一种快速检测鉴定菊花叶枯线虫的LAMP引物组及其检测方法与流程

文档序号:12098024阅读:来源:国知局

技术特征:

1. 一种快速检测鉴定菊花叶枯线虫的LAMP引物组,其特征在于,所述引物组包括一对外引物F3/B3,一对内引物FIP/BIP和一条环引物LF;其序列分别依次如SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.5所示。

2.权利要求1所述LAMP引物组在检测和/或鉴定菊花叶枯线虫中的应用。

3.一种快速检测鉴定菊花叶枯线虫的LAMP检测方法,其特征在于,包括如下步骤:

S1. 以待测样品DNA为模板,利用权利要求1所述LAMP引物组进行LAMP扩增;

S2. 根据扩增结果判断待测样品中是否含有菊花叶枯线虫。

4. 根据权利要求3所述的快速检测鉴定菊花叶枯线虫的LAMP检测方法,其特征在于,步骤S1所述LAMP扩增的体系为:10×Thermopol Buffer 2.5μL;25×F3/B3 1μL;25×FIP/BIP 1μL;25×LF 1μL;10 mmol/L dNTPs 6μL;100 mmol/L MgSO4 1.5μL;8U/μl Bst DNA聚合酶2.0 warmstart 1μL;模板DNA 1μL;甜菜碱4μL;ddH2O补至25μL。

5.根据权利要求3所述的快速检测鉴定菊花叶枯线虫的LAMP检测方法,其特征在于,步骤S1所述LAMP扩增的反应条件为:55~65℃温育55~60min,75~85℃保温6~10min。

6.根据权利要求3所述的快速检测鉴定菊花叶枯线虫的LAMP检测方法,其特征在于,步骤S2所述根据扩增结果判断待测样品中是否含有菊花叶枯线虫的具体方法为:利用电泳法或荧光染料法对LAMP扩增进行检测,根据检测结果判断待测样品中是否含有菊花叶枯线虫。

7.根据权利要求6所述的快速检测鉴定菊花叶枯线虫的LAMP检测方法,其特征在于,结果的判断标准为:电泳法:若扩增产物呈明显的梯状条带,则为阳性,表示待测样品中含有菊花叶枯线虫;若扩增产物未出现条带,则为阴性,表示待测样品中不含有菊花叶枯线虫;

荧光染料法:若呈现绿色荧光,则为阳性,表示待测样品中含有菊花叶枯线虫;若呈现橙色,则为阴性,表示待测样品中不含有菊花叶枯线虫。

8.权利要求3~6任一所述的快速检测鉴定菊花叶枯线虫的LAMP检测方法在检测和/或鉴定菊花叶枯线虫中的应用。

9.权利要求3~6任一所述的快速检测鉴定菊花叶枯线虫的LAMP检测方法在检测和/或鉴定混合线虫样品中或/和植物组织样品中是否含有菊花叶枯线虫方面的应用。

10.一种快速检测鉴定菊花叶枯线虫的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包含权利要求1所述引物组。

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