专利名称：一种提取毛喉鞘蕊花有效成分的方法
技术领域：
本发明属中药制药领域，涉及一种提取毛喉鞘蕊花有效成分的方法。具体一种提取毛喉鞘蕊花有效成分异佛司可林的方法。
背景技术：
毛喉鞘蕊花Coleus forskohlii (Willd) Briq.系唇形科 Labiatae 鞘蕊花属Coleus Lour.植物，可用于治疗心血管疾病、感冒、咳嗽和呼吸紊乱等疾病。异佛司可林(isoforskolin)是国产毛喉鞘蕊花的主要有效成分，现有技术公开了其具有降压、降低眼内压、平喘、抗血小板聚集、抗肺损伤等作用。该化合物具有多种生物活性，在药品和保健食品开发方面的应用前景良好。目前已有的提取异佛司可林的相关技术主要有:(I)采用含水乙醇提取，有机溶剂萃取和硅胶柱层析分离等技术制备异佛司克林，该种工艺中存在如下缺陷:使用大量氯仿、二氯甲烷、石油醚或丙酮等有毒有机溶剂，以及不易再生重复使用的分离材料硅胶(中国专利公开号CN 1539493A和CN 101259123A) ； (2)超临界流体萃取法，该法设备复杂，投资大，也未公开该法制得得异佛司可林的纯度(中国专利公开号CN 1539493A) ; (3)采用含水乙醇提取，大孔树脂纯化，该法简便、适于大生产，但所得提取物中异佛司可林的含量仅为8%和20% (中国专利ZL200410084646.9)。因此，关于如可提取高纯度异佛司可林的方法引起本领域研究者的关注
发明内容
: 本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种提取毛喉鞘蕊花有效成分的方法，尤其是一种提取毛喉鞘蕊花有效成分异佛司可林的方法。本发明将毛喉鞘蕊花全草或根粉碎后，以含水乙醇提取，大孔树脂柱层析、十八烷基键合硅胶柱层析、重结晶等方法进行纯化，制得纯度大于90%的异佛司可林。本方法制备工艺环保，易放大生产，制得的异佛司可林纯度可高达90%甚至98%，可用作药品开发的原料和保健品的功能添加剂。具体而言，本发明的提取毛喉鞘蕊花有效成分异佛司可林的方法，其特征在于，其包括步骤:(I)提取:取毛喉鞘蕊花全草或根粉碎后，用70 95%乙醇提取，浓缩提取液，浓缩液直接过滤，或加入絮凝剂后过滤，滤液备用；(2)大孔树脂柱层析纯化:上述滤液调节pH值后通过大孔树脂柱，依次用水及浓度为20 40%乙醇淋洗，再用60 85%乙醇洗脱，将洗脱液浓缩至干，得大孔树脂提取物；(3)十八烷基键合硅胶(ODS)柱层析纯化:取上述大孔树脂提取物，与等重量ODS混合均匀，或用尽可能少量的乙醇溶解后，上ODS柱纯化，以20 35%乙醇淋洗杂质，再用40 65%乙醇洗脱，将洗脱液浓缩至干，得ODS提取物；
(4)重结晶:上述ODS提取物以乙酸乙酯、丙酮、乙醇或所述溶剂的混合液进行重结晶，析出白色晶体后，滤出结晶，干燥，得纯度大于90%的异佛司可林；(5)制备液相纯化:制得的异佛司可林晶体用甲醇溶解后，经制备液相进一步纯化，得纯度大于98%的异佛司可林。本发明中，制得的异佛司可林纯度按重量百分比计算。本发明中，所述的大孔树脂优选非极性或弱极性的聚苯乙烯型多孔性吸附树脂。本发明步骤2中，所述上大孔树脂前的滤液的pH值范围为5 10。本发明步骤2中，大孔树脂柱层析纯化进行I 3次。本发明步骤3中，所述的ODS柱层析纯化进行I 3次。本发明步骤4中，重结晶反复2 3次。本发明中，采用高效液相色谱蒸发光散射检测器测定异佛司可林的纯度，按峰面积归一化法计算异佛司可林的纯度为90%以上。本发明与现有技术比较，具有工艺环保，适于工业化生产，制得的异佛司可林纯度闻等优点，具体体现为:(I)使用的溶剂主要为乙醇和水，可回收利用，对环境无污染；(2)柱层析分离材料采用大孔树脂和十八烷基键合硅胶，可再生后反复使用；(3)制得的异佛司可林纯度高，可达90%以上。
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为了便于理解，以下将通过具体的实施例对本发明的提取毛喉鞘蕊花有效成分的方法进行详细地描述。需要特别指出的是，具体实例仅是为了说明，显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明，在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变，这些修正和改变也纳入本发明的范围内。
具体实施方式
:实施例1(I)毛喉鞘蕊花全草5公斤，粉碎，过20目筛，用70%乙醇60升分3次热提，首次提取2h，第二、三次各提取lh，合并3次提取液，浓缩至约8升。浓缩液用水稀释至25升，低速搅拌下加入I %壳聚糖溶液5升，静置lh，过滤，将滤液调节至pH = 8 ;(2)上述滤液以2BV/h (BV为大孔树脂的柱床体积)的流速通过10升HP20型大孔树脂柱，依次用5BV水和4BV 30%乙醇淋洗除去杂质，再用4BV 85%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩近干。浓缩液用20 %乙醇稀释至2升，通过2升HP20型大孔树脂柱，重复上述洗脱程序，浓缩洗脱液至干，得大孔树脂提取物；(3)将大孔树脂提取物与等重量的十八烷基键合硅胶(ODS)混合均匀，上ODS柱，以25%乙醇淋洗杂质，再用65 %乙醇洗脱，分管收集，用薄层色谱检识各管洗脱液中有无异佛司可林，合并含有异佛司可林的洗脱液，浓缩至干，重复以上ODS柱层析，收集含有异佛司可林的洗脱液，洗脱液浓缩至干，得ODS提取物；⑷ODS提取物用乙酸乙酯溶解，待析出白色晶体后，滤出结晶，结晶用乙酸乙酯溶解后进行重结晶，滤出晶体，干燥，得纯度大于90%的异佛司可林。(5)制备液相纯化:上述异佛司可林晶体用甲醇溶解后，采用制备液相进一步纯化，液相色谱条件:色谱柱为ODS柱，流动相为水甲醇(35: 65)，检测波长210nm。收集主峰保留时间的流出液，浓缩至干，得纯度大于98%的异佛司可林。实施例2(I)毛喉鞘蕊花全草5公斤，粉碎，过20目筛，用80%乙醇浸泡12h后渗漉，收集渗漉液40升，浓缩至约5升。浓缩液用水稀释至20升，过滤，将滤液调节至pH = 9 ;
(2)上述滤液以2BV/h(BV为大孔树脂的柱床体积)的流速通过10升HZ818型大孔树脂柱，依次用5BV水和4BV 25%乙醇淋洗除去杂质，再用4BV 80%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩近干。浓缩液用20%乙醇稀释至2升，通过2升HZ818型大孔树脂柱，重复上述洗脱程序，浓缩洗脱液至干，得大孔树脂提取物；(3)将大孔树脂提取物用少量乙醇溶解后，上ODS柱，以20%乙醇淋洗杂质，再用60%乙醇洗脱，分管收集，用薄层色谱检识各管洗脱液中有无异佛司可林，合并含有异佛司可林的洗脱液，浓缩至干，重复以上ODS柱层析，收集含有异佛司可林的洗脱液，洗脱液浓缩至干，得ODS提取物；⑷ODS提取物用无水乙醇溶解，待析出白色晶体后，滤出结晶。结晶用无水乙醇溶解后进行重结晶，滤出晶体，干燥，得纯度大于90%的异佛司可林；(5)制备液相纯化:上述异佛司可林晶体用甲醇溶解后，采用制备液相进一步纯化，液相色谱条件:色谱柱为ODS柱，流动相为水甲醇(35: 65)，检测波长210nm。收集主峰保留时间的流出液，浓缩至干，得纯度大于98%的异佛司可林。
权利要求
1.一种提取毛喉鞘蕊花有效成分的方法，该有效成分为异佛司可林，其特征在于，其包括步骤: (1)提取:取毛喉鞘蕊花全草或根粉碎后，用70 95%乙醇提取，浓缩提取液，浓缩液直接过滤，或加入絮凝剂后过滤，滤液备用； (2)大孔树脂柱层析纯化:上述滤液调节PH值后通过大孔树脂柱，依次用水及浓度为20 40%乙醇淋洗，再用60 85%乙醇洗脱，将洗脱液浓缩至干，得大孔树脂提取物； (3)十八烷基键合硅胶(ODS)柱层析纯化:取上述大孔树脂提取物，与等重量ODS混合均匀，或用尽可能少量的乙醇溶解后，上ODS柱纯化，以20 35%乙醇淋洗杂质，再用40 65%乙醇洗脱，将洗脱液浓缩至干，得ODS提取物； (4)重结晶:上述ODS提取物以乙酸乙酯、丙酮、乙醇或所述溶剂的混合液进行重结晶，析出白色晶体后，滤出结晶，干燥，得纯度大于90%的异佛司可林； (5)制备液相纯化:制得的异佛司可林晶体用甲醇溶解后，经制备液相进一步纯化，得纯度大于98%的异佛司可林。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的大孔树脂选自非极性或弱极性的聚苯乙烯型多孔性吸附树脂。
3.根据权利要求1所述的方法，其特 征在于，所述步骤(2)中的上大孔树脂前的滤液pH值范围为5 10。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中大孔树脂柱层析纯化进行I 3次。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的ODS柱层析纯化进行I 3次。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中的重结晶进行2 3次。
全文摘要
本发明属中药制药领域，涉及一种提取毛喉鞘蕊花有效成分的方法。具体是一种提取毛喉鞘蕊花有效成分异佛司可林的方法。本发明将毛喉鞘蕊花全草或根粉碎后，以含水乙醇提取，大孔树脂柱层析、十八烷基键合硅胶柱层析、重结晶等方法进行纯化，制得纯度大于90％的异佛司可林。本方法制备工艺环保，易放大生产，制得的异佛司可林纯度可高达90％甚至98％，可用作药品开发的原料和保健品的功能添加剂。
文档编号C07D311/92GK103183658SQ201110458818
公开日2013年7月3日 申请日期2011年12月29日 优先权日2011年12月29日
发明者黄建明, 田璐璐, 汪亚勤, 殷嘉珺, 刘真君, 谢道涛 申请人:复旦大学