一种竹节草素的制备方法及抗肿瘤应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，尤其涉及一种竹节草素的制备方法及抗肿瘤应用。制备方法包括以下步骤：（1）取竹节草根茎粉碎60-80目，加入超临界萃取釜中，在萃取压力15-25MPa、温度40-60℃的条件下，通入液态CO2超临界萃取2-3小时，在压力5-10MPa，温度50-60℃解析，得萃取物；（2）上述萃取物用热水分散，加入大孔树脂中吸附，乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液浓缩，得沉淀物；（3）上述沉淀物加入85%甲醇回流溶解，放置重结晶，干燥即得竹节草素。采用本发明制备方法，工艺操作简便、得率高，污染小，适合高纯度竹节草素的生产。竹节草素具有抗肿瘤作用，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，利于提高生物利用度。
【专利说明】一种竹节草素的制备方法及抗肿瘤应用
【技术领域】
[0001] 本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，特别涉及一种竹节草素的制备 方法及抗肿瘤应用。
【背景技术】
[0002] 节草素（Aciculatin)，黄色结晶，分子式为C22H2208，分子量为414. 41，是从竹节草 的根茎中提取分离得到的一种黄酮苷类化合物。药理研究表明，竹节草素对KB细胞具有细 胞毒活性。竹节草为鸭跖草科植物竹筋草的全草，具有清热解毒、利尿消肿、止血的功效；主 疮疖痈肿、咽喉肿痛、热痢、白浊、小便不利、外伤出血等症。
[0003] 通过文献检索，国内尚未见竹节草素用于制备抗肿瘤药物。
【发明内容】
[0004] 为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，提供一种竹节草素的制备方法 及抗肿瘤应用。
[0005] 为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案： 竹节草素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 取竹节草根茎粉碎60-80目，加入超临界萃取釜中，在萃取压力15-25MPa、温度 40-60°C的条件下，通入液态C02超临界萃取2-3小时，在压力5-10MPa，温度50-60°C解析， 得萃取物； (2) 上述萃取物用热水分散，加入大孔树脂中吸附，乙醇水溶液梯度洗脱，收集洗脱液 浓缩，得沉淀物； (3) 上述沉淀物加入85%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得竹节草素。
[0006] 步骤（2)中所述的大孔树脂可选AB-8、HZ816、D101和HPD100中的一种。
[0007] 步骤（2)中所述的乙醇水溶液梯度洗脱为：先取4-8BV20-60%的乙醇洗脱杂质，再 用3-8BV70-95%乙醇溶液洗脱。
[0008] 所述制备的竹节草素，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，包含中链脂肪酸盐、胆 酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。
[0009] 采用本法制备竹节草素，工艺简便易操作，制备量大，产品得率高，而且低污染；添 加肠吸收促进剂，有利于提高生物利用度。
[0010] 下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0011] 实施例1 : 竹节草素的制备 竹节草根茎原料干燥后粉碎60目，取5kg加入超临界萃取釜中，通入液态C02,设置在 萃取压力15MPa、温度50°C，达到上述参数后，调整液态C02流速为20kg/h，动态萃取3小 时，在压力5MPa，温度50°C调件下解析，得到萃取物120g。萃取物加2L热水分散加入装有 500gAB-8树脂的树脂柱中吸附，取4BV60%的乙醇洗脱杂质，再用5BV 90%乙醇溶液洗脱有 效成分，收集洗脱液减压浓缩，放置沉淀，沉淀物加入85%甲醇回流溶解，放置结晶，过滤、 洗涤干燥即得竹节草素，含量97. 4%。
[0012] 实施例2: 竹节草根茎原料干燥后粉碎80目，取5kg加入超临界萃取釜中，通入液态C02,设置在 萃取压力19MPa、温度60°C，达到上述参数后，调整液态C02流速为25kg/h，动态萃取2小 时，在压力8MPa，温度60°C调件下解析，得到萃取物130g。萃取物加2L热水分散加入装有 500g HZ816树脂的树脂柱中吸附，取5BV50%的乙醇洗脱杂质，再用5BV 80%乙醇溶液洗 脱有效成分，收集洗脱液减压浓缩，放置沉淀，沉淀物加入85%甲醇回流溶解，放置结晶，过 滤、洗涤干燥即得竹节草素，含量96. 7%。
[0013] 实施例3: 竹节草根茎原料干燥后粉碎60目，取5kg加入超临界萃取釜中，通入液态C02,设置在 萃取压力25MPa、温度50°C，达到上述参数后，调整液态C02流速为20kg/h，动态萃取3小 时，在压力6MPa，温度50°C调件下解析，得到萃取物110g。萃取物加2L热水分散加入装有 500g D101树脂的树脂柱中吸附，取6BV40%的乙醇洗脱杂质，再用8BV75%乙醇溶液洗脱有 效成分，收集洗脱液减压浓缩，放置沉淀。沉淀物加入85%甲醇回流溶解，放置结晶，过滤、 洗涤干燥即得竹节草素，含量97. 5%。
[0014] 实施例4: 竹节草素的抗肿瘤应用 1、材料 动物：昆明种小鼠，雌雄各半性，体重20±2g，由南京中医药大学提供。
[0015] 细胞株：Sarc〇ma 180腹水型瘤株（S180)，由中国科学院上海药物研究所提供。
[0016] 2、方法 取50只小鼠，每只小鼠左腋下接种S18(l瘤液，次日随机分成5组，每组10只，分别为生 理盐水对照组（NS组)、阳性对照组、竹节草素低剂量组（2mg/kg)、中剂量组（4mg/kg)、高剂 量组（8mg/kg)。接种24h后竹节草素给药组灌胃给药，连续7,阳性对照组试验期间腹腔注 射2次，隔日给药。期间，每日观察小鼠的一般活动、皮毛、粪便等情况。最后一次给药24h 后断颈处死，称重，并计算抑瘤率。
[0017] 3、结果 本发明植物提取物对小鼠 S18(l皮下荷瘤有明显的抑制作用，抑瘤率为70. 86-76. 04%， 结果见表1。
[0018] 抑瘤率（％)= (1-治疗组平均瘤重/空白对照组平均瘤重）X% 表1本发明植物提取物对S18(l皮下荷瘤小鼠的抑瘤作用（n=10， i±S)
【权利要求】
1. 一种竹节草素的制备方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 取竹节草根茎粉碎60-80目，加入超临界萃取釜中，在萃取压力15-25MPa、温度 40-60°C的条件下，通入液态C02超临界萃取2-3小时，在压力5-10MPa，温度50-60°C解析， 得萃取物； (2) 上述萃取物用热水分散，加入大孔树脂中吸附，乙醇水溶液梯度洗脱，收集洗脱液 浓缩，得沉淀物； (3) 上述沉淀物加入85%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得竹节草素。
2. 根据权利要求1所述的竹节草素的制备方法，其特征在于：步骤（2)中所述的大孔树 脂可选 AB-8、HZ816、D101 和 HPD100 中的一种。
3. 根据权利要求1所述的竹节草素的制备方法，其特征在于：步骤（2)中所述的乙醇水 溶液梯度洗脱为：先取4-8BV20-60%的乙醇洗脱杂质，再用3-8BV70-95%乙醇溶液洗脱。
4. 根据权利要求Γ3所述方法制备的竹节草素，在其口服配方中添加肠吸收促进剂。
5. 根据权利要求4所述的竹节草素，其特征在于肠吸收促进剂包含中链脂肪酸盐、胆 酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。
【文档编号】C07D493/18GK104230951SQ201410445534
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年9月4日 优先权日:2014年9月4日
【发明者】张金芳, 杨存 申请人:南京标科生物科技有限公司