一种短枝六道木叶多糖及其提取方法与流程

本发明属于多糖提取领域，具体涉及一种短枝六道木叶多糖及其提取方法。

背景技术：

短枝六道木，是忍冬科(Caprifoliaceae)六道木属(Ablia)落叶灌木，其叶子也称神仙草叶。自然分布于陕西，四川，湖北等地区，是中国特有的中草药资源。陕西等地将其叶片称为凉粉叶，有将其制成凉粉的习惯，俗称为“神仙豆腐”，口感滑嫩、清爽，食用历史已有千年。有研究表明果胶是短枝六道木叶中最主要的水溶性膳食纤维，并含有其它多糖类化合物。多糖作为一种生物大分子，具有免疫调节，抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂、促进核酸与蛋白质生物合成，控制细胞分裂、分化，调节细胞生长、衰老等作用，成为目前热点的研究课题。

目前多糖常用的提取方法为酸解法以及碱液提取法，但是酸碱提取条件比较剧烈，程序比较复杂，工业成本高，反应结束后的酸碱液会成为新的污染源。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺陷，提供一种短枝六道木叶多糖及其提取方法，提取条件温和，不使用酸碱以及有机试剂，废液易处理。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

包括以下步骤：

(1)提取：将短枝六道木叶粉碎后与水以1g：(50～70)mL的比例混合，在70～90℃条件下加热3～5h，得到粗提液；

(2)浓缩：将步骤(1)所得到的粗提液进行浓缩，得到浓缩液；

(3)纯化：将浓缩液依次进行分离和醇沉，产生沉淀物，收集沉淀物得到短枝六道木叶多糖。

进一步地，步骤(1)中短枝六道木叶提取一次后分离出滤渣，滤渣再反复提取1～3次，合并所有提取液，得到粗提液。

进一步地，步骤(2)中在60～70℃条件下减压浓缩。

进一步地，步骤(3)中浓缩液分离的采用转速为3000～5000r/min的条件进行离心分离5～10min，收集上清液。

进一步地，步骤(3)中的醇沉是将分离得到的上清液加入3～4倍体积的无水乙醇进行沉淀。

进一步地，步骤(3)中醇沉是在0～4℃静置过夜。

进一步地，步骤(3)中的沉淀物是通过在3000～5000r/min条件下离心5～10min收集的，收集的沉淀物干燥得到短枝六道木叶多糖。

一种利用如上所述短枝六道木叶多糖的提取分离方法提取分离得到的短枝六道木叶多糖。

与现有技术相比，本发明的优点是：

(1)经过提取即可得到多糖粗提液，再经过浓缩和纯化即可得到短枝六道木叶多糖，工艺简单，流程短，易于操作，生产成本低，易于工业化连续生产，为短枝六道木叶的进一步开发利用提供技术支持；

(2)安全可靠，提取条件温和，将短枝六道木叶粉碎与水混合在70～90℃加热回流即可；不使用酸碱以及有毒有机试剂，废液易处理，不产生污染，对环境友好，得到的多糖立体结构不易被破坏，生物活性高；

(3)产率高，本发明的产率可达到17.7％。

本发明制得的短枝六道木叶多糖具有较强的DPPH自由基清除能力，抗氧化性能好。

【附图说明】

图1是本发明中回流温度对短枝六道木叶多糖得率的影响图。

图2是本发明中回流时间对短枝六道木叶多糖得率的影响图。

图3是本发明中回流次数对短枝六道木叶多糖得率的影响图。

【具体实施方式】

下面将结合本发明的实施例进行清楚，完整的描述，此处所用的实施例仅用于说明和解释本发明，不用于限定本发明。

本发明包括以下步骤：

(1)提取：将短枝六道木叶粉碎至直径在1cm以下备用，与水以1g：(50～70)mL的比例混合，在70～90℃条件下加热3～5h，得到多糖粗提液；短枝六道木叶滤渣反复提取1～3次，合并所有提取液。

(2)浓缩：将步骤(1)所得到的粗提液在60～70℃条件下减压浓缩；

(3)离心分离：将步骤(2)所得到的浓缩液离心分离，收集上清液；离心分离所用转速为3000～5000r/min，每次离心5～10min。

(4)醇沉：将步骤(3)所得到的上清液加入3～4倍体积的无水乙醇，在0～4℃静置过夜(12h以上)，进行沉淀，通过在3000～5000r/min条件下离心5～10min收集沉淀物，所得到的沉淀物挥干乙醇(自然挥发或者真空干燥)后，得到短枝六道木叶多糖。

实施例1

一种短枝六道木叶提取、分离的方法，依次包括下述步骤：

(1)准确称取40g干燥粉碎的短枝六道木叶，加入2000mL的去离子水，在70℃水浴下，回流提取两次，每次3h，趁热过滤，收集滤液；

(2)滤液在60℃条件下在旋转蒸发仪中减压蒸馏浓缩，直至体积缩小为原来的十分之一；

(3)浓缩液在3000r/min条件下离心5min，去除固体残渣，收集上清液；

(4)取上清液，加入3倍体积的无水乙醇，4℃过夜静置使其自然沉淀，在3000r/min条件下离心5min收集沉淀物，沉淀物挥干乙醇后，得到短枝六道木叶多糖；

本实例最终结果为：通过苯酚-硫酸法定量测定短枝六道木叶多糖得率为14.9％。

短枝六道木叶多糖提取、分离后，对其抗氧化性能进行测定，结果如表1所示，得到的多糖随着物质的浓度增加而呈现增大的趋势，当浓度达到一定量时呈现稳定的趋势，证明本发明得到的产品具有较强的DPPH自由基清除能力。

表1本发明得到的短枝六道木叶多糖不同浓度下抗氧化性能表

实施例2

一种短枝六道木叶提取、分离的方法，依次包括下述步骤：

(1)准确称取40g干燥粉碎的短枝六道木叶，加入2400mL的去离子水，在80℃水浴下，回流提取两次，每次3h，趁热过滤，收集滤液；

(2)滤液在60℃条件下在旋转蒸发仪中减压蒸馏浓缩，直至体积缩小为原来的十分之一；

(3)浓缩液在3000r/min条件下离心5min，去除固体残渣，收集上清液；

(4)取上清液，加入3倍体积的无水乙醇，4℃过夜静置使其自然沉淀，在3000r/min条件下离心5min收集沉淀物，沉淀物挥干乙醇后，得到短枝六道木叶多糖；

本实例最终结果为：短枝六道木叶多糖得率为17.7％。

实施例3

改变回流温度分别为60℃、70℃、90℃和100℃，其它条件与实施例2相同，最终短枝六道木叶多糖得率分别如图1所示。由图1看出，随温度升高，短枝六道木叶多糖得率先升高后降低，在80℃得率最高。

实施例4

一种短枝六道木叶提取、分离的方法，依次包括下述步骤：

(1)准确称取40g干燥粉碎的短枝六道木叶，加入2800mL的去离子水，在80℃水浴下，回流提取两次，每次3h，趁热过滤，收集滤液；

(2)滤液在60℃条件下在旋转蒸发仪中减压蒸馏浓缩，直至体积缩小为原来的十分之一；

(3)浓缩液在3000r/min条件下离心5min，去除固体残渣，收集上清液；

(4)取上清液，加入3倍体积的无水乙醇，4℃过夜静置使其自然沉淀，在3000r/min条件下离心5min收集沉淀物，沉淀物挥干乙醇后，得到短枝六道木叶多糖；

本实例最终结果为：短枝六道木叶多糖得率为17.4％。

实施例5

改变回流提取时间分别为1h、2h、4h和5h，其它条件与实施例4相同，最终短枝六道木叶多糖的得率如图2所示。由图2可知，随着提取时间的增加，短枝六道木多糖得率先升高后趋于稳定，在5h时得率最高。

实施例6

一种短枝六道木叶提取、分离的方法，依次包括下述步骤：

(1)准确称取40g干燥粉碎的短枝六道木叶，加入2200mL的去离子水，在75℃水浴下，回流提取三次，每次5h，趁热过滤，收集滤液；

(2)滤液在65℃条件下在旋转蒸发仪中减压蒸馏浓缩，直至体积缩小为原来的十二分之一；

(3)浓缩液在4000r/min条件下离心8min，去除固体残渣，收集上清液；

(4)取上清液，加入3.5倍体积的无水乙醇，0℃过夜静置使其自然沉淀，4000r/min条件下离心8min收集沉淀，真空冷冻干燥得到短枝六道木叶多糖；

本实例最终结果为：短枝六道木叶多糖得率为16.5％。

实施例7

一种短枝六道木叶提取、分离的方法，依次包括下述步骤：

(1)准确称取40g干燥粉碎的短枝六道木叶，加入2600mL的去离子水，在90℃水浴下，回流提取一次，每次4h，趁热过滤，收集滤液；

(2)滤液在70℃条件下在旋转蒸发仪中减压蒸馏浓缩，直至体积缩小为原来的八分之一；

(3)浓缩液在5000r/min条件下离心10min，去除固体残渣，收集上清液；

(4)取上清液，加入4倍体积的无水乙醇，2℃过夜静置使其自然沉淀，5000r/min条件下离心10min收集沉淀，真空冷冻干燥得到短枝六道木叶多糖；

本实例最终结果为：短枝六道木叶多糖得率为16.8％。

实施例8

短枝六道木叶残渣反复提取的次数为1次、2次、3次、4次和5次，其它条件与实施例7相同，最终短枝六道木叶多糖的得率如图3所示。随着提取次数的增加，短枝六道木叶多糖得率先升高，后趋于稳定，在4次时已经达到最高值。

上述方案中，以实施例2为最佳实施例。

上述实施例旨在举例说明本发明的原理，而不受其限制，在不脱离本发明的精神和范围前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都将落入本发明的保护范围之内。