专利名称：：荧光素钠的精制方法
技术领域：
：本发明涉及一种仅含氧原子的杂环有机化合物的精制方法，具体是用试剂级荧光素钠为原料制备药用级高纯度的荧光素钠的方法。
背景技术：
：荧光素钠的化学名为9-(邻羧基苯基)-6-羟基-3&咕吨-3-酮二钠盐，英文名为fluoresceinsodium,可用于眼角膜损伤、眼底血管造影诊断及血液循环时间的测定。高纯度的药用级的荧光素钠用于制备造影用的注射剂。目前用于制备注射剂的荧光素钠原料虽符合药典要求，荧光素钠的重量含量可达到98.5%，但是用高效液相色谱法分析即可发现仍有较多个杂质存在，因有杂质千扰，用分光光度法测定时，即使浓度稀释为1.0%时，在600nm波长处其吸收度值均大于4.0，仪器无法准确读数；对于装在安瓿瓶内的10%或20%浓度的荧光素钠注射液，在自然光下检视，液体颜色极深，无法进行可见异物检S。据文献报道荧光素钠中主要杂质是苯二甲酸酐，间苯二酚，6-羟基-7-磺酸基-9-(邻羧基苯基)-3H-咕吨-3-酮，6-羟基-9--(邻乙氧基羰基苯基)-3H-口占吨-3--酮或2-(2，4--二羟基苯甲酰基)苯甲酸等。由于这些杂质的存在，其荧光素钠注射液注射入人体还会带来一定的副作用，如恶心呕吐、皮肤荨麻疹、咳嗽等过敏反应，严重时可产生过敏性休克，无法保证用药的安全。由于这些杂质与荧光素钠结构相似，分离操作难度较大，杂质在碱性条件下易溶于水，此时，活性碳对其吸附明显低，而在酸性条件下这些杂质和荧光素共沉淀，所以本
技术领域：
的技术人员认为用传统的方法去除这些杂质制备高纯度的荧光素钠是很难实现的。有机制备化学手册(中)P280页，介绍了用荧光素钠重结晶的方法加以提纯。由于荧光素钠有两种变体-一不溶于醇醚的红色变体和溶于甲醇和乙醇的黄色变体，黄色变体受热易转变为稳定的红色变体。在制备荧光素时，低温酸化析出的为黄色变体，此种变体可溶于甲醇或乙醇。但从水中析出的黄色变体含有大量水分，不容易过滤，也不容易干燥，而且在加热干燥或加热溶解过程中，黄色变体以转变为不溶解的红色变体，实际操作中非常困难，并且产率低、废水产生量大。CN101270124A专利公开了一种制备高纯度荧光素及荧光素钠的新方法，它是将荧光素或荧光素钠与乙酰化试剂反应生成双乙酰荧3光素，从而利用杂质和双乙酰荧光素的不同化学极性，使杂质分离，再经过皂化、酸化、成盐得到高纯度的荧光素钠，荧光素钠的重量含量可达到99.2%以上。该方法尽管是可行的，但是，双乙酰荧光素作为一种放射性毒性物质，在加热或遇火条件下，能分解出放射性毒性物质，具有较强的危害性。同时，工艺步骤多而烦琐，成本高。所以我们为了解决制备高纯度的药用荧光素钠而寻找一种简便可行的方法。
发明内容本发明的目的是用简便可行的方法用试剂级荧光素钠(重量含量为90.095.0%)制备重量含量99.5%以上的药用高纯度荧光素钠。为达到本发明的目的，本发明所采用的技术方案是重量含量为卯.095.0%的荧光素钠，加荧光素钠重量的212倍体积的极性溶剂为溶剂，加热回流至荧光素钠溶解后加入荧光素钠重量的110%的活性碳，继续回流1060分钟后过滤，取滤液加入计算量(100g的荧光素钠加入56ml的浓盐酸)的盐酸，搅拌，并使其降温至室温，放置，使荧光素钠完全析出，过滤，滤液用极性溶剂洗涤沉淀后用纯水洗涤至氯离子符合规定(Cl《0.35%)为止，将荧光素置于25倍量的水中，用氢氧化钠或碳酸氢钠调节pH值至8.59.0，过滤，滤液浓縮成稠状物，在105。C以下干燥，即得重量含量为99.5%以上，杂质含量为0.5%以下，配成10%(W/V)溶液时600nm处吸光度小于0.5的荧光素所说的极性溶剂有许多，在本发明中优选水、无水乙醇、5099%的乙醇溶液、甲醇、二甲基甲酰胺、丙酮、正丁醇或氯仿异丁醇体积比为i:i的溶液。本发明中荧光素钠重量含量的测定方法采用高效液相色谱法色谱条件与系统适用性用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇0.1mol/ml的磷酸二氢钠溶液体积比为50:50的溶液作流动相；检测波长为235nm;流速为lml/分钟。理论板数按荧光素钠峰计算应不低于2000，荧光素钠峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。标准液的制备精密称取一定量的双乙酰荧光素(USPDiacetylfluoresceinRS)(110.7mg无水双乙酰荧光素相当于100mg的荧光素钠)，溶于10ml的乙醇中，置100ml容量瓶中，加入2ml2.5mol的氢氧化钠溶液，沸水蒸汽中旋转加热20分钟，放冷，用水稀释至刻度，混匀，制成每lml含荧光素钠lmg的对照品溶液。样品的制备精密称取干燥至恒重的荧光素钠100mg,置100ml的容量瓶内，加水稀释至刻度，制成供试品溶液。测定方法取对照品溶液和供试品溶液各10iU，注入液相色谱仪中，记录色谱图，按外标法计算供试品中荧光素钠的含量。色谱条件与系统适用性用辛烷基硅烷键合硅胶为填充柱(5um,4.6mmX250mm)，柱温为30°C，流动相A为磷酸二氢钾1.22g，加水溶解并稀释至lOOOml，用磷酸调节pH至2.0;流动相B为乙腈；检测波长为220nm;按下表进行线性梯度洗脱。<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>供试品溶液的制备取荧光素钠适量，加乙腈水体积比为15:85的溶液作溶剂制成每lml中含0.5mg荧光素钠的溶液，作为供试品溶液。对照溶液及对照品溶液的制备精密量取供试品溶液lml置100ml量瓶中，用溶剂乙腈水体积比为15:85的溶液稀释至刻度，作为对照溶液。另各取邻苯二甲酸(杂质A)和间苯二酚(杂质B)对照品适量，精密称定，加乙腈水体积比为15:85的溶液制成每lml中含2.5Ug的溶液，作为邻苯二甲酸对照品溶液和间苯二酚对照品溶液。测定方法各取对照品溶液20ul，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%;再精密量取供试品溶液、对照溶液与对照品溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中主峰与相邻各杂质峰的分离度应符合要求。供试品溶液色谱图中如有与对照品溶液色谱图中杂质A与B相应的峰，其峰面积不得大于对照品溶液色谱图中杂质A与B的面积；如有其他杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍(相当于供试溶液重量含量的O.5%)，其他杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积(相当于供试溶液重量含量的1.0%)。供试品溶液色谱图中小于对照溶液主峰面积0.05倍的杂质峰忽略不计。附图1精制前的荧光素钠含量的HPLC色谱图附图2空白的HPLC色谱图附图3间苯二酚的HPLC色谱图附图4邻苯二甲酸的HPLC色谱图附图5精制前荧光素钠有关物质的HPLC色谱图附图6精制后的荧光素钠含量的HPLC色谱图附图7精制后的荧光素钠有关物质的HPLC色谱图图中，l是荧光素钠的峰，2是杂质峰，3是间苯二酚的峰，4是邻苯二甲酸的峰。本发明的优点是1.操作简单，易实现工业化批量生产；2.整个工艺是---次酸碱精制工序，废水量少，利于环保；3.本发明的方法能有效地提高产品的纯度及其溶液的澄清度，便于注射剂产品的质量控制和降低临床用药的风险。下面通过具体实施例结合附图阐述本发明的技术方案。具体实施例方式实施例1称取荧光素钠100g，(荧光素钠是由天津试剂一厂提供，重量含量为95.0%(见附图1)，经HPLC分析(见附图25，杂质含量为7.1%，)力Q100%的乙醇500ml，加热回流至溶解,加入5g的活性碳，继续回流15分钟后过滤，取滤液加56ml的盐酸(36.5%),搅拌，并使其降温至室温，放置18小时，过滤，滤饼用200ml甲醇洗涤后用纯化水洗涤至氯离子符合规定止，将荧光素置于200ml的水中，加入氢氧化钠液(浓度40%)调节pH至8.7，溶液浓縮至稠状物，在105'C干燥，即得重量75g的荧光素钠，用高效液相色谱法测定含量为99.8%(见附图6)，精制收率为75%，杂质含量0.25%(见附图7)，10%溶液600nm吸光度0.377。实施例2、称取荧光素钠l()()g(同实施例1的原料)，力l:]50X的乙醇250ml，加热问流至溶解,加入10g的活性碳，继续回流30分钟后过滤，取滤液滴加56ml的盐酸(36.5%)，搅拌，并使其降温至室温，放置16小时，过滤，滤饼用丙酮洗涤后用纯化水洗涤至氯离子符合规定止，将荧光素置于200ml的水中，加入氢氧化钠液(浓度40%)调节pH至8.8，溶液浓缩至稠状物，在105X:干燥，即得重量70g的荧光素钠，用高效液相色谱法测定含量为99.7%，精制收率为70%，杂质含量0.18%，10。/。溶液600nm吸光度0.379。实施例3称取荧光素钠100g，(同实施例1的原料)力U水200ml，搅拌溶解,加入10g的活性碳，加热回流30分钟后过滤，取滤液滴加56ml的盐酸(36.5%)，搅拌，并使其降温至室温，放置20小时，过滤，滤饼用乙醇洗涤后用纯化水洗涤至氯离子符合规定止，将荧光素置于150ml的水屮，加入氢氧化钠液(浓度40%)调节pH至8.75，溶液浓縮至稠状物，在105。C千燥，即得重量60g的荧光素钠，用高效液相色谱法测定含量为99.6%，精制收率为60%，杂质含量0.32%，10%溶液600nm吸光度0.495。实施例4称取荧光素钠100g，(同实施例1的原料)加甲醇1000ml，加热回流至溶解,加入5g的活性碳，继续回流30分钟后过滤，取滤液滴加56ml的盐酸(36.5%)，搅拌，并使其降温至室温，放置20小时，过滤，滤饼用二甲基甲酰胺洗涤后用纯化水洗涤至氯离子符合规定止，将荧光素置于150ml的水中，加入氢氧化钠液(浓度40%)调节pH至8.75，溶液浓縮至稠状物，在105°C干燥，即得重量58.5g的荧光素钠，用高效液相色谱法测定含量为99.8。％，精制收率为58.5%，杂质含量0%，10M溶液600nm吸光度0.475。实施例5称取荧光素钠100g，加丙酮1000ml，加热回流至溶解,加入8g的活性碳，继续回流30分钟后过滤，取滤液滴加56ml的盐酸(36.5%),搅拌，并使其降温至室温，放置20小时，过滤，滤饼用乙醇洗涤后用纯化水洗涤至氯离子符合规定止，将荧光素置于200ml的水中，加入氢氧化钠液(浓度40%)调节pH至8.70，溶液浓缩至稠状物，在105i:干燥，即得重量53g的荧光素钠，用高效液相色谱法测定含量为99.6%，精制收率为53%，杂质含量0.42%，10%溶液600nm吸光度0.468。实施例6荧光素钠100g，加二甲基甲酰胺300ml，加热回流至溶解,加入10g的活性碳，继续回流30分钟后过滤，取滤液滴加56ml的盐酸(36.5%)，搅拌，并使其降温至室温，放置18小时，过滤，滤饼用二甲基甲酰胺洗涤后用纯化水洗涤至氯离子符合规定止，将荧光素置于200ml的水中，加入氢氧化钠液(浓度40%)调节pH至8.70，溶液浓缩至稠状物，在105。C干燥，即得重量73g的荧光素钠，用高效液相色谱法测定含量为99.9%，精制收率为73%，杂质含量0.28%,10%溶液600nm吸光度0.364。实施例7-荧光素钠100g，加正丁醇1200ml，加热冋流至溶解,加入10g的活性碳，继续问流30分钟后过滤，取滤液滴加56ml的盐酸(36.5%)，搅拌，并使其降温至室温，放置18小时，过滤，滤饼用乙醇洗涤后用纯化水洗涤至氯离子符合规定止，将荧光素置于200ml的水中，加入氢氧化钠液(浓度40%)调节pH至8.70，溶液浓縮至稠状物，在105t:干燥，即得重量45g的荧光素钠，用高效液相色谱法测定含量为99.7%，精制收率为46%，杂质含量0.42%，10%溶液600nm吸光度0.425。实施例8荧光素钠100g，加氯仿异丁醇(1:1)1200ml，加热回流至溶解,加入10g的活性碳，继续回流30分钟后过滤，取滤液滴加56ml的盐酸(36.5%)，搅拌，并使其降温至室温，放置18小时，过滤，滤饼用甲醇洗涤后用纯化水洗涤至氯离子符合规定止，将荧光素置于200ml的水中，加入氢氧化钠液(浓度40%)调节pH至8.70，溶液浓縮至稠状物，在105r干燥，即得重量43g的荧光素钠，用高效液相色谱法测定含量为99.6%，精制收率为43%，杂质含量0.48%，10%溶液600nm吸光度0.451。权利要求1、一种荧光素钠的精制方法，其特征在于取重量含量为90.0～95.0％的荧光素钠，加入荧光素钠重量的2～12倍体积的极性溶剂，加热回流至荧光素钠溶解后加入荧光素钠重量的1～10％的活性碳，继续回流10～60分钟后过滤，取滤液搅拌下加计算量的盐酸，以100g的荧光素钠加56ml的浓盐酸，并使其降温至室温，放置，使荧光素钠完全析出，过滤，用极性溶剂洗涤沉淀后再用纯水洗涤，将荧光素置于2～5倍量的水中，用氢氧化钠或碳酸钠调节pH值至8.5～9.0，过滤，滤液浓缩成稠状物，干燥，即得重量含量在99.5％以上的荧光素钠。2、根据权利要求1所述的荧光素钠的精制方法，其特征在于所述的极性溶剂为水、无水乙醇、5099%的乙醇溶液、甲醇、二甲基甲酰胺、丙酮、正丁醇或氯仿异丁醇体积比为1:1的溶液。全文摘要荧光素钠的精制方法，涉及用试剂级荧光素钠为原料制备高纯度的荧光素钠的方法。它是取试剂级荧光素钠，加入极性溶剂，加入活性炭，回流10～60分钟后过滤，取滤液搅拌下加盐酸，降至室温，放置，使荧光素钠完全析出，过滤，用极性溶剂洗涤后再用纯水洗涤，将荧光素置于水中，用氢氧化钠或碳酸钠调节pH值至8.5～9.0，过滤，滤液浓缩成稠状物，干燥，即得重量含量在99.5％以上的荧光素钠。本方法操作简单，易实现工业化批量生产；整个工艺是一次酸碱精制工序，废水量少，利于环保；方法能有效地提高产品的纯度及其溶液的澄清度，便于注射剂产品的质量控制和降低临床用药的风险。文档编号C07D311/00GK101628907SQ20091004144公开日2010年1月20日申请日期2009年7月28日优先权日2009年7月28日发明者司徒少金,周小琴,段敏丽,莎王,许小春,高建胜申请人:广州白云山明兴制药有限公司