小鼠腹水的生产加工方法
【专利摘要】本发明公开了一种小鼠腹水的生产加工方法，其步骤如下：将液体石蜡注射入选取好的小鼠腹腔，刺激小鼠的免疫反应；一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去得到单克隆抗体，同时刺激腹膜渗透压改变，产生含有单克隆抗体的腹水；抽取腹水，将抽好的腹水放在离心管里，在天平上平衡，然后放进高速冷冻离心机中离心；离心结束后，用移液枪吸取上层油脂，吸完后将腹水慢慢倒入塑料瓶中，瓶底出现带血丝的沉积物就废弃；再将瓶底没有出现带血丝沉积物的腹水冷冻保存；将冷冻后的腹水取出解冻；解冻后的腹水用纱布过滤后倒入大烧杯中；最后包装入库。本发明所得腹水量大、腹水收获时间短，且制备的腹水中单克隆抗体含量高，且易纯化。
【专利说明】小鼠腹水的生产加工方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于抗体制备领域，尤其涉及一种小鼠腹水的生产加工方法。
【背景技术】
[0002] 由于小鼠腹水中含有单克隆抗体，该种抗体具有高特异性和单一生物学功能，可 用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗，因此对小鼠腹水的生产加工方法得到进一步的 研究；目前，诱导小鼠产生腹水的方法已广为采用，如应用降植烷或不完全福氏佐剂等，但 其缺点是所得腹水量较少、腹水中含有的单克隆抗体含量低，而且腹水收获时间较长，同时 有可能诱发实体瘤。
【发明内容】
[0003] 本发明为了解决上述现有技术存在的缺陷和不足，提供了一种所得腹水量大、腹 水收获时间短，且腹水中含有的单克隆抗体含量高、纯化方便的小鼠腹水的生产加工方法。
[0004] 本发明的技术方案：一种小鼠腹水的生产加工方法，其步骤如下：
[0005] 1)将液体石蜡注射入选取好的小鼠腹腔，刺激小鼠的免疫反应；
[0006] 2) -周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去得到单克隆抗体，同时刺激腹膜渗透 压改变，产生含有单克隆抗体的腹水；
[0007] 3)抽取腹水，将抽好的腹水放在离心管里，在天平上平衡，使两边离心管里的腹水 重量相等，然后放进高速冷冻离心机中离心；
[0008] 4)离心结束后，打开离心管管盖，用移液枪吸取上层油脂，吸完后将淡黄色、透明 的腹水慢慢倒入塑料瓶中，瓶底出现带血丝的沉积物就废弃；
[0009] 5)再将瓶底没有出现带血丝沉积物的腹水放在-20°c ± 10°C冰箱中冷冻保存； [0010] 6)将冷冻后的腹水取出，放在2 °C -8 °C的冰箱中解冻；
[0011] 7)解冻后的腹水用若干层纱布过滤后倒入大烧杯中；
[0012] 8)最后将过滤好的腹水倒入250ml的量筒里记数，将记数好的腹水倒入250ml的 塑料瓶中，包装入库。
[0013] 优选地，步骤1)中所述选取好的小鼠为6-8周龄、体重大于22g的F1小鼠。
[0014] 优选地，步骤2)中所述接种的杂交瘤细胞数量为3000-5000/鼠，步骤2)中每只 小鼠可收集5?10ml的腹水。
[0015] 优选地，步骤3)中的离心机设置为1000转，8分钟，4°C。
[0016] 优选地，步骤4)中移液枪的容量为1ml，塑料瓶的容量为250ml。
[0017] 优选地，步骤6)中解冻时间为三天，步骤7)中纱布为三层。
[0018] 本发明所得腹水量大、腹水收获时间短，且制备的腹水中单克隆抗体含量高，每毫 升可达数毫克甚至数十毫克水平，同时腹水中的杂蛋白也较少，便于单克隆抗体的纯化。 【具体实施方式】
【权利要求】
1. 一种小鼠腹水的生产加工方法，其特征在于：其步骤如下： 1) 将液体石蜡注射入选取好的小鼠腹腔，刺激小鼠的免疫反应； 2) -周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去得到单克隆抗体，同时刺激腹膜渗透压改 变，产生含有单克隆抗体的腹水； 3) 抽取腹水，将抽好的腹水放在离心管里，在天平上平衡，使两边离心管里的腹水重量 相等，然后放进高速冷冻离心机中离心； 4) 离心结束后，打开离心管管盖，用移液枪吸取上层油脂，吸完后将淡黄色、透明的腹 水慢慢倒入塑料瓶中，瓶底出现带血丝的沉积物就废弃； 5) 再将瓶底没有出现带血丝沉积物的腹水放在_20°C ±10°C冰箱中冷冻保存； 6) 将冷冻后的腹水取出，放在2 °C -8 °C的冰箱中解冻； 7) 解冻后的腹水用若干层纱布过滤后倒入大烧杯中； 8) 最后将过滤好的腹水倒入250ml的量筒里记数，将记数好的腹水倒入250ml的塑料 瓶中，包装入库。
2. 根据权利要求1所述的一种小鼠腹水的生产加工方法，其特征在于：步骤1)中所述 选取好的小鼠为6-8周龄、体重大于22g的F1小鼠。
3. 根据权利要求1所述的一种小鼠腹水的生产加工方法，其特征在于：步骤2)中所述 接种的杂交瘤细胞数量为3000-5000/鼠，步骤2)中每只小鼠可收集5?10ml的腹水。
4. 根据权利要求1所述的一种小鼠腹水的生产加工方法，其特征在于：步骤3)中的离 心机设置为1000转，8分钟，4°C。
5. 根据权利要求1所述的一种小鼠腹水的生产加工方法，其特征在于：步骤4)中移液 枪的容量为lml，塑料瓶的容量为250ml。
6. 根据权利要求1所述的一种小鼠腹水的生产加工方法，其特征在于：步骤6)中解冻 时间为三天，步骤7)中纱布为三层。
【文档编号】C07K16/00GK104119435SQ201310153080
【公开日】2014年10月29日 申请日期:2013年4月24日 优先权日:2013年4月24日
【发明者】沈海英 申请人:杭州宏泰生物技术有限公司