本发明涉及生物肥料领域，具体而言，涉及一种用于防治当归根腐病的微生物肥料、其制备方法及应用。
背景技术：
当归(angelicasinensis(oliv.)diels)，也叫岷归、秦归等，具有滋阴、补血、提高免疫力等诸多药理功效。近年来，随着人们对当归药理活性物质的不断挖掘，其经济价值凸显，导致市场对当归资源的需求激增。目前，在我国当归的主产区甘肃、云南、宁夏等地，人们通过人工种植的方式来满足市场供应量，但是，随着种植面积的不断扩大，不可避免的出现了当归的连作种植，以及由此导致的当归根腐病等连作障碍问题，严重影响着当归产业的可持续发展。
作为当归根腐病的主要致病因子镰刀属菌(fusariumlinkexfr.)，对其防控一直是难点，也是重点，主要原因在于：镰刀属菌来源广泛，几乎任何植物和土壤等都携带有各种镰刀菌，难以实现彻底根治；镰刀属菌可产孢子，对环境的耐受力较强，对化学农药或是物理火烧表层土壤等方法不甚敏感；镰刀属菌喜好潮湿、偏酸性土壤，而土壤的属性又与耕作方式和当地的气候等有关，防治易受外界影响。因此，用传统方法难以有效解决镰刀属菌带来的土传病害问题。
技术实现要素：
本发明的第一目的在于提供一种用于防治当归根腐病的微生物肥料，其能够将寡雄腐霉和肥料混合发酵，通过肥料作为载体，将寡雄腐霉运用到当归根腐防治中，使得当归在连作的过程中，土壤微环境改变不大，可显著提高当归根腐病的防治率。
本发明的第二目的在于提供上述微生物肥料的制备方法，其能够制出可显著提高当归根腐病防治率的微生物肥料。
本发明的第三目的在于提供上述微生物肥料在农业种植中的应用，其能够提高当归根腐病的防治率。
本发明的第四目的在于提供上述微生物肥料在治疗当归根腐病中的应用，其能够提高当归根腐病的防治率。
本发明是这样实现的：
一种用于防治当归根腐病的微生物肥料，其包括原料：寡雄腐霉和肥料；其中，寡雄腐霉和肥料混合发酵。
一种如上述微生物肥料的制备方法，将寡雄腐霉与肥料混合发酵。
上述的微生物肥料在农业种植中的应用。
上述微生物肥料在治疗当归根腐病中的应用。
本发明具有以下有益效果：
本发明的提供一种用于防治当归根腐病的微生物肥料，其包括原料：寡雄腐霉和肥料；其中，寡雄腐霉和肥料混合发酵。本发明提供的微生物肥料能够将寡雄腐霉和肥料混合发酵，通过肥料作为载体，大量的将寡雄腐霉运用到根腐防治中，使得植物在连作的过程中，土壤微环境改变不大，可显著提高植物根腐病的防治率。此外，本发明还提供上述微生物肥料的制备方法以及其应用，以达到提高植物根腐病的防治率的目的。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的微生物肥料进行具体说明。
本发明实施例提供一种用于防治当归根腐病的微生物肥料，其包括原料：寡雄腐霉和肥料；其中，寡雄腐霉和肥料混合发酵。
具体地，寡雄腐霉是自然界中存在的一种适应性很强的寄生真菌，寡雄腐霉通过寄生作用有效杀灭致病真菌，通过抗生作用抑制致病真菌的孢子萌发、菌丝生长，从而达到治病防病的目的；其可定植在植物根系表面，并可进入根系维管束，从而能有效预防和治疗植物根系病害；其进入根系的过程促使植物根系细胞壁增厚，其分泌物寡雄蛋白可刺激植物本身抗病机制的发生，提高植物抗病能力，从而达到减少各种病害发生的目的；寡雄腐霉分泌的类生长素化合物促进植物生长素的合成，分泌的多种胞外酶分解土壤中的磷，从而达到促进根系生长、增加作物产量的效果。
进一步地，寡雄腐霉为3～7份，肥料为93～97份。采用该比例混合制得的微生物肥料，有易于肥料中的寡雄腐霉扩增，提高该微生物肥料对抑制当归根腐病的防治率。
进一步地，上述寡雄腐霉为寡雄腐霉孢子粉或寡雄腐霉菌液。
进一步地，肥料可以为有机肥，有机肥包括饼肥、堆肥、沤肥、厩肥、沼肥以及绿肥中的一种或多种。具体的，有机肥是指富含有机物质，既能提供农作物生长所需养分，改良土壤，又能提高作物产量、保持土壤费力的一种肥料。其中，饼肥是指有豆饼、菜子饼、麻子饼、棉子饼、花生饼、桐子饼、茶子饼等；堆肥是指以各类桔秆、落叶、青草、动植物残体、人畜粪便为原料，与少量泥土混合堆积而成的一种有机肥料；沤肥是天然有机质经微生物分解或发酵形成的一种肥料，又称农家肥，其原料来源广，数量大，养分全，含量低，肥效迟而长，须经微生物分解转化后才能为植物所吸收；厩肥是指家畜(猪、牛、马、羊、鸡、鸭等)粪尿和垫圈材料、饲料残茬混合堆积并经微生物作用而成的肥料；沼肥在指沼液及沼渣组成，沼液及治渣总称为沼肥，是生物质经沼气池厌氧发酵的产物；绿肥是指用绿色植物体(如豆科的绿豆、蚕豆、草木樨、田菁、苜蓿、苕子等。非豆科绿肥有黑麦草、肥田萝卜、小葵子、满江红、水葫芦、水花生等)制成的肥料，绿肥是一种养分完全的生物肥源。
本发明提供一种上述微生物肥料的制备方法，其包括步骤：将寡雄腐霉与肥料混合发酵。
进一步地，寡雄腐霉与肥料混合前，可以将寡雄腐霉单独发酵，得到寡雄腐霉发酵液，然后将寡雄腐霉发酵液与肥料混合发酵。换言之，在微生物肥料的制备方法中，寡雄腐霉要经过二次发酵，二次发酵能够增加寡雄腐霉的分泌物，提高微生物肥料的抗病率，更好地促进植物生长。
进一步地，上述的寡雄腐霉单独发酵是指寡雄腐霉放在发酵培养基上进行发酵，发酵培养基包括有下列组分：马铃薯19％～21％，蛋白胨0.4％～0.6％，氯化钠0.4％～0.6％。
进一步地，在发酵培养基中，可以将寡雄腐霉以2％～5％的比例添加至发酵培养基中。
本发明还提供上述微生物肥料在农业种植中的应用。具体为在当归时，将混合有寡雄腐霉的微生物肥料与土壤接触，既能给当归提供养分，又能抑制当归根腐病的发生。
本发明还提供上述微生物肥料在治疗当归根腐病中的应用。具体为，将本发明提供的微生物肥料与有根腐病的当归的根系接触。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
第一实施例
本实施例提供一种用于防治当归根腐病的微生物肥料的制备方法。
寡雄腐霉孢子粉的制备
将寡雄腐霉放到试管中进行斜面培养(马铃薯葡萄糖琼脂培养基+15％琼脂)，待斜面培养基上长满孢子后，在超净台上每管用10ml无菌生理盐水注入斜面试管，用无菌接种环轻触斜面表面，使孢子充分洗脱混匀，得到洗脱液。该洗脱液用无菌洁净滤纸过滤取得孢子悬液，再将该孢子悬液经6000r/min离心弃上清液浓缩至约2ml，将其接种至装有20ml一级种子摇瓶培养液(葡萄糖2％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，0.1mpa、121℃灭菌20min后冷却)的100ml三角瓶中，于25℃～28℃、转速180r/min的摇床上培养48h，然后转接到装有100ml二级种子培养液(蔗糖2％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，0.1mpa、121℃灭菌20min后冷却)的250ml摇瓶中，在25℃、转速180r/min的摇床上培养48h。之后将孢悬液转接到50l气升式发酵罐培养基中(马铃薯20％，蛋白胨0.5％，氯化钠0.5％)，温度25℃，通气量1.0vvm，搅拌转速120r/min发酵48h得到菌液。将气升发酵罐培养过的菌液再转接到转鼓式固体发酵罐中(内装灭过菌的容积量30％的培养基，组成为：豆饼5％，玉米粉10％，麸皮50％，秸秆粉35％，其中固体物料与水分的质量比为3:2)，发酵前3天温度为28℃，第4d起每天降温3℃培养，至发酵第6d时结束，所得为寡雄腐霉原孢子粉制剂，有效活菌数6×108个/g。
有机肥的制备
将调整好碳氮比(25:1)和含水量55％的物料(玉米秸秆+牛羊粪便混合物)，按照1‰的比例加入有机物料腐熟菌剂，搅拌混匀；将混匀的物料堆成梯形发酵，堆顶宽1米，堆底宽2米，堆高0.8～1米，堆料的长度根据物料量确定，夏季注意避免阳光直接照射；发酵开始后，每天检测物料温度，当距表层30厘米处物料温度升至60℃以上时翻堆，并重复这一过程，直到堆温在连续3天时间内呈下降趋势时为止，此过程通常为10天。
微生物肥料的制备
将上述制备的孢子粉以2％～5％的比例添加到发酵培养基中，再以3％的比例(孢子粉3份，有机肥93份)接种至上述有机肥当中，或堆放或摊晾3d后制得有抑菌作用的生物有机肥。
第二实施例
本实施例提供一种用于防治当归根腐病的微生物肥料的制备方法，与第一实施例提供的制备方法大体相同，区别在于参数的变化，如下：
寡雄腐霉孢子粉的制备
将寡雄腐霉放到试管中进行斜面培养(马铃薯葡萄糖琼脂培养基+15％琼脂)，待斜面培养基上长满孢子后，在超净台上每管用10ml无菌生理盐水注入斜面试管，用无菌接种环轻触斜面表面，使孢子充分洗脱混匀，得到洗脱液。该洗脱液用无菌洁净滤纸过滤取得孢子悬液，将该孢子悬液经7000r/min离心弃上清液浓缩至约2ml，将其接种至装有20ml一级种子摇瓶培养液(葡萄糖2％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，0.1mpa、121℃灭菌20min后冷却)的100ml三角瓶中，于26℃、转速180r/min的摇床上培养48h，然后转接到装有100ml二级种子培养液(蔗糖2％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，0.1mpa、121℃灭菌20min后冷却)的250ml摇瓶中，在26℃、转速180r/min的摇床上培养48h。之后将孢悬液转接到50l气升式发酵罐培养基中(马铃薯20％，蛋白胨0.5％，氯化钠0.5％)，温度26℃，通气量1.0vvm，搅拌转速120r/min发酵48h得到菌液。将气升发酵罐培养过的菌液再转接到转鼓式固体发酵罐中(内装灭过菌的容积量30％的培养基，组成为：豆饼5％，玉米粉10％，麸皮50％，秸秆粉35％，其中固体物料与水分的质量比为3:2)，发酵前3天温度为28℃，第4d起每天降温3℃培养，至发酵第6d时结束，所得为寡雄腐霉原孢子粉制剂，有效活菌数6×108个/g。
有机肥的制备
将调整好碳氮比(27:1)和含水量(58％)的物料(玉米秸秆+牛羊粪便混合物)，按照3‰的比例加入有机物料腐熟菌剂，搅拌混匀；将混匀的物料堆成梯形发酵，堆顶宽1米，堆底宽2米，堆高0.9米，堆料的长度根据物料量确定，夏季注意避免阳光直接照射；发酵开始后，每天检测物料温度，当距表层40厘米处物料温度升至60℃以上时翻堆，并重复这一过程，直到堆温在连续3天时间内呈下降趋势时为止，此过程为10天。
微生物肥料的制备
将上述制备的孢子粉以3％的比例添加到发酵培养基中，再以4％的比例接种至上述有机肥当中(孢子粉4份，有机肥95份)，堆放4d后制得有抑菌作用的生物有机肥。
第三实施例
本实施例提供一种用于防治当归根腐病的微生物肥料的制备方法，与第一、二实施例提供的制备方法大体相同，区别在于参数的变化，如下：
寡雄腐霉孢子粉的制备
将寡雄腐霉放到试管中进行斜面培养(马铃薯葡萄糖琼脂培养基+15％琼脂)，待斜面培养基上长满孢子后，在超净台上每管用10ml无菌生理盐水注入斜面试管，用无菌接种环轻触斜面表面，使孢子充分洗脱混匀，得到洗脱液。该洗脱液用无菌洁净滤纸过滤取得孢子悬液，再将该孢子悬液经8000r/min离心弃上清液浓缩至约2ml，将其接种至装有20ml一级种子摇瓶培养液(葡萄糖2％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，0.1mpa、121℃灭菌20min后冷却)的100ml三角瓶中，于28℃、转速180r/min的摇床上培养48h，然后转接到装有100ml二级种子培养液(蔗糖2％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，0.1mpa、121℃灭菌20min后冷却)的250ml摇瓶中，在28℃、转速180r/min的摇床上培养48h。之后将孢悬液转接到50l气升式发酵罐培养基中(马铃薯20％，蛋白胨0.5％，氯化钠0.5％)，温度28℃，通气量1.0vvm，搅拌转速120r/min发酵48h得到菌液。将气升发酵罐培养过的菌液再转接到转鼓式固体发酵罐中(内装灭过菌的容积量30％的培养基，组成为：豆饼5％，玉米粉10％，麸皮50％，秸秆粉35％，其中固体物料与水分的质量比为3:2)，发酵前3天温度为28℃，第4d起每天降温3℃培养，至发酵第6d时结束，所得为寡雄腐霉原孢子粉制剂，有效活菌数6×108个/g。
有机肥的制备
将调整好碳氮比(30:1)和含水量(60％)的物料(玉米秸秆+牛羊粪便混合物)，按照5‰的比例加入有机物料腐熟菌剂，搅拌混匀；将混匀的物料堆成梯形发酵，堆顶宽1米，堆底宽2米，堆高1米，堆料的长度根据物料量确定，夏季注意避免阳光直接照射；发酵开始后，每天检测物料温度，当距表层50厘米处物料温度升至60℃以上时翻堆，并重复这一过程，直到堆温在连续3天时间内呈下降趋势时为止，此过程通常为15天。
微生物肥料的制备
将上述制备的孢子粉以5％的比例添加到发酵培养基中，再以5％的比例接种至上述有机肥当中(孢子粉5份，有机肥97份)，摊晾5d后制得有抑菌作用的生物有机肥。
第四实施例
验证第一～三实施例提供的制备方法制得的微生物肥料在连作当归种植中对土壤和当归生长情况的影响。
1.实验方法
2014年时选取岷县麻子川乡一块占5亩土地种植当归，施肥用常规化肥(尿素+磷酸二胺)，当归收获时测定产量、当归根腐病发病率和土壤ph值；2015年将该地分为五块，设五个处理，对照实验条件如表1所示，每个处理为1亩左右，在当归移栽前，在每个处理地块均匀施用肥料90kg，在当归移栽后，再次施用肥料15g。
表1第四实施例的对照实验条件
于当年当归收获时分别测定不同处理根际土中寡雄腐霉菌数、当归产量、土壤ph值和根腐病害发生率。
2.实验结果如表2所示
表2第一实施例中的微生物肥料在岷县麻子川乡连作当归种植中对土壤和当归生长情况的影响
由表2可知，采用本发明第一～三实施例提供的制备方法制备的微生物肥料中，寡雄腐霉菌数明显高于其他两个对照组，且当归根腐病害发生得到了有效地控制，当归产量有所提高，说明本发明提供的微生物肥料既能有效地防治当归的根腐病，又能对当归的生长有促进作用。
第五实施例
验证第一～三实施例提供的制备方法制得的微生物肥料在连作当归种植中对土壤和当归生长情况的影响。
寡雄辅霉菌采用从中国农业微生物菌种保藏管理中心引进的编号分别为accc38048的寡雄腐霉菌株。
1.实验方法
试验选地在甘肃岷县岷川镇，该地块占地4亩，2014年当归土地种植施用常规化肥(尿素+磷酸二胺)，当归收获时测定产量、根腐病发病率和土壤ph值；2015年将该地分为八块，设八个处理，对照实验条件如表3所示，每个处理为0.5亩左右，在当归移栽前，在每个处理地块均匀施用肥料80kg，在当归移栽后，再次施用肥料15g。
表3第五实施例的对照实验条件
于当年当归收获时分别测定不同处理根际土中寡雄腐霉菌数、当归产量、土壤ph值和根腐病害发生率，测试结果如表4示。
2.实验结果
表4第五施例的微生物肥料对在连作当归种植中对土壤和当归生长情况的影响结果
根据表4，对比第一～三实施例与第一对照例可知，将寡雄辅霉菌直接与肥料混合发酵能够有效增加寡雄辅霉菌的数量，提高当归根腐病的防治率以及当归的产量。
对比第一～三实施例与第二～三对照例可知，将过多或过少的寡雄辅霉菌的孢子粉进行单独发酵，都将对微生物肥料对当归根腐病的防治率以及当归的产量产生不好影响。
对比第一～三实施例与第四～五对照例可知，寡雄辅霉菌与有机肥的配比，对对当归根腐病的防治率以及当归的产量起到重要作用，将寡雄辅霉菌以2％～7％的比例接种至有机肥中，能够更好的提高当归根腐病的防治率，继而提高当归的产量。
综上所述，本发明的提供一种用于防治当归根腐病的微生物肥料，其包括原料：寡雄腐霉和肥料；其中，寡雄腐霉和肥料混合发酵。本发明提供的微生物肥料能够将寡雄腐霉和肥料混合发酵，通过肥料作为载体，大量的将寡雄腐霉运用到根腐防治中，使得植物在连作的过程中，土壤微环境改变不大，可显著提高植物根腐病的防治率。此外，本发明还提供上述微生物肥料的制备方法以及其在农业种植中和其在治疗当归根腐病中的应用，以达到提高植物根腐病的防治率的目的。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。