专利名称：一种紫菜降压肽的制备方法
技术领域：
本发明涉及肽的制备，尤其是一种紫菜降压肽的制备方法。
背景技术：
高血压病是一种危险的多发病，全球患高血压人数已超过5亿，同时它又是动脉硬化、冠心病、心脏及肾脏功能衰竭的最主要的致病因素，治疗高血压是全球医学界面临的一项艰巨任务。目前，治疗高血压的药物普遍采用化学合成药物，但高血压患者长期服用合成药会产生各种的副作用。随着人们对自身健康意识的不断增强，医务人员与患者更青睐于非化学合成药物疗法。降血压肽又称为血管紧张素转化酶抑制肽(Angiotensin Converting EnzymeInhibitory Peptides,简称ACEIPs)是具有降血压活性的生物活性肽。其中，食源性蛋白降血压肽由于其无毒、无副作用、安全性高，且对血压正常者无降压作用，适合长期食用，已成为当前研究的热点。我国的海域面积辽阔，海藻的种类多、产量高、海藻蛋白资源丰富。其中，紫菜是蛋白质含量较高的海藻之一，蛋白含量可达到30%左右。同时，紫菜中还含有大量维生素、氨·基酸、矿物质、微量元素及生物活性物质和药用成分，能降低胆固醇、血压、血脂、活化血管对预防高血压、冠心病等有很好的功效。如何利用紫菜为原料制备食源性降压肽是一新的研究课题。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供一种工艺先进、工序合理、操作可行的紫菜降压肽的制备方法。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是一种紫菜降压肽的制备方法，其特征在于经过下列工艺
选取紫菜干粉为原料，按照5 10% (W/V)的比例加入水，匀浆，用氨水调节pH至7. 5，调节温度至45 50°C，加入碱性蛋白酶，碱性蛋白酶的酶用量为每克紫菜干粉重量加3000个酶活单位(U)，搅拌，酶解5 7h ;酶解完毕后，加热煮沸10 15 min，进行灭酶处理，离心，得上清液；将所得到的上清液，以分子量2000为截留值的超滤膜进行超滤处理，收集滤过液；将滤过液在55 60°C温度条件下，减压浓缩至固形物含量为45% 55%，进行冷冻干燥，粉碎，得到紫菜降压肽。本发明是以紫菜为主要原料，采用碱性蛋白酶对紫菜中的蛋白质进行水解，生成游离氨基酸和肽；采用超滤技术对肽进行了分离富集，分子量小于2000的活性肽，再采用冻干技术得到紫菜降压肽。其中冻干技术既保持了蛋白良好的溶解特性，又减少了干燥过程中的损失。本发明的紫菜降压肽的制备方法工艺合理，制作简单，操作性强。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明。实施例I
一种紫菜降压肽的制备方法，其特征在于经过下列工艺
选取紫菜干粉为原料，按照8% (W/V)的比例加入水，匀浆，用氨水调节pH至7. 5，调节温度至50°C， 加入碱性蛋白酶，碱性蛋白酶的酶用量为每克紫菜干粉重量加3000个酶活单位(U)，搅拌，酶解6h ;酶解完毕后，加热煮沸10 min,进行灭酶处理，离心，得上清液；将所得到的上清液，以分子量2000为截留值的超滤膜进行超滤处理，收集滤过液；将滤过液在55°C温度条件下，减压浓缩至固形物含量为50%，进行冷冻干燥，粉碎，得到紫菜降压肽。实施例2
一种紫菜降压肽的制备方法，其特征在于经过下列工艺
选取紫菜干粉为原料，按照5% (W/V)的比例加入水，匀浆，用氨水调节pH至7. 5，调节温度至48°C，加入碱性蛋白酶，碱性蛋白酶的酶用量为每克紫菜干粉重量加3000个酶活单位(U)，搅拌，酶解5h ;酶解完毕后，加热煮沸12 min,进行灭酶处理，离心，得上清液；将所得到的上清液，以分子量2000为截留值的超滤膜进行超滤处理，收集滤过液；将滤过液在58°C温度条件下，减压浓缩至固形物含量为55%，进行冷冻干燥，粉碎，得到紫菜降压肽。实施例3
一种紫菜降压肽的制备方法，其特征在于经过下列工艺
选取紫菜干粉为原料，按照10% (W/V)的比例加入水，匀浆，用氨水调节pH至7. 5，调节温度至45°C，加入碱性蛋白酶，碱性蛋白酶的酶用量为每克紫菜干粉重量加3000个酶活单位(U)，搅拌，酶解7h ;酶解完毕后，加热煮沸15 min,进行灭酶处理，离心，得上清液；将所得到的上清液，以分子量2000为截留值的超滤膜进行超滤处理，收集滤过液；将滤过液在60°C温度条件下，减压浓缩至固形物含量为45%，进行冷冻干燥，粉碎，得到紫菜降压肽。本发明制得紫菜降压肽作为抑制剂进行ACE抑制活性的测定
在2 mL的离心管中加入50 μ L抑制剂和200 μ L 5 mmol马尿酰组胺酰亮氨酸(HHL)(含有O. 3 mo I · L-1NaCl硼酸缓冲液，pH值8. 3)。在37°C恒温水浴预热5 min，然后加入25 μ LO · 02U · Hir1ACE启动反应，恒温保持30 min加入O. 2 mL Imol · Γ1的HCl终止反应。加入I. 2 mL冰冷的乙酸乙酯,用力振荡混合,3500 r离心5 min后,取出0.8
mL酯层移入试管中，在85°C的烘箱中烘干(约Ih)，再加入4 mL的去离子水振荡2 min溶解马尿酸，溶液在228 nm测定吸光值。对照组除不加入抑制剂、空白组除在反应前先加入O. 2 mL Imol · Γ1的HCl以终
止反应外，其余操作同反应管完全相同。抑制剂对ACE活性的抑制率=(对照组马尿酸含量一样品组马尿酸含量)/对照组马尿酸含量X 100%。经测定，紫菜降压肽的ACE抑制率IC5tl为780 μ g/ml，显示出较好的体外ACE抑制活性。
权利要求
1 .一种紫菜降压肽的制备方法，其特征在于经过下列工艺 选取紫菜干粉为原料，按照5 10% (W/V)的比例加入水，匀浆，用氨水调节pH至7. 5，调节温度至45 50°C，加入碱性蛋白酶，碱性蛋白酶的酶用量为每克紫菜干粉重量加3000个酶活单位(U)，搅拌，酶解5 7h ;酶解完毕后，加热煮沸10 15 min，进行灭酶处理，离心，得上清液；将所得到的上清液，以分子量2000为截留值的超滤膜进行超滤处理，收集滤过液；将滤过液在55 60°C温度条件下，减压浓缩至固形物含量为45% 55%，进行冷冻干燥，粉碎，得到紫菜降压肽。
全文摘要
本发明涉及一种紫菜降压肽的制备方法，其是选取紫菜干粉为原料，加水，匀浆，调节pH至7.5，在45～50℃条件下加入碱性蛋白酶，酶解5～7h；灭酶，离心得上清液；将上清液以分子量2000为截留值的超滤膜进行超滤处理，收集滤过液；将滤过液减压浓缩至固形物含量为45%～55%，进行冷冻干燥，粉碎，得到紫菜降压肽。本发明的紫菜降压肽的制备方法工艺合理，制作简单，操作性强。
文档编号C07K4/08GK102925520SQ20121041607
公开日2013年2月13日 申请日期2012年10月26日 优先权日2012年10月26日
发明者刘新, 刘昌衡, 孙永军, 袁文鹏, 贾爱荣, 胡炜, 张绵松, 夏雪奎, 张永刚, 孟秀梅, 鞠文明 申请人:山东好当家海洋发展股份有限公司, 山东省科学院生物研究所