专利名称：一种从车前草中分离熊果酸的方法
技术领域：
本发明属天然药物领域，具体涉及从车前草中分离活性成分熊果酸的新工艺。
背景技术：
熊果酸(Ursolic acid)又名乌苏酸或乌索酸,属三職类化合物,分子式为C3tlH18O3,化学名称为3 P -羟基-熊果烷-12-烯-28-羧酸。熊果酸具有广泛的药用价值，如治疗肝脏纤维化、治疗肌肉萎缩、抗高血压、抗动脉粥样硬化、抗氧化等作用，且它对多种致癌细胞具有细胞毒、诱导分化及抗血管形成作用，其防癌抗癌作用已引起重视，成为现代肿瘤药研究的新热点，熊果酸也有可能成为抗HIV的潜在药物。车前草又名车轮菜、猪耳草、钱串草、踏不死、蛤蚂草、野甜菜、车轱辘菜等，为车前科植物车前(Plantago asiatica L.)或平车前(Plantago depressa Willd.)的干燥全草。车前草中熊果酸含量较高。车前草在我国资源丰富，几乎全国各省均有分布，生长迅速且价格低廉，这为车前草的开发利用提供了丰富的资源。本发明所用原料车前草，就是车前草的干燥全草。
发明内容
本发明目的在于提供一种从车前草中分离熊果酸的新方法。它是将粉碎过的车前草用低碳链醇或它们的水溶液提取，回收溶剂得浸膏；浸膏用中等极性溶剂提取或萃取，回收得浸取物；该浸取物用低极性溶剂脱脂后，溶于低碳链醇并用活性炭脱色；回收溶剂得到白色熊果酸粗品；熊果酸粗品经低碳链醇、低碳链醇水溶液、乙酸乙酯或它们混合物重结晶后得熊果酸晶体。本工艺具体步聚如下
1、取经粉碎的车前草，按液固比mL/g4/1 20/1加入低碳链醇即甲醇或乙醇或它们的任意比混合物，或它们的水溶液，体积比浓度50% 100%，在20-90°C下，加热回流或功率100 IOOOw的超声波或100 IOOOw功率的微波辅助提取I 3次，每次0. I 2小时，搅拌速度0 2000r/min，合并提取液，常压或减压回收溶剂得浸膏；
2、取浸膏，按液固比mL/g10/1 100/1加入中等极性溶剂二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷、乙酸乙酯或它们的任意比混合物，在20-70°C下，加热回流提取或功率100 IOOOw的超声或功率100 IOOOw的微波辅助提取I 3次，每次0. I 2小时，搅拌速度0 2000r/min，或者把浸膏分散于水中再用上述中等极性溶剂进行萃取I 3次，水相和有机相体积比1/9 9/1，合并提取液或有机萃取液，常压或减压回收溶剂得中等极性溶剂浸取物；
3、取该中等极性溶剂浸取物，按液固比mL/g10/1 100/1加入低极性溶剂石油醚、正己烷、环己烷、正庚烷或它们的任意比混合物，在20-90°C下，加热回流脱脂或功率100 IOOOw的超声或功率100 IOOOw的微波，辅助脱脂I 3次，每次0. I 2小时，搅拌速度0 2000r/min，过滤或离心，得到脱脂后中等极性溶剂浸取物；
4、按液固比mL/g20/1 200/1加入低碳链醇即甲醇或乙醇或它们的任意比混合物或它们的水溶液体积比浓度50% 100%，使脱脂后中等极性溶剂浸取物溶解，在20-90°C下，按浸取物质量g/g的1/10 5/1加入活性炭，加热回流或超声100 IOOOw的功率或功率100 IOOOw的微波辅助脱色I 5次每次0. I 2小时，搅拌速度0 2000r/min,过滤或离心，常压或减压回收溶剂得到熊果酸粗品； 5、取熊果酸粗品，按液固比mL/g20/1 300/1加入低碳链醇即甲醇或乙醇或它们的任意比混合物或它们的水溶液，体积比浓度50% 100%或乙酸乙酯或乙酸乙酯与低碳链醇的混合物，体积比1/9 9/1，进行结晶或重结晶，过滤或离心得到熊果酸晶体。本发明的优点是与其它植物原料相比，本发明所用车前草在我国分布广泛，易于栽培，生长迅速，这为本发明提供了丰富且价廉的原料；本发明所需化工原料易得，并且可以回收再用，因此“三废”处理量小，对环境基本不产生污染；本发明不采用柱层析技术，而是直接采用提取、萃取、脱色、结晶等工艺，故本工艺简便、所需装置简单，非常适合规模化生产。综上述所，本发明所需原料价廉易得，环境污染小，工艺简便易行，生产装置简单，所以本发明制备熊果酸的成本较低并且非常适合规模化生产。
具体实施例方式实施例I :
将车前草自然凉干或烘干，粉碎，取车前草细粉，用8倍量95%乙醇提取3次(每次2小时，70°C，搅拌，转速800r/min)，减压回收乙醇得到深褐色浸膏；乙醇提取物分散于水中，取等体积的氯仿分别萃取3次，合并氯仿层，回收氯仿得到氯仿提取物；氯仿提取物用10倍量的石油醚(沸点60-90°C )脱去脂溶性成分3次(每次I小时，60°C，搅拌，转速500r/min)；脱脂后的氯仿提取物溶于95%乙醇中，加入活性炭脱色3次(每次I小时，50°C，搅拌，转速500r/min),过滤，合并滤液，回收乙醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品用95%乙醇重结晶得到熊果酸晶体。实施例2
将车前草自然凉干或烘干，粉碎，取车前草细粉，用6倍量无水乙醇提取3次(每次2小时，60°C，搅拌，转速600r/min)，减压回收乙醇得到深褐色浸膏；乙醇提取物分散于水中，取等体积的二氯甲烷分别萃取3次，合并二氯甲烷层，回收二氯甲烷得到二氯甲烷提取物；二氯甲烷提取物用20倍量的正已烷脱去脂溶性成分3次(每次I小时，40°C，搅拌，转速500r/min);脱脂后的二氯甲烷提取物溶于无水乙醇中，加入活性炭脱色3次(每次I小时，60°C，搅拌，转速400r/min)，过滤，合并滤液，回收乙醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品用无水乙醇重结晶得到熊果酸晶体。实施例3
将车前草自然凉干或烘干，粉碎，取车前草细粉，用6倍量甲醇提取3次(每次2小时，40°C，搅拌，转速600r/min)，减压回收甲醇得到深褐色浸膏；甲醇醇提取物分散于水中，取等体积的乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯得到乙酸乙酯提取物；乙酸乙酯提取物用20倍量的石油醚(沸点60-90°C)脱去脂溶性成分3次(每次I小时，50°C，搅拌，转速500r/min);脱脂后的乙酸乙酯提取物溶于无水乙醇中，加入活性炭脱色3次(每次I小时，40°C，搅拌，转速500r/min)，过滤，合并滤液，回收乙醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品用乙酸乙酯重结晶得到熊果酸晶体。
实施例4:
将车前草自然凉干或烘干，粉碎，取车前草细粉，用10倍量60%乙醇水溶液提取3次(每次2小时，40°C，搅拌，转速600r/min)，减压回收溶剂得到深褐色浸膏；乙醇提取物分散于水中，取等体积的乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯得到乙酸乙酯提取物；乙酸乙酯提取物用20倍量的正已烷脱去脂溶性成分3次(每次I小时，40°C，搅拌，转速500r/min);脱脂后的正已烷提取物溶于甲醇中，加入活性炭脱色3次(每次I小时，40°C，搅拌，转速500r/min)，过滤，合并滤液，回收甲醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品用甲醇重结晶得到熊果酸晶体。实施例5:
将车前草自然凉干或烘干，粉碎，取车前草细粉，用12倍量95%乙醇超声辅助提取3次(每次0. 5小时)(可加温度，转速)，减压回收乙醇得到深褐色浸膏；乙醇提取物用20倍的二氯甲烷分别提取3次，合并二氯甲烷层，回收二氯甲烷得到二氯甲烷提取物；二氯甲烷提取物用30倍量的石油醚(沸点60-90°C )脱去脂溶性成分2次(每次30小时，50°C，搅拌，转速500r/min);脱脂后的二氯甲烷提取物溶于无水乙醇中，加入活性炭脱色3次(每次I小时，50°C，搅拌，转速600r/min)，过滤，合并滤液，回收乙醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品用乙醇和乙酸乙酯的混合物重结晶得到熊果酸晶体。实施例6:
将车前草自然凉干或烘干，粉碎，取车前草细粉，用12倍量95%乙醇微波辅助提取3次(每次0. 2小时)，减压回收乙醇得到深褐色浸膏；乙醇提取物用20倍的氯仿分别提取3次，回收氯仿得到氯仿提取物；氯仿提取物用30倍量的石油醚(沸点60-90°C)脱去脂溶性成分2次(每次0.5小时，50°C，搅拌，转速500r/min);脱脂后的氯仿提取物溶于无水乙醇中，力口入活性炭脱色3次(每次I小时，50°C，搅拌，转速600r/min)，过滤，合并滤液，回收乙醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品用乙醇重结晶得到熊果酸晶体。实施例I
将车前草自然凉干或烘干，粉碎，取车前草细粉，采用渗漉法(增加量)，用95%乙醇提取，减压回收乙醇得到深褐色浸膏；乙醇提取物用20倍的二氯乙烷分别提取3次，回收二氯乙烷得到二氯乙烷提取物；二氯乙烷提取物用20倍量的石油醚(沸点60-90°C)脱去脂溶性成分2次(每次0.5小时，50°C，搅拌，转速400r/min);脱脂后的二氯乙烷提取物溶于甲醇中，加入活性炭脱色3次(每次I小时，40°C，搅拌，转速600r/min)，离心，合并清液，回收甲醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品用甲醇和乙醇混合溶液重结晶得到熊果酸晶体。实施例8:
将车前草自然凉干或烘干，粉碎，取车前草细粉，用10倍量95%乙醇超声辅助提取3次(每次0.5小时)，减压回收乙醇得到深褐色浸膏；乙醇提取物用20倍的乙酸乙酯分别提取3次，回收乙酸乙酯得到乙酸乙酯提取物；乙酸乙酯提取物用30倍量的石油醚(沸点60-900C )脱去脂溶性成分3次(每次0. 3小时，40°C，搅拌，转速500r/min);脱脂后的乙酸乙酯提取物溶于95%乙醇中，加入活性炭脱色3次(每次0. 5小时，60°C，搅拌，转速400r/min)，过滤，合并滤液，回收乙醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品用95%乙醇重结晶得到熊果酸晶体。 实施例9:
将车前草自然凉干或烘干，粉碎，取车前草细粉，用14倍量乙醇超声辅助提取3次(每次0. 2小时)，减压回收乙醇得到深褐色浸膏；乙醇提取物用20倍的氯仿分别提取3次，回收氯仿得到氯仿提取物；氯仿提取物用30倍量的环已烷脱去脂溶性成分2次(每次0. 5小 时，50°C，搅拌，转速500r/min);脱脂后的氯仿提取物溶于甲醇中，加入活性炭脱色3次(每次I小时，50°C，搅拌，转速600r/min)，过滤，合并滤液，回收甲醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品用甲醇重结晶得到熊果酸晶体。
权利要求
1.一种从车前草中分离熊果酸的方法，其特征在干 (1)取经粉碎的车前草，按液固比mL/g4/1 20/1加入低碳链醇或它们的水溶液，体积比浓度50% 100%，在20-90°C下，加热回流或功率100 IOOOw的超声波或100 IOOOw功率的微波辅助提取I 3次，每次0. I 2小时，搅拌速度0 2000r/min，合并提取液，常压或减压回收溶剂得浸膏； (2)取浸膏，按液固比mL/g10/1 100/1加入中等极性溶剂，在20-70°C下，加热回流提取或功率100 IOOOw的超声或功率100 IOOOw的微波辅助提取I 3次，每次0. I 2小时，搅拌速度0 2000r/min，或者把浸膏分散于水中再用上述中等极性溶剂进行萃取I 3次,水相和有机相体积比1/9 9/1,合并提取液或有机萃取液,常压或减压回收溶剂得中等极性溶剂浸取物； (3)取该中等极性溶剂浸取物，按液固比mL/g10/1 100/1加入低极性溶剂，在20-90°C下，加热回流脱脂或功率100 IOOOw的超声或功率100 IOOOw的微波，辅助脱脂I 3次，毎次0. I 2小时，搅拌速度0 2000r/min，过滤或离心，得到脱脂后中等极性溶剂浸取物； (4)按液固比mL/g20/1 200/1加入低碳链醇或它们的水溶液，体积比浓度50% 100%，使脱脂后中等极性溶剂浸取物溶解，在20-90°C下，按浸取物质量g/g的1/10 5/1加入活性炭，加热回流或超声100 IOOOw的功率或功率100 IOOOw的微波辅助脱色I 5次毎次0. I 2小时，搅拌速度0 2000r/min，过滤或离心，常压或减压回收溶剂得到熊果Ife粗品； (5)取熊果酸粗品，按液固比mL/g20/1 300/1加入低碳链醇或它们的水溶液，体积比浓度50% 100%或こ酸こ酯或こ酸こ酯与低碳链醇的混合物，体积比1/9 9/1，进行结晶或重结晶，过滤或离心得到熊果酸晶体。
2.根据权利要求I所述的ー种从车前草中分离熊果酸的方法，其特征在干所述低碳链醇是甲醇、こ醇和它们的任意比混合物中的ー种。
3.根据权利要求I所述的ー种从车前草中分离熊果酸的方法，其特征在于所述中等极性溶剂是ニ氯甲烷、三氯甲烷、ニ氯こ烷、こ酸こ酯和它们的任意比混合物中的ー种。
4.根据权利要求I所述的ー种从车前草中分离熊果酸的方法，其特征在干所述低极性溶剂是石油醚、正己烷、环己烷、正庚烷和它们的任意比混合物中的ー种。
全文摘要
一种从车前草中分离熊果酸的方法,是将粉碎过的车前草用低碳链醇或它们的水溶液提取，回收溶剂得浸膏；浸膏用中等极性溶剂提取或萃取，回收得浸取物；该浸取物用低极性溶剂脱脂后，溶于低碳链醇并用活性炭脱色；回收溶剂得到白色熊果酸粗品；熊果酸粗品经低碳链醇、低碳醇水溶液、乙酸乙酯或它们混合物重结晶后得熊果酸晶体。本发明原料易得、工艺简单易行，所获得的熊果酸纯度高、成本低，非常适合规模化生产。
文档编号C07J63/00GK102649808SQ20121012039
公开日2012年8月29日 申请日期2012年4月24日 优先权日2012年4月24日
发明者朱建航, 范杰平 申请人:南昌大学