一种含有活性云母的组合物在抑菌活性中的应用的制作方法

[0001]
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种含有活性云母的组合物在抑菌活性中的应用。


背景技术：

[0002]
云母是一种造岩矿物，呈现六方形的片状晶形，是主要造岩矿物之一，其亦是一种重要的中药物质。中药云母实际为硅酸盐类矿物白云母，采得后洗净泥土，除去杂石即可。《本草经疏》有提到：云母，石性镇坠，能使火下，火下则水上，是既济之象也。故安五脏，益子精，明目。《神农本草经》亦记载云母的功效，其记载道：主身皮死肌，中风寒热，如在车船上，除邪气，安五脏，益子精，明目。现有专利cn 110628826a公开了一种含有活性云母的组合物及其生物发酵制备方法，该专利文件中获得的含有活性云母组合物富含有效活性组分，具有降解有机污染物的能力、具有保健功效；其还可用于制备防晒品、用作消毒剂、用作空气净化剂等。由此可以看出，云母无论是作为一种矿物质还是中药成分都具有较为强大的功能。
[0003]
目前，传统抗生素的广泛使用引起了病菌的耐药性不断增强，耐药菌株越来越多，亟需一类抗菌谱广，不易产生耐药性的优势替代品出现。基于现有技术中云母具有重要的药学价值，亟需对含有活性云母的组合物作出进一步研究。


技术实现要素：

[0004]
本发明的目的在于提供一种含有活性云母的组合物在抑菌活性中的应用。经研究表明，本发明提供的活性云母组合物在一定用量范围内对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有明显抑制作用，该活性云母组合物在制备抗菌药物中具有一定潜力。
[0005]
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
[0006]
本发明提供了一种含有活性云母的组合物在制备抑菌和/或抗菌产品中的应用。
[0007]
本发明中，所述菌为细菌。
[0008]
本发明中，所述细菌为大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。
[0009]
本发明中，所述产品为药物、饲料添加剂或牙齿脱敏剂。
[0010]
本发明中，其特征在于，所述活性云母组合物在所述产品中的重量百分比为4.5％～100％。
[0011]
本发明中，所述活性云母组合物是由硅酸盐类矿物和梅果在溶剂中发酵，得到的发酵液。
[0012]
本发明中，所述的溶剂选自水、醇类溶剂、醚类溶剂中的至少一种。
[0013]
本发明中，所述硅酸盐类矿物、梅果和溶剂的重量比为2～6：0.5～2：3～8。
[0014]
本发明中，所述发酵的时间总共为130～150天。
[0015]
本发明中，所述硅酸盐类矿物的粒径为0.5～0.8cm。
[0016]
本发明的有益效果：本发明提供了一种含有活性云母的组合物在抑菌活性中的应
用。通过采用0、0.25、0.5、1、2ml的5种浓度的含有活性云母的组合物作用于液体菌液，其中菌种优选为大肠杆菌(e.coli atcc 25922)和金黄色葡萄球菌(s.aureus atcc 25923)，充分培养并进行取样，测定其在600nm处的吸光度，以判断含有活性云母的组合物抑菌作用。结果显示，菌液在600nm处的吸光度随含有活性云母的组合物用量的增加，细菌浓度明显减少。结果表明，含有活性云母的组合物具有显著的抑菌活性。
附图说明
[0017]
图1为不同浓度含有活性云母的组合物中大肠杆菌菌液在600nm处的吸光度图；
[0018]
图2为不同浓度含有活性云母的组合物中金黄色葡萄球菌在600nm处的吸光度图。
具体实施方式
[0019]
本发明提供了一种含有活性云母的组合物在制备抑菌和/或抗菌产品中的应用。
[0020]
在本发明中，所述菌为细菌。在本发明中，所述抑菌和/或抗菌试验方法具体包括如下步骤：1)配制细菌培养基，并进行灭菌；2)将菌种接入所述步骤1)培养基，进行培养；3)取不同量的含有活性云母的组合物发酵液，用所述步骤1)培养基稀释至相同的体积，配制成不同浓度的含有活性云母的组合物发酵稀释液；4)将所述步骤2)菌液加入所述步骤3)溶液，进行培养；5)每隔一定时间，对所述步骤4)进行取样，并测定在600nm处的吸光度。所述步骤2)、3)、4)和步骤5)中的取样需在超净台中进行无菌操作。在本发明中，所述细菌培养基可以是任意液体细菌培养基。在本发明的具体实施例中，所述细菌培养基优选为mhb(mueller-hinton broth)培养基，配制方法优选为：称取mhb培养基固体21.0g，溶解于1000ml蒸馏水中。所述细菌培养的条件优选包括：温度为37℃，转速为180rpm，培养时间优选为12～20h，更优选为14～18h，最优选为16h。所述吸光度的测定方式优选为采用紫外-可见分光光度计进行测定。本发明中，对所述试验方法中采用到的原料来源并无特殊限定，采用本领域技术人员熟知的常规市售产品即可。
[0021]
在本发明中，以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌作为细菌的代表，测定活性云母组合物的抑菌或抗菌活性。在本发明中，所述菌种优选为大肠杆菌(e.coli atcc 25922)和金黄色葡萄球菌(s.aureus atcc 25923)。在本发明中，菌种菌液为吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室自行冻存，所述冻存方法优选为：当细菌在培养基中扩增至od600值为0.5～0.6时，取500μl菌液与500μl灭菌的50％甘油水溶液混合均匀，于-80℃冻存。
[0022]
在本发明中，所述产品为药物、饲料添加剂或牙齿脱敏剂。在本发明中，所述药物、饲料添加剂或牙齿脱敏剂中均添加了所述活性云母组合物。在本发明中，对所述药物、饲料添加剂或牙齿脱敏剂的具体制备方法没有特殊限定，均可采用本领域中已知的制备工艺。
[0023]
在本发明中，所述活性云母组合物在所述产品中的重量百分比为4％～100％，优选为9％～60％，更优选为30％～40％，使制备得到的产品具有一定的抑菌和/或抗菌活性。
[0024]
在本发明中，所述活性云母组合物是由硅酸盐类矿物和梅果在溶剂中发酵，得到的发酵液。在本发明中，优选的发酵方法可以参见公开号cn 110628826 a、发明名称为一种含有活性云母的组合物及其生物发酵制备方法的专利中公开的含有活性云母的组合物的制备方法。在本发明中，所述硅酸盐类矿物质选自花岗岩、珍珠岩、绿柱岩、变质岩、玄武岩中的至少一种；所述梅果选自青梅、乌梅、西梅中的至少一种。本发明中对所述硅酸盐类矿
质及梅果的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的常规市售产品即可。
[0025]
在本发明中，所述的溶剂选自水、醇类溶剂、醚类溶剂中的至少一种。在本发明中，所述醇类溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇、异戊醇、乙基己醇、乙二醇、丙二醇中的至少一种；所述醚类溶剂选自甲醚、乙醚、丙醚、异丙醚、丁醚、戊醚、异戊醚、己醚、乙基丁基醚、甲基叔丁基醚、乙基乙烯基醚、丁基乙烯基醚中的至少一种。在本发明中，对所述溶剂的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的常规市售产品即可。
[0026]
在本发明中，所述硅酸盐类矿物、梅果和溶剂的重量比为2～6：0.5～2：3～8，更优选重量比为3～5：0.8～1.5：4～7。
[0027]
在本发明中，所述发酵的时间总共为130～150天，更优选发酵总共时间为135～145天。
[0028]
在本发明中，所述硅酸盐类矿物的粒径优选为0.5～0.8cm。
[0029]
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0030]
实施例1
[0031]
一种含有活性云母的组合物的制备方法，具体制备方法如下：按重量份计，制备原料包括3份硅酸盐类矿物、1份梅果和4份溶剂。将硅酸盐类矿物粉碎至0.5cm～0.8cm并用振动机进行清洗；将梅果去核；将硅酸盐类矿物、梅果和溶剂加入到发酵罐中，在50℃条件下发酵135天，过滤得到含有活性云母的组合物原液。
[0032]
实施例2
[0033]
一种含有活性云母的组合物的制备方法，具体制备方法如下：按重量份计，制备原料包括5份硅酸盐类矿物、2份梅果和7份溶剂。将硅酸盐类矿物粉碎至0.5cm～0.8cm并用振动机进行清洗；将梅果去核；将硅酸盐类矿物、梅果和溶剂加入到发酵罐中，在65℃条件下发酵130天，过滤得到含有活性云母的组合物原液。
[0034]
实施例3
[0035]
一种含有活性云母的组合物的制备方法，具体制备方法如下：按重量份计，制备原料包括2份硅酸盐类矿物、0.5份梅果和3份溶剂。将硅酸盐类矿物粉碎至0.5cm～0.8cm并用振动机进行清洗；将梅果去核；将硅酸盐类矿物、梅果和溶剂加入到发酵罐中，在45℃条件下发酵145天，过滤得到含有活性云母的组合物原液。
[0036]
实施例4
[0037]
含有活性云母的组合物原液对大肠杆菌的抑制作用
[0038]
称取mhb培养基固体21.0g，溶解于1000ml蒸馏水中。将制备得到的mhb培养基用高压灭菌锅在温度为121.3℃的条件下，灭菌20min。取保存于-80℃冰箱中的大肠杆菌菌种1μl于2ml mhb培养基中，在37℃、180rpm的条件下，培养16h。分别取0、0.25、0.5、1、2ml实施例1中含有活性云母组合物原液于试管中，用mhb培养基稀释至6ml。分别向不同浓度的含有活性云母组合物溶液中加入10μl培养的菌液，在37℃、180rpm的条件下培养。每隔2h取500μl样品，以不含菌液的各浓度含有活性云母组合物溶液为空白对照并进行调零，用紫外-可见分光光度计测定对应浓度下、不同时间的菌液在600nm处的吸光度。
[0039]
结果如图1所述，随着含有活性云母组合物原液的取用量增加，对大肠杆菌的抑菌作用逐渐增加，抑菌率可达90％以上。
[0040]
实施例5
[0041]
含有活性云母的组合物原液对金黄色葡萄球菌的抑制作用
[0042]
称取mhb培养基固体21.0g，溶解于1000ml蒸馏水中。将制备得到的mhb培养基用高压灭菌锅在温度为121.3℃的条件下，灭菌20min。取保存于-80℃冰箱中的金黄色葡萄球菌菌种1μl于2ml mhb培养基中，在37℃、180rpm的条件下，培养16h。分别取0、0.25、0.5、1、2ml实施例1中含有活性云母组合物原液于试管中，用mhb培养基稀释至6ml。分别向不同浓度的含有活性云母组合物溶液中加入10μl培养的菌液，在37℃、180rpm的条件下培养。每隔2h取500μl样品，以不含菌液的各浓度有机锗溶液为空白对照并进行调零，用紫外-可见分光光度计测定对应浓度下、不同时间的菌液在600nm处的吸光度。
[0043]
结果如图2所述，随着含有活性云母组合物原液的取用量增加，对金黄色葡萄球菌的抑菌作用逐渐增加，抑菌率可达90％以上。
[0044]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。