本发属于天然植物成分提取领域，尤其涉及一种用曼地亚红豆杉高产10-DABⅢ的方法。
背景技术：
曼地亚红豆杉(Taxus X media)是一种天然杂交品种，其母本为日本红豆杉(T.cuspidata)，父本为欧洲红豆杉(T.baccata)，是国内红豆杉的7-8倍的生长量。
紫杉烷类化合物是提取于高等裸子植物红豆杉的树皮、根和叶等部位的一类化合物，主要含有紫杉醇、三尖杉宁碱、10-DABⅢ(即10-去乙酰基巴卡丁Ⅲ)、7-木糖基紫杉醇等，有许多已被证明具有细胞毒性和抗肿瘤活性，而用来提取紫杉醇等的天然红豆杉资源有限，因而天然紫杉醇原料药的生产和供应受到限制，远远不能满足紫杉醇临床的应用。
10-DABⅢ是合成紫杉醇、多西他赛、卡巴他赛的原料，故其属于抗肿瘤药物研发中十分重要的成分。凡是含有10-DABⅢ结构的物质都可以水解制备成10-去乙酰基巴卡丁Ⅲ，如三尖杉宁碱、紫杉醇C、紫杉醇D、巴卡亭Ⅲ、7-木糖基紫杉醇、10-去乙酰基紫杉醇、10-去乙酰基三尖杉宁碱、7-木糖基-10-去乙酰基紫杉醇、7-木糖基-10-去乙酰基三尖杉宁碱等，这些物质都可以水解制成10-去乙酰基巴卡丁Ⅲ。
现有制备10-DABⅢ的方法存在提取率不高且溶剂用量大且操作步骤复杂等缺陷，不利于对其进行大规模生产。例如授权公告号为CN101798294B的“一种抗肿瘤药物中间体10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ的制备方法”专利，公开的提取紫杉烷类有效成分的方法是：先将三尖杉宁碱的醇溶液与水合肼接触，将其转化成10-DABⅢ，将产物用硅胶柱层析分离，以石油醚-丙酮(3∶1)为洗脱剂，得到10-DABⅢ主段，再将该主段进行二次重结晶，得到高纯度的10-DABⅢ。该方法的主要缺点是：①所用原料单一，为三尖杉宁碱；②10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ的纯化工艺采用了柱层析的方式，溶剂用量大。
技术实现要素：
本发明的目的是为了提供一种制备工艺、生产设备及操作步骤简单，10-DABⅢ产率高、实用性强的用曼地亚红豆杉高产10-DABⅢ的方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种用曼地亚红豆杉高产10-DABⅢ的方法包括步骤：
A.溶液提取：采用甲醇或乙醇水溶液对曼地亚红豆杉进行搅拌提取2-8h得提取液，提取液减压浓缩得到浸膏；
B.溶解酸化：在所得浸膏中加入有机溶剂进行搅拌溶解得到溶解液，向溶解液中加入酸，在0-40℃下搅拌酸化1-24h，得酸化溶液；
C.水解：向酸化溶液中加入碱中和至中性后，再向溶液中加入水合肼，在0-60℃下搅拌水解2-72h后，加入终止反应剂至溶液呈中性即得水解液；
D.纯化：将水解液减压浓缩至粘稠状，萃取后对有机相浓缩再经重结晶提纯得产品。
进一步的，所述步骤A中所用的甲醇或乙醇水溶液的体积/mL为红豆杉质量/g的5-30倍。也就是说1g曼地亚红豆杉所使用的甲醇或乙醇水溶液的体积为5-30mL。
进一步优选的，甲醇或乙醇水溶液的体积/mL为红豆杉质量/g的5-20倍。
进一步的，所述步骤B中甲醇或乙醇水溶液的体积分数为40-99.5％。
进一步的，所述步骤B中用于中和水解液的酸为甲酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸的一种或多种混合。
进一步的，所述步骤B中所述酸的重量为浸膏重量的0.1-1倍，所述水合肼的重量为浸膏重量的1-5倍。
进一步的，所述步骤B中所述有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、四氢呋喃、二氯甲烷、乙酸乙酯的一种或多种混合，所述有机溶剂的体积用量/mL为浸膏重量/g的5-20倍。也即1g浸膏需要用5-20mL的有机溶剂来溶解。
进一步的，所述步骤C中所述终止反应剂为含有质量分数为5-20％氢氧化钠/氢氧化钾和5-20％氯化铵/硫酸铵/碳酸铵/硝酸铵的水溶液。也就是说终止反应剂为含有两种物质的水溶液，一种物质为氢氧化钠或氢氧化钾，其质量分数为5-20％，另一种物质为氯化铵、硫酸铵、碳酸铵、硝酸铵中的一种，期智联股份数为5-20％。
进一步的，所述步骤C中所述碱为氢氧化钠和/或氢氧化钾。
进一步的，所述步骤D中所述萃取步骤为：加入萃取剂进行1-4h萃取，然后加入水分层，取有机层减压浓缩回收萃取剂后得10-DABⅢ粗品，10-DABⅢ粗品进行重结晶提纯；所述萃取剂的体积/mL为浸膏重量/g的10-30倍，水的体积/mL为浸膏重量/g的10-30倍。
进一步的，所述步骤D中所述萃取剂为乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷的一种或多种混合。
采用本发明提供的方法制备10-DABⅢ具有如下有益效果：
1.本发明方法以曼地亚红豆杉为原料，采用先提取获得浸膏、再酸化和水解浸膏溶液从而获得10-DABⅢ，10-DABⅢ粗品收率高达0.065％～0.163％，10-DABⅢ粗品中10-DABⅢ含量高达5.5％～8.6％。
2.本发明方法充分利用了红豆杉资源中含有10-DABⅢ结构的物质，使其变废为宝。
3.本发明方法所用生产设备为常规设备，所用溶剂为常规溶剂，生产条件易实施，操作方便适合工业化生产。
本发明可广泛应用于从红豆杉中获得10-去乙酰基巴卡丁Ⅲ的方法，采用本发明方法生产的10-去乙酰基巴卡丁Ⅲ可用于紫杉醇、多西他赛的合成原料，应用于医药领用中。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。所述实施例仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
实施例一
采用体积分数为40％、体积/mL为曼地亚红豆杉质量/g的5倍的甲醇水溶液对曼地亚红豆杉进行搅拌提取2小时，过滤获得提取液，对提取液减压浓缩后得到浸膏，向浸膏中加入体积/mL为浸膏重量/g 5倍的甲醇进行搅拌溶解得到溶解液，向溶解液中加入浸膏重量的0.1倍甲酸，在0℃下搅拌酸化1小时，得到酸化后的溶液，向酸化后的溶液中加入氢氧化钠中和至中性后加入浸膏重量的1倍的水合肼，在0℃下搅拌水解2小时，得到水解后的溶液，向水解后的溶液中加入含有质量分数为5％氢氧化钠和5％氯化铵水溶液至pH为中性，然后减压浓缩至浓缩液为粘稠状，加入体积/mL为浸膏重量/g 10倍的乙酸乙酯作为萃取剂进行搅拌萃取1小时，再加入体积/mL为浸膏重量/g 10倍的水进行搅拌处理后分层，取出有机层，减压浓缩回收萃取剂后得到10-DABⅢ粗品，10-DABⅢ粗品收率为0.065％，10-DABⅢ粗品中10-DABⅢ含量为达5.5％，对10-DABⅢ粗品采用常规的重结晶方法进行处理后即可获得含量为98％以上的10-DABⅢ产品。
实施例二
采用体积分数为99.5％、体积/mL为曼地亚红豆杉质量/g的30倍的乙醇溶液对曼地亚红豆杉进行搅拌提取8小时，过滤获得提取液，对提取液减压浓缩后得到浸膏，向浸膏中加入体积/mL为浸膏重量/g 20倍的乙酸乙酯进行搅拌溶解得到溶解液，向溶解液中加入浸膏重量1倍的三氟乙酸，在40℃下搅拌酸化24小时，得到酸化后的溶液，向酸化后的溶液中加入氢氧化钠中和至中性后加入浸膏重量5倍的水合肼，在60℃下搅拌水解72小时，得到水解后的溶液，向水解后的溶液中加入含有质量分数为20％氢氧化钾和20％硝酸铵的水溶液至pH为中性，然后减压浓缩至浓缩液为粘稠状，加入体积/mL为浸膏重量/g 30倍的三氯甲烷作为萃取剂搅拌萃取4小时，再加入体积/mL为浸膏重量/g 30倍的水进行搅拌处理后分层，取出有机层，减压浓缩回收萃取剂后得到10-DABⅢ粗品，10-DABⅢ粗品收率为0.163％，10-DABⅢ粗品中10-DABⅢ含量为8.6％，对10-DABⅢ粗品采用常规的重结晶方法进行处理后即可获得含量为98％以上的10-DABⅢ产品。
实施例三
采用体积分数为80％、体积/mL为曼地亚红豆杉质量/g的20倍的甲醇溶液对曼地亚红豆杉进行搅拌提取4小时，过滤获得提取液，对提取液减压浓缩后得到浸膏，向浸膏中加入浸膏重量12倍的四氢呋喃进行搅拌溶解得到溶解液，向溶解液中加入浸膏重量0.5倍的乙酸，在20℃下搅拌酸化12小时，得到酸化后的溶液，向酸化后的溶液中加入氢氧化钠中和至中性后加入浸膏重量3倍的水合肼，在40℃下搅拌水解30小时，得到水解后的溶液，向水解后的溶液中加入含有质量分数为10％氢氧化钠和10％硫酸铵的水溶液至pH为中性，然后减压浓缩至浓缩液为粘稠状，加入体积/mL为浸膏重量/g 20倍的二氯甲烷作为萃取剂搅拌萃取2小时，再加入体积/mL为浸膏重量/g 20倍的水进行搅拌处理后分层，取出有机层，减压浓缩回收萃取剂后得到10-DABⅢ粗品，10-DABⅢ粗品收率为0.138％，10-DABⅢ粗品中10-DABⅢ含量为7.9％，对10-DABⅢ粗品采用常规的重结晶方法进行处理后即可获得含量为98％以上的10-DABⅢ产品。