专利名称：利用转氨酶使多环化合物氨基化的方法
利用转氨酶使多环化合物氨基化的方法发明的主题
本发明的主题是用于制备带有氨基基团的多环环体系的酶促方法。现有技术
二氨基二脱水二脱氧己糖醇类，作为双功能的胺类，是化学反应的感兴趣的中间体。 描述了 2，5- 二氨基-1，4:3,6- 二脱水-2，5- 二脱氧-D-己糖醇的三种立体异构体(例如
Bashford, V. G.禾口 Wiggins, L. F. (1950) . Anhydrides of polyhydric alcohols. XIII. The amino derivatives of 1， 4:3， 6-dianhydromannitol, -sorbitol， and L—iditol and their behavior towards nitrous acid. Journal of the Chemical
Society 1950 371-374·): 2，5-二氨基-1，4:3，6-二脱水-2，5-二脱氧-D-甘露醇(I)， 2，5-二氨基-1,4:3,6-二脱水-2，5-二脱氧-D-葡萄糖醇(II)和 2，5-二氨基-1，43，6-二脱水-2，5-二脱氧-L-艾杜糖醇(III)。三种立体异构体在位置2和5的手性上不同。相对于稠合的五元环的椅型，此处的氨基基团可以处在内，内(I)，处在内，外(II)或处在外， 外(III)位置。
权利要求
1.方法，利用至少一种具有转氨酶活性的酶E，用于使在带有至少一个酮基团的多环的环体系中的至少一个酮基团氨基化而得到氨基基团。
2.权利要求1的方法，特征在于作为多环的环体系使用具有顺式-连接的环的那些。
3.权利要求1或2中至少一项的方法，特征在于作为多环的环体系使用选自下组的化合物
4.权利要求1到3中至少一项的方法，特征在于使用来自谷氨酰胺-鲨肌醇转氨酶(EC 编号2. 6. 1.50)类别的酶。
5.权利要求1到4中至少一项的方法，特征在于酶E能够从芽胞杆菌属、小单孢菌属或链霉菌属的微生物分离。
6.权利要求1到5中至少一项的方法，特征在于酶E能够从环状芽孢杆菌或灰色链霉菌的微生物分离。
7.权利要求1到6中至少一项的方法，特征在于具有转氨酶活性的酶包含根据SEQID NO :2、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :13、SEQ ID NO :15、SEQ ID NO :17、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO 27,SEQ ID NO 29、SEQ ID N0:31 或 SEQ ID NO :33 的多肽序列，或选自包含 SEQ ID NO 2,SEQ ID N0:4、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO =IUSEQ ID NO :13,SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO :17、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :27, SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :31或SEQ ID NO :33的酶的功能等效物的组，其中通过删除、插入、取代、插入或删除、取代和插入的组合使得相对于相应的SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :13、SEQ ID NO :15、SEQ ID NO :17、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :27、SEQID NO 29, SEQ ID NO :31和SEQ ID NO :33至多25%的氨基酸残基被修饰，且其仍保持了根据 SEQ ID NO 2, SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO =IUSEQ ID NO: 13、SEQ ID NO :15、SEQ ID NO :17、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :31 禾口 SEQ ID NO :33 的相应酶至少 50%的酶活性。
8.权利要求1到7中至少一项的方法，特征在于使用带有至少一个酮基团的多环的环体系，所述环体系通过氧化多环的起始环体系的至少一个仲羟基基团而得到酮。
9.权利要求8中的方法，特征在于使用具有至少一个仲羟基基团的多环的起始环体系，在所述多环的起始环体系中，所述仲羟基基团的至少之一处于相对于所述多环起始环体系的内-位置。
10.权利要求8或9的方法，特征在于使用具有至少一个仲羟基基团的多环的起始环体系，在所述多环的起始环体系中，所述仲羟基基团的至少之一处于相对于所述多环起始环体系的外-位置。
11.权利要求8到10中至少一项的方法，特征在于作为多环的起始环体系使用选自下组的至少一种化合物去水甘露糖醇， 异山梨醇， 异艾杜糖，
12.权利要求8到11中至少一项的方法，特征在于所述氧化由具有乙醇脱氢酶活性的酶F来催化。
13.权利要求12的方法，特征在于由酶E和F的酶反应产生的副产物通过使用具有氨基酸脱氢酶活性的至少一种酶G来再生。
14.权利要求1到13中至少一项的方法，特征在于通过改变反应条件来影响所形成的带有至少一个氨基基团的环体系的对映异构体的比例。
15.带有至少一个氨基基团的多环的环体系，通过权利要求1到14中至少一项的方法制备。
全文摘要
本发明涉及一种方法，该方法利用至少一种具有转氨酶活性的酶E，用于使在带有至少一个酮基团的多环的环体系中至少一个酮基团氨基化而得到氨基基团。
文档编号C07D493/04GK102308001SQ201080006614
公开日2012年1月4日 申请日期2010年1月13日 优先权日2009年2月4日
发明者勒赫纳 A., 斯克拉 A., 吕曼 B., 劳施 C., 罗尔曼 C., C. 普弗费尔 J., 多德勒 K., 格拉曼 K., 哈斯 T., 西贝尔 V. 申请人:赢创德固赛有限责任公司