从菠菜叶粉末中提取叶酸的方法与流程

本发明属于植物提取物的制备，具体涉及了一种从菠菜叶粉末中提取叶酸的方法。

背景技术：

叶酸(Folic acid)，又称维生素M或蝶酰谷氨酸，是一种淡橙黄色结晶或薄片。叶酸在空气中比较稳定，但在光照条件下易分解从而失去活性；叶酸在酸性溶液中对热不稳定，但在中性和碱性环境中较为稳定。叶酸的分子式为C₁₉H₁₉N₇O₆，分子量为441.4；其分子主要是由蝶啶、对氨基苯甲酸和谷氨酸三部分组成的。

叶酸是一种对人体健康极其重要的B族维生素，可用于合成、修复DNA，对于孕妇尤其重要，可有效减少新生儿神经管缺陷症的发作几率。然而，人体自身无法合成叶酸，只能通过日常膳食或药物补充叶酸。叶酸主要分布在动物肝脏、绿叶蔬菜和微生物中，其中绿叶蔬菜是人们日常生活中补充叶酸的重要来源，但含量通常较低且因作物的种类不同而含量不等，因此获取各类食物中叶酸的含量一直是相关研究领域关注的问题。迟晓星等(“叶酸的提取及抗氧化性研究”，《现代食品科技》，2011年27期)以油菜、香菇、香蕉为原料，以偏磷酸为提取剂，荧光光度法测定，得出香蕉中叶酸的含量为38.8μg/g，油菜为25.2μg/g，香菇为23.8μg/g；邵丽华等(“小米叶酸提取与测定方法的研究”，《食品工业科技》，2013年34期)同样测定了小米内的叶酸含量为2.29μg/g。但目前尚无系统性的从菠菜叶中提取叶酸的相关报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种从菠菜叶中提取叶酸的方法，该方法工艺简便，易于操作，安全性高。

本发明的技术方案如下：

一种从菠菜叶粉末中提取叶酸的方法，包括以下步骤：

(1)从菠菜叶粉末中初步提取叶酸：向菠菜叶粉末原料中加入液料比(v/m)为10-20倍的提取溶液在恒定温度下避光浸泡提取10-50min，浸提液经离心、抽滤后得到上清液；

(2)硅胶层析柱吸附分离：将所述上清液经硅胶柱吸附剂吸附，用二氯甲烷-甲醇溶液体系洗脱，收集分离液，将目标分离液氮吹浓缩得到所述叶酸提取物。

所述步骤(1)中的菠菜叶粉末为从市场直接购买的，目数为100目。

所述步骤(1)中的提取液溶质是磷酸、磷酸二氢钾、乙酸铵、氨水或氢氧化钠中的一种。

所述步骤(1)中的提取液溶质是乙酸铵，浓度为30mmol/L。

所述步骤(1)中的液料比(v/m)为12倍，所述恒定温度为25℃或50℃或75℃或100℃恒温条件，所述提取时间为30min。

所述步骤(1)中的离心条件为转速6000rpm，离心温度为25℃，离心时间为15min。

所述步骤(1)中从菠菜叶粉末中初步提取叶酸是在避光情况下进行的。

所述步骤(2)中所述硅胶的目数为100目，层析柱的型号为Φ32mm*457mm。

所述步骤(2)中二氯甲烷-甲醇配比为5～7:3～5(v/v)，硅胶层析柱中硅胶高度为5～15cm，上清液上样体积为3～8mL。

本发明采用乙酸铵溶液初步提取菠菜叶粉末中的叶酸并用硅胶柱进一步分离，可得到纯度在50％左右的叶酸，同时产率在9.72μg/g左右。本发明采用菠菜叶粉末作为提取叶酸的原料，价廉易得且绿色环保；以毒性相对较低的乙酸铵溶液作为叶酸初步提取的提取液，在兼顾提取效率的同时提升了实验操作的安全性；完整工艺操作简便，对设备没有特殊的要求；同时通过本发明得出菠菜叶中叶酸的含量约为9.72μg/g，为相关作物中叶酸含量的测定提供了参考。

附图说明

图1料液比对叶酸初步提取效果的影响

图2提取液溶质对叶酸初步提取效果的影响

图3提取温度对叶酸初步提取效果的影响

图4提取时间对叶酸初步提取效果的影响

具体实施方式

下面结合具体实施例来对本发明进行进一步的描述：

实施例1

(1)从菠菜叶粉末中初步提取叶酸：向60g菠菜叶粉末原料中加入30mmol/L的乙酸铵溶液720mL，在75℃条件下恒温避光浸泡提取30min，将浸提液在6000rpm，25℃条件下离心15min，抽滤得到上清液。

(2)硅胶层析柱吸附分离：将所述上清液上样5mL，经10cm高的硅胶柱吸附剂吸附，用二氯甲烷:甲醇＝7:3(v/v)溶液体系洗脱，收集分离液，将目标分离液氮吹浓缩得到所述叶酸提取物。

实施例2

(1)从菠菜叶粉末中初步提取叶酸：向60g菠菜叶粉末原料中加入30mmol/L的乙酸铵溶液600mL，在50℃条件下恒温避光浸泡提取10min，将浸提液在6000rpm，25℃条件下离心15min，抽滤得到上清液。

(2)硅胶层析柱吸附分离：将所述上清液上样8mL，经5cm高的硅胶柱吸附剂吸附，用二氯甲烷:甲醇＝8:2(v/v)溶液体系洗脱，收集分离液，将目标分离液氮吹浓缩得到所述叶酸提取物。

实施例3

(1)从菠菜叶粉末中初步提取叶酸：向60g菠菜叶粉末原料中加入0.05mol/L的磷酸溶液1200mL，在25℃条件下恒温避光浸泡提取50min，将浸提液在6000rpm，25℃条件下离心15min，抽滤得到上清液。

(2)硅胶层析柱吸附分离：将所述上清液上样3mL，经15cm高的硅胶柱吸附剂吸附，用二氯甲烷:甲醇＝6:4(v/v)溶液体系洗脱，收集分离液，将目标分离液氮吹浓缩得到所述叶酸提取物。

实施例4

(1)从菠菜叶粉末中初步提取叶酸：向60g菠菜叶粉末原料中加入3％的氢氧化钠溶液900mL，在100℃条件下恒温避光浸泡提取40min，将浸提液在6000rpm，25℃条件下离心15min，抽滤得到上清液。

(2)硅胶层析柱吸附分离：将所述上清液上样5mL，经15cm高的硅胶柱吸附剂吸附，用二氯甲烷:甲醇＝5:5(v/v)溶液体系洗脱，收集分离液，将目标分离液氮吹浓缩得到所述叶酸提取物。

应当明确的是，本发明不限于这里的实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，按本发明构思所做出的显而易见的改进和修饰都应该在本发明的保护范围之内。