专利名称：从猪牙皂中同时制备齐墩果酸和刺囊酸的方法
技术领域：
本发明涉及一种从猪牙皂中同时制备齐墩果酸和刺囊酸的方法。
背景技术：
猪牙皂为豆科植物皂荚Gledisia Sinensis Lam.的干燥不育果实，主要含五环三萜型皂荚皂苷类成分，齐墩果酸和刺囊酸是皂荚皂苷的主要苷元(化学结构式见图1和图
2)。齐墩果酸和刺囊酸不仅对人体具有重要的生理活性，而且是中医药研究和分析测试中最常用的化学对照品，因此，制备齐墩果酸和刺囊酸具有重要的应用价值。目前对齐墩果酸和刺囊酸对照品的制备多采用制备型高效液相色谱法，该方法制备的对照品虽纯度较高，但需要大型贵重仪器和专用层析柱，具有成本高、制备周期长等缺陷。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种从猪牙皂中同时制备齐墩果酸和刺囊酸的方法，本方法以猪牙皂为原料，经醇提取、水解和制备型薄层分离可同时制备齐墩果酸和刺囊酸。对制备的两种成分，经与中国药品生物制品检定所提供的齐墩果酸和刺囊酸对照品对比分析，表明采用本法制备的齐墩果酸和刺囊酸，其纯度与两种对照品基本相当，达到了中药化学对照品的质量要求。本方法无需贵重仪器，简便易行，成本低，且能达到中药化学对照品的质量要求。本发明是通过以下技术方案实现的:一种从猪牙皂中同时制备齐墩果酸和刺囊酸的方法，步骤如下:(I)猪牙皂总皂苷提取物的提取:称取猪牙皂100g，用600mL75% (体积百分数)的乙醇回流提取2h，滤过，残渣再用600mL75%乙醇提取2次，每次lh，滤过，合并3次醇提液，回收乙醇，浓缩成浸膏，60 65°C减压干燥，粉碎，得猪牙皂总皂苷提取物，备用；(2)猪牙皂总皂苷的水解:取猪牙皂总皂苷提取物10g，加硅藻土 3 5g，拌匀，置索氏提取器中，加甲醇200mL，回流3小时，放冷，蒸干，残渣加10%盐酸(质量百分数)200mL使溶解，转移至圆底烧瓶中，水浴加热水解2h，放冷，置分液漏斗中，用氯仿提取3次(3次的氯仿用量依次为lOOmL，lOOmL，60mL)，合并氯仿提取液，用水洗涤2次，每次150mL，弃去水液，回收氯仿，蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至25mL量瓶中，摇匀，O 4°C放置，有白色结晶析出，滤出结晶，母液浓缩至约10ml，同上放置，又有结晶析出，再滤出结晶，将两次结晶合并，用少量甲醇洗涤结晶，55 60°C干燥，得干燥结晶，备用，该结晶主要含齐墩果酸和刺囊酸；(3)齐墩果酸及刺囊酸的薄层制备:①薄层供试品溶液的制备:取上述干燥结晶，用甲醇制成浓度为26mg/ml的溶液，作为薄层供试品溶液；②薄层条件:层析板 层析板为厚度为0.6mm的娃胶G薄层板(20cmX 20cm), 105°C活化30分钟，备用；展开剂:环己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比为15:4:2)上层；显色剂:10%硫酸乙醇(质量百分数)，电吹风加热至显色清晰；展距:15cm;③点样及制备:用微型点样器吸取样品液800 μ 1，以条状或点状形式连续点于薄层板上，置于盛有展开剂的层析缸中，展程15cm，取出，晾干，薄层板两侧显色，将层析板齐墩果酸(上部显色斑点)和刺囊酸(下部显色斑点)显色斑点对应的中间未显色区域分别仔细刮下，将刮下的齐墩果酸和刺囊酸硅胶粉各置一个250mL锥形瓶中，加甲醇150mL，超声处理30min，离心，滤出上清液，沉淀再加入甲醇150ml，同上超声、离心重复操作2次，分别合并含齐墩果酸和刺囊酸的三次超声滤液，回收甲醇，蒸干，即分别得到制备的齐墩果酸和刺囊酸(本制备方法可根据制备量的要求，采用上述方法可同时点于多块薄层层析板上进行分离制备)。本发明的从猪牙皂中同时制备齐墩果酸和刺囊酸的方法，以猪牙皂为原料，经醇提取、水解和制备型薄层分离制备齐墩果酸和刺囊酸，并进行了三批两种成分的制备试验，通过对制备的两种成分的分析表明，采用本法制备的齐墩果酸和刺囊酸，其纯度与两种对照品基本相当，达到了中药化学对照品的要求。本制备方法与目前齐墩果酸和刺囊酸的制备方法相比，具有无需贵重仪器，简便易行，成本低，且能达到化学对照品的质量要求等优点，是同时制备两种中药化学对照品的较理想的方法。经查新有关本制备方法的研究未见文献报道。
图1:齐墩果酸的化学结构式。图2:刺囊酸的化学结构式。图3:水解得结晶的TLC图。图4:薄层制备示意全部显色图。图5:薄层制备仅两侧显色示意图。图6:薄层制备的齐墩果酸和刺囊酸的TLC图，其中，条带1:刺囊酸对照；条带2:TLC制备的刺囊酸；条带3:齐墩果酸对照；条带4 =TLC制备的齐墩果酸。图7-1:刺囊酸对照品HPLC图。图7-2:齐墩果酸对照品HPLC图。图7-3:薄层制备的刺囊酸HPLC图。图7-4:薄层制备的齐墩果酸HPLC图。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明。实施例1从猪牙皂中同时制备齐墩果酸和刺囊酸步骤如下:(I)猪牙皂总皂苷提取 物的提取:称取猪牙皂100g，用600mL75%的乙醇回流提取2h,滤过，残渣再用600mL75%乙醇提取2次，每次lh，滤过，合并3次醇提液，回收乙醇，浓缩成浸膏，60 65°C减压干燥，粉碎，得猪牙皂总皂苷提取物，备用，三批总皂苷提取物制备结果见表I。表I三批总皂苷提取物制备结果
权利要求
1.一种从猪牙皂中同时制备齐墩果酸和刺囊酸的方法，其特征在于:步骤如下: (1)猪牙皂总皂苷提取物的提取:称取猪牙皂100g，用75%的乙醇回流提取2h，滤过，残渣再用75%乙醇提取2次，每次lh，滤过，合并3次醇提液，回收乙醇,浓缩成浸膏,60 65°C减压干燥，粉碎，得猪牙皂总皂苷提取物，备用； (2)猪牙皂总皂苷的水解:取猪牙皂总皂苷提取物10g，加硅藻土3 5g，拌匀，置索氏提取器中，加甲醇，回流3小时，放冷，蒸干，残渣加稀盐酸使溶解，转移至圆底烧瓶中，水浴加热水解2h，放冷，置分液漏斗中，用氯仿提取3次，合并氯仿提取液，用水洗涤2次，弃去水液，回收氯仿，蒸干，残渣用甲醇溶解，O 4°C放置，有白色结晶析出，滤出结晶，母液浓缩至10ml，同上放置，又有结晶析出，再滤出结晶，将两次结晶合并，用甲醇洗涤结晶，55 60 °C干燥,得干燥结晶； (3)齐墩果酸及刺囊酸的薄层制备: ①薄层供试品溶液的制备:取上述干燥结晶，用甲醇制成浓度为26mg/ml的溶液，作为薄层供试品溶液； ②点样及制备:用微型点样器吸取样品液，以条状或点状形式连续点于多块薄层板上，置于盛有展开剂的层析缸中，取出，晾干，薄层板两侧显色，将层析板齐墩果酸和刺囊酸显色斑点对应的中间未显色区域分别刮下，将刮下的齐墩果酸和刺囊酸硅胶粉分别置于锥形瓶中，加甲醇，超声处理30min，离心，滤出上清液，沉淀再加入甲醇，同上超声、离心重复操作2次，合并三次超声滤液，回收甲醇，蒸干，即分别得到制备的齐墩果酸和刺囊酸。
2.根据权利要求1所述的从猪牙皂中同时制备齐墩果酸和刺囊酸的方法，其特征在于:所述步骤(2)中，稀盐酸是指质量百分数为10%的盐酸。
3.根据权利要求1所述的从猪牙皂中同时制备齐墩果酸和刺囊酸的方法，其特征在于:所述步骤(2) 中，3次的氯仿用量依次为lOOmL，100mL，60mL。
4.根据权利要求1所述的从猪牙皂中同时制备齐墩果酸和刺囊酸的方法，其特征在于:所述步骤(3)中，薄层层析用的薄层板为厚度为0.6mm的硅胶G薄层板。
5.根据权利要求1所述的从猪牙皂中同时制备齐墩果酸和刺囊酸的方法，其特征在于:所述步骤(3)中，展开剂为环己烷-乙酸乙酯-甲酸。
6.根据权利要求5所述的从猪牙皂中同时制备齐墩果酸和刺囊酸的方法，其特征在于:所述展开剂环己烷-乙酸乙酯-甲酸中，环己烷、乙酸乙酯、甲酸三者的体积比为15:4:2。
7.根据权利要求1所述的从猪牙皂中同时制备齐墩果酸和刺囊酸的方法，其特征在于:所述步骤(3)中，显色剂为质量百分数为10%的硫酸乙醇，显色方式为:电吹风加热至显色清晰。
8.根据权利要求1所述的从猪牙皂中同时制备齐墩果酸和刺囊酸的方法，其特征在于:所述步骤(3)中，薄层层析的展距为15cm。
全文摘要
本发明公开了一种从猪牙皂中同时制备齐墩果酸和刺囊酸的方法，步骤如下(1)猪牙皂总皂苷提取物的提取；(2)猪牙皂总皂苷的水解；(3)齐墩果酸及刺囊酸的薄层制备。本方法以猪牙皂为原料，经醇提取、水解和制备型薄层分离可同时制备齐墩果酸和刺囊酸。对制备的两种成分，经与中国药品生物制品检定所提供的齐墩果酸和刺囊酸对照品对比分析和含量测定，表明采用本法制备齐墩果酸的含量为97.8%，刺囊酸的含量为98.2%，其纯度与两种对照品基本相当，达到了中药化学对照品的质量要求。本方法无需贵重仪器，简便易行，成本低，且能达到中药化学对照品的质量要求。
文档编号C07J63/00GK103145790SQ201310087260
公开日2013年6月12日 申请日期2013年3月18日 优先权日2013年3月18日
发明者赵渤年, 张新军, 刘青, 梁瑞雪, 贾元印 申请人:山东省中医药研究院