专利名称：一种鲜海蜇胶原蛋白的制备方法
技术领域：
本发明涉及肽的制备方法，尤其是一种鲜海蜇胶原蛋白的制备方法。
背景技术：
海蜇(Rhopilema esculentum),钵水母纲，根口水母,广泛分布于我国的沿海近岸，是我国传统渔业生产的主要大型经济水母。我国是最早开发利用海蜇资源的国家。研究表明，海蜇对高血压、慢性气管炎、哮喘、胃溃疡和单纯性甲状腺肿大有防治作用。由于海蜇含水量高且易自溶，极大的限制了其应用。海蜇伞部主要组成为胶原蛋白，胶原蛋白是由三条多肽链组成的呈三股螺旋结构的蛋白质，作为一种天然的高分子化合物，其特有的结构和化学组成使其在生物医学材料、药物输送载体、组织工程、化妆品和食品等领域得到了广泛应用。胶原蛋白的制备方法根据不同的原料而多种多样。胶原蛋白的提取方法简单的说可以分为四种，即酸法浸提、碱法浸提、中性盐浸提和酶法浸提等。其基本的原理都是根据胶原蛋白的特性改变蛋白质所在的外界环境，把胶原蛋白从其他蛋白质中分离出来。碱法易造成胶原肤键水解，提取的胶原分子质量较低。盐法提取工艺不稳定，且胶原溶出率低。而酸法和酶法两者各有千秋。酸法提取胶原能最大程度地保持其三螺旋结构，酶法提取的溶出率高并且能降低胶原的抗原性。申请号为200610042188. 1，名称为海蜇胶原蛋白及其制备方法，其是以盐溃海蜇或新鲜海蜇的中胶层为研究对象，蛋白酶处理后，用超滤的方法分离浓缩，得到分子量在10-30万道尔顿的胶原蛋白，其截留率为95-98%。申请号为:200810013761. 5，名称为:一种海蜇胶原蛋白的提取及其制备胶原肽的方法，其是以新鲜海蜇、解冻海蜇或盐溃海蜇作为原料，采用酸碱对原料进行溶胀处理，热水提取海蜇胶原蛋白，经透析、超滤和离子柱等方法脱盐、浓缩和干燥得到胶原蛋白。上述专利申请公开文件中，在胶原蛋白的提取方面存在两方面的问题一方面酶法提取和酸碱处理会给胶原蛋白的三螺旋结果带来破坏；另一方面透析和离子柱脱盐成本较高，不利于工业化；超滤膜对非一价盐的截留率较高，脱盐率低。
发明内容
为了克服现有技术中不足，本发明提供一种胶原蛋白三螺旋结构保持率及脱盐率高的鲜海蜇胶原蛋白的制备方法。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是一种鲜海蜇胶原蛋白的制备方法，其特征在于经过下列工艺
(1)流水清洗选取新鲜海蜇为原料，去触角后，头皮分离，用清水冲洗干净；
(2)剪碎将冲洗好的鲜海蜇皮和鲜海蜇头剪切成小方块；
(3)酸浸提将剪切后的海蜇小方块加入海蜇小方块I 2倍体积、浓度为lmol/L I. 2mol/L的乙酸溶液，搅拌均匀，控制温度25°C 30°C，浸提2 3天；CN 102924591 A
书
明
说
2/3页
(4)过滤用60目的布袋过滤，收集滤过液；
(5)电渗析将滤过液的物料浓度调整至O.5 1%，温度控制为30 40°C，流速控制为10 15L/h，在15 18v的电压下进行电渗析，收集脱盐清液；
(6)超滤纯化浓缩控制进膜压力O.5MPa，出膜压力O. 5MPa，温度30 40°C，将脱盐清液通过截留分子质量为5000 10000 Da的超滤膜，加水循环三次，收集浓缩液；
(7)冷冻干燥将浓缩液预冷至-20°C，真空度<180Pa，加热板30°C IOOmin ；50°C360min ;40°C至冻干终点，即得胶原蛋白粉末。本发明是将新鲜海蜇洗净后剪碎，加入乙酸溶液进行酸浸提，过滤液进行电渗析处理，再经超滤纯化浓缩、冷冻干燥得胶原蛋白粉末。本发明采用乙酸溶液进行酸法提取，最大程度地保持其三螺旋结构，得到胶原蛋白粗液；胶原蛋白粗液进行的电渗析处理，去除高价盐，降低盐含量；采用超滤膜进一步去除胶原蛋白中的盐含量，提高了胶原蛋白的纯度。本发明的鲜海蜇胶原蛋白的制备方法，其胶原蛋白三螺旋结构保持率及脱盐率高，得物纯度高，胶原蛋白粗液的电渗析处理成本低，易实现工业化。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步说明。实施例I
一种鲜海蜇胶原蛋白的制备方法，其特征在于经过下列工艺
(1)流水清洗选取新鲜海蜇为原料，去触角后，头皮分离，用清水冲洗干净；
(2)剪碎将冲洗好的鲜海蜇皮和鲜海蜇头剪切成小方块；
(3)酸浸提称量剪切后的海蜇小方块2Kg，加入海蜇小方块I倍体积、浓度为lmol/L的乙酸溶液，搅拌均匀，控制温度30°C，浸提2天；
(4)过滤用60目的布袋过滤，收集滤过液；
(5)电渗析将滤过液的物料浓度调整至O.5%，温度控制为40°C，流速控制为10L/h，在18v的电压下进行电渗析，收集脱盐清液；
(6)超滤纯化浓缩控制进膜压力O.5MPa，出膜压力O. 5MPa，温度40°C，将脱盐清液通过截留分子质量为5000Da的超滤膜，加水循环三次，收集浓缩液；
(7)冷冻干燥将浓缩液预冷至-20°C，真空度<180Pa，加热板30°C IOOmin ；50°C360min ;40°C至冻干终点，即得胶原蛋白粉末18g。实施例2
一种鲜海蜇胶原蛋白的制备方法，其特征在于经过下列工艺
(1)流水清洗选取新鲜海蜇为原料，去触角后，头皮分离，用清水冲洗干净；
(2)剪碎将冲洗好的鲜海蜇皮和鲜海蜇头剪切成小方块；
(3)酸浸提称量剪切后的海蜇小方块3Kg，加入海蜇小方块2倍体积、浓度为I.2mol/L的乙酸溶液，搅拌均匀，控制温度25°C，浸提3天；
(4)过滤用60目的布袋过滤，收集滤过液；
(5)电渗析将滤过液的物料浓度调整至1%，温度控制为35°C，流速控制为15L/h，在15v的电压下进行电渗析，收集脱盐清液；
(6)超滤纯化浓缩控制进膜压力O.5MPa，出膜压力O. 5MPa，温度35 °C，将脱盐清液通
4过截留分子质量为10000 Da的超滤膜，加水循环三次，收集浓缩液；
(7)冷冻干燥将浓缩液预冷至-20°C，真空度< 180Pa，加热板30°C IOOmin ；50°C360min ;40°C至冻干终点，即得胶原蛋白粉末30g。实施例3
一种鲜海蜇胶原蛋白的制备方法，其特征在于经过下列工艺
(1)流水清洗选取新鲜海蜇为原料，去触角后，头皮分离，用清水冲洗干净；
(2)剪碎将冲洗好的鲜海蜇皮和鲜海蜇头剪切成小方块；
(3)酸浸提称量剪切后的海蜇小方块5Kg，加入海蜇小方块I.5倍体积、浓度为Imol/L的乙酸溶液，搅拌均匀，控制温度29 °C，浸提3天；
(4)过滤用60目的布袋过滤，收集滤过液；
(5)电渗析将滤过液的物料浓度调整至O.8%，温度控制为30°C，流速控制为12L/h，在16v的电压下进行电渗析，收集脱盐清液；
(6)超滤纯化浓缩控制进膜压力O.5MPa，出膜压力O. 5MPa，温度30°C，将脱盐清液通过截留分子质量为10000 Da的超滤膜，加水循环三次，收集浓缩液；
(7)冷冻干燥将浓缩液预冷至-20°C，真空度<180Pa，加热板30°C IOOmin ；50°C360min ;40°C至冻干终点，即得胶原蛋白粉末45g。
权利要求
1. 一种鲜海蜇胶原蛋白的制备方法，其特征在于经过下列工艺 (1)流水清洗选取新鲜海蜇为原料，去触角后，头皮分离，用清水冲洗干净； (2)剪碎将冲洗好的鲜海蜇皮和鲜海蜇头剪切成小方块； (3)酸浸提将剪切后的海蜇小方块加入海蜇小方块I 2倍体积、浓度为lmol/L I.2mol/L的乙酸溶液，搅拌均匀，控制温度25°C 30°C，浸提2 3天； (4)过滤用60目的布袋过滤，收集滤过液； (5)电渗析将滤过液的物料浓度调整至O.5 1%，温度控制为30 40°C，流速控制为10 15L/h，在15 18v的电压下进行电渗析，收集脱盐清液； (6)超滤纯化浓缩控制进膜压力O.5MPa，出膜压力O. 5MPa，温度30 40°C，将脱盐清液通过截留分子质量为5000 10000 Da的超滤膜，加水循环三次，收集浓缩液； (7)冷冻干燥将浓缩液预冷至-20°C，真空度<180Pa，加热板30°C IOOmin ；50°C360min ;40°C至冻干终点，即得胶原蛋白粉末。
全文摘要
本发明涉及一种鲜海蜇胶原蛋白的制备方法，其是选取选取新鲜海蜇为原料，去触角，洗净后剪切成小方块；将海蜇小方块加入乙酸溶液浸提2～3天；过滤，收集滤过液；再将滤过液进行电渗析处理，收集脱盐清液；将脱盐清液通过截留分子质量为5000～10000Da的超滤膜，进行超滤纯化浓缩得浓缩液；将浓缩液进行冷冻干燥，得胶原蛋白粉末。本发明采用酸法提取，最大程度地保持其三螺旋结构；在超滤前进行电渗析，去除高价盐，与超滤协同降低胶原蛋白产品的盐含量，得物纯度高。胶原蛋白粗液的电渗析处理成本低，易实现工业化。
文档编号C07K1/24GK102924591SQ201210416150
公开日2013年2月13日 申请日期2012年10月26日 优先权日2012年10月26日
发明者张绵松, 刘昌衡, 孙永军, 夏雪奎, 袁文鹏, 胡炜, 张永刚, 孟秀梅, 贾爱荣, 刘新 申请人:山东好当家海洋发展股份有限公司, 山东省科学院生物研究所