紫丹参甲素磺酸钠的制备方法
【专利摘要】本发明公开了紫丹参甲素磺酸钠的制备方法。该制备方法包括下述步骤：采用高效液相反相色谱法分离丹参酮类磺化液，即可；其中，高效液相反相色谱法的条件如下：流动相A为0.1%三乙胺-水、流动相B为0.1%三乙胺-甲醇；或，流动相A为0.1%二乙胺-水、流动相B为0.1%二乙胺-甲醇；或，流动相A为0.1%乙胺-水、流动相B为0.1%乙胺-甲醇；或，流动相A为水、流动相B为甲醇；百分比为组分占流动相的体积百分比；检测波长为271nm。本发明的制备方法制备能力强、制备量大、周期短、效率高，并且减少了有机溶剂的使用，工艺操作连续性强易于进行质量控制和生产。
【专利说明】紫丹参甲素磺酸钠的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及药物领域，具体涉及紫丹参甲素磺酸钠的制备方法。
【背景技术】
[0002]丹参,又名血参、赤根、红根、血生根,为唇形科植物(Salvia miltiorrhza)的根茎，其入药始载于《神农本草经》。中医认为，其味苦微寒，具有活血痛经、祛瘀止痛、清心除烦、凉血消痈的功效，适用于治疗月经不调、痛经、经闭、崩漏、带下、冠心病、动脉粥样硬化、高血脂、心绞痛、跌打淤血、失眠、神经衰弱、乙肝等疾病，为妇科、内科及外伤科证属血瘀兼热者常用。
[0003]现代药学研究表明，丹参中化学成分复杂，主要为水溶性丹参酚酸类和脂溶性二萜醌类丹参酮类化合物。其中，丹参酮类化合物主要包括丹参酮1、丹参酮II A、丹参酮II B、异丹参酮1、异丹参酮II A、隐丹参酮、异隐丹参酮、甲基丹参酮、羟基丹参酮等。[0004]丹参酮II A是重要的丹参有效成分。丹参酮II A磺酸钠(Sodium Tanshinone II ASulfonate，STS)，则是丹参酮II A经磺化后得到的水溶性磺酸盐。由于磺酸基的引入，在治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞等疾病方面，丹参酮II A磺酸钠相比丹参酮IIA具有更多的优越性，从而成为主要的心血管类丹参提取物中药。
[0005]丹参酮IIA是制备丹参酮IIA磺酸钠的原料，从丹参药材饮片提取，故难免混有少量、或极低含量其他结构较为相似的组分，如丹参酮II B、丹参酮1、隐丹参酮、紫丹参甲素等。若要制备高纯度丹参酮IIA磺酸钠，则获得这些极低含量相关组分标准品、以及这些标准品在丹参酮IIA磺酸钠原料相关成分含量控制中的应用，具有重要意义。
[0006]但是，由于该类化合物结构复杂，化学全合成难度大，要获得高纯度对照品成为挑战。有研究报道从丹参酮II A磺酸钠原料药中提取相关物质，由于其含量极低，HPLC纯度通常不到百分之一，采用高效液相法分离提取，工作量大、难度高。因此，丹参提取物中极低含量组分的高纯度标准品规模化制备，及其在丹参酮IIA磺酸钠原料药相关物质含量监控中的应用成为本领域长期以来难以解决的技术难题。
[0007]紫丹参甲素也是丹参脂溶性二萜醌类化合物有效成分之一，不仅耐缺氧作用比丹参酮II A更强，而且抗菌作用也强于隐丹参酮，并对多种实验肿瘤动物有效。
[0008]现有技术公开了紫丹参甲素提取方法，如专利CN02104328.0 “高纯度紫丹参甲素的制备方法”和专利CN201210494022.9 “紫丹参甲素的医药用途”均采用有机溶剂提取和硅胶柱分离，其分离效果差、流速低、制备量小、周期长；专利CN201210371880.4 “一种紫丹参甲素的制备方法”采用闪式提取、超滤浓缩，其中透膜损失大、设备投入高；专利CN201310349682.2 “一种紫丹参甲素的提取方法”采用超临界C02逆流色谱提取，使用耐20MPa高压设备，投入成本大、风险高，后处理采用大孔树脂和重结晶，有机溶剂消耗量大，有效成分损失大、收率低。
【发明内容】
[0009]本发明所要解决的技术问题在于为了克服现有技术中紫丹参甲素提取困难、效率低的缺陷，提供了紫丹参甲素磺酸钠及其制备方法和应用。本发明的紫丹参甲素磺酸钠水溶性好，解决了紫丹参甲素脂溶性太大水溶性不好限制其在医药领域应用的问题，且纯度高，其制备方法的制备能力强、制备量大、周期短、效率高，并且减少了有机溶剂的使用，工艺操作连续性强易于进行质量控制和生产。
[0010]本发明通过以下技术方案解决上述技术问题。
[0011]本发明提供了紫丹参甲素磺酸钠，其结构如下式:
[0012]
【权利要求】
1.一种紫丹参甲素磺酸钠的制备方法，其包括下述步骤:采用高效液相反相色谱法分离丹参酮类磺化液，即可； 其中，高效液相反相色谱法的条件如下: 流动相A为0.1%三乙胺-水、流动相B为0.1%三乙胺-甲醇；或，流动相A为0.1% 二乙胺-水、流动相B为0.1% 二乙胺-甲醇；或，流动相A为0.1%乙胺-水、流动相B为0.1%乙胺-甲醇；或，流动相A为水、流动相B为甲醇；百分比为组分占流动相的体积百分比；检测波长为271nm，保留时间为50~70min。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的高效液相反相色谱法包括富集纯化、中间纯化和精制纯化；其中，所述的富集纯化的条件如下: 流动相A为0.1%三乙胺-水、流动相B为0.1%三乙胺-甲醇；或，流动相A为0.1%二乙胺-水、流动相B为0.1% 二乙胺-甲醇；或，流动相A为0.1%乙胺-水、流动相B为0.1%乙胺-甲醇；或，流动相A为水、流动相B为甲醇；流速为80~120mL/min，检测波长为27Inm ； 将丹参酮类磺化液与流动相A按体积比为1:4的混合物上样29~30min，80%流动相A+20%流动相B平衡lmin，以流动相A和流动相B按照下述体积比进行线性梯度洗脱45min:80%A+20%B — 35%A+65%B，再以100%流动相B再生lOmin，收集保留时间为50~70min的洗脱液得到富集纯化样品溶液； 所述的中间纯化的条件如下: 流动相A为0.1%三乙胺-水、流动相B为0.1%三乙胺-甲醇；或，流动相A为0.1%二乙胺-水、流动相B为0.1% 二乙胺-甲醇；或，流动相A为0.1%乙胺-水、流动相B为0.1%乙胺-甲醇；或，流动相A为水、流动相B为甲醇；流速为80~120mL/min，检测波长为27Inm ； 将所述的富集纯化样品溶液与流动相A按体积比为1:1的混合物上样28min，80%流动相A+20%流动相B平衡I~2min，以流动相A和流动相B按照下述体积比进行线性梯度洗脱40min:80%A+20%B — 40%A+60%B，再以100%流动相B再生lOmin，收集保留时间为50~65min的洗脱液得到中间纯化样品溶液； 所述的精制纯化的条件如下: 流动相A为0.1%三乙胺-水、流动相B为0.1%三乙胺-甲醇；或，流动相A为0.1%二乙胺-水、流动相B为0.1% 二乙胺-甲醇；或，流动相A为0.1%乙胺-水、流动相B为0.1%乙胺-甲醇；或，流动相A为水、流动相B为甲醇；流速为20~30mL/min，检测波长为27Inm ； 将所述的中间纯化样品溶液与流动相A按体积比为1:1的混合物上样20min，80%流动相A+20%流动相B平衡4min，以流动相A和流动相B按照下述体积比进行线性梯度洗脱35min:80%A+20%B — 45%A+55%B，再以100%流动相B再生lOmin，收集保留时间为50~60min的洗脱液得到精制纯化样品溶液。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的富集纯化采用的装置如下:采用PrepStar SD-1制备系统和L&L4002色谱柱，装PLRP-S反相C18聚合物填料160.0g,动态轴向压缩系统装填至压力650psi，静态锁紧至柱床高度25cm ;柱温为10~30°C ； 和/或，所述的中间纯化采用的装置如下:采用Pr印Star SD-1制备系统和L&L4002色谱柱，装PLRP-S反相C18聚合物填料160.0g，动态轴向压缩系统装填至压力650psi，静态锁紧至柱床高度25cm ;柱温为10~30°C ; 和/或，所述的精制纯化采用的装置如下:采用Pr印Star SD-1制备系统和L&L4001色谱柱，装ODS-AQ反相C18硅胶填料80.0g，动态轴向压缩系统装填至压力650psi，静态锁紧至柱床高度25cm ;柱温为10~30°C。
4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的富集纯化中，所述的流速为lOOmL/min ； 和/或，所述的中间纯化中，所述的流速为100mL/min ； 和/或，所述的精制纯化中，所述的流速为25mL/min。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的丹参酮类磺化液通过下述步骤制得: (1)将丹参提取物溶解于冰醋酸-乙酸酐的混合溶液中，再加入浓硫酸-冰醋酸的混合溶液，进行反应得到反应液； (2)将石油醚、二氯甲烷和水的混合溶液加入步骤(1)的反应液，再加入氯化钠溶液，抽滤，得到滤饼； (3)用石油醚-二氯甲烷的混合溶液浸泡步骤(2)的滤饼，抽滤干燥得粗品； (4)用甲醇溶解步骤(3)的粗品，活性炭过滤，滤液浓缩，冷却结晶过滤，滤液即为丹参酮类磺化液。`
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的冰醋酸-乙酸酐的混合溶液与所述的丹参提取物的体积质量比为7~9ml/g ； 和/或，所述的冰醋酸-乙酸酐的混合溶液为冰醋酸与乙酸酐体积比为1: (2~3)的混合溶液； 和/或，所述的浓硫酸-冰醋酸的混合溶液为浓硫酸与冰醋酸体积比为1:1的混合溶液； 和/或，所述的石油醚、二氯甲烷和水的混合溶液为石油醚、二氯甲烷和水的体积比为1:2: (2~2.5)的混合溶液； 和/或，所述的石油醚-二氯甲烷的混合溶液为石油醚与二氯甲烷体积比为1:3的混合溶液； 和/或，所述的丹参提取物通过下述步骤制得:将丹参用乙醇提取，过滤，滤液浓缩，干燥，即得。
7.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的精致纯化结束后还包括冻干过程；所述的冻干过程包括如下步骤:将所述的精制纯化样品溶液浓缩，冷冻干燥，即可。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的浓缩的压力为-0.08MPa~-0.1MPa，所述的浓缩的温度为30~40°C。
【文档编号】C07J73/00GK103864884SQ201410093550
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2014年3月14日 优先权日:2014年3月14日
【发明者】洪勇, 琚姝, 黄臻辉 申请人:上海第一生化药业有限公司