专利名称：天门冬氨酸氨基转移酶活力的快速测试方法
技术领域：
本发明涉及电化学检测技术领域，是一种检测天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate Aminotransferase，AST)，又称谷草转氨酶(Glutamine-Oxalacetate Transferase，GOT)活力的快速测试方法，其特征在于被测物在电极表面发生氧化还原反应。本文着重介绍了生物传感器对天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的测试方法及其敏感试剂制备方法，使用该方法可以快速检测出天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活力。
背景技术：
在刚刚结束的雅典奥运会上，我国健儿奋力拼搏，取得了令世界瞩目的好成绩，这之中除了运动员的辛勤汗水外，科学的训练方法也是其中重要的组成部分。进行运动员的身体机能状况评定是其中最关键的一环，运动时人体内的一系列生理生化变化是机体对所承受运动负荷的客观反映，反映机体对运动训练的应激能力。训练负荷太小，运动能力提高不明显；训练负荷过大，不仅不能提高运动能力，反而损害身体健康。因此，在运动训练中，合理运用基础理论、医务监督、控制训练负荷、判断运动性疲劳、防止过度疲劳和运动损伤的发生，以及有效的挖掘人体的运动潜力、提高竞技能力，均有十分重要的意义，并已经成为科学训练的重要内容。天门冬氨酸氨基转移酶(AST)即为需重点监测的参数之一，该酶广泛分布在人体各组织器官内。分布次序心≥肝＞肌肉＞肾，以心脏含量最高，是血清的7800倍。在心脏等脏器受损时，细胞内酶释入血液，使血清内酶的活性提高。因此，在训练中常用此酶作为判定心脏组织是否受损的重要指标。由此可知，血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的测定，对运动员训练疲劳程度的监控，进而调整改进训练计划有重大的意义，而且该方法可以为运动员选材提供简便、快速和廉价的手段，使之更具有实用价值。
同时它还可用作心脏功能评定的指标，作为一种定性筛查标准，对于多种心脏疾病的早期预警有着不可替代的作用。随着社会的发展，患有心脑血管疾病的人数急剧上升，因此定期的心脏功能检查也变得越来越重要，可见天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测的临床意义也十分巨大。
目前市场上尚无使用电化学方法检测天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的便携式仪表成品，大部分的检测设备都使用光学方法，对仪器设备的加工精度要求高，需要洁净度高，便携性能差。而且传统的测量方法需用针管抽足量前臂血，用离心法分离血清，需血量大，所需步骤复杂，耗时长，受试者有一定的不适感。具体到传感器试条的制作，目前制作试条以及检测仪表大多数依托于丝网印刷的厚膜技术，采用厚膜技术的传感器试条制作耗时、耗材，用丝网印刷方法得出的电极带的表面非常不平，工艺较为复杂而且在响应时间、灵敏度、稳定性等方面不如基于先进的微机电系统(MEMS)制造技术的薄膜电极。基于MEMS技术制备的生物传感器器件，较之丝网厚膜印刷技术，具有体积小，灵敏度高，一致性好(CV％≤5％，甚至更低)，相关性佳(可达0.99)，工艺简单等优点，大批量生产成本低。
本发明与目前国内外产品比较，具有许多优势，独创性地采用了电化学检测方法，重复性好；一次性试条的生产工艺采用先进的微机电系统(MEMS)工艺，既保证了检测的可靠性和一致性，又降低了试条的生产成本；所需血量少(3~5μl)。具有系统响应快，灵敏度高等优点。
发明内容
本发明的一个目的是要提供一种检测天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活力的生物传感器。
本发明的另一个目的是要提供一种检测天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活力的电化学方法。
本发明的另一个目的是要提供快速检测天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活力的电流测试方法，该方法包含若干步生物化学反应。
本发明的另一个目的是要提供快速检测天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活力的酶电极试剂制备方法，在绝缘材料上利用MEMS技术形成均匀表面的薄膜金电极。
为达到上述目的，本发明的技术解决方案是提供一种天门冬氨酸氨基转移酶活力的快速测试方法，使用基于微机电系统技术制备的生物传感器，包括a)将被侧物液滴吸入电极的反应区内，电极表面发生氧化还原反应，氧化还原反应产生电子传递并形成电流；b)电流在辅助因子的协同作用下，将天冬氨酸转化为谷氨酸和草酰乙酸，测定谷氨酸或草酰乙酸的量，可相应得出天门冬氨酸氨基转移酶的活力。
所述的快速测试方法，其在b)步中，所述测定谷氨酸或草酰乙酸的量，按下列四种方法中任选一种进行方法一谷氨酸在有辅酶NAD存在的条件下，与谷氨酸脱氢酶反应，生成的NADH与天门冬氨酸氨基转移酶的活力成正比关系，借助具有氧化还原作用的电子传递体检测NADH的氧化电流，得到天门冬氨酸氨基转移酶的活力；方法二谷氨酸直接与谷氨酸氧化酶反应，生成的过氧化氢与天门冬氨酸氨基转移酶的活力成正比关系，借助具有氧化还原作用的电子传递体检测过氧化氢的氧化电流，得到天门冬氨酸氨基转移酶的活力；方法三草酰乙酸在有氢离子存在的条件下，与辅酶NADH反应生成NAD，借助具有氧化还原作用的电子传递体检测NAD的氧化电流，得到天门冬氨酸氨基转移酶的活力；方法四草酰乙酸在草酰乙酸脱羧酶的作用下生成丙酮酸，在有激活因子的条件下，丙酮酸氧化酶催化丙酮酸生成与天门冬氨酸氨基转移酶活力成正比的过氧化氢，借助具有氧化还原作用的电子传递体检测过氧化氢的氧化电流，得到天门冬氨酸氨基转移酶的活力。
所述的快速测试方法，其所述使用的基于微机电系统技术制备的生物传感器，其包括提供反应所用到的敏感试剂包括和被检测物天门冬氨酸氨基转移酶发生氧化还原反应的酶、底物和各种辅助因子；用于电子转递的电子转递体；用于溶解试剂的缓冲溶液；用于保持酶活性的稳定剂和各种附加试剂；提供一种用于检测的电极，用于连接反应试剂和检测仪表装置，对被测试物施加工作电压，并通过电子传递体完成生物化学反应所产生的电子传递。
所述的快速测试方法，其所述反应敏感试剂中的酶，与被分析物起反应且能产生与被分析物天门冬氨酸氨基转移酶的活力相对应的电流，包括辅酶NAD、谷氨酸脱氢酶、谷氨酸氧化酶、草酰乙酸脱羧酶、丙酮酸氧化酶、过氧化氢酶，其中，辅酶NAD+的量为0.1～0.4mM；谷氨酸脱氢酶的量为1～50U/ml。
所述的快速测试方法，其所述底物，为天冬氨酸、α-酮戊二酸，其中，天冬氨酸量为0.1～1M，α-酮戊二酸量为10～30mM。
所述的快速测试方法，其所述反应敏感试剂中的电子传递体，起氧化还原作用，为从过氧化物酶氧化还原聚合物、铁氰酸盐、亚甲基蓝、二茂铁及其衍生物、对苯醌、吩嗪硫酸甲酯、靛酚及其衍生物和β-萘醌-4-磺酸钾组成的组中选择出的一种，其量为10～50mM。
所述的快速测试方法，其所述酶促反应中的辅助因子，是由牛血清白蛋白、心肌黄酶、柠檬酸三钠、海藻糖、磷酸吡哆醛、甲壳素、丝素蛋白、琥珀酸钠中选择出的一种，其量为1～20μM。
所述的快速测试方法，其所述反应敏感试剂中的缓冲溶液，为磷酸缓冲液、TRIS缓冲液、柠檬酸缓冲液、乙酸缓冲液组成的组中选择出的一种。
所述的快速测试方法，其所述发生氧化还原反应时所用到的辅助因子，是由牛血清白蛋白、心肌黄酶、柠檬酸三钠、海藻糖、磷酸吡哆醛、甲壳素、丝素蛋白、琥珀酸钠中选择出的一种，其量为0.01～10U/μl。
所述的快速测试方法，其所述反应敏感试剂中的稳定剂，保持酶的活性，是从琥珀酸钠、柠檬酸三钠、牛血清白蛋白、海藻糖、甲壳素、丝素蛋白中任选一种制成，其量为1～50mM。
所述的快速测试方法，其所述电极，为两电极或多电极形式的薄膜电极，制备于绝缘性基板上；
固定在电极上的反应试剂，包括电子接受体、与被分析物起反应且能产生与被分析物浓度相对应的电流的酶、缓冲液、表面活性剂；电极材料为钯、铂、碳、金、铱、铜、银、氯化银及其混合物中的一种。
所述的快速测试方法，其所述绝缘性基板，为从聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚酯、聚碳酸酯、聚乙烯、聚丙烯、聚乙烯对苯二甲酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯和丙烯晴-丁二烯-苯乙烯等组成的组合中选择出来的一种聚合物制成。
所述的快速测试方法，其可用于血清中或全血中天门冬氨酸氨基转移酶活力的检测。
本发明的电极采用毛细作用。可以将液滴从电极的侧面吸入电极的反应区内，由于毛细原理，样品更容易迅速铺满整个反应区，使反应进行的更迅速、更充分，检测结果更准确。
本发明所配套使用的仪表装置请参考已申请专利的200420006421.7号专利文件，对该仪表装置作有限调整后，可用于天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的检测。
本发明将反应试剂固定在电极上形成试剂层，该反应试剂包括起氧化还原作用的电子接受体，与被分析物天门冬氨酸氨基转移酶(AST)起反应的底物以及后续反应所需要的酶和其它试剂，还至少包括稳定剂和缓冲液。当被分析物天门冬氨酸氨基转移酶(AST)通过毛细作用滴加到测试电极上后，用电化学生物传感器检测系统可以快速检测所产生的与天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活力相对应的电流输出信号。
本发明通过电子介体将酶反应过程中产生的电子从酶反应中心转移到电极表面，使得电流型酶传感器的响应速度和检测灵敏度得到了提高，同时降低了反应的电压。
本发明缓冲液用于提供一个pH值稳定的反应环境，最佳pH值为6~7。
图1本发明设计的两电极分层示意图；图2本发明的电极组合后的立体图；
图3本发明实施例的天门冬氨酸氨基转移酶(AST)实时响应图。
具体实施例方式
以下说明和实施例详细说明了本发明的优选实施方案。本领域技术人员应当理解的是，在本发明的范围内包括本发明的多种改变和改进。因此，对一种优选实施方案的说明不应当被视为对本发明范围的限定。
提供反应所用到的敏感试剂包括和被检测物天门冬氨酸氨基转移酶(AST)发生氧化还原反应的酶、底物和各种辅助因子；用于电子转递的电子转递体；用于溶解试剂的缓冲溶液；以及保持酶活性的稳定剂和各种附加试剂。
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)在辅助因子的协同作用下，将天冬氨酸转化为谷氨酸和草酰乙酸，测定谷氨酸和草酰乙酸的量都可以相应得出天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活力。
方法一谷氨酸在有辅酶NAD存在的条件下，与谷氨酸脱氢酶反应，生成的NADH与天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活力成正比关系，借助具有氧化还原作用的电子传递体检测NADH的氧化电流，可以得到天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活力。反应式如下 方法二谷氨酸还可直接与谷氨酸氧化酶反应，生成的过氧化氢与天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活力成正比关系，借助具有氧化还原作用的电子传递体检测过氧化氢的氧化电流，也可得到天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活力。反应式如下
方法三草酰乙酸在有氢离子存在的条件下，与辅酶NADH反应生成NAD，借助具有氧化还原作用的电子传递体检测该反应的氧化电流，也可得到天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活力。反应式如下
方法四草酰乙酸还可以在草酰乙酸脱羧酶的作用下生成丙酮酸，在有激活因子的条件下，丙酮酸氧化酶催化丙酮酸生成与天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活力成正比的过氧化氢。借助具有氧化还原作用的电子传递体检测过氧化氢的氧化电流，也可得到天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活力。反应式如下
对于有辅酶NADH参与的反应过程，通过检测NADH吸光度的变化，也可以用光学检测设备测定天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活力。
对于有过氧化氢产生的反应过程，通过加入某种颜色指示剂，可能还包括若干其他试剂，利用过氧化氢对颜色指示剂的作用，通过检测颜色指示剂吸光度的变化，也可以用光学检测设备测定天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活力。
本发明以方法一为优选实施例，介绍了测定天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活力的试剂制备方法。
天门冬氨酸氨基转移酶(AST)在辅助因子的协同作用下，令天冬氨酸和α-酮戊二酸起反应，转化为谷氨酸和草酰乙酸，谷氨酸在有辅酶NAD存在的条件下，与谷氨酸脱氢酶反应，生成的NADH与天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活力成正比关系，在有另一种辅助因子作用的条件下，借助具有氧化还原作用的电子传递体检测NADH的氧化电流，可以得到天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活力。
作为底物的天冬氨酸量为0.1～1M，优选为0.2～0.6M，实施例中优选为0.5M。
作为底物的α-酮戊二酸量为10～30mM，优选为15～25mM，实施例中优选为20mM。
酶促反应中的辅助因子，是由牛血清白蛋白、心肌黄酶、柠檬酸三钠、海藻糖、磷酸吡哆醛、甲壳素、丝素蛋白、琥珀酸钠等中选择出的一种，其量为1～20μM，优选为5～10μM，实施例中优选为5μM。
辅酶NAD+的量为0.1～0.4mM，优选为0.2～0.3mM，实施例中优选为0.26mM。
谷氨酸脱氢酶的量为1～50U/ml，优选为1～10U/ml，实施例中优选为2U/ml。
发生氧化还原反应时所用到的辅助因子，是由牛血清白蛋白、心肌黄酶、柠檬酸三钠、海藻糖、磷酸吡哆醛、甲壳素、丝素蛋白、琥珀酸钠等中选择出的一种，其量为0.01～10U/μl，优选为0.05～1U/μl，实施例中优选为0.1U/μl。
电子媒介体是由亚甲基蓝、甲苯鞍蓝、甲酚固紫、铁氰酸盐、二茂铁及其衍生物、对苯醌、吩嗪硫酸甲酯、靛酚及其衍生物和β-萘醌-4-磺酸钾等中选择出的一种，量为10～50mM，优选20～40mM，实施例中优选为25mM。
保持酶活性的稳定剂，它是由从琥珀酸钠、柠檬酸三钠、牛血清白蛋白、海藻糖、甲壳素、丝素蛋白等中选择出的一种，其量为1～50mM，优选5～25mM，实施例中优选为10mM。
溶解酶和电子媒介体的溶剂，它可以使用水、磷酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、乙酸缓冲液、Tris盐酸缓冲液等各种缓冲液，目的是用来保持恒定的PH值，实施例中优选PH值为7.4。
实施例中所用到的电极，如图1、2所示。绝缘性基材5是由从聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚酯、聚碳酸酯、聚乙烯、聚丙烯、聚乙烯对苯二甲酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯和丙烯晴-丁二烯-苯乙烯等中选择出来的一种聚合物制成，其厚度在0.1～1mm之间，优选0.2～0.6mm，第二绝缘层2和覆盖层1与绝缘基材5是同种材料，厚度不同，其厚度在0.1～0.5mm之间，优选0.2～0.4mm。
所述工作电极和对电极所用材料包括选自钯、铂、碳、金、铱、铜、银及其混合物的材料。优选应用金电极，因为它加工简单，与塑料的粘接性好且导电率高，本发明制成的金电极薄至约100纳米，很适合一次性使用。电极经过表面活化处理后，不仅可以去除电极表面的污染物，同时还能起到活化电极表面的作用，刻蚀的条件可根据电极表面的情况做适当的调整。用等离子体法快速活化电极表面的技术参照已公开专利CN1506678A号。
其工作电极4和对电极6的形状参照已申请专利，专利申请号为02160271.9，它可以采用圆形、方形、条形等各种形状的电极。电极系统可以是两电极的，即工作电极、假参比电极(共用对电极和参比电极)，也可以是三电极的，即工作电极、对电极和参比电极。制作详细说明可以参照已申请专利200410030214.X号专利文件，在此不再赘述。
实施例本实施例优选铁氰化物作为具有氧化还原作用的电子传递体，发生的反应如下
取如附图1所示的电极备用。
准备试剂取谷氨酸脱氢酶母液0.1U/μl，将其稀释到16U/ml，取50μl加入离心管中。再取4M天冬氨酸溶液、0.16Mα-酮戊二酸溶液、80mM海藻糖溶液、40μM维生素B6(磷酸吡哆醛)溶液、2mM NAD+溶液、0.8U/μl心肌黄酶溶液、0.2M铁氰酸盐溶液各50μl加入同一离心管中。轻震荡至混合完全。将5μl上述溶液滴加在电极反应区3上，在37℃的干燥箱中干燥20分钟。取出，加覆盖层7，形成毛细作用沟道。
在制备好的电极上，通过毛细作用加入3~5μl标准溶液，在电极表面发生如下反应
反应式(3)产生电子传递，在电化学生物传感器检测系统(CHI)上可以快速检测出与天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活力相对应的电流(见图3)。
同时利用NADH吸光度的变化，也可以使用光学检测系统进行天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活力的检测。
本发明用了优选实施例进行说明，优选实施例只是为了说明的目的，而不是对本发明的限制。在上述说明的基础上可以对本发明作许多改进和改变。因此，在所附权利要求书的范围内，本发明可以有不是上述的其他实现方式。例如其它组合的试剂配方、在电极表面作任何化学处理和表面修饰、指示剂的种类和反应位置、在试剂层上覆盖过滤膜从而消除红细胞的干扰而用于全血天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的检测、纳米颗粒修饰的试剂反应区、三电极或多电极形式、厚膜电极的制备形式等。同时也并不局限于电化学方法利用NADH或氧化还原反应生成的H2O2吸光度的变化，在添加若干辅助试剂的情况下，也可以使用光学检测系统进行天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活力的检测。
权利要求
1.一种天门冬氨酸氨基转移酶活力的快速测试方法，使用基于微机电系统技术制备的生物传感器，其特征在于，包括a)将被侧物液滴吸入电极的反应区内，电极表面发生氧化还原反应，氧化还原反应产生电子传递并形成电流；b)电流在辅助因子的协同作用下，将天冬氨酸转化为谷氨酸和草酰乙酸，测定谷氨酸或草酰乙酸的量，可相应得出天门冬氨酸氨基转移酶的活力。
2.如权利要求1所述的快速测试方法，其特征在于，在b)步中，所述测定谷氨酸或草酰乙酸的量，按下列四种方法中任选一种进行方法一谷氨酸在有辅酶NAD存在的条件下，与谷氨酸脱氢酶反应，生成的NADH与天门冬氨酸氨基转移酶的活力成正比关系，借助具有氧化还原作用的电子传递体检测NADH的氧化电流，得到天门冬氨酸氨基转移酶的活力；方法二谷氨酸直接与谷氨酸氧化酶反应，生成的过氧化氢与天门冬氨酸氨基转移酶的活力成正比关系，借助具有氧化还原作用的电子传递体检测过氧化氢的氧化电流，得到天门冬氨酸氨基转移酶的活力；方法三草酰乙酸在有氢离子存在的条件下，与辅酶NADH反应生成NAD，借助具有氧化还原作用的电子传递体检测NAD的氧化电流，得到天门冬氨酸氨基转移酶的活力；方法四草酰乙酸在草酰乙酸脱羧酶的作用下生成丙酮酸，在有激活因子的条件下，丙酮酸氧化酶催化丙酮酸生成与天门冬氨酸氨基转移酶活力成正比的过氧化氢，借助具有氧化还原作用的电子传递体检测过氧化氢的氧化电流，得到天门冬氨酸氨基转移酶的活力。
3.如权利要求1所述的快速测试方法，其特征在于，所述使用的基于微机电系统技术制备的生物传感器，其包括提供反应所用到的敏感试剂包括和被检测物天门冬氨酸氨基转移酶发生氧化还原反应的酶、底物和各种辅助因子；用于电子转递的电子转递体；用于溶解试剂的缓冲溶液；用于保持酶活性的稳定剂和各种附加试剂；提供一种用于检测的电极，用于连接反应试剂和检测仪表装置，对被测试物施加工作电压，并通过电子传递体完成生物化学反应所产生的电子传递。
4.如权利要求3所述的快速测试方法，其特征在于，所述反应敏感试剂中的酶，与被分析物起反应且能产生与被分析物天门冬氨酸氨基转移酶的活力相对应的电流，包括辅酶NAD、谷氨酸脱氢酶、谷氨酸氧化酶、草酰乙酸脱羧酶、丙酮酸氧化酶、过氧化氢酶，其中，辅酶NAD+的量为0.1～0.4mM；谷氨酸脱氢酶的量为1～50U/ml。
5.如权利要求3所述的快速测试方法，其特征在于，所述底物，为天冬氨酸、α-酮戊二酸，其中，天冬氨酸量为0.1～1M，α-酮戊二酸量为10～30mM。
6.如权利要求3所述的快速测试方法，其特征在于，所述反应敏感试剂中的电子传递体，起氧化还原作用，为从过氧化物酶氧化还原聚合物、铁氰酸盐、亚甲基蓝、二茂铁及其衍生物、对苯醌、吩嗪硫酸甲酯、靛酚及其衍生物和β-萘醌-4-磺酸钾组成的组中选择出的一种，其量为10～50mM。
7.如权利要求3所述的快速测试方法，其特征在于，所述酶促反应中的辅助因子，是由牛血清白蛋白、心肌黄酶、柠檬酸三钠、海藻糖、磷酸吡哆醛、甲壳素、丝素蛋白、琥珀酸钠中选择出的一种，其量为1～20μM。
8.如权利要求3所述的快速测试方法，其特征在于，所述反应敏感试剂中的缓冲溶液，为磷酸缓冲液、TRIS缓冲液、柠檬酸缓冲液、乙酸缓冲液组成的组中选择出的一种。
9.如权利要求3所述的快速测试方法，其特征在于，所述发生氧化还原反应时所用到的辅助因子，是由牛血清白蛋白、心肌黄酶、柠檬酸三钠、海藻糖、磷酸吡哆醛、甲壳素、丝素蛋白、琥珀酸钠中选择出的一种，其量为0.01～10U/μl。
10.如权利要求3所述的快速测试方法，其特征在于，所述反应敏感试剂中的稳定剂，保持酶的活性，是从琥珀酸钠、柠檬酸三钠、牛血清白蛋白、海藻糖、甲壳素、丝素蛋白中任选一种制成，其量为1～50mM。
11.如权利要求3所述的快速测试方法，其特征在于，所述电极，为两电极或多电极形式的薄膜电极，制备于绝缘性基板上；固定在电极上的反应试剂，包括电子接受体、与被分析物起反应且能产生与被分析物浓度相对应的电流的酶、缓冲液、表面活性剂；电极材料为钯、铂、碳、金、铱、铜、银、氯化银及其混合物中的一种。
12.如权利要求11所述的快速测试方法，其特征在于，所述绝缘性基板，为从聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚酯、聚碳酸酯、聚乙烯、聚丙烯、聚乙烯对苯二甲酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯和丙烯晴-丁二烯-苯乙烯等组成的组合中选择出来的一种聚合物制成。
13.如权利要求1、2或3所述的快速测试方法，其特征在于，可用于血清中或全血中天门冬氨酸氨基转移酶活力的检测。
全文摘要
本发明涉及电化学检测技术领域，是一种检测天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活力的快速测试方法，产生与被测物活力(浓度)相对应的电化学变化或光学变化。其包括a)将被侧物液滴吸入电极的反应区内，电极表面发生氧化还原反应，氧化还原反应产生电子传递并形成电流；b)电流在辅助因子的协同作用下，将天冬氨酸转化为谷氨酸和草酰乙酸，测定谷氨酸或草酰乙酸的量，可相应得出天门冬氨酸氨基转移酶的活力。当被分析物滴加到电极反应区上后，用电化学生物传感器检测系统可以快速检测出的活力。本发明使得电流型酶传感器的响应速度和检测灵敏度得到了提高，同时降低了反应的电压。
文档编号G01N27/327GK1782701SQ20041000993
公开日2006年6月7日 申请日期2004年12月2日 优先权日2004年12月2日
发明者郭宗慧, 蔡新霞, 刘春秀, 姜利英, 李华清, 罗贤波, 王慧, 周爱玉 申请人:中国科学院电子学研究所