、钙0.1～5份、硼6～15份、锌0.05～3份、锰0.05～3份、镁0.05～3份；所述液体肥料中含有胺鲜酯0.5～6份、甘氨酸22～35份、脯氨酸20～30份、赖氨酸6～16份、苯丙氨酸7～18份；总氮含量≥2.7mg/g，氨基氮含量≥0.68mg/g，有机质含量≥120g/l。所述活性液体肥基底制剂由链霉菌属菌株“ty-001#”发酵得到。链霉菌属菌株“ty-001#”的培养基为：取大豆进行浸泡或取豆粕进行预发酵后，进行打浆、过滤；然后往滤液中加入糖后，加水定容至培养基中糖的浓度≥100g/l，ph为7.4～7.6。所述链霉菌属菌株“ty-001#”于2017年3月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，分类命名为streptomyces.，其保藏编号为gdmccno.：60152，保藏地址是中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。进一步地，所述有效促进蜜宝西瓜保花保果的液体肥料，由以下重量份的物质组成：活性液体肥基底制剂1000份；氮28～33份、钾26～32份、磷13～18份、硫13～17份、钙0.5～3份、硼8～12份、锌0.1～1份、锰0.1～1份、镁0.1～1份；所述液体肥料中含有胺鲜酯1～5份、甘氨酸26～32份、脯氨酸21～27份、赖氨酸8～14份、苯丙氨酸10～14份；总氮含量≥2.7mg/g，氨基氮含量≥0.68mg/g，有机质含量≥120g/l。优选地，所述有效促进蜜宝西瓜保花保果的液体肥料，由以下重量份的物质组成：活性液体肥基底制剂1000份；氮30份、钾30份、磷15份、硫15份、钙2份、硼10份、锌0.5份、锰0.5份、镁0.5份；所述液体肥料中含有胺鲜酯2份、甘氨酸28份、脯氨酸24份、赖氨酸12份、苯丙氨酸12份；总氮含量≥2.7mg/g，氨基氮含量≥0.68mg/g，有机质含量≥120g/l。进一步地，所述氮、钾、磷的份数比为2:2:1。进一步地，所述钙、硼、硫之比为1:5:6～8。进一步地，所述胺鲜酯、赖氨酸与苯丙氨酸的比例为1:6:6。进一步地，所述硫的来源包括硫磺、硫酸钙、硫酸钾、硫化钠、硫化铵、液态二氧化硫。进一步地，所述钙的来源包括硫酸钙、乳酸钙、葡萄糖酸钙、柠檬酸钙。一种所述有效促进蜜宝西瓜保花保果的液体肥料的制备方法，包括以下步骤：s1.制备培养基：取大豆进行浸泡或取豆粕进行预发酵后，进行打浆、过滤；然后往滤液中加入糖后，加水定容至培养基中糖的浓度≥100g/l，ph为7.4～7.6；s2.接种：取链霉菌属菌株“ty-001#”的液体菌种，接种到培养基中，搅拌均匀；s3.发酵：在发酵过程中往培养基中持续通入氧气，于20～28℃下持续发酵7～8天后，得到发酵液；s4.终止发酵：将发酵液灌装密闭静置15天，得到所述活性液体肥基底制剂；s5.液体肥料的配置：往所述活性液体肥基底制剂添加胺鲜酯、甘氨酸、脯氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸或氮、钾、磷、硫、钙、硼、锌、锰、镁中的一种或几种，得到所述液体肥料；所述链霉菌属菌株“ty-001#”于2017年3月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，分类命名为streptomyces.，其保藏编号为gdmccno.：60152，保藏地址是中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。进一步地，所述预发酵的步骤为：s11.往豆粕中加水，并搅拌充分均匀，直至豆粕用手紧捏达到滴水成线的状态即可；s12.用薄膜覆盖在豆粕表面，不留缝隙，计时开始预发酵过程；s13.预发酵时间为3～5天；开始发酵2天后，将温度计插入豆粕深处，发酵原料内部温度≥40℃时，将预发酵豆粕里外翻转一次，继续发酵2～3天。优选地，所述步骤s1中加水定容至培养基中糖的浓度为100g/l。优选地，所述活性液体肥基底制剂存放15天后其氨基态氮含量≥4.2g/l。优选地，所述液体菌种中每毫升有2亿个活菌；所述液体菌种与培养基的比例为165g:250l。优选地，链霉菌属菌株“ty-001#”的形态特征为：菌落呈圆形，乳白色，边缘光滑，表明有炼乳状光泽；孢子革兰氏染色呈阳性。一种所述链霉菌属菌株(streptomyces)的培养方法，包括以下步骤：y1.取链霉菌属菌株“ty-001#”划线于固体培养基上，25～30℃倒置活化培养3～7天，制得活化后菌株；y2.取步骤s1制得的活化后菌株接种至液体培养基中，在温度为25～30℃、转数为150～220转/分钟的条件下，摇床培养3～7天，得到菌液。优选地，所述液体培养基每升组分如下：取大豆、豆粕100g磨成豆浆过滤，弃渣；白砂糖、蔗糖或红糖100g；水定容至1升，ph为7.4～7.6。优选地，所述液体培养基每升组分如下：牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化钠5.0g，水定容至1升，ph为7.4～7.6。优选地，所述固体培养基每升组分如下：牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化钠5.0g、琼脂15～25g，水定容至1升，ph为7.4～7.6。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明的液体肥料能够有效促进蜜宝西瓜的保花保果，坐果率显著提高，且有利于果实的品质提高和果树的生长发育。本发明的液体肥料对蜜宝西瓜的花朵数增加了25.0％，坐果率84.0％，相对对照组增加了29.2％，具有显著的提高。使用了本发明液体肥料的西瓜保果率达90.4％，而对照组仅为76.9％；单个鲜果重也增加了28.1％，实现亩产量增长率高达99.7％，效果非常可观。然而，该液体肥料对早春红玉西瓜的花朵数量以及坐果率的促进效果都没有起到实质的作用，对早春红玉西瓜的保果率、亩产量和果实品质增加仅有较为小的作用。本发明的液体肥料对蜜宝西瓜的保花保果具有十分显著的效果，对不同品种的西瓜藤的保花保果具有较高的选择性。本发明提供的链霉菌属菌株“ty-001#”，该菌株能够适应高渗透压下通气发酵培养。具体实施方式以下结合说明书和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本
技术领域：
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。实施例1链霉菌属菌株(streptomyces)的分离与鉴定1.实验材料和条件(1)在湖南省郴州市某地采集到的土壤样品。(2)液体培养基每升组分如下：牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化钠5.0g，水定容至1升，ph为7.5。固体培养基每升组分如下：牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化钠5.0g、琼脂15～25g，水定容至1升，ph为7.5。培养基分装，高压灭菌锅灭菌(121℃，30min)。(3)无菌操作条件：所有器皿和用具均须经高压灭菌锅灭菌(121℃，30min)，接种等操作均在超净工作台内进行。(4)菌株培养条件：置于25±1℃光照恒温箱(14l：10d)中培养，待菌落形成后，转移到pda斜面，再转入5℃冰箱内保存。2.菌株分离与筛选(1)从湖南省郴州市某地的土壤样品中分离获得一株链霉菌属菌株t0。(2)将分离得到的链霉菌属菌株t0接入固体培养基中斜面继代培养，再转入5℃冰箱内保存。(3)将继代培养的菌株t0于液体培养基中，在振荡摇床上220转/分钟，25℃条件下培养5天。(4)培养5天后的t0液体菌，放置于20瓦紫外线灯25cm处照射2小时。(5)将照射后的t0液体菌接入固体斜面培养基中25℃下培养5天，然后挑出长得最好的存活菌落接入固体培养基继代培养。(6)重复若干遍步骤(2)～(5)的过程循环。在每一遍重复过程循环中，固体培养基和液体培养基中的氯化钠用量都增加1克，直至固体培养基和液体培养基中的氯化钠用量达到25克。将最终存活的健壮菌株进行继代培养，再转入5℃冰箱内保存。(7)将以上筛选出的耐高渗透压菌株t0，进行发酵生产试验。经7天25℃敞开有氧发酵后，测定发酵液中氨基态氮(按甲醛滴定法测定氨基氮标准检测)，挑选出氨基态氮含量(≥0.7mg/l)最高的菌株作为最终生产用菌株，命名“ty-001#”。发酵生产试验所用的培养基如下：取大豆100g磨成豆浆过滤，弃豆渣；白砂糖100g，定容至1000ml，ph为7.5。3.菌株“ty-001#”的鉴定(1)形态学鉴定形态特征为：菌落呈圆形，乳白色，边缘光滑，表明有炼乳状光泽；孢子革兰氏染色呈阳性。形态学鉴定显示，该菌株属于链霉菌属。综上所述，菌株“ty-001#”为链霉菌属，于2017年3月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其保藏编号为gdmccno.：60152，保藏地址是中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。实施例2一种有效促进蜜宝西瓜保花保果的液体肥料的制备和应用一种有效促进蜜宝西瓜保花保果的液体肥料的制备方法包括以下步骤：s1.制备培养基：取1000g大豆浸泡10h后，放入磨浆机中磨成豆浆，滤去豆渣，将滤液置于干净的发酵桶中，然后往滤液中加入白砂糖后，加水定容至培养基中糖的浓度100g/l，ph为7.5；s2.接种：取链霉菌属菌株“ty-001#”的液体菌种，接种到培养基中，搅拌均匀；液体菌种中每毫升有2亿个活菌；液体菌种与培养基的比例为165g:250l；s3.发酵：开启氧气泵，在发酵过程中往发酵桶中持续通入氧气，并根据发酵桶中单独浆液气泡情况，加入适量的消泡剂。发酵桶用透气膜覆盖，以免落入杂物，于25℃下持续发酵7天后，得到发酵液；s4.终止发酵：将发酵液灌装密闭静置15天，得到活性液体肥基底制剂。s5.液体肥料的配置：往1000份活性液体肥基底制剂中添加胺鲜酯2份、甘氨酸28份、脯氨酸24份、赖氨酸12份、苯丙氨酸12份、氮30份、钾30份、磷15份、硫15份、钙2份、硼10份、锌0.5份、锰0.5份、镁0.5份，得到所述液体肥料；所得液体肥料中总氮含量≥2.7mg/g，氨基氮含量≥0.68mg/g，有机质含量≥120g/l。其中n、p、k、s、ca、b、zn、mn、mg分别来源于磷酸二氢铵和氨基酸、磷酸二氢铵、硫酸钾、硫酸钾、葡萄糖酸钙、硼酸、氯化锌、mnedta、硫酸镁。链霉菌属菌株“ty-001#”于2017年3月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，分类命名为streptomyces.，其保藏编号为gdmccno.：60152，保藏地址是中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。实施例3一种有效促进蜜宝西瓜保花保果的液体肥料的制备和应用一种有效促进蜜宝西瓜保花保果的液体肥料的制备方法包括以下步骤：s1.制备培养基：取1000g豆粕进行预发酵后，放入磨浆机中进行打浆，过滤，将滤液置于干净的发酵桶中，然后往滤液中加入白砂糖后，加水定容至培养基中糖的浓度100g/l，ph为7.5；预发酵的步骤为：s11.往豆粕中加水，并搅拌充分均匀，直至豆粕用手紧捏达到滴水成线的状态即可；s12.用薄膜覆盖在豆粕表面，不留缝隙，计时开始预发酵过程；s13.预发酵时间为4天；开始发酵2天后，将温度计插入豆粕深处，发酵原料内部温度≥40℃时，将预发酵豆粕里外翻转一次，继续发酵2天。s2.接种：取链霉菌属菌株“ty-001#”的液体菌种，接种到培养基中，搅拌均匀；液体菌种中每毫升有2亿个活菌；液体菌种与培养基的比例为165g:250l；s3.发酵：开启氧气泵，在发酵过程中往发酵桶中持续通入氧气，并根据发酵桶中单独浆液气泡情况，加入适量的消泡剂。发酵桶用透气膜覆盖，以免落入杂物，于25℃下持续发酵7天后，得到发酵液；s4.终止发酵：将发酵液灌装密闭静置15天，得到活性液体肥基底制剂。s5.液体肥料的配置：往1000份活性液体肥基底制剂中添加胺鲜酯1.5份、甘氨酸22份、脯氨酸20份、赖氨酸9份、苯丙氨酸9份、氮38份、钾38份、磷19份、硫12份、钙2份、硼10份、锌0.5份、锰0.5份、镁0.5份，得到所述液体肥料；所得液体肥料中总氮含量≥2.7mg/g，氨基氮含量≥0.68mg/g，有机质含量≥120g/l；其中n、p、k、s、ca、b、zn、mn、mg分别来源于磷酸二氢铵和氨基酸、磷酸二氢铵、硫酸钾、硫酸钾、葡萄糖酸钙、硼酸、氯化锌、mnedta、硫酸镁。链霉菌属菌株“ty-001#”于2017年3月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，分类命名为streptomyces.，其保藏编号为gdmccno.：60152，保藏地址是中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。实施例4一种有效促进蜜宝西瓜保花保果的液体肥料的制备和应用一种有效促进蜜宝西瓜保花保果的液体肥料的制备方法包括以下步骤：s1.制备培养基：取1000g大豆浸泡10h后，放入磨浆机中磨成豆浆，滤去豆渣，将滤液置于干净的发酵桶中，然后往滤液中加入白砂糖后，加水定容至培养基中糖的浓度100g/l，ph为7.5；s2.接种：取链霉菌属菌株“ty-001#”的液体菌种，接种到培养基中，搅拌均匀；液体菌种中每毫升有2亿个活菌；液体菌种与培养基的比例为165g:250l；s3.发酵：开启氧气泵，在发酵过程中往发酵桶中持续通入氧气，并根据发酵桶中单独浆液气泡情况，加入适量的消泡剂。发酵桶用透气膜覆盖，以免落入杂物，于25℃下持续发酵7天后，得到发酵液；s4.终止发酵：将发酵液灌装密闭静置15天，得到活性液体肥基底制剂。s5.液体肥料的配置：往1000份活性液体肥基底制剂中添加胺鲜酯1.5份、甘氨酸22份、脯氨酸20份、赖氨酸9份、苯丙氨酸9份、氮22份、钾22份、磷11份、硫11份、钙1.2份、硼6份、锌0.05份、锰0.05份、镁0.05份，得到所述液体肥料；所得液体肥料中总氮含量≥2.7mg/g，氨基氮含量≥0.68mg/g，有机质含量≥120g/l。其中n、p、k、s、ca、b、zn、mn、mg分别来源于磷酸二氢铵和氨基酸、磷酸二氢铵、硫酸钾、硫酸钾、葡萄糖酸钙、硼酸、氯化锌、mnedta、硫酸镁。链霉菌属菌株“ty-001#”于2017年3月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，分类命名为streptomyces.，其保藏编号为gdmccno.：60152，保藏地址是中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。实施例5一种有效促进蜜宝西瓜保花保果的液体肥料的制备和应用一种有效促进蜜宝西瓜保花保果的液体肥料的制备方法包括以下步骤：s1.制备培养基：取1000g大豆浸泡10h后，放入磨浆机中磨成豆浆，滤去豆渣，将滤液置于干净的发酵桶中，然后往滤液中加入白砂糖后，加水定容至培养基中糖的浓度100g/l，ph为7.5；s2.接种：取链霉菌属菌株“ty-001#”的液体菌种，接种到培养基中，搅拌均匀；液体菌种中每毫升有2亿个活菌；液体菌种与培养基的比例为165g:250l；s3.发酵：开启氧气泵，在发酵过程中往发酵桶中持续通入氧气，并根据发酵桶中单独浆液气泡情况，加入适量的消泡剂。发酵桶用透气膜覆盖，以免落入杂物，于25℃下持续发酵7天后，得到发酵液；s4.终止发酵：将发酵液灌装密闭静置15天，得到活性液体肥基底制剂；s5.液体肥料的配置：往1000份活性液体肥基底制剂中添加胺鲜酯2.5份、甘氨酸35份、脯氨酸30份、赖氨酸15份、苯丙氨酸15份、氮36份、钾36份、磷18份、硫20份、钙3份、硼15份、锌3份、锰3份、镁3份，得到所述液体肥料；所得液体肥料中总氮含量≥2.7mg/g，氨基氮含量≥0.68mg/g，有机质含量≥120g/l；其中n、p、k、s、ca、b、zn、mn、mg分别来源于磷酸二氢铵和氨基酸、磷酸二氢铵、硫酸钾、硫酸钾、葡萄糖酸钙、硼酸、氯化锌、mnedta、硫酸镁。链霉菌属菌株“ty-001#”于2017年3月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，分类命名为streptomyces.，其保藏编号为gdmccno.：60152，保藏地址是中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。对比例1一种有效促进蜜宝西瓜保花保果的液体肥料的制备和应用一种有效促进蜜宝西瓜保花保果的液体肥料的制备方法包括以下步骤：s1.制备培养基：取1000g大豆浸泡10h后，放入磨浆机中磨成豆浆，滤去豆渣，将滤液置于干净的发酵桶中，然后往滤液中加入白砂糖后，加水定容至培养基中糖的浓度100g/l，ph为7.5；s2.发酵：开启氧气泵，在发酵过程中往发酵桶中持续通入氧气，并根据发酵桶中单独浆液气泡情况，加入适量的消泡剂。发酵桶用透气膜覆盖，以免落入杂物，于25℃下持续发酵7天后，得到发酵液；s3.终止发酵：将发酵液灌装密闭静置15天，得到所述活性液体肥基底制剂。s4.液体肥料的配置：往1000份活性液体肥基底制剂中添加胺鲜酯3份、甘氨酸22份、脯氨酸24份、赖氨酸10份、苯丙氨酸10份、氮30份、钾25份、磷20份、硫15份、钙5份、硼15份、锌3份、锰3份、镁3份，得到所述液体肥料；所得液体肥料中总氮含量≥2.7mg/g，氨基氮含量≥0.68mg/g，有机质含量≥120g/l。有效促进蜜宝西瓜保花保果的液体肥料的应用效果评价：液体肥料能快速补充果藤生长所需的养分，促进瓜果生长。为验证本发明制备的液体肥料在蜜宝西瓜果藤上大面积示范应用的实际效果，申请人选择在蜜宝西瓜上进行了试验示范。1材料与方法1.1供试地点1设在资兴市某蜜宝西瓜基地内，试验地面积12亩，土壤肥力水平较均匀。供试地点2设在建宁市某早春红玉西瓜基地内，试验地面积12亩，土壤肥力水平较均匀。1.2供试作物1蜜宝西瓜，藤行距0.6m*1m，长势中庸且一致。供试作物2早春红玉西瓜，藤行距0.6m*1m，长势中庸且一致。1.3供试肥料为实施例2～5制得的蜜宝西瓜保花保果的液体肥料，产品剂型为液体。1.4每个供试地点均进行3个试验处理：①实验组：种植后每3个月浇施一次供试肥料，每次500ml/亩，稀释200倍。②对照组(ck)：每亩每次以同实验组等量清水同时期进行，其他施肥措施同处理①。③对比例组：每亩每次以同实验组等量的对比例1制备的化肥同时期进行，其他施肥措施同处理①。实验组和对照组均按当地常规栽培技术进行管理。试验各处理以每亩为小区，重复3次，管理一致。各组随机选取10株瓜藤，统计10株瓜藤花果数量的总和，测定保花保果状况。2结果与分析2.1不同处理对坐果率的影响由表1可知，本实施例2～5制备的液体肥料相对对照组蜜宝西瓜的花朵数增加了25.0％，坐果率达84.0％，相对对照组增加了29.2％，相对对比例组增加了16.5％具有显著的提高。然而，该液体肥料对早春红玉西瓜的花朵数量以及坐果率的促进效果都没有起到实质的作用。可见，本发明的液体肥料对不同西瓜藤的保花保果具有选择性，对蜜宝西瓜的保花保果作用最为显著。表1不同西瓜藤品质不同处理的坐果率结果处理花朵数/朵坐果数/个坐果率/％蜜宝西瓜实验组504284.0蜜宝西瓜对照组402665.0蜜宝西瓜对比例组433172.1早春红玉西瓜实验组514078.4早春红玉西瓜对照组483675.0早春红玉西瓜对比例组493877.62.2对亩产量的影响统计每亩株数，随机10点取样，统计10株挂果数，称鲜果重，计算10株挂果数总和、单个鲜果重的平均值，测算理论亩产量。经测算，每亩栽种1000株西瓜藤，抽取10株西瓜藤挂果数、单个鲜果均重和亩产量的平均值如表2。由表2可知，使用了该液体肥料的蜜宝西瓜保果率达90.4％，而对照组仅为76.9％，对照组为81.6％；单个鲜果重也增加了28.1％，实现亩产量增长率高达99.7％，效果非常可观。然而，该液体肥料对早春红玉西瓜的保果率和亩产量增加仅有较为小的作用。可见，本发明的液体肥料对蜜宝西瓜的保花保果具有十分显著的效果，对不同品种的西瓜藤具有较高的选择性。表2不同西瓜藤品质不同处理的结果情况及亩产量以上所述仅为本发明的优选实施例，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的包含范围之内。当前第1页12