信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)表达的调节的制作方法

文档序号:11613043阅读:209来源:国知局
本申请是以下申请的分案申请:申请日:2012年3月30日;申请号:201280026065.2(pct/us2012/031642);发明名称:同上。序列表本申请与电子格式的序列表一起被递交。提供的序列表是2012年3月29日创建的标题为biol0142woseq.txt,大小为672kb的文件。电子格式的序列表中的信息通过引用整体并入本文。领域在某些实施方案中,提供的是用于抑制动物中stat3mrna和蛋白质的表达的方法、化合物和组合物。此类方法、化合物和组合物可用于治疗、预防或改善过度增殖性疾病。背景蛋白质stat(信号转导及转录激活蛋白)家族是在信号转导和转录激活中起双重作用的dna结合蛋白质。目前,存在6种不同的stat家族成员(stat1、stat2、stat3、stat4、stat5和stat6)和几种同工型(stat1α、stat1β、stat3α和stat3β)。stat的活性受到多种细胞因子和促有丝分裂刺激物的调节。细胞因子与其受体的结合导致与这些受体相关的janus蛋白质酪氨酸激酶(jak)的活化。这磷酸化stat,导致其转位进入细胞核和stat应答基因的转录激活。stat上特定酪氨酸残基的磷酸化导致它们的活化,从而形成与特定基因启动子序列结合的stat同二聚体和/或异二聚体。由细胞因子通过stat激活介导的事件包括细胞增殖和分化以及防止细胞凋亡。stat激活的特异性归因于特异细胞因子,即每种stat对少量特异细胞因子起反应。还发现,其它非细胞因子信号分子如生长因子也可以活化stat。这些因子与蛋白质酪氨酸激酶相关的细胞表面受体的结合导致stat的磷酸化作用。特别地,已经发现stat3(也就是急性期反应因子(aprf))对白介素-6(il-6)和表皮生长因子(egf)产生反应(darnell,jr.,j.e.,等人,science,1994,264,1415-1421)。此外,还已经发现stat3在干扰素介导的信号转导中具有重要作用(yang,c.-h.,等人,proc.natl.acad.sci.usa,1998,95,5568-5572)。存在的证据表明stat3可以受到mapk途径的调节。erk2诱导丝氨酸磷酸化作用并且还与stat3相关联(jain、n.,等人,oncogene,1998,17,3157-3167)。stat3在大多数细胞类型中表达(zhong,z.,等人,proc.natl.acad.sci.usa,1994,91,4806-4810)。其诱导参与对组织损伤和炎症作出反应的基因的表达。还证实stat3通过bcl-2的表达阻止细胞凋亡(fukada,t.,等人,immunity,1996,5,449-460)。最近,在转化细胞的线粒体中检测出stat3,显示其促进与癌细胞类似的糖分解的和氧化的磷酸化活性(gough,d.j.,等人,science,2009,324,1713-1716)。线粒体中stat3的抑制损害由激活的ras介导的恶性转化。该数据证实线粒体中stat3的ras介导的转化功能(除其在细胞核中的作用之外)。stat3的异常表达或组成型表达与多种疾病过程有关。概述本文提供的是用于调节stat3mrna和蛋白质的表达的方法、化合物和组合物。在某些实施方案中,可用于调节stat3mrna和蛋白质的表达的化合物是反义化合物。在某些实施方案中,反义化合物是反义寡核苷酸。在某些实施方案中,调节可在细胞或组织中发生。在某些实施方案中,细胞或组织是动物中的。在某些实施方案中,所述动物是人。在某些实施方案中,stat3mrna水平被降低。在某些实施方案中,stat3蛋白水平被降低。此类降低可以以时间依赖性方式或剂量依赖性方式发生。还提供的是可用于预防、治疗和改善疾病、病症和病况的方法、化合物和组合物。在某些实施方案中,此类疾病、病症和病况是过度增殖性疾病、病症和病况。在某些实施方案中,此类过度增殖性疾病、病症和病况包括癌症以及相关的恶性肿瘤和转移。在某些实施方案中,此类癌症包括肺癌,包括非小细胞肺癌(nsclc)、胰腺癌、结直肠癌、多发性骨髓瘤、肝细胞癌(hcc)、成胶质细胞瘤、卵巢癌、骨肉癌、头颈癌、乳腺癌、鳞状细胞癌、肠道腺瘤、前列腺癌和胃癌。此类疾病、病症和病况可具有共同的一种或多种危险因素、原因或结果。形成过度增殖性疾病的某些危险因素和原因包括老龄化;烟草使用;暴露于阳光和电离辐射;与某些化学品接触;被某些病毒和细菌感染;某些激素治疗;癌症家族史;饮酒;和某些生活方式选择(包括不良饮食、缺乏身体活动、和/或体重超重)。与形成过度增殖性疾病相关的某些症状和结果包括乳房或身体任何其它部分的增厚或肿块;新痣或现有痣的变化;不能治愈的溃疡;持续不消失的声音嘶哑或咳嗽;肠或膀胱习性的变化;进食后的不适;吞咽困难;无法解释的体重增加或减轻;不正常的出血或排泄;疲劳;一种或多种肿瘤在体内的转移;心血管并发症,包括心搏停止和中风;以及死亡。在某些实施方案中,治疗方法包括给需要其的个体施用stat3反义化合物。在某些实施方案中,治疗方法包括给需要其的个体施用stat3反义寡核苷酸。详述应理解,前面的一般说明和后面的详细说明都仅仅是示例性的和说明性的,且不限制所要求保护的发明。在本文,除非另有特别指明,否则单数的使用包括复数。如本文所用,除非另有指明,否则使用“或”是指“和/或”。而且,使用术语“包括”以及其它形式如“包括”和“被包括”不是限制性的。此外,除非另有特别指明,否则术语如“元素”或“组分”涵盖包含一个单元的元素和组分,也涵盖包含一个以上子单元的元素和组分。本文所用的分段标题仅用于组织的目的,不应被解释为限制所描述的主题。本申请中引用的所有文件或文件部分,包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍和论文,据此通过引用对于本文论述的文件的部分以及以其整体明确并入。定义除非提供特别定义,否则本文描述的术语结合分析化学、合成有机化学和医药化学的方法和技术是那些本领域所熟知和通用的。在化学合成和化学分析中可使用标准技术。在允许的情况下,所有专利、申请、已公布的申请和其他出版物、从如国家生物技术信息中心(ncbi)等数据库中获得的genbank登录号和相关序列信息以及在本公开中提及的其他数据,其在此被讨论的部分被作为参考,并且这些部分的全部内容被并入本申请。据此通过引用对于本文论述的文件的部分以及以其整体明确并入。除非另有说明,否则下列术语具有下列含义:“2’-脱氧核苷”意指包含2’-h呋喃糖基糖部分的核苷,如在脱氧核糖核苷(dna)中天然存在地发现。在某些实施方案中,2’-脱氧核苷可包含修饰的核碱基或可包含rna核碱基(例如,尿嘧啶)。“2’-o-甲氧基乙基”(也称为2’-moe和2’-o(ch2)2-och3)是指呋喃糖基(furosyl)环的2’位的o-甲氧基-乙基修饰。2’-o-甲氧基乙基修饰的糖是修饰的糖。“2’-moe核苷”(也称为2’-o-甲氧基乙基核苷)意指包含2’-moe修饰的糖部分的核苷。“2’-取代的核苷”意指核苷包含在2’-位的不是h或oh的取代基。除非另外指明,2’-取代的核苷不是双环核苷。“5’-甲基胞嘧啶”意指用连接于5’位的甲基修饰的胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶是修饰的核碱基。“约”意指在值的±10%内。例如,若陈述“化合物影响stat3的至少约70%抑制”,则暗指stat3水平在63%至77%的范围内被抑制。“活性药物试剂”意指当向个体时施用提供疗效的药物组合物中的一种或多种物质。例如,在某些实施方案中,靶向于stat3的反义寡核苷酸是活性药物试剂。“活性靶区”或“靶区”意指一种或多种活性反义化合物靶向的区域。“活性反义化合物”意指降低靶核酸水平或蛋白质水平的反义化合物。“伴随施用”是指两种试剂以它们的药理学效果在患者体内都显现的任何方式同时施用。伴随施用不需要在单一药物组合物中、相同剂型中或以相同施用途径施用两种试剂。两种试剂的效果不需要同时显现它们自己。效果只需要在一段时间重叠,且不需要同久远。“施用”意指将药物试剂提供给个体,并且包括但不限于医疗专业人员施用和自我施用。“改善”是指相关疾病、病症或病况的至少一种指标、迹象或症状的减轻。指标的严重程度可以通过本领域普通技术人员已知的主观或客观的测量来确定。“动物”是指人或非人动物(包括但不限于小鼠、大鼠、兔、狗、猫、猪)和非人灵长类(包括但不限于猴和黑猩猩)。“抗体”是指以通过某种方式与抗原特异性反应为特征的分子,其中抗体和抗原各自根据对方来定义。抗体可能是指完整的抗体分子或其中任何片段或区域,如重链、轻链、fab区以及fc区。“反义活性”意指可归因于反义化合物与其靶核酸相杂交的任何可检测或可测量的活性。在某些实施方案中,反义活性是靶核酸或此类靶核酸编码的蛋白的量或表达的降低。“反义化合物”意指能够通过氢键合进行与靶核酸相杂交的寡聚化合物。反义化合物的实例包括单链和双链化合物,如反义寡核苷酸、sirna、shrna、snorna、mirna和卫星重复。“反义抑制”意指与不存在反义化合物时靶核酸水平或靶蛋白水平相比,在与靶核酸互补的反义化合物存在时,靶核酸水平或靶蛋白水平降低。“反义寡核苷酸”意指具有允许与靶核酸的相应区域或区段杂交的核碱基序列的单链寡核苷酸。“双环糖”意指通过两个原子的桥接而修饰的呋喃糖基环。双环糖是修饰的糖。“双环核苷”(也称为bna)意指具有糖部分的核苷,所述糖部分包含连接糖环的两个碳原子的桥,由此形成双环环系统。在某些实施方案中,该桥连接糖环的4’-碳和2’-碳。“帽结构”或“末端帽部分”意指已在反义化合物任一端并入的化学修饰。“cet”或“受约束的乙基”意指具有糖部分的双环核苷,所述糖部分包含连接4’-碳和2’-碳的桥,其中该桥具有式:4’-ch(ch3)-o-2’。“受约束的乙基核苷”(也称为cet核苷)意指包含含有4’-ch(ch3)-o-2’桥的双环糖部分的核苷。“化学不同的区域”是指在某些方面在化学上不同于相同反义化合物的其它区域的反义化合物中的区域。例如,具有2’-o-甲氧基乙基核苷酸的区域在化学上不同于含有无2’-o-甲氧乙基修饰的核苷酸的区域。“嵌合反义化合物”意指具有至少两个化学不同的区域的反义化合物。“共施用”意指向个体施用两种或更多种药物试剂。两种或更多种药物试剂可以在单一药物组合物中,或也可能在分开的药物组合物中。两种或更多种药物试剂中的每一种可通过相同或不同的施用途径施用。共施用涵盖平行或相继施用。“互补性”意指第一核酸与第二核酸的核碱基之间的配对能力。“连续核碱基”意指彼此直接相邻的核碱基。“稀释剂”意指缺乏药理学活性,但药学必需或需要的组合物中的成分。例如,在注射的组合物中的稀释剂可以是液体,例如盐水溶液。“剂量”意指单次施用中或规定时间段内提供的药物试剂的规定量。在某些实施方案中,剂量可能以一份、两份或多份丸剂、片剂或注射剂施用。例如,在需要皮下施用的某些实施方案中,所需剂量需要通过单次注射不容易容纳的体积,因此,可以使用两次或更多次注射以达到所需剂量。在某些实施方案中,药物试剂是通过在延长时间内或连续输注而施用的。剂量可以按每小时、每天、每周或每月药物试剂的量来规定。“有效量”意指在需要药剂的个体中足以实现所需生理学结果的活性药物试剂的量。根据待处理个体的健康与生理状况、待处理个体的分类群、组合物的剂型、个体医疗状况的评估以及其他有关因素,个体间的有效量可能有变化。“完全互补”或“100%互补”意指第一核酸的每个核碱基在第二核酸中具有互补核碱基。在某些实施方案中,第一核酸是反义化合物且靶核酸是第二核酸。“缺口聚体(gapmer)”意指一种嵌合反义化合物,其中具有多个支持rna酶h切割的核苷的内部区域位于具有一个或多个核苷的外部区域之间,其中包含内部区域的核苷化学上不同于包含外部区域的核苷或核苷。内部区域可被称为“缺口”且外部区域可被称为“翼”。“缺口扩大的”意指在具有一到六个核苷的5’和3’翼区段之间并且与其直接相邻处具有12或更多个连续2’-脱氧核糖核苷的嵌合反义化合物。“杂交”意指互补核酸分子的退火。在某些实施方案中,互补核酸分子包括反义化合物和靶核酸。“过度增殖性疾病”意指特征在于细胞的快速或过度生长和繁殖的疾病。过度增殖性疾病的实例包括癌症,例如癌、肉瘤、淋巴瘤和白血病以及相关恶性肿瘤和转移。“鉴定具有过度增殖性疾病风险的动物”意指鉴定已经诊断具有过度增殖性疾病的动物或鉴定具有发展过度增殖性疾病倾向性的动物。具有发展过度增殖性疾病倾向性的动物包括那些具有一种或多种过度增殖性疾病危险因素的动物,这些因素包括高龄;其它过度增殖性疾病史;烟草使用史;暴露于阳光和/或电离辐射的历史;之前与某些化学品接触、尤其是连续接触;过去或现在被某些病毒和细菌感染;过去或现在使用某些激素治疗;遗传易感性;饮酒;和某些生活方式选择(包括不良饮食、缺乏身体活动、和/或体重超重)。此类鉴定可通过包括评价个体的医疗史和标准临床试验或评估的任何方法来实现。“直接相邻”意指在直接相邻的元素之间没有任何介入元素。“抑制stat3”意指与在不存在stat3反义化合物(如反义寡核苷酸)时stat3mrna和/或蛋白质水平的表达相比,在存在stat3反义化合物(包括stat3反义寡核苷酸)下降低stat3mrna和/或蛋白质水平的表达。“个体”意指被选择用于治疗或疗法的人或非人动物。“核苷间连接”是指核苷间的化学键。“连接的核苷”意指键合在一起的相邻核苷。“错配”或“非互补核碱基”是指当第一核酸的核碱基不能与第二或靶核酸的相应核碱基配对时的情形。“修饰的核苷间连接”是指天然存在的核苷间键(即磷酸二酯核苷间键)的替换或任何改变。“修饰的核碱基”是指除了腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶或尿嘧啶之外的任何核碱基。“未修饰的核碱基”意指嘌呤碱基腺嘌呤(a)和鸟嘌呤(g),以及嘧啶碱基胸腺嘧啶(t)、胞嘧啶(c)和尿嘧啶(u)。“修饰的核苷酸”意指独立具有修饰的糖部分、修饰的核苷间连接或修饰的核碱基的核苷酸。“修饰的核苷”意指独立具有修饰的糖部分或修饰的核碱基的核苷。“修饰的寡核苷酸”意指包含修饰的核苷间连接、修饰的糖和/或修饰的核碱基的寡核苷酸。“修饰的糖”是指由天然糖的取代或变化。“基序”意指反义化合物中化学不同的区域的模式。“天然存在的核苷间连接”意指3’至5’磷酸二酯连接。“天然糖部分”意指在dna(2’-h)或rna(2’-oh)中发现的糖。“核酸”是指由单体核苷酸组成的分子。核酸包括核糖核酸(rna)、脱氧核糖核酸(dna)、单链核酸、双链核酸、小干扰核糖核酸(sirna)和微rna(mirna)。“核碱基”意指能与另一核酸的碱基配对的杂环部分。“核碱基序列”意指不依赖于任何糖、连接或核碱基修饰的连续核碱基的顺序。“核苷”意指连接于糖的核碱基。“核苷模拟物”包括用于替代寡聚化合物的一个或多个位置处的糖或糖和碱基且未必是连接的那些结构,例如具有吗啉代、环己烯基、环己基、四氢吡喃基、诸如非呋喃糖单元的双环或三环糖模拟物的核苷模拟物。核苷酸模拟物包括用于替代寡聚化合物的一个或多个位置处的核苷和连接的那些结构,如例如肽核酸或吗啉代(-n(h)-c(=o)-o-或其它非磷酸二酯连接而连接的吗啉代)。糖代用品与稍广义术语核苷模拟物有重叠,但旨在仅表示糖单元(呋喃糖环)的替代。本文提供的四氢吡喃基环是糖代用品的实例的展示,其中,呋喃糖基团已被四氢吡喃基环系统所替代。“核苷酸”意指具有与核苷的糖部分共价连接的磷酸基团的核苷。“脱靶效应”是指与基因而不是预期靶核酸的rna或蛋白质表达的调节相关的不需要或有害的生物效应。“寡聚化合物”或“寡聚物”意指能够与核酸分子的至少一个区域杂交的连接的单体亚单位的聚合物。“寡核苷酸”意指连接的核苷的聚合物,这些核苷中的每一个可以是修饰的或未修饰的,并且彼此独立。“胃肠外施用”意指通过注射(例如,弹丸注射)或输注而施用。胃肠外施用包括皮下施用、静脉内施用、肌内施用、动脉内施用、腹膜内施用或颅内施用,例如鞘内施用或脑室内施用。“肽”意指通过以酰胺键连接至少两个氨基酸而形成的分子。肽是指多肽和蛋白质。“药物组合物”意指适用于向个体施用的物质的混合物。例如,药物组合物可包含一种或多种活性药物试剂和无菌水溶液。在某些实施方案中,药物组合物在某些细胞系的自由摄取测定中显示活性。“药学上可接受的衍生物”涵盖本文所述的化合物的药学上可接受的盐、偶联物、前药或异构体。“药学上可接受的盐”意指反义化合物的生理学上和药学上可接受的盐,即保留亲本寡核苷酸的所需生物活性,且不向其赋予不需要的毒性效果的盐。“硫代磷酸连接”意指核苷之间的连接,其中通过用硫原子替代非桥接氧原子之一来修饰磷酸二酯键。硫代磷酸连接(p=s)是修饰的核苷间连接。“部分”意指核酸中确定数量的连续(即,连接的)核碱基。在某些实施方案中,部分是靶核酸中确定数量的连续核碱基。在某些实施方案中,部分是反义化合物中确定数量的连续核碱基。“预防”是指延迟或阻止疾病、病症或病况的发作或发展达数分钟至无限的时间。预防也意指降低发展疾病、病症或病况的风险。“前药”意指以非活性形式制备的在身体或细胞内通过内源酶或其他化学品或条件的作用而转化为活性形式的治疗剂。“副作用”意指由治疗所引起的除所需效应之外的生理反应。在某些实施方案中,副作用包括注射部位反应、肝功能测试异常、肾功能异常、肝脏毒性、肾脏毒性、中枢神经系统异常、肌肉疾病以及不适。例如,血清中提高的转氨酶水平可能表明肝脏毒性或肝功能异常。例如,增高的胆红素可能表明肝脏毒性或肝功能异常。“信号转导及转录激活蛋白3核酸”或“stat3核酸”意指编码stat3的任何核酸。例如,在某些实施方案中,stat3核酸包括编码stat3的dna序列、由编码stat3的dna转录的rna序列(包括包含内含子和外显子的基因组dna)和编码stat3的mrna序列。“stat3mrna”意指编码stat3蛋白质的mrna。“单链寡核苷酸”意指没有与互补链杂交的寡核苷酸。“可特异性杂交的”是指反义化合物在反义寡核苷酸与靶核酸之间具有足以诱导所需效应的互补度,而在期望特异性结合的条件下即在体内测定和治疗性治疗时的生理条件下表现出对非靶核酸最低影响或无影响。“靶向(targeting)”或“靶向(targeted)”意指设计和选择与靶核酸特异性杂交并诱导预期效应的反义化合物的过程。“靶核酸”、“靶rna”、“靶mrna”和“靶rna转录本”均是指能够被反义化合物靶向的核酸。“靶区段”意指靶向反义化合物的靶核酸的核苷酸的序列。“5’靶位点”是指靶区段的最5’端核苷酸。“3’靶位点”是指靶区段的最3’端核苷酸。“治疗有效量”意指为个体提供疗效的药物试剂的量。“治疗”是指施用药物组合物以实现疾病、病症或病况的改变或改善。“未修饰的核苷酸”意指由天然存在的核碱基、糖部分和核苷间连接组成的核苷酸。在某些实施方案中,未修饰的核苷酸是rna核苷酸(即β-d-核糖核苷)或dna核苷酸(即β-d-脱氧核糖核苷)。某些实施方案在某些实施方案中,提供的是用于抑制stat3mrna或蛋白质表达的方法、化合物和组合物。在某些实施方案中,提供的是用于预防肿瘤生长和肿瘤体积的方法。在某些实施方案中,提供的是用于降低肿瘤生长和肿瘤体积的方法。在某些实施方案中,提供的是用于治疗、预防和改善需要其的个体中与stat3相关的疾病、病症和病况的方法、化合物和组合物。还构思的是用于制备用于治疗、预防和改善与stat3相关的疾病、病症或病况的药剂的方法和化合物。stat3相关的疾病、病症和病况包括过度增殖性疾病,例如,癌、肉瘤、淋巴瘤和白血病以及相关恶性肿瘤和转移。在某些实施方案中,提供的是用于治疗、预防或改善stat3相关疾病的stat3反义化合物。在某些实施方案中,stat3反义化合物是stat3反义寡核苷酸,其能够抑制细胞、组织或动物中stat3mrna和/或stat3蛋白质的表达。在某些实施方案中,提供的是用于治疗或预防肺癌的如本文所述的stat3反义化合物,所述肺癌包括非小细胞肺癌(nsclc)、胰腺癌、结直肠癌、多发性骨髓瘤、肝细胞癌(hcc)、成胶质细胞瘤、卵巢癌、骨肉癌、头颈癌、乳腺癌、鳞状细胞癌、肠道腺瘤、前列腺癌和胃癌。在某些实施方案中,提供的是用于治疗癌症或预防癌症转移的如本文所述的stat3反义化合物。在某些实施方案中,提供的是如本文所述的stat3反义化合物,用于治疗、预防或改善过度增殖性疾病,例如,癌症、癌、肉瘤、淋巴瘤和白血病以及相关恶性肿瘤和转移。在某些实施方案中,提供的是靶向于stat3核酸的反义化合物。在某些实施方案中,stat3核酸是下列序列的任一个:于genbank登录号nm_139276.2列出的序列(以seqidno:1并入本文)或由核苷酸4185000至4264000截短的genbank登录号nt_010755.14的互补序列(以seqtdno:2并入本文)。在某些实施方案中,本文提供的反义化合物靶向于seqidno1的下列区域中的任一个:250-286;250-285;264-285;264-282;728-745;729-745;729-744;787-803;867-883;955-978;1146-1170;1896-1920;1899-1920;1899-1919;1899-1918;1899-1916;1901-1916;1946-1963;1947-1963;2155-2205;2155-2187;2156-2179;2204-2221;2681-2696;2699-2716;3001-3033;3008-3033、3010-3033、3010-3032、3015-3033、3015-3032、3015-3031、3016-3033、3016-3032、3016-3033;3452-3499;3460-3476;3583-3608;3591-3616;3595-3615;3595-3614;3595-3612;3675-3706;3713-3790;3715-3735;3833-3878;3889-3932;3977-4012;4067-4100;4225-4256;4234-4252;4235-4252;4235-4251;4236-4252;4306-4341;4431-4456;4439-4454;4471-4510;4488-4505;4530-4558;4539-4572;4541-4558;4636-4801;4782-4796;4800-4823;4811-4847;4813-4859;4813-4815;4813-4831;4827-4859;4827-4844;4842-4859。在某些实施方案中,本文提供的反义化合物在seqidno1的下列区域中的任一个内互补:250-286;250-285;264-285;264-282;728-745;729-745;729-744;787-803;867-883;955-978;1146-1170;1896-1920;1899-1920;1899-1919;1899-1918;1899-1916;1901-1916;1946-1963;1947-1963;2155-2205;2155-2187;2156-2179;2204-2221;2681-2696;2699-2716;3001-3033;3008-3033、3010-3033、3010-3032、3015-3033、3015-3032、3015-3031、3016-3033、3016-3032、3016-3033;3452-3499;3460-3476;3583-3608;3591-3616;3595-3615;3595-3614;3595-3612;3675-3706;3713-3790;3715-3735;3833-3878;3889-3932;3977-4012;4067-4100;4225-4256;4234-4252;4235-4252;4235-4251;4236-4252;4306-4341;4431-4456;4439-4454;4471-4510;4488-4505;4530-4558;4539-4572;4541-4558;4636-4801;4782-4796;4800-4823;4811-4847;4813-4859;4813-4815;4813-4831;4827-4859;4827-4844;4842-4859。在某些实施方案中,提供的是包含由12至22个连接的核苷组成的修饰的反义寡核苷酸的化合物,其中所述修饰的反义寡核苷酸包含:由1至5个连接的核苷组成的5’-翼;由1至5个连接的核苷组成的3’-翼;由8至12个连接的2’-脱氧核苷组成的5’-翼和3’-翼之间的缺口;且其中5’-翼和3’-翼中的至少一个包含至少一个双环核苷或2’-取代的核苷;其中所述修饰的反义寡核苷酸的核碱基序列与seqidno:1的核碱基序列的任何下述核碱基的等长部分互补:核碱基250-286;250-285;264-285;264-282;728-745;729-745;729-744;787-803;867-883;955-978;1146-1170;1896-1920;1899-1920;1899-1919;1899-1918;1899-1916;1901-1916;1946-1963;1947-1963;2155-2205;2155-2187;2156-2179;2204-2221;2681-2696;2699-2716;3001-3033;3008-3033、3010-3033、3010-3032、3015-3033、3015-3032、3015-3031、3016-3033、3016-3032、3016-3033;3452-3499;3460-3476;3583-3608;3591-3616;3595-3615;3595-3614;3595-3612;3675-3706;3713-3790;3715-3735;3833-3878;3889-3932;3977-4012;4067-4100;4225-4256;4234-4252;4235-4252;4235-4251;4236-4252;4306-4341;4431-4456;4439-4454;4471-4510;4488-4505;4530-4558;4539-4572;4541-4558;4636-4801;4782-4796;4800-4823;4811-4847;4813-4859;4813-4815;4813-4831;4827-4859;4827-4844;4842-4859。在某些实施方案中,本文提供的反义化合物靶向于seqidno2的下列区域中的任一个:2668-2688;2703-2720;5000-5021;5001-5017;5697-5722;5699-5716;6475-6490;6475-6491;6476-6491;7682-7705;8078-8097;8079-8095;9862-9811;9870-9897;9875-9893;9875-9891;9877-9893;11699-11719;12342-12366;12345-12364;12346-12364;12347-12364;12353-12380;12357-12376;12358-12376;12358-12373;12360-12376;14128-14148;16863-16883;46091-46111;50692-50709;50693-50709;50693-50708;61325-61349;66133-66157;66136-66157;66136-66155;66136-66153;66138-66153;66184-66200;67067-67083;4171-74220;74199-74220;74202-74220;74171-74219;74199-74219;74202-74219;74171-74218;74199-74218;74202-74218;74723-74768;74764-74803;74782-74802;74782-74801;74782-74800;74782-74799;74783-74802;74783-74801;74783-74800;74783-74799;74862-74893;74900-74977;74902-74922;74902-74920;75070-75119;75164-75199;75254-75287;75412-75443;75421-75439;75422-75439;75422-75438;75423-75439;75423-75438;75493-75528;75616-75643;75626-75641;75658-75699;75676-75692;75717-75745;75726-75759;75726-75745;75727-75745;75728-75745;75831-75988;75852-75969;75969-75984;75987-76056;76000-76046;76000-76032;76000-76018;76014-76046;76014-76032;76029-76046;和76031-76046。在某些实施方案中,本文提供的反义化合物在seqidno2的下列区域中的任一个内互补:2668-2688;2703-2720;5000-5021;5001-5017;5697-5722;5699-5716;6475-6490;6475-6491;6476-6491;7682-7705;8078-8097;8079-8095;9862-9811;9870-9897;9875-9893;9875-9891;9877-9893;11699-11719;12342-12366;12345-12364;12346-12364;12347-12364;12353-12380;12357-12376;12358-12376;12358-12373;12360-12376;14128-14148;16863-16883;46091-46111;50692-50709;50693-50709;50693-50708;61325-61349;66133-66157;66136-66157;66136-66155;66136-66153;66138-66153;66184-66200;67067-67083;4171-74220;74199-74220;74202-74220;74171-74219;74199-74219;74202-74219;74171-74218;74199-74218;74202-74218;74723-74768;74764-74803;74782-74802;74782-74801;74782-74800;74782-74799;74783-74802;74783-74801;74783-74800;74783-74799;74862-74893;74900-74977;74902-74922;74902-74920;75070-75119;75164-75199;75254-75287;75412-75443;75421-75439;75422-75439;75422-75438;75423-75439;75423-75438;75493-75528;75616-75643;75626-75641;75658-75699;75676-75692;75717-75745;75726-75759;75726-75745;75727-75745;75728-75745;75831-75988;75852-75969;75969-75984;75987-76056;76000-76046;76000-76032;76000-76018;76014-76046;76014-76032;76029-76046;和76031-76046。在某些实施方案中,提供的是包含由12至22个连接的核苷组成的修饰的反义寡核苷酸的化合物,其中所述修饰的反义寡核苷酸包含:由1至5个连接的核苷组成的5’-翼;由1至5个连接的核苷组成的3’-翼;由8至12个连接的2’-脱氧核苷组成的5’-翼和3’-翼之间的缺口;且其中5’-翼和3’-翼中的至少一个包含至少一个双环核苷或2’-取代的核苷;其中所述修饰的反义寡核苷酸的核碱基序列与seqidno:2的核碱基序列的任何下述核碱基的等长部分互补:核碱基2668-2688;2703-2720;5000-5021;5001-5017;5697-5722;5699-5716;6475-6490;6475-6491;6476-6491;7682-7705;8078-8097;8079-8095;9862-9811;9870-9897;9875-9893;9875-9891;9877-9893;11699-11719;12342-12366;12345-12364;12346-12364;12347-12364;12353-12380;12357-12376;12358-12376;12358-12373;12360-12376;14128-14148;16863-16883;46091-46111;50692-50709;50693-50709;50693-50708;61325-61349;66133-66157;66136-66157;66136-66155;66136-66153;66138-66153;66184-66200;67067-67083;4171-74220;74199-74220;74202-74220;74171-74219;74199-74219;74202-74219;74171-74218;74199-74218;74202-74218;74723-74768;74764-74803;74782-74802;74782-74801;74782-74800;74782-74799;74783-74802;74783-74801;74783-74800;74783-74799;74862-74893;74900-74977;74902-74922;74902-74920;75070-75119;75164-75199;75254-75287;75412-75443;75421-75439;75422-75439;75422-75438;75423-75439;75423-75438;75493-75528;75616-75643;75626-75641;75658-75699;75676-75692;75717-75745;75726-75759;75726-75745;75727-75745;75728-75745;75831-75988;75852-75969;75969-75984;75987-76056;76000-76046;76000-76032;76000-76018;76014-76046;76014-76032;76029-76046;和76031-76046。某些实施方案提供包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物,所述修饰的寡核苷酸具有的核碱基序列包含与seqidno:1的核碱基3008至3033的等长部分互补的至少12个连续核碱基的部分,其中所述核碱基序列与seqidno:1互补。某些实施方案提供包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物,所述修饰的寡核苷酸具有的核碱基序列包含与seqidno:1的核碱基3016至3031的等长部分互补的至少12个连续核碱基的部分,其中所述核碱基序列与seqidno:1互补。某些实施方案提供包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物,所述修饰的寡核苷酸具有的核碱基序列包含与seqidno:2的核碱基6476至6491的等长部分互补的至少12个连续核碱基的部分,其中所述核碱基序列与seqidno:2互补。某些实施方案提供包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物,所述修饰的寡核苷酸具有的核碱基序列包含与seqidno:1的下述核碱基的等长部分互补的至少12个连续核碱基的部分:核碱基2250-286;250-285;264-285;264-282;728-745;729-745;729-744;787-803;867-883;955-978;1146-1170;1896-1920;1899-1920;1899-1919;1899-1918;1899-1916;1901-1916;1946-1963;1947-1963;2155-2205;2155-2187;2156-2179;2204-2221;2681-2696;2699-2716;3001-3033;3008-3033、3010-3033、3010-3032、3015-3033、3015-3032、3015-3031、3016-3033、3016-3032、3016-3033;3452-3499;3460-3476;3583-3608;3591-3616;3595-3615;3595-3614;3595-3612;3675-3706;3713-3790;3715-3735;3833-3878;3889-3932;3977-4012;4067-4100;4225-4256;4234-4252;4235-4252;4235-4251;4236-4252;4306-4341;4431-4456;4439-4454;4471-4510;4488-4505;4530-4558;4539-4572;4541-4558;4636-4801;4782-4796;4800-4823;4811-4847;4813-4859;4813-4815;4813-4831;4827-4859;4827-4844;或4842-4859,其中所述修饰的寡核苷酸的核碱基序列与seqidno:1互补。某些实施方案提供包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物,所述修饰的寡核苷酸具有的核碱基序列包含与seqidno:2的下述核碱基的等长部分互补的至少12个连续核碱基的部分:核碱基2668-2688;2703-2720;5000-5021;5001-5017;5697-5722;5699-5716;6475-6490;6475-6491;6476-6491;7682-7705;8078-8097;8079-8095;9862-9811;9870-9897;9875-9893;9875-9891;9877-9893;11699-11719;12342-12366;12345-12364;12346-12364;12347-12364;12353-12380;12357-12376;12358-12376;12358-12373;12360-12376;14128-14148;16863-16883;46091-46111;50692-50709;50693-50709;50693-50708;61325-61349;66133-66157;66136-66157;66136-66155;66136-66153;66138-66153;66184-66200;67067-67083;4171-74220;74199-74220;74202-74220;74171-74219;74199-74219;74202-74219;74171-74218;74199-74218;74202-74218;74723-74768;74764-74803;74782-74802;74782-74801;74782-74800;74782-74799;74783-74802;74783-74801;74783-74800;74783-74799;74862-74893;74900-74977;74902-74922;74902-74920;75070-75119;75164-75199;75254-75287;75412-75443;75421-75439;75422-75439;75422-75438;75423-75439;75423-75438;75493-75528;75616-75643;75626-75641;75658-75699;75676-75692;75717-75745;75726-75759;75726-75745;75727-75745;75728-75745;75831-75988;75852-75969;75969-75984;75987-76056;76000-76046;76000-76032;76000-76018;76014-76046;76014-76032;76029-76046;或76031-76046,其中所述修饰的寡核苷酸的核碱基序列与seqidno:2互补。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸的核碱基序列包含seqidno:245的序列。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸的核碱基序列由seqidno:245的序列组成。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸的核碱基序列包含seqidno:413的序列。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸的核碱基序列由seqidno:413的序列组成。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸与seqidno:1或2100%互补。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸由单链修饰的寡核苷酸组成。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸具有至少一个修饰的核苷间连接。在某些实施方案中,每个核苷间连接是硫代磷酸核苷间连接。在某些实施方案中,至少一个核苷包含修饰的糖。在某些实施方案中,至少一个修饰的糖是双环糖。在某些实施方案中,所述双环糖包含4’-ch2-o-2’桥。在某些实施方案中,所述双环糖包含4’-ch(ch3)-o-2’桥。在某些实施方案中,所述修饰的糖包含2’-o(ch2)2-och3基团。在某些实施方案中,所述修饰的糖包含2’-o-ch3基团。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸的至少一个核苷包含修饰的核碱基。在某些实施方案中,所述修饰的核碱基是5’-甲基胞嘧啶。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸包含:由1至5个连接的核苷组成的5’-翼;由1至5个连接的核苷组成的3’-翼;由8至12个连接的2’-脱氧核苷组成的5’-翼和3’-翼之间的缺口;且其中5’-翼和3’-翼中的至少一个包含至少一个双环核苷或一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸包含:由1至5个连接的核苷组成的5’-翼;由1至5个连接的核苷组成的3’-翼;由8至12个连接的2’-脱氧核苷组成的5’-翼和3’-翼之间的缺口;且其中5’-翼和3’-翼中的至少一个包含至少一个双环核苷和至少一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中,所述2’-取代的核苷包含由2’-o(ch2)2-och3基团或2’-o-ch3基团组成的组中的任一个。在某些实施方案中,所述双环核苷包含由4’-ch2-o-2’桥和4’-ch(ch3)-o-2’桥组成的组中的任一个。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸包含:由3个连接的核苷组成的5’-翼;由3个连接的核苷组成的3’-翼;由10个连接的2’-脱氧核苷组成的5’-翼和3’-翼之间的缺口;其中5’-翼和3’-翼中的每一个的每个核苷包含受约束的乙基核苷;其中每个核苷间连接是硫代磷酸连接;和其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶。某些实施方案提供包含修饰的寡核苷酸的化合物,所述修饰的寡核苷酸由12至30个连接的核苷组成且具有包含seqidno:245的核碱基序列的至少12个连续核碱基的核碱基序列。某些实施方案提供包含修饰的寡核苷酸的化合物,所述修饰的寡核苷酸由12至30个连接的核苷组成且具有包含seqidno:413的核碱基序列的至少12个连续核碱基的核碱基序列。某些实施方案提供包含修饰的寡核苷酸的化合物,所述修饰的寡核苷酸由12至30个连接的核苷组成且具有包含seqidno:9-426、430-442、445-464、471-498、500-1034、1036-1512和1541-2757的核碱基序列中的任一个的至少12个连续核碱基的核碱基序列。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸由单链修饰的寡核苷酸组成。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸的至少一个核苷间连接是修饰的核苷间连接。在某些实施方案中,每个核苷间连接是硫代磷酸核苷间连接。在某些实施方案中,至少一个核苷包含修饰的糖。在某些实施方案中,至少一个修饰的糖是双环糖。在某些实施方案中,所述双环糖包含4’-ch2-o-2’桥。在某些实施方案中,所述双环糖包含4’-ch(ch3)-o-2’桥。在某些实施方案中,所述修饰的糖包含2’-o(ch2)2-och3基团。在某些实施方案中,所述修饰的糖包含2’-o-ch3基团。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸的至少一个核苷包含修饰的核碱基。在某些实施方案中,所述修饰的核碱基是5’-甲基胞嘧啶。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸包含:由1至5个连接的核苷组成的5’-翼;由1至5个连接的核苷组成的3’-翼;由8至12个连接的2’-脱氧核苷组成的5’-翼和3’-翼之间的缺口;且其中5’-翼和3’-翼中的至少一个包含至少一个双环核苷或2’-取代的核苷。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸包含:由1至5个连接的核苷组成的5’-翼;由1至5个连接的核苷组成的3’-翼;由8至12个连接的2’-脱氧核苷组成的5’-翼和3’-翼之间的缺口;且其中5’-翼和3’-翼中的至少一个包含至少一个双环核苷和至少一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中,所述2’-取代的核苷包含由2’-o(ch2)2-och3基团或2’-o-ch3基团组成的组中的任一个。在某些实施方案中,所述双环核苷包含由4’-ch2-o-2’桥和4’-ch(ch3)-o-2’桥组成的组中的任一个。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸包含:由3个连接的核苷组成的5’-翼;由3个连接的核苷组成的3’-翼;由10个连接的2’-脱氧核苷组成的5’-翼和3’-翼之间的缺口;其中5’-翼和3’-翼中的每一个的每个核苷包含受约束的乙基核苷;其中每个核苷间连接是硫代磷酸连接;和其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶。某些实施方案提供包含由12至22个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物,其中所述修饰的寡核苷酸包含:由1至5个连接的核苷组成的5’-翼;由1至5个连接的核苷组成的3’-翼;由8至12个连接的2’-脱氧核苷组成的5’-翼和3’-翼之间的缺口;其中5’-翼和3’-翼中的至少一个包含至少一个双环核苷或2’-取代的核苷;其中所述修饰的寡核苷酸的核碱基序列与seqidno:1的核碱基序列的核碱基3016至3031的等长部分互补;且其中所述化合物抑制stat3mrna表达的表达。某些实施方案提供包含由12至22个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物,其中所述修饰的寡核苷酸包含:由1至5个连接的核苷组成的5’-翼;由1至5个连接的核苷组成的3’-翼;由8至12个连接的2’-脱氧核苷组成的5’-翼和3’-翼之间的缺口;其中5’-翼和3’-翼中的至少一个包含至少一个双环核苷或2’-取代的核苷;其中所述修饰的寡核苷酸的核碱基序列与seqidno:2的核碱基序列的核碱基6476至6491的等长部分互补;且其中所述化合物抑制stat3mrna表达的表达。在某些实施方案中,5’-翼和3’-翼中的至少一个包含至少一个2’-脱氧核苷。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸由单链修饰的寡核苷酸组成。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸包含至少一个双环核苷。在某些实施方案中,至少一个双环核苷包含4’-ch(ch3)-o-2’桥。在某些实施方案中,每个双环核苷包含4’-ch(ch3)-o-2’桥。在某些实施方案中,至少一个双环核苷包含4’-ch2-o-2’桥。在某些实施方案中,每个双环核苷包含4’-ch2-o-2’桥。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸包含至少一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中,至少一个2’-取代的核苷包含2’-o(ch2)2-och3基团。在某些实施方案中,每个2’-取代的核苷包含2’-o(ch2)2-och3基团。在某些实施方案中,至少一个2’-取代的核苷包含2’-o-ch3基团。在某些实施方案中,每个2’-取代的核苷包含2’-o-ch3基团。在某些实施方案中,至少一个核苷间连接是修饰的核苷间连接。在某些实施方案中,每个修饰的核苷间连接是硫代磷酸连接。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸的至少一个核苷包含修饰的核碱基。在某些实施方案中,所述修饰的核碱基是5’-甲基胞嘧啶。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸具有如下式a所述的糖基序:(j)m-(b)n-(j)p-(b)r-(a)t-(d)g-(a)v-(b)w-(j)x-(b)y-(j)z其中:每个a独立地是2’-取代的核苷;每个b独立地是双环核苷;每个j独立地是2’-取代的核苷或2’-脱氧核苷;每个d是2’-脱氧核苷;m是0-4;n是0-2;p是0-2;r是0-2;t是0-2;v是0-2;w是0-4;x是0-2;y是0-2;z是0-4;g是6-14;前体条件是:m、n和r中的至少一个不是0;w和y中的至少一个不是0;m、n、p、r和t的总和是2至5;和v、w、x、y和z的总和是2至5。在某些实施方案中,所述修饰的寡核苷酸具有由以下组成的组中的任一个的糖基序:k-d(10)-ke-d(10)-kk-d(10)-ek-k-d(10)-k-kk-k-d(10)-e-ee-e-d(10)-k-kk-k-k-d(10)-k-k-ke-e-e-d(10)-k-k-kk-k-k-d(10)-e-e-ek-k-k-d(10)-k-k-ke-k-k-d(10)-k-k-ee-e-k-d(10)-k-k-ee-d-k-d(10)-k-k-ee-k-d(10)-k-e-k-ek-d(10)-k-e-k-e-ee-e-k-d(10)-k-e-k-ee-d-d-k-d(9)-k-k-ee-e-e-e-d(9)-k-k-e其中,k是受约束的乙基核苷,e是2’-moe取代的核苷,且d是2’-脱氧核苷。某些实施方案提供治疗动物的过度增殖性疾病的方法,包括向需要其的动物施用包含由12至30个连接的核苷组成且具有包含seqidno:9-426、430-442、445-464、471-498、500-1034、1036-1512和1541-2757的核碱基序列中的任一个的至少12个连续核碱基的核碱基序列的修饰的寡核苷酸的化合物。某些实施方案提供治疗动物的过度增殖性疾病的方法,包括向需要其的动物施用包含由12至30个连接的核苷组成且具有包含seqidno:245的至少12个连续核碱基的核碱基序列的修饰的寡核苷酸的化合物。某些实施方案提供治疗动物的过度增殖性疾病的方法,包括向需要其的动物施用包含由12至30个连接的核苷组成且具有包含seqidno:413的至少12个连续核碱基的核碱基序列的修饰的寡核苷酸的化合物。在某些实施方案中,所述施用减小动物中的肿瘤大小。在某些实施方案中,所述施用减小动物中的肿瘤体积。在某些实施方案中,所述施用防止动物中的转移。在某些实施方案中,所述施用延长动物的存活。在某些实施方案中,所述施用减少动物中的恶病质。某些实施方案提供降低动物中stat3的表达的方法,包括向需要其的动物施用包含由12至30个连接的核苷组成且具有包含seqidno:9-426、430-442、445-464、471-498、500-1034、1036-1512和1541-2757的核碱基序列中的任一个的至少12个连续核碱基的核碱基序列的修饰的寡核苷酸的化合物。某些实施方案提供降低动物中stat3的表达的方法,包括向需要其的动物施用包含由12至30个连接的核苷组成且具有包含seqidno:245的至少12个连续核碱基的核碱基序列的修饰的寡核苷酸的化合物。某些实施方案提供降低动物中stat3的表达的方法,包括向需要其的动物施用包含由12至30个连接的核苷组成且具有包含seqidno:413的至少12个连续核碱基的核碱基序列的修饰的寡核苷酸的化合物。在某些实施方案中,所述化合物不具有2-10-2的翼-缺口-翼基序。反义化合物寡聚化合物包括但不限于,寡核苷酸、寡核苷、寡核苷酸类似物、寡核苷酸模拟物、反义化合物、反义寡核苷酸和sirna。寡聚化合物可以与靶核酸“反义”,是指它能够通过氢键合与靶核酸进行杂交。在某些实施方案中,反义化合物具有核碱基序列,当以5’至3’方向书写时,其包含其靶向的靶核酸的靶区段的反向互补序列。在某些此类实施方案中,反义寡核苷酸具有核碱基序列,当以5’至3’方向书写时,其包含其靶向的靶核酸的靶区段的反向互补序列。在某些实施方案中,靶向stat3核酸的反义化合物为12至30个亚单位长。在某些实施方案中,靶向stat3核酸的反义化合物为14至30个亚单位长。在某些实施方案中,靶向stat3核酸的反义化合物为12至22个亚单位长。换句话说,此类反义化合物分别为12至30个连接的亚单位、14至30个连接的亚单位、或12至22个连接的亚单位。在其它实施方案中,反义化合物为8至80、12至50、13至30、13至50、14至30、14至50、15至30、15至50、16至30、16至50、17至30、17至50、18至22、18至24、18至30、18至50、19至22、19至30、19至50或20至30个连接的亚单位。在某些此类实施方案中,反义化合物为8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80个连接的亚单位长,或上述值的任何两个所定义的范围。在一些实施方案中,反义化合物是反义寡核苷酸,且连接的亚单位是核苷酸。在某些实施方案中,靶向于stat3核酸的反义寡核苷酸可能被缩短或截短。例如,可以从5’末端(5’截短)、或可选地从3’末端(3’截短)删除单个亚单位。靶向于stat3核酸的缩短或截短的反义化合物可能有两个从反义化合物的5’末端删除的亚单位,或可选地可能有两个从反义化合物的3’末端删除的亚单位。可选地,被删除的核苷可能散布在整个反义化合物中,例如,在有一个从5’末端删除的核苷以及一个从3’末端删除的核苷的反义化合物中。当加长的反义化合物中存在单个附加的亚单位时,该附加的亚单位可以位于反义化合物的5’或3’末端。当存在两个或多个附加的亚单位时,这些增加的亚单位可能彼此相邻,例如,在具有两个亚单位被加到反义化合物的5’末端(5’添加)或者3’末端(3’添加)的反义化合物中。可选地,增加的亚单位可以散布在整个反义化合物中,例如,在具有一个亚单位被添加到5’末端以及一个亚单位被添加到3’末端的反义化合物中。增加或降低反义化合物如反义寡核苷酸的长度,和/或引入错配碱基而不消除活性是可能的。例如,在woolf等人(proc.natl.acad.sci.usa89:7305-7309,1992),对一系列长度为13-25个核碱基的反义寡核苷酸在卵母细胞注射模型中诱导靶rna切割的能力进行了测试。具有8或11个错配碱基靠近反义寡核苷酸末端的长度为25个核碱基反义寡核苷酸能够引导靶mrna的特异性切割,虽然其程度小于不含错配的反义寡核苷酸。类似地,用13个核碱基反义寡核苷酸(包括具有1个或3个错配的那些)实现了靶特异性切割。gautschi等人(j.natl.cancerinst.93:463-471,2001年3月)说明了与bcl-2mrna100%互补并且与bcl-xlmrna具有3个错配的寡核苷酸在体外和体内降低bcl-2和bcl-xl两者的表达的能力。而且,这种寡核苷酸在体内表现出有效的抗肿瘤活性。maher和dolnick(nuc.acid.res.16:3341-3358,1988)分别对一系列串联的14个核碱基反义寡核苷酸、以及由两个或三个串联反义寡核苷酸的序列组成的28和42个核碱基反义寡核苷酸测试了它们在兔网织红细胞测定中阻止人dhfr翻译的能力。三条14个核碱基反义寡核苷酸的每一个单独能抑制翻译,虽然水平比28或42个核碱基反义寡核苷酸的水平要更弱些。在某些实施方案中,如本文所述的化合物由于当如本文所述的那样递送至huvec细胞时具有小于20um、小于19um、小于18um、小于17um、小于16um、小于15um、小于14um、小于13um、小于12um、小于11um、小于10um、小于9um、小于8um、小于7um、小于6um、小于5um、小于4um、小于3um、小于2um、小于1um的体外ic50中的至少一者,因而是有效的。在某些实施方案中,如本文所述的化合物由于当如本文所述的那样递送至huvec细胞时具有1.0um、小于0.9um、小于0.8um、小于0.7um、小于0.6um、小于0.5um、小于0.4um、小于0.3um、小于0.2um、小于0.1um的体外ic50中的至少一者,因而是有效的。在某些实施方案中,如本文所述的化合物由于当如本文所述的那样递送至huvec细胞时具有0.95um、小于0.90um、小于0.85um、小于0.80um、小于0.75um、小于0.70um、小于0.65um、小于0.60um、小于0.55um、小于0.50um、小于0.45um、小于0.40um、小于0.35um、小于0.30um、小于0.25um、小于0.20um、小于0.15um、小于0.10um、小于0.05um、小于0.04um、小于0.03um、小于0.02um、小于0.01um的体外ic50中的至少一者,因而是有效的。在某些实施方案中,如本文所述的化合物由于当如本文所述的那样通过自由摄取方法递送至癌细胞系时具有小于20um、小于15um、小于10um、小于5um、小于2um的体外ic50中的至少一者,因而是有效的。在某些实施方案中,如通过alt或ast值增加不超过盐水治疗的动物的4倍、3倍或2倍或者肝、脾或肾重量增加不超过30%、20%、15%、12%、10%、5%或2%中的至少一者所示,如本文所述的化合物是高度可耐受的。在某些实施方案中,如通过alt或ast比盐水治疗的动物没有增加所示,如本文所述的化合物是高度可耐受的。在某些实施方案中,如通过肝、脾或肾重量比盐水治疗的动物没有增加所示,如本文所述的化合物是高度可耐受的。在某些实施方案中,这些化合物包括isis455265、isis455269、isis455271、isis455272、isis455291、isis455371、isis455394、isis455703、isis455429、isis455471、isis455527、isis455530、isis455536、isis455548、isis455611、isis465236、isis465237、isis465588、isis465740、isis465754、isis465830、isis466670、isis466720;isis481374、isis481390、isis481420、isis481431、isis481453、isis481464、isis481475、isis481495、isis481500、isis481501、isis481525、isis481548、isis481549、isis481597、isis481695、isis481700、isis481702、isis481710、isis481725、isis481750和isis481763。在某些实施方案中,此类化合物包括包含seqidno57、90、90、175、223、245、267、307、317、318、366、411、413、54、258、268、272、288、464、367、393、1564、1568、1571、1572、1590、1670、1693、1728、1770、1826、1829、1835、1847、1910、1997、2168、2198、2325、2339、2720、2731、2732和2756中的任何一个的序列的化合物。反义化合物基序在某些实施方案中,靶向于stat3核酸的反义化合物具有模式或基序中排列的化学修饰的亚单位,以赋予反义化合物性质如增强的对靶核酸的抑制活性、增加的结合亲合力或抗体内核酶的降解。嵌合反义化合物通常含有至少一个修饰区域,以赋予增加的核酶降解抗性、增加的细胞摄入、增加的对靶核酸的结合亲合力和/或增加的抑制活性。嵌合反义化合物的第二个区域可以充当细胞内切核酸酶rna酶h的底物,rna酶h切割rna:dna双链体的rna链。具有缺口聚体基序的反义化合物被认为是嵌合反义化合物。在缺口聚体中,具有多个支持rna酶h切割的核苷酸的内部区域位于具有多个与内部区域的核苷化学差异的核苷酸的外部区域之间。在具有缺口聚体基序的反义寡核苷酸的情况下,缺口区段一般充当内切核酸酶切割的底物,然而翼区段包含修饰的核苷。在某些实施方案中,缺口聚体的区域通过包含每个不同区域的糖部分的类型而区分。在一些实施方案中,用于区分缺口聚体区域的糖部分类型可包括β-d-核糖核苷、β-d-脱氧核糖核苷、2’-修饰的核苷(此类2’-修饰的核苷可包括2’-moe和2’-o-ch3,以及其它)和双环糖修饰的核苷(此类双环糖修饰的核苷可包括具有受约束的乙基的那些)。在某些实施方案中,翼可包括数个修饰的糖部分,包括例如2’-moe和受约束的乙基。在某些实施方案中,翼可包括数个修饰的和未修饰的糖部分。在某些实施方案中,翼可包括2’-moe核苷、受约束的乙基核苷和2’-脱氧核苷的各种组合。每个不同的区域可包含一致的糖部分、变体或交替糖部分。翼-缺口-翼基序通常被描述为“x-y-z”,其中“x”代表5’-翼的长度,“y”代表缺口的长度,且“z”代表3’-翼的长度。“x”和“z”可包含一致的变体、或交替糖部分。在某些实施方案中,“x”和“y”可包括一个或多个2’-脱氧核苷。“y”可包含2’-脱氧核苷。如本文所用的,被描述为“x-y-z”的缺口聚体的结构使得缺口与5’-翼和3’翼中的每一个的位置直接相邻。因此,在5’-翼与缺口之间、或缺口与3’-翼之间不存在插入核苷酸。本文所述的反义化合物中的任一个可具有缺口聚体基序。在某些实施方案中,“x”和“z”是相同的,在其它实施方案中,它们是不同的。在某些实施方案中,“y”为8至15个核苷。x、y或z可以为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30或更多个核苷中的一个。在某些实施方案中,本文提供的缺口聚体包括,例如,具有1-9-1的基序的11聚体。在某些实施方案中,本文提供的缺口聚体包括,例如,具有1-9-2、2-9-1或1-10-1的基序的12聚体。在某些实施方案中,本文提供的缺口聚体包括,例如,具有1-9-3、2-9-2、3-9-1、1-10-2或2-10-1的基序的13聚体。在某些实施方案中,本文提供的缺口聚体包括,例如,具有1-9-4、2-9-3、3-9-2、4-9-1、1-10-3、2-10-2或3-10-1的基序的14聚体。在某些实施方案中,本文提供的缺口聚体包括,例如,具有1-9-5、2-9-4、3-9-3、4-9-2、5-9-1、1-10-4、2-10-3、3-10-2、或4-10-1的基序的15聚体。在某些实施方案中,本文提供的缺口聚体包括,例如,具有2-9-5、3-9-4、4-9-3、5-9-2、1-10-5、2-10-4、3-10-3、4-10-2、或5-10-1的基序的16聚体。在某些实施方案中,本文提供的缺口聚体包括,例如,具有3-9-5、4-9-4、5-9-3、2-10-5、3-10-4、4-10-3、或5-10-2的基序的17聚体。在某些实施方案中,本文提供的缺口聚体包括,例如,具有4-9-5、5-9-4、3-10-5、4-10-4、或5-10-3的基序的18聚体。在某些实施方案中,本文提供的缺口聚体包括,例如,具有5-9-5、4-10-5、或5-10-4的基序的19聚体。在某些实施方案中,本文提供的缺口聚体包括,例如,具有5-10-5的基序的20聚体。在某些实施方案中,反义化合物具有“翼聚体(wingmer)”基序,具有翼-缺口或缺口-翼结构,即如上所述对于缺口聚体结构的x-y或y-z结构。因此,本文提供的翼聚体结构包括但不限于,例如5-10、8-4、4-12、12-4、3-14、16-2、18-1、10-3、2-10、1-10、8-2、2-13、5-13、5-8、或6-8。在某些实施方案中,靶向于stat3核酸的反义化合物具有2-10-2缺口聚体基序。在某些实施方案中,靶向于stat3核酸的反义化合物具有3-10-3缺口聚体基序。在某些实施方案中,靶向于stat3核酸的反义化合物具有5-10-5缺口聚体基序。在某些实施方案中,靶向于stat3核酸的反义化合物具有1-10-5缺口聚体基序。在某些实施方案中,靶向于stat3核酸的反义化合物具有3-10-4缺口聚体基序。在某些实施方案中,靶向于stat3核酸的反义化合物具有2-10-4缺口聚体基序。在某些实施方案中,靶向于stat3核酸的反义化合物具有4-9-3缺口聚体基序。在某些实施方案中,靶向于stat3核酸的反义化合物具有缺口扩大的基序。在某些实施方案中,靶向于stat3核酸的反义化合物具有下列糖基序中的任一个:k-d(10)-ke-d(10)-kk-d(10)-ek-k-d(10)-k-kk-k-d(10)-e-ee-e-d(10)-k-kk-k-k-d(10)-k-k-ke-e-e-d(10)-k-k-kk-k-k-d(10)-e-e-ek-k-k-d(10)-k-k-ke-k-k-d(10)-k-k-ee-e-k-d(10)-k-k-ee-d-k-d(10)-k-k-ee-k-d(10)-k-e-k-ek-d(10)-k-e-k-e-ee-e-k-d(10)-k-e-k-ee-d-d-k-d(9)-k-k-ee-e-e-e-d(9)-k-k-e其中,k是受约束的乙基核苷,e是2’-moe取代的核苷,且d是2’-脱氧核苷。在某些实施方案中,所述反义寡核苷酸具有如下式a描述的糖基序:(j)m-(b)n-(j)p-(b)r-(a)t-(d)g-(a)v-(b)w-(j)x-(b)y-(j)z其中:每个a独立地是2’-取代的核苷;每个b独立地是双环核苷;每个j独立地是2’-取代的核苷或2’-脱氧核苷;每个d是2’-脱氧核苷;m是0-4;n是0-2;p是0-2;r是0-2;t是0-2;v是0-2;w是0-4;x是0-2;y是0-2;z是0-4;g是6-14;前体条件是:m、n和r中的至少一个不是0;w和y中的至少一个不是0;m、n、p、r和t的总和是2至5;和v、w、x、y和z的总和是2至5。靶核酸、靶区域和核苷酸序列编码stat3的核苷酸序列包括且不限于下列:genbank登录号nm_139276.2(以seqidno:1并入本文)和由核苷酸4185000至4264000截短的genbank登录号nt_010755.14的互补序列(以seqidno:2并入本文)。应理解,本文所含的实施例中的每个seqidno中列出的序列独立于对糖部分、核苷间连接或核碱基的任何修饰。因此,seqidno定义的反义化合物可独立地包含对糖部分、核苷间连接或核碱基的一个或多个修饰。isis号(isisno)描述的反义化合物指示核碱基序列和基序的组合。在某些实施方案中,靶区是结构限定的靶核酸区域。例如,靶区可涵盖3’utr、5’utr、外显子、内含子、外显子/内含子结点、编码区域、翻译起始区域、翻译终止区域、或其他定义的核酸区域。stat3的结构限定的区域可通过登录号从如ncbi的序列数据库获得,且此类信息通过并入本文。在某些实施方案中,靶区可涵盖从靶区中的一个靶区段的5’靶位点到同一靶区中另一个靶区段的3’靶位点的序列。靶向包括确定反义化合物与之杂交以便发生所需效应的至少一个靶区段。在某些实施方案中,所需效应是mrna靶核酸水平的降低。在某些实施方案中,所需效应是由靶核酸编码的蛋白质的水平的降低或与靶核酸相关的表型变化。靶区可含有一个或多个靶区段。靶区中的多个靶区段可以重叠。可选地,它们可以不重叠。在某些实施方案中,靶区中的靶区段被至多约300个核苷酸分开。在某些实施方案中,靶区中的靶区段被靶核酸上的若干核苷酸分开,所述若干核苷酸为、为约、为至多、为至多约250、200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、20或10个核苷酸,或为任意两个前述值所定义的范围的数量的核苷酸。在某些实施方案中,靶区中的靶区段被耙核酸上的至多、或至多约、5个核苷酸分开。在某些实施方案中,靶区段是连续的。构思的是具有本文所列的5’靶位点或3’靶位点中的任一个的起始核酸的范围所定义的靶区。合适的靶区段可能在5’utr、编码区域、3’utr、内含子、外显子、或外显子/内含子结点中被发现。含有起始密码子或终止密码子的靶区段也是合适的靶区段。合适的靶区段可特异性地排除某些结构限定的区域如起始密码子或终止密码子。合适的靶区段的确定可包括靶核酸序列与基因组中的其它序列的比较。例如,blast算法可用于鉴定不同核酸中有相似性的区域。这种比较可防止挑选出可能与所选靶核酸之外的序列靶核酸(即,非靶序列或脱靶序列)以非特异性方式杂交的反义化合物序列。反义化合物在活性靶区中的活性(例如,如通过靶核酸水平的降低百分比来定义)可能会变化。在某些实施方案中,stat3mrna水平的降低表明stat3表达的抑制。stat3蛋白质水平的降低也表明靶mrna表达的抑制。而且,表型变化表明stat3表达的抑制。在某些实施方案中,降低的细胞生长、降低的肿瘤生长和减小的肿瘤体积可表明stat3表达的抑制。在某些实施方案中,与癌症相关的症状的改善可表明stat3表达的抑制。在某些实施方案中,恶病质的减少表明stat3表达的抑制。在某些实施方案中,癌症标记物的减少可表明stat3表达的抑制。杂交在一些实施方案中,杂交发生在本文公开的反义化合物与stat3核酸之间。杂交最常见的机制涉及核酸分子的互补核碱基之间的氢键合(例如,watson-crick,hoogsteen或反相hoogsteen氢键合)。杂交可以在不同条件下发生。严格条件是序列依赖的,且取决于待杂交的核酸分子的特性和组成。确定序列是否与靶核酸特异性杂交的方法为本领域所熟知。在某些实施方案中,本文提供的反义化合物可与stat3核酸特异性杂交。互补性当反义化合物的足够数量的核碱基与靶核酸的相应核碱基发生氢键作用以产生所需效应时(例如,靶核酸,如stat3核酸的反义抑制),那么反义化合物与靶核酸彼此互补。假如反义化合物保持能够与靶核酸特异性杂交,则反义化合物与stat3核酸之间的非互补核碱基可被耐受的。而且,反义化合物可与stat3核酸的一个或多个区段杂交,以至于插入或相邻区段不参与到杂交事件(例如,环结构、错配或发夹结构)。在某些实施方案中,本文提供的反义化合物、或其指定部分与stat3核酸、靶区、靶区段、或其指定部分为、或至少为70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%互补。反义化合物与靶核酸的互补性百分比可以用常规方法测定。例如,反义化合物的20个核碱基中的18个与靶区互补并因此特异性杂交的反义化合物表示90%的互补性。在该实例中,剩余的非互补核碱基可以是聚集的或点缀有互补核碱基,不必彼此之间或与互补核碱基相连续。同样地,长度为18个核碱基且具有四个两侧为与靶核酸完全互补的两个区域的非互补核碱基的反义化合物具有与靶核酸77.8%的总互补性,因此落在本发明的范围之内。可以使用本领域已知的blast程序(基本的局部比对搜索工具)和powerblast程序(altschul等人,j.mol.biol.,1990,215,403410;zhang和madden,genomeres.,1997,7,649656)常规地确定反义化合物与靶核酸区域的互补性百分比。同源百分比、序列同一性或互补性可以用例如采用默认设置的gap程序(wisconsin序列analysispackage,unix的版本8,geneticscomputergroup,universityresearchpark,madisonwis.)来确定,其利用smith和waterman的算法(adv.appl.math.,1981,2,482489)。在某些实施方案中,本文提供的反义化合物、或其指定部分与靶核酸或其指定部分完全互补(即100%互补)。例如,反义化合物可与stat3核酸或靶区、或其靶区段或靶序列完全互补。如本文所用的,“完全互补”意指反义化合物的每个核碱基能够与靶核酸的相应核碱基准确碱基配对。例如,20个核碱基反义化合物与400个核碱基长的靶序列完全互补,只要该靶核酸的相应20个核碱基部分与反义化合物互补。完全互补也可以用于是指第一条和/或第二条核酸的指定部分。例如,30个核碱基反义化合物中的20个核碱基部分可以与400个核碱基长的靶序列“完全互补”。如果靶序列有相应的20个核碱基,其中每个核碱基与反义化合物的20个核碱基部分互补,那么30个核碱基寡核苷酸的20个核碱基部分与靶序列完全互补。同时,根据反义化合物的剩余的10个核碱基是否也与靶序列互补,整个30个核碱基反义化合物与靶序列可能完全互补或可能不完全互补。非互补核碱基的位置可在反义化合物的5’末端或3’末端。可选地,非互补核碱基或核碱基可在反义化合物的内部位置。当存在两个或多个非互补核碱基时,它们可以是连续的(即连接的)或非连续的。在一个实施方案中,非互补核碱基位于缺口聚体反义寡核苷酸的翼区段。在某些实施方案中,相对于靶核酸如stat3核酸、或其指定部分,长度为或高至11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个核碱基的反义化合物包含至多4、至多3、至多2、或至多1个非互补核碱基。在某些实施方案中,相对于靶核酸如stat3核酸、或其指定部分,长度为或高至11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核碱基的反义化合物包含至多6、至多5、至多4、至多3、至多2、或至多1个非互补核碱基。本文提供的反义化合物还包括与靶核酸部分互补的化合物。如本文所用的,“部分”是指在靶核酸的区域或区段中确定数量的连续(即连接的)核碱基。“部分”也可以是指反义化合物的确定数量的连续核碱基。在某些实施方案中,反义化合物与靶区段的至少8个核碱基部分互补。在某些实施方案中,反义化合物与靶区段的至少9个核碱基部分互补。在某些实施方案中,反义化合物与靶区段的至少10个核碱基部分互补。在某些实施方案中,反义化合物与靶区段的至少11个核碱基部分互补。在某些实施方案中,反义化合物与靶区段的至少12个核碱基部分互补。在某些实施方案中,反义化合物与靶区段的至少13个核碱基部分互补。在某些实施方案中,反义化合物与靶区段的至少14个核碱基部分互补。在某些实施方案中,反义化合物与靶区段的至少15个核碱基部分互补。还构思的是与靶区段的至少9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个核碱基部分、或由任意两个这些值所定义的范围互补的反义化合物。同一性本文提供的反义化合物也可与特定核苷酸序列、seqidno、或由特定isis号代表的化合物、或其部分具有确定的同一性百分比。如本文所用的,如果具有相同的核碱基配对能力,则反义化合物与本文公开的序列相同。例如,在公开的dna序列中,含有取代胸腺嘧啶的尿嘧啶的rna会被认为是与dna序列相同,因为尿嘧啶和胸腺嘧啶均与腺嘌呤配对。本文所述的反义化合物的缩短的和加长的版本以及具有相对于本文提供的反义化合物的非相同碱基的化合物也被构思。非相同的碱基可以彼此邻近或散布于整个反义化合物中。根据相对于被比较序列具有相同碱基配对的碱基的数量计算反义化合物的百分比同一性。在某些实施方案中,反义化合物或其部分与本文公开的一个或多个反义化合物或seqidno、或其部分有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同。在某些实施方案中,反义化合物的部分与靶核酸的等长部分相比较。在某些实施方案中,8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个核碱基部分与靶核酸的等长部分相比较。在某些实施方案中,反义寡核苷酸的部分与靶核酸的等长部分相比较。在某些实施方案中,8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个核碱基部分与靶核酸的等长部分相比较。修饰核苷是碱基-糖组合。核苷的核碱基(也称为碱基)部分通常为杂环碱基部分。核苷酸是进一步包括共价连接到核苷的糖部分的磷酸根的核苷。对于包括戊呋喃糖基糖的那些核苷,磷酸基团可连接到糖的2’、3’或5’羟基部分。寡核苷酸通过相邻的核苷彼此共价连接形成线形的聚合寡核苷酸而形成。在寡核苷酸结构内,磷酸基团通常被称为形成寡核苷酸的核苷间连接。对反义化合物的修饰涵盖取代或改变核苷间连接、糖部分或核碱基。修饰的反义化合物通常比天然形式优选,因为它们具有期望的性质,如,例如增强的细胞摄入、增强的对核酸靶的亲合力、在存在核酸酶时增加的稳定性或增加的抑制活性。化学修饰的核苷也可用来增加缩短的或截短的反义寡核苷酸对其靶核酸的结合亲合力。因此,用具有此类化学修饰的核苷的较短反义化合物经常可以获得类似的结果。修饰的核苷间连接rna和dna的天然存在的核苷间连接是3’至5’磷酸二酯连接。具有一个或多个修饰的,即非天然存在的、核苷间连接的反义化合物常常比具有天然存在的核苷间连接的反义化合物优先被选择,因为它们具有期望的性质,如,例如增强的细胞摄入、增强的对核酸靶的亲合力、和在存在核酸酶时增加的稳定性。具有修饰的核苷间连接的寡核苷酸包括保留磷原子的核苷间连接以及没有磷原子的核苷间连接。代表性含磷核苷间连接包括但不限于,磷酸二酯、磷酸三酯、甲基磷酸酯、氨基磷酸酯和硫代磷酸。制备含磷的和不含磷的连接的方法是公知的。在某些实施方案中,靶向于stat3核酸的反义化合物包含一个或多个修饰的核苷间连接。在某些实施方案中,修饰的核苷间连接是硫代磷酸连接。在某些实施方案中,反义化合物的每个核苷间连接是硫代磷酸核苷间连接。修饰的糖部分本文提供的反义化合物可任选地含有一个或多个其中糖基团已被修饰的的核苷。此类糖修饰的核苷可以赋予反义化合物增强的核酸酶稳定性、增加的结合亲合力或一些其它有益的生物特性。在某些实施方案中,核苷包含化学修饰的呋喃核糖环部分。化学修饰的呋喃核糖环的实例包括且不限于,加入取代基(包括5’和2’取代基);形成双环核酸(bna)的非偕环原子的桥接;用s、ni或c(r1)i2(r=h、c1-c12烷基或保护基)替代核糖基环氧原子;和其组合。化学修饰的糖的实例包括,2’-f-5’-甲基取代的核苷(参见,于8/21/08公布的pct国际申请wo2008/101157中的其它公开的5’,2’-双取代的核苷),用s替代核糖基环氧原子且在2’-位具有进一步取代(参见,于2005年6月16日公布的美国专利申请us2005/0130923),或可选地bna的5’-取代(参见,于11/22/07公布的pct国际申请wo2007/134181,其中lna被例如5’-甲基或5’-乙烯基取代)。具有修饰的糖部分的核苷的实例包括但不限于,包含5’-乙烯基、5’-甲基(r或s)、4’-s、2’-f、2’-och3和2’-o(ch2)2och3取代基的核苷。在2’位的取代基也可选自烯丙基、氨基、叠氮基、硫代、o-烯丙基、o-c1-c10烷基、ocf3、o(ch2)2sch3、o(ch2)2-o-n(rm)(rn)和o-ch2-c(=o)-n(rm)(rn),其中每个rm和rn独立地是h或取代的或未取代的c1-c10烷基。如本文所用的,“双环核苷”是指修饰的核苷包含双环糖部分。双环核苷的实例包括但不限于,包含4’与2’核糖基环原子之间的桥的核苷。在某些实施方案中,本文提供的反义化合物包括一个或多个双环核苷,其中桥包含4’至2’双环核苷。此类4’至2’双环核苷的实例包括但不限于,下式之一:4’-(ch2)-o-2’(lna);4’-(ch2)-s-2’;4’-(ch2)2-o-2’(ena);4’-ch(ch3)-o-2’和4’-ch(ch2och3)-o-2’、及其类似物(参见,于2008年7月15日授权的美国专利7,399,845);4’-c(ch3)(ch3)-o-2’、及其类似物(参见,于2009年1月8日公布的pct国际申请wo2009/006478);4’-ch2-n(och3)-2’、及其类似物(参见,于2008年12月11目公布的pct国际申请wo2008/150729);4’-ch2-o-n(ch3)-2’(参见,于2004年9月2日公布的美国专利申请us2004/0171570);4’-ch2-ni-o-2’,其中r是h、c1-c12烷基、或保护基(参见,于2008年9月23日授权的美国专利7,427,672);4’-ch2-c(h)(ch3)-2’(参见,chattopadhyaya,等人,j.org.chem.,2009,74,118-134);和4’-ch2-c(=ch2)-2’、及其类似物(参见,于2008年12月8目公布的pct国际申请wo2008/154401)。还参见例如:singh等人,chem.commun.,1998,4,455-456;koshkin等人,tetrahedron,1998,54,3607-3630;wahlestedt等人,proc.natl.acad.sci.u.s.a.,2000,97,5633-5638;kumar等人,bioorg.med.chem.lett.,1998,8,2219-2222;singh等人,j.org.chem.,1998,63,10035-10039;srivastava等人,j.am.chem.soc.,129(26)8362-8379(2007年7月4日);elayadi等人,curr.opinioninvens.drugs,2001,2,558-561;braasch等人,chem.biol.,2001,8,1-7;orum等人,curr.opinionmol.ther.,2001,3,239-243;美国专利号u.s.6,670,461、7,053,207、6,268,490、6,770,748、6,794,499、7,034,133、6,525,191、7,399,845;公布的pct国际申请wo2004/106356、wo94/14226、wo2005/021570和wo2007/134181;美国专利公布no.us2004/0171570、us2007/0287831和us2008/0039618;和美国专利序列号12/129,154、60/989,574、61/026,995、61/026,998、61/056,564、61/086,231、61/097,787和61/099,844;和pct国际申请no.pct/us2008/064591、pct/us2008/066154和pct/us2008/068922。上述双环核苷中的每一个可被制备成具有一个或多个立体化学糖结构,包括例如α-l-呋喃核糖和β-d-呋喃核糖(参见于1999年3月25日以wo99/14226公布的pct国际申请pct/dk98/00393)。在某些实施方案中,bna核苷的双环糖部分包括但不限于,具有戊呋喃糖基糖部分的4’位与2’位之间的至少一个桥的化合物,其中此类桥独立地包含1个或2至4个连接的基团,所述基团独立地选自-[c(ra)(rb)]n-、-c(ra)=c(rb)-、-c(ra)=n-、-c(=nra)-、-c(=o)-、-c(=s)-、-o-、-si(ra)2-、-s(=o)x-和-n(ra)-;其中:x是0、1、或2;n是1、2、3、或4;每个ra和rb独立地是h、保护基、羟基、c1-c12烷基、取代的c1-c12烷基、c2-c12链烯基、取代的c2-c12链烯基、c2-c12炔基、取代的c2-c12炔基、c5-c20芳基、取代的c5-c20芳基、杂环基团、取代的杂环基团、杂芳基、取代的杂芳基、c5-c7脂环族基团、取代的c5-c7脂环族基团、卤素、oj1、nj1j2、sj1、n3、cooj1、酰基(c(=o)-h)、取代的酰基、cn、磺酰基(s(=o)2-j1)、或亚砜基(s(=o)-j1);和每个j1和j2独立地是h、c1-c12烷基、取代的c1-c12烷基、c2-c12链烯基、取代的c2-c12链烯基、c2-c12炔基、取代的c2-c12炔基、c5-c20芳基、取代的c5-c20芳基、酰基(c(=o)-h)、取代的酰基、杂环基团、取代的杂环基团、c1-c12氨基烷基、取代的c1-c12氨基烷基、或保护基。在某些实施方案中,双环糖部分的桥是-[c(ra)(rb)]n-、-[c(ra)(rb)]n-o-、-c(rarb)-n(r)-o-或-c(rarb)-o-n(r)-。在某些实施方案中,桥是4’-ch2-2’、4’-(ch2)2-2’、4’-(ch2)3-2’、4’-ch2-o-2’、4’-(ch2)2-o-2’、4’-ch2-o-n(r)-2’和4’-ch2-n(r)-o-2’-,其中每个r独立地是h、保护基、或c1-c12烷基。在某些实施方案中,双环核苷进一步由异构体结构限定。例如,包含4’-2’亚甲基-氧基桥的核苷可以呈α-l结构或呈β-d结构。之前,α-l-亚甲基氧基(4’-ch2-o-2’)bna’s已被并入显示反义活性的反义寡核苷酸中(frieden等人,nucleicacidsresearch,2003,21,6365-6372)。在某些实施方案中,双环核苷包括但不限于,(a)α-l-亚甲基氧基(4’-ch2-o-2’)bna、(b)β-d-亚甲基氧基(4’-ch2-o-2’)bna、(c)亚乙基氧基(4’-(ch2)2-o-2’)bna、(d)氨基氧基(4’-ch2-o-n(r)-2’)bna、(e)氧基氨基(4’-ch2-n(r)-o-2’)bna、(f)甲基(亚甲基氧基)(4’-ch(ch3)-o-2’)bna、(g)亚甲基-硫代(4’-ch2-s-2’)bna、(h)亚甲基-氨基(4’-ch2-n(r)-2’)bna、(i)甲基碳环(4’-ch2-ch(ch3)-2’)bna和(j)亚丙基碳环(4’-(ch2)3-2’)bna,如下所描绘。其中bx是碱基部分且r独立地是h、保护基或c1-c12烷基。在某些实施方案中,具有式i的双环核苷:其中:bx是杂环碱基部分;-qa-qb-qc-是-ch2-n(rc)-ch2-、-c(=o)-n(rc)-ch2-、-ch2-o-n(rc)-、-ch2-n(rc)-o-、或-n(rc)-o-ch2;rc是c1-c12烷基或氨基保护基;且ta和tb各自独立地是h、羟基保护基、偶联物基团、反应性磷基团、磷部分、或共价连接到载体介质。在某些实施方案中,具有式ii的双环核苷:其中:bx是杂环碱基部分;ta和tb各自独立地是h、羟基保护基、偶联物基团、反应性磷基团、磷部分、或共价连接到载体介质;za是c1-c6烷基、c2-c6链烯基、c2-c6炔基、取代的c1-c6烷基、取代的c2-c6链烯基、取代的c2-c6炔基、酰基、取代的酰基、取代的酰胺、硫醇、或取代的硫基。在一个实施方案中,每个取代的基团独立地被取代基单取代或多取代,所述取代基独立地选自卤素、氧代、羟基、ojc、njcjd、sjc、n3、oc(=x)jc和njcc(=x)njcjd,其中每个jc、jd和jc独立地是h、c1-c6烷基、或取代的c1-c6烷基且x是o或njc。在某些实施方案中,具有式iii的双环核苷:其中:bx是杂环碱基部分;ta和tb各自独立地是h、羟基保护基、偶联物基团、反应性磷基团、磷部分、或共价连接到载体介质;zb是c1-c6烷基、c2-c6链烯基、c2-c6炔基、取代的c1-c6烷基、取代的c2-c6链烯基、取代的c2-c6炔基、或取代的酰基(c(=o)-)。在某些实施方案中,具有式iv的双环核苷:其中:bx是杂环碱基部分;ta和tb各自独立地是h、羟基保护基、偶联物基团、反应性磷基团、磷部分、或共价连接到载体介质;rd是c1-c6烷基、取代的c1-c6烷基、c2-c6链烯基、取代的c2-c6链烯基、c2-c6炔基、或取代的c2-c6炔基;每个qa、qb、qc和qd独立地是h、卤素、c1-c6烷基、取代的c1-c6烷基、c2-c6链烯基、取代的c2-c6链烯基、c2-c6炔基、或取代的c2-c6炔基、c1-c6烷氧基、取代的c1-c6烷氧基、酰基、取代的酰基、c1-c6氨基烷基、或取代的c1-c6氨基烷基;在某些实施方案中,具有式v的双环核苷:其中:bx是杂环碱基部分;ta和tb各自独立地是h、羟基保护基、偶联物基团、反应性磷基团、磷部分、或共价连接到载体介质;qa、qb、qc和qf各自独立地是氢、卤素、c1-c12烷基、取代的c1-c12烷基、c2-c12链烯基、取代的c2-c12链烯基、c2-c12炔基、取代的c2-c12炔基、c1-c12烷氧基、取代的c1-c12烷氧基、ojj、sjj、sojj、so2jj、njjjk、n3、cn、c(=o)ojj、c(=o)njjjk、c(=o)jj、o-c(=o)njjjk、n(h)c(=nh)njjjk、n(h)c(=o)njjjk或n(h)c(=s)njjjk;或qc和qf一起为=c(qg)(qh);qg和qh各自独立地是h、卤素、c1-c12烷基、或取代的c1-c12烷基。亚甲基氧基(4’-ch2-o-2’)bna单体腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、5-甲基-胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶的合成和制备以及其寡聚化,和核酸识别属性已被描述(参见例如,koshkin等人,tetrahedron,1998,54,3607-3630)。bna及其制备也描述于wo98/39352和wo99/14226中。亚甲基氧基(4’-ch2-o-2’)bna、亚甲基氧基(4’-ch2-o-2’)bna和2’-硫代-bna的类似物也已被制备(参见例如,kumar等人,bioorg.med.chem.lett.,1998,8,2219-2222)。包含作为核酸聚合酶的底物的寡脱氧核糖核苷酸双链体的锁核苷类似物的制备也已被描述(参见例如,wengel等人,wo99/14226)。而且,2’-氨基-bna(一种新的构象限制的高亲和性寡核苷酸类似物)的合成已在本领域中被描述(参见例如,singh等人,j.org.chem.,1998,63,10035-10039)。此外,已制备了2’-氨基-和2’-甲基氨基-bna且之前已报道了它们的具有互补rna和dna链的双链体的热稳定性。在某些实施方案中,具有式vi的双环核苷其中:bx是杂环碱基部分;ta和tb各自独立地是h、羟基保护基、偶联物基团、反应性磷基团、磷部分、或共价连接到载体介质;每个qi、qj、qk和ql独立地是h、卤素、c1-c12烷基、取代的c1-c12烷基、c2-c12链烯基、取代的c2-c12链烯基、c2-c12炔基、取代的c2-c12炔基、c1-c12烷氧基、取代的c1-c12烷氧基、ojj、sjj、sojj、so2jj、njjjk、n3、cn、c(=o)ojj、c(=o)njjjk、c(=o)jj、o-c(=o)-njjjk、n(h)c(=nh)njjjk、n(h)c(=o)njjjk、或n(h)c(=s)njjjk;和qi和qj或ql和qk一起为=c(qg)(qh),其中qg和qh各自独立地是h、卤素、c1-c12烷基、或取代的c1-c12烷基。一个具有4’-(ch2)3-2’桥和链烯基类似物、桥4’-ch=ch-ch2-2’的碳环双环核苷已被描述(参见例如,freier等人,nucleicacidsresearch,1997,25(22),4429-4443和albaek等人,j.org.chem.,2006,77,7731-7740)。碳环双环核苷的合成和制备以及其寡聚化和生化研究也已被描述(参见例如,srivastava等人,j.am.chem.soc.2007,129(26),8362-8379)。如本文所用的,“4’-2’双环核苷”或“4’至2’双环核苷”是指包含呋喃糖环的双环核苷,所述呋喃糖环包含连接2’碳原子和4’碳原子的桥。如本文所用的,“单环核苷”是指包含不为双环糖部分的修饰的糖部分的核苷。在某些实施方案中,核苷的糖部分、或糖部分类似物可在任何位置被修饰或取代。如本文所用的,“2’-修饰的糖”意指在2’位修饰的呋喃糖基糖。在某些实施方案中,此类修饰包括选自以下的取代基:卤化物,包括但不限于取代的和未取代的烷氧基、取代的和未取代的硫代烷基、取代的和未取代的氨基烷基、取代的和未取代的烷基、取代的和未取代的烯丙基、以及取代的和未取代的炔基。在某些实施方案中,2’修饰选自包括但不限于以下的取代基:o[(ch2)no]mch3、o(ch2)nnh2、o(ch2)nch3、o(ch2)nonh2、och2c(=o)n(h)ch3和o(ch2)non[(ch2)nch3]2,,其中n和m为1至约10。其它2’-取代基也可选自:c1-c12烷基;取代的烷基;链烯基;炔基;烷芳基;芳烷基;o-烷芳基或o-芳烷基;sh;sch3;ocn;cl;br;cn;cf3;ocf3;soch3;so2ch3;ono2;no2;n3;nh2;杂环烷基;杂环烷芳基;氨基烷基氨基;聚烷基氨基;取代的甲硅烷基;rna切割基团;报道基团;嵌入剂;用于提高药动学性质的基团;和用于提高反义化合物的药效学性质的基团、及其它具有类似性质的取代基。在某些实施方案中,修饰的核苷包含2’-moe侧链(参见例如,baker等人,j.biol.chem.,1997,272,11944-12000)。此类2’-moe取代已被描述成具有相较于未修饰的核苷和其它修饰的核苷如2’-o-甲基、o-丙基和o-氨基丙基得以提高的结合亲合力。也已显示具有2’-moe取代基的寡核苷酸是基因表达的反义抑制剂,对于体内用途具有很有前途的特征(参见例如,martin,p.,helv.chim.acta,1995,78,486-504;altmann等人,chimia,1996,50,168-176;altmann等人,biochem.soc.trans.,1996,24,630-637;和altmann等人,nucleosidesnucleotides,1997,16,917-926)。如本文所用的,“修饰的四氢吡喃核苷”或“修饰的thp核苷”意指具有替换正常核苷的戊呋喃糖基残基的六环四氢吡喃“糖”(糖代用品)的核苷。修饰的thp核苷包括但不限于,其在本领域中被称为己糖醇核酸(hna)、anitol核酸(ana)、甘露醇核酸(mna)(参见leumann,cj.bioorg.&med.chem.(2002)10:841-854)、氟hna(f-hna)、或具有式x的那些化合物:式x:其中对于式x的所述至少一个四氢吡喃核苷类似物中的每一个独立地:bx是杂环碱基部分;t3和t4各自独立地是连接四氢吡喃核苷类似物与反义化合物的核苷间连接基团或者t3和t4中的一个是连接四氢吡喃核苷类似物与反义化合物的核苷间连接基团,且t3和t4中的另一个是h、羟基保护基、连接的偶联物基团、或5’或3’-末端基团;q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7各自独立地是h、c1-c6烷基、取代的c1-c6烷基、c2-c6链烯基、取代的c2-c6链烯基、c2-c6炔基、或取代的c2-c6炔基;且r1和r2中的一个是氢且另一个选自卤素、取代的或未取代的烷氧基、nj1j2、sj1、n3、oc(=x)j1、oc(=x)nj1j2、nj3c(=x)nj1j2和cn,其中x是o、s、或nj1,且每个j1、j2和j3独立地是h或c1-c6烷基。在某些实施方案中,提供了式x的修饰的thp核苷,其中qm、qn、qp、qr、qs、qt和qu各自为h。在某些实施方案中,qm、qn、qp、qr、qs、qt和qu中的至少一个不是h。在某些实施方案中,qm、qn、qp、qr、qs、qt和qu中的至少一个是甲基。在某些实施方案中,提供了式x的thp核苷,其中r1和r2之一是f。在某些实施方案中,r1是氟且r2是h,r1是甲氧基且r2是h,且r1是甲氧基乙氧基且r2是h。如本文所用的,“2’-修饰的”或“2’-取代的”是指包含糖的核苷,所述糖包含在2’位的不是h或oh的取代基。2’-修饰的核苷包括但不限于其中连接糖环的两个碳原子的桥连接2’碳和糖环的另一个碳的双环核苷,以及具有非桥接2’取代基如烯丙基、氨基、叠氮基、硫代、o-烯丙基、o-c1-c10烷基、-ocf3、o-(ch2)2-o-ch3、2’-o(ch2)2sch3、o-(ch2)2-o-n(rm)(rn)、或o-ch2-c(=o)-n(rm)(rn)的核苷,其中每个rm和rn独立地是h或取代的或未取代的c1-c10烷基。2’-修饰的核苷可进一步包含其它修饰,例如在糖的其它位置和/或在核碱基的其它修饰。如本文所用的,“2’-f”是指包含在2’位的氟基的糖。如本文所用的,“2’-ome”或“2’-och3”或“2’-o-甲基”各自是指包含糖的核苷,所述糖包含在糖环2’位的-och3基团。如本文所用的,”寡核苷酸”是指包含多个连接的核苷的化合物。在某些实施方案中,多个核苷中的一个或多个被修饰。在某些实施方案中,寡核苷酸包含一个或多个核糖核苷(rna)和/或脱氧核糖核苷(dna)。可用于修饰核苷以并入反义化合物中的很多其它双环和三环糖代用品环系统也为本领域已知(参见例如,综述文章:leumann,j.c,bioorganic&medicinal化学,2002,10,841-854)。此类环系统可经受各种附加的取代基以增强活性。用于制备修饰的糖的方法为本领域技术人员所熟知。在具有修饰的糖部分的核苷酸中,核碱基部分(天然、修饰的、或其组合)被保留,用于与适当的核酸靶杂交。在某些实施方案中,反义化合物包含具有修饰的糖部分的一个或多个核苷酸。在某些实施方案中,修饰的糖部分是2’-moe。在某些实施方案中,2’-moe修饰的核苷酸以缺口聚体基序排列。在某些实施方案中,修饰的糖部分是cet。在某些实施方案中,cet修饰的核苷酸排列在缺口聚体基序的翼的各处。用于配制药物组合物的组合物和方法反义寡核苷酸可以与药学上可接受的活性和/或惰性物质混合,以用于制备药物组合物或制剂。用于配制药物组合物的组合物和方法依赖于若干标准,包括但不限于施用途径、疾病程度、或待施用的剂量。靶向于stat3核酸的反义化合物可通过将反义化合物与合适的药学上可接受的稀释剂或载体结合而在药物组合物中使用。药学上可接受的稀释剂包括磷酸盐缓冲盐水(pbs)。pbs是适于在待胃肠外递送的组合物中使用的稀释剂。因此,在一个实施方案中,在本文所述的方法中使用包含靶向于stat3核酸的反义化合物和药学上可接受的稀释剂的药物组合物。在某些实施方案中,药学上可接受的稀释剂是pbs。在某些实施方案中,反义化合物是反义寡核苷酸。包含反义化合物的药物组合物涵盖任何药学上可接受的盐、酯或这些酯的盐或任何其它的寡核苷酸,其在施用到动物(包括人)后,能够提供(直接地或间接地)生物活性的代谢物或其残基。因此,例如,本公开也涉及药学上可接受的反义化合物的盐、前药、此类前药的药学上可接受的盐和其它的生物等效物。合适的药学上可接受的盐包括但不限于,钠和钾盐。前药可以包括在反义化合物的一端或两端并入附加的核苷,所述前药通过身体内的核酸内切酶切割,以形成活性反义化合物。偶联的反义化合物反义化合物可共价连接到增强所得反义寡核苷酸的活性、细胞分布或细胞摄入的一个或多个部分或偶联物。典型的偶联物基团包括胆固醇部分或脂质部分。附加的偶联物基团包括碳水化合物、磷脂、生物素、吩嗪、叶酸、菲啶、蒽醌、吖啶、荧光素、若丹明、香豆素以及染料。反义化合物也可以被修饰为具有一个或多个通常连接在反义化合物的一个或两个末端的稳定基团,以增强例如核酸酶稳定性等特性。稳定基团包括帽结构。这些末端修饰能防止具有末端核酸的反义化合物被核酸外切酶降解,并有助于细胞内的递送和/或定位。帽可存在于5’-末端(5’-帽)、或在3’-末端(3’-帽)、或可在两个末端都存在。帽结构为本领域普通技术人员所熟知,且包括例如,反转的脱氧无碱基帽。可用于在反义化合物的一个或两个末端形成帽结构以赋予核酸酶稳定性的3’和5’稳定基团还包括2003年1月16日公布的wo03/004602中所公开的那些基团。细胞培养和反义化合物处理可在多种细胞类型中体外测试反义化合物对stat3核酸的水平、活性或表达的影响能够检测。用于此类分析的细胞类型购自商业供应商(例如,美国典型培养物保藏中心,manassus,va;zen-bio,inc.,researchtrianglepark,nc;cloneticscorporation,walkersville,md),并且根据供应商说明书用商业可得的试剂(例如invitrogenlifetechnologies,carlsbad,ca)培养细胞。示例性的细胞类型包括但不限于,huvec细胞、b.end细胞、hepg2细胞、hep3b细胞和原代肝细胞。反义寡核苷酸的体外测试本文描述的是用反义寡核苷酸处理细胞的方法,这些方法可被适当修改以用于用其它反义化合物的处理。当细胞在培养中达到约60-80%融合时,细胞可用反义寡核苷酸处理。一种通常用于将反义寡核苷酸导入培养的细胞的试剂包括阳离子脂质转染试剂lipofectin(invitrogen,carlsbad,ca)。反义寡核苷酸可与lipofectin在opti-mem1(invitrogen,carlsbad,ca)中混合,以获得所需最终浓度的反义寡核苷酸和范围为每100nm反义寡核苷酸2至12ug/ml的lipofectin浓度。用于将反义寡核苷酸导入培养的细胞的其它试剂包括lipofectamine(invitrogen,carlsbad,ca)。反义寡核苷酸与lipofectamine在opti-mem1减血清培养基(invitrogen,carlsbad,ca)中混合,以获得所需浓度的反义寡核苷酸和范围为每100nm反义寡核苷酸2至12ug/ml的lipofectamine浓度。另一种用于将反义寡核苷酸导入培养的细胞的技术包括电穿孔。细胞通过常规方法用反义寡核苷酸处理。通常在反义寡核苷酸处理后16-24小时收获细胞,此时用本领域已知的和本文所述的方法测定靶核酸的rna或蛋白质水平。通常,以多份重复进行处理时,数据呈示为重复处理的平均值。采用的反义寡核苷酸的浓度因细胞系不同而变化。针对特定细胞系确定最佳反义寡核苷酸浓度的方法为本领域所熟知。当用lipofectamine转染时,通常在1nm至300nm的浓度范围内使用反义寡核苷酸。当用电穿孔转染时,通常在625至20,000nm的较高浓度范围内使用反义寡核苷酸。自由摄取测定在某些实施方案中,癌症细胞系中反义寡核苷酸的转染依赖性活性(即,自由摄取)是效能的量度。自由摄取可在癌症细胞系如,例如sk-br-3细胞、u251-mg细胞、mda-mb-231细胞、h460细胞、a431细胞、colo205细胞、snb-19细胞、sk-ov3细胞、h1993肺癌细胞、h358肺癌细胞、pc-9肺癌细胞、khm-35肺癌细胞、capan-1胰腺癌细胞、hpaf-11胰腺癌细胞和colo201结直肠癌细胞中测量。在自由摄取测定中,将反义寡核苷酸施用至细胞系,而不需要转染剂或电穿孔。将反义寡核苷酸以一个或多个剂量施用至细胞系且测量靶mrna或蛋白质表达的抑制百分比。当施用多个剂量时,可测量ic50。在某些实施方案中,展示高效能度的反义寡核苷酸(如通过单个剂量或多个剂量后的抑制百分比测量)比展示低效能度的反义寡核苷酸更被优先选择。展示高体外效能度的那些反义寡核苷酸更可能展示体内效能。rna分离对总细胞rna或poly(a)+mrna可以进行rna分析。rna分离的方法为本领域所熟知。使用本领域熟知的方法制备rna,例如,根据制造商推荐的操作规程使用trizol试剂(invitrogen,carlsbad,ca)进行。靶水平或表达的抑制的分析stat3核酸的水平或表达的抑制可本领域已知的多种方法进行测定。例如,靶核酸可以通过例如,northern印迹分析、竞争性聚合酶链反应(pcr)或定量实时pcr进行定量。可对总细胞rna或poly(a)+mrna进行rna分析。rna分离的方法为本领域所熟知。northern印迹分析也是本领域的常规方法。定量实时pcr可利用商业可得的abiprism7600、7700、或7900序列detectionsystem(得自pe-appliedbiosystems,fostercity,ca)方便地完成,并且根据制造商说明书而使用。靶rna水平的定量实时pcr分析靶rna水平的定量可根据制造商说明书通过利用abiprism7600、7700、或7900序列detectionsystem(pe-appliedbiosystems,fostercity,ca)的定量实时pcr来完成。定量实时pcr的方法为本领域所熟知。在实时pcr之前,分离的rna要进行逆转录酶(rt)反应,以产生随后可用作实时pcr扩增的底物的互补dna(cdna)。rt和实时pcr反应在相同的样本孔中顺序进行。rt和实时pcr的试剂可从invitrogen(carlsbad,ca)获得。rt实时pcr反应通过本领域技术人员熟知的方法进行。通过实时pcr获得的基因(或rna)目标量用如亲环蛋白a等表达恒定的基因的表达水平或通过用ribogreen(invitrogen,inc.carlsbad,ca)对总rna的定量来标准化。亲环蛋白a表达通过实时pcr、通过与靶同时运行、通过多路或分别进行定量。总rna使用ribogreenrna定量试剂(invetrogen,inc.eugene,or)来定量。在jones,l.j.等人,(analyticalbiochemistry,1998,265,368-374)中教导ribogreen定量rna的方法。cytofluor4000设备(peappliedbiosystems)用来测量ribogreen荧光。设计与stat3核酸杂交的探针和引物。用于设计实时pcr和引物的方法为本领域所熟知,且可包括使用软件如primerexpresssoftware(appliedbiosystems,fostercity,ca)。蛋白质水平的分析stat3核酸的反义抑制可以通过测量stat3蛋白质水平来评估。stat3的蛋白质水平可以用本领域熟知的多种方法来评价或定量,如免疫沉淀、western印迹分析(免疫印迹)、酶联免疫吸附测定(elisa)、定量蛋白质测定、蛋白活性测定(例如,胱天蛋白酶活性测定)、免疫组织化学、免疫细胞化学或荧光激活的细胞分选(facs)。针对靶的抗体可被识别并从如msrs抗体目录(aeriecorporation,birmingham,mi)等各种来源获得,或可以通过本领域熟知的常规单克隆或多克隆抗体生产技术来制备。对检测小鼠、大鼠、猴和人stat3有用的抗体是商业可得的。反义化合物的体内测试在动物体内测试了反义化合物例如反义寡核苷酸,以评估它们抑制stat3表达和产生表型变化如减少的细胞生长、与癌症相关的症状的改善、恶病质的减少和癌症标记物的减少的能力。测试可在正常动物中或在实验疾病模型中进行。对于向动物施用,反义寡核苷酸在药学上可接受的稀释剂,如磷酸盐缓冲盐水中配制。施用包括胃肠外施用途径,如腹膜内、静脉内、皮下、鞘内和脑室内。反义寡核苷酸剂量和给药频率的计算在本领域技术人员的技能之内,并取决于因素如施用途径和动物体重。在经过一段时间的反义寡核苷酸治疗后,从肝组织分离rna并测量stat3核酸表达的改变。也可以测量stat3蛋白质水平的改变。在某些实施方案中,使用异种移植肿瘤模型测量反义寡核苷酸对肿瘤生长和转移的影响。在本文所述的异种移植肿瘤模型中,将来自癌性细胞系的细胞接种到动物中。此类细胞系可包括,例如,人乳腺癌细胞、mda-mb-231、a431人表皮样癌、u251人神经胶质瘤肿瘤细胞和人nci-h460非小细胞肺癌细胞。本文所述的和用于本文所述的异种移植模型的某些化合物可靶向人stat3、小鼠stat3、大鼠stat3和/或猴子stat3。本文所述的和用于本文所述的异种移植模型的某些化合物可与一个或多个物种stat3交叉反应。在某些实施方案中,本文所述的和用于本文所述的异种移植模型的化合物可以是有效的肿瘤生长和肿瘤体积抑制剂,而不是数据表明其中内源性stat3未减少(由于缺少交叉反应性)。某些适应症在某些实施方案中,提供的是治疗个体的方法、化合物和组合物,包括施用一种或多种本文提供的药物组合物。在某些实施方案中,所述个体患有过度增殖性疾病。在某些实施方案中,所述过度增殖性疾病是癌症,例如,癌、肉瘤、淋巴瘤和白血病以及相关恶性肿瘤和转移。在某些实施方案中,所述癌症类型是肺癌、包括非小细胞肺癌(nsclc)、胰腺癌、结直肠癌、多发性骨髓瘤、肝细胞癌(hcc)、成胶质细胞瘤、卵巢癌、骨肉癌、头颈癌、乳腺癌、鳞状细胞癌、肠道腺瘤、前列腺癌和胃癌。在某些实施方案中,所述个体处于患过度增殖性疾病的风险,包括癌症,例如,癌、肉瘤、淋巴瘤和白血病以及相关恶性肿瘤和转移。这包括个体具有发展过度增殖性疾病的一个或多个危险因素,包括老龄化;烟草使用;暴露于阳光和电离辐射;与某些化学品接触;被某些病毒和细菌感染;某些激素治疗;遗传易感性;饮酒;和某些生活方式选择(包括不良饮食、缺乏身体活动、和/或体重超重)。在某些实施方案中,所述个体被鉴定为需要过度增殖性疾病的治疗。在某些实施方案中,提供了用于预防性降低个体的stat3表达的方法。某些实施方案包括通过向个体施用治疗有效量的靶向于stat3核酸的反义化合物而治疗需要其的个体。在某些实施方案中,利用本文所述的方法、化合物和组合物的治疗可用于防止与某些基因如stat3的上调相关的癌症在肿瘤骨表面向骨的转移。在某些实施方案中,利用本文所述的方法、化合物和组合物的方法可用于防止癌症向骨的转移。在某些实施方案中,利用本文所述的方法、化合物和组合物的治疗可用于防止肾细胞癌、乳腺癌、非小细胞肺癌和前列腺癌向骨转移。在一个实施方案中,治疗有效量的靶向于stat3核酸的反义化合物的施用伴随有监测个体血清中的stat3水平以确定个体对施用反义化合物的反应。由医师利用个体对施用反义化合物的反应以确定治疗性干预的量和持续时间。在某些实施方案中,靶向于stat3核酸的反义化合物的施用导致stat3表达降低至少15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或99%、或任意两个这些值所定义的范围。在某些实施方案中,靶向于stat3核酸的反义化合物的施用导致降低的细胞生长、降低的肿瘤生长、减少的肿瘤体积、与癌症相关的症状的改善和癌症标记物的减少。在某些实施方案中,stat3反义化合物的施用降低细胞生长、肿瘤生长和肿瘤体积至少15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或99%、或任意两个这些值所定义的范围。在某些实施方案中,包含靶向于stat3的反义化合物的药物组合物用于制备用于治疗罹患或易患过度增殖性疾病的患者的药剂。某些联合疗法在某些实施方案中,一种或多种本文提供的药物组合物与一种或多种其它药物试剂共施用。在某些实施方案中,此类一种或多种其它药物试剂被设计成治疗与一种或多种本文提供的药物组合物相同的疾病、病症或病况。在某些实施方案中,此类一种或多种其它药物试剂被设计成治疗与一种或多种本文提供的药物组合物不同的疾病、病症或病况。在某些实施方案中,此类一种或多种其它药物试剂被设计成治疗一种或多种本文提供的药物组合物的不希望的副作用。在某些实施方案中,一种或多种本文提供的药物组合物与另一种药物试剂共施用以治疗其它药物试剂的不希望的作用。在某些实施方案中,一种或多种本文提供的药物组合物与另一种药物试剂共施用以产生联合效应。在某些实施方案中,一种或多种本文提供的药物组合物与另一种药物试剂共施用以产生协同效应。在某些实施方案中,一种或多种本文提供的药物组合物和一种或多种其它药物试剂同时施用。在某些实施方案中,一种或多种本文提供的药物组合物和一种或多种其它药物试剂在不同时间施用。在某些实施方案中,一种或多种本文提供的药物组合物和一种或多种其它药物试剂一起制备成单一制剂。在某些实施方案中,一种或多种本文提供的药物组合物和一种或多种其它药物试剂分开制备。在某些实施方案中,一种或多种其它药物试剂包括全反式视黄酸、阿扎胞苷、硫唑嘌呤、博来霉素、卡铂、卡培他滨、顺铂、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、阿糖胞苷、柔红霉素、多西他赛、去氧氟尿苷、阿霉素、表柔比星、埃博霉素、依托泊苷、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、伊达比星、伊马替尼、双氯乙基甲胺、巯嘌呤、甲氨蝶呤、米托蒽醌、奥沙利铂、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、硫鸟嘌呤、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春地辛或长春瑞滨。在某些实施方案中,一种或多种其它药物试剂包括另一种反义寡核苷酸。在某些实施方案中,另一种反义寡核苷酸是第二stat3反义寡核苷酸。在某些实施方案中,一种或多种其它药物试剂包括分子靶向疗法。在某些实施方案中,分子靶向疗法是egfr抑制剂、mtor抑制剂、her2抑制剂、或vegf/vegfr抑制剂。在某些实施方案中,egfr抑制剂包括吉非替尼、埃罗替尼、拉帕替尼、西妥昔单抗、帕尼单抗(panitumumbo)。在某些实施方案中,mtor抑制剂包括依维莫司和西罗莫司脂化物(temsirolimus)。在某些实施方案中,her2抑制剂包括曲妥珠单抗和拉帕替尼。在某些实施方案中,vegf/vegfr抑制剂包括帕唑帕尼、贝伐珠单抗、舒尼替尼和索拉非尼。在某些实施方案中,一种或多种本文提供的药物组合物与放射疗法一起施用。在某些实施方案中,一种或多种药物组合物与放射疗法同时施用。在某些实施方案中,一种或多种药物组合物在放射疗法之前施用。在某些实施方案中,一种或多种药物组合物在放射疗法之后施用。在某些实施方案中,一种或多种药物组合物在放射疗法方案中于不同时间点施用。在某些实施方案中,放射疗法可用于抑制肿瘤生长。在某些实施方案中,放射疗法可用于增加总存活。在某些实施方案中,与施用一种或多种本文提供的药物结合使用的放射疗法优于使用单独的疗法,因为放射疗法和施用一种或多种药物两者均受限于以有限毒性实现有效的抗增殖反应。在某些实施方案中,医生设计包括放射疗法和施用一种或多种本文提供的药物组合物两者的治疗方案。在某些实施方案中,医生设计包括放射疗法、施用一种或多种本文提供的药物组合物和施用一种或多种其它化疗剂的治疗方案。耐受性在某些实施方案中,本文提供的化合物表现出最低的副作用。副作用包括通常与靶向stat3无关的对施用反义化合物的反应,如在动物中的炎症反应。在某些实施方案中化合物被动物很好地耐受。增加的耐受性可取决于若干因素,包括但不限于,反义化合物的核苷酸序列、核苷酸的化学修饰、反义化合物中未修饰的和修饰的核苷的特定基序、或其组合。耐受性由若干因素决定。此类因素包括体重、器官重量、肝功能、肾功能、血小板计数、白细胞计数。在某些实施方案中,本文提供的化合物表现出对器官重量的最低影响。在某些实施方案中,化合物表现出脾和/或肝重量的低于7倍、6倍、5倍、4倍、3倍、2倍或没有明显的增加。在某些实施方案中,本文提供的化合物表现出对肝功能的最低影响。用于评价肝功能的因素包括alt水平、ast水平、血浆胆红素水平和血浆白蛋白水平。在某些实施方案中本文提供的化合物表现出alt或ast的低于7倍、小于6倍、小于5倍、小于4倍、小于3倍或低于2倍或没有明显的增加。在某些实施方案中,本文提供的化合物表现出血浆胆红素水平的低于3倍、小于2倍或没有明显的增加。在某些实施方案中,本文提供的化合物表现出对肾功能的最低影响。在某些实施方案中,本文提供的化合物表现出血液尿素氮(bun)血浆浓度的低于3倍、小于2倍或没有明显的增加。在某些实施方案中,本文提供的化合物表现出尿蛋白与肌酐比值的低于6倍、5倍、4倍、3倍、2倍或没有明显的增加。在某些实施方案中,本文提供的化合物表现出对血液学因素的最低影响。在某些实施方案中,本文提供的化合物表现出血小板计数的低于60%、50%、40%、30%、20%、10%或5%的减少。在某些实施方案中,本文提供的化合物表现出单核细胞计数的低于4倍、小于3倍、小于2倍或没有明显的增加。在某些实施方案中,化合物进一步显示有利的药物动力学。在某些实施方案中,反义化合物在相关生物体液或组织中显示出相对高的半衰期。在某些实施方案中,化合物或组合物进一步显示有利的粘度。在某些实施方案中,化合物或组合物在165-185mg/ml的浓度时的粘度至多为40cp。在其它实施方案中,化合物显示上述特征的组合,并且在动物模型中高效地降低stat3mrna表达。实施例非限制性公开和通过引用并入尽管本文所述的某些化合物、组合物和方法已经依照某些实施方案进行了具体描述,但是下列实施例仅仅用于说明本文所述的化合物并且不旨在限制它们。本申请引用的每个参考文献通过引用以其整体并入本文。实施例1:对huvec细胞中人stat3的反义抑制设计了靶向人stat3核酸的反义寡核苷酸并且在体外测试它们对人stat3mrna表达的影响。表1和2中所示的嵌合反义寡核苷酸被设计为2-10-2cet缺口聚体或3-10-3cet缺口聚体。2-10-2cet缺口聚体为14个核苷酸长,其中中央缺口区段包含10个2’-脱氧核苷,且两边(在5’和3’方向)为各自包含两个核苷的翼。3-10-3cet缺口聚体为16个核苷长,其中中央缺口区段包含10个2’-脱氧核苷,且两边(在5’和3’方向)为各自包含三个核苷的翼。5’翼区段中的每个核苷和3’翼区段中的每个核苷具有cet糖修饰。遍及每个缺口聚体的核苷间连接是硫代磷酸(p=s)连接。每个缺口聚体中的所有胞嘧啶残基是5’-甲基胞嘧啶。cet缺口聚体的效能与isis337332、isis337333和isis345785相比较,它们为靶向人stat3的5-10-5moe缺口聚体并且进一步描述于uspn7,307,069((通过引用并入本文)中。以1,000nm反义寡核苷酸利用电穿孔转染以每孔20,000个细胞的密度培养的huvec细胞。在约24小时的治疗期之后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用人引物探针组rts199(正向序列acatgccactttggtgtttcataa,在本文命名为seqidno:6;反向序列tcttcgtagattgtgctgatagagaac,在本文命名为seqidno:7;探针序列cagtatagccgcttcctgcaagagtcgaa,在本文命名为seqidno:8)测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未治疗的对照细胞的stat3的抑制百分比。在相同条件下测试所有cet缺口聚体和moe缺口聚体。“人靶起始位点”指示人基因序列中靶向缺口聚体的最5’端核苷。“人靶终止位点”指示人基因序列中靶向缺口聚体的最3’端核苷。表1中所列的每个缺口聚体靶向于人stat3mrna,在本文命名为seqidno:1(genbank登录号nm_139276.2)。表2中所列的每个缺口聚体靶向于人stat3基因组序列,在本文命名为seqidno:2(从核苷酸4185000至4264000截短的genbank登录号nt_010755.14的互补序列)。表1靶向于seqidno:1的cet和moe嵌合反义寡核苷酸对人stat3mrna水平的抑制表2靶向于seqidno:2的cet和moe嵌合反义寡核苷酸对人stat3mrna水平的抑制实施例2:对b.end细胞中鼠stat3的反义抑制还测试在实施例1所述的研究中测试的反义寡核苷酸对b.end细胞中stat3mrna的影响。以7,000nm反义寡核苷酸利用电穿孔转染以每孔20,000个细胞的密度培养的b.end细胞。在约24小时的处理期间之后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用鼠引物探针组rts2381(正向序列gccacgttggtgtttcataatct,在本文命名为seqidno:465;反向序列gatagaggacattggactcttgca,在本文命名为seqidno:466;探针序列ttgggtgaaattgaccagcaatatagccg,在本文命名为seqidno:467)以测量rna。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。与stat3小鼠基因序列互补的某些序列显示b.end细胞中的良好抑制。结果在表3中表示为相对于未治疗的对照细胞的stat3的抑制百分比。将表3中的人寡核苷酸与小鼠stat-3基因组序列相比较,在本文命名为seqidno:3(从核苷酸12286001至12344000截短的genbank登录号nt_165773.2的互补序列)。“小鼠靶起始位点”指示鼠序列中靶向缺口聚体的最5’端核苷酸。“小鼠靶终止位点”指示鼠序列中靶向缺口聚体的最3’端核苷酸。表3与seqidno:1和seqidno:3互补的某些cet嵌合反义寡核苷酸对人stat3mrna水平的抑制实施例3:靶向stat3的反义寡核苷酸在balb/c小鼠中的耐受性进一步测试40个显示高效能水平的反义寡核苷酸(选自实施例1中评价的452种化合物)的体内耐受性。按组向每组2-4只的雄性balb/c小鼠皮下注射25mg/kg的isis反义寡核苷酸,一周两次,持续3周。一组4只雄性balb/c小鼠用pbs皮下注射,一周两次,持续3周。这组小鼠用作对照组,将其与处理组相比较。最后一次给药后一天,称取体重,对小鼠施以安乐死,并且收集器官和血浆用于进一步分析。在给药前和在治疗期结束时测量小鼠的体重。计算相比于初始体重的增长百分比。在研究结束时测量肝、脾和肾重量并且将其与pbs处理的小鼠相比较。为了评价isis寡核苷酸对代谢功能的影响,利用自动化临床化学分析仪(hitachiolympusau400e,melville,ny)测量转氨酶和bun的血浆浓度。测量alt(丙氨酸转氨酶)、ast(天冬氨酸转氨酶)和bun的血浆浓度。所测试的40个反义寡核苷酸中,某些反义寡核苷酸(包括isis481374、isis481390、isis481420、isis481431、isis481453、isis481464、isis481475、isis481495、isis481500、isis481501、isis481525、isis481548、isis481549、isis481597、isis481695、isis481700、isis481702、isis481710、isis481725、isis481750和isis481763)满足体重、器官重量、alt、ast和bun参数的耐受性阈值。实施例4:对huvec细胞中人stat3的剂量依赖性反义抑制在huvec细胞中以不同剂量测试来自实施例1和2的显示对stat3的显著体外抑制的缺口聚体。细胞以每孔20,000个细胞的密度铺板且以31.25nm、62.5nm、125nm、250nm、500nm和1,0000nm浓度的反义寡核苷酸利用电穿孔转染,如表4中详细说明。在约16小时的处理期后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用人stat3引物探针组rts199(正向序列acatgccactttggtgtttcataa,在本文命名为seqidno:6;反向序列tcttcgtagattgtgctgatagagaac,在本文命名为seqidno:7;探针序列cagtatagccgcttcctgcaagagtcgaa,在本文命名为seqidno:8)测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表4中,并且通过将所用的寡核苷酸浓度对在每种浓度下实现的stat3mrna表达的抑制百分比进行作图以及记录相比于对照实现stat3mrna表达的50%抑制的寡核苷酸浓度来计算。如在表4中所示,反义寡核苷酸处理的细胞中stat3mrna水平以剂量依赖性方式显著降低。表4利用电穿孔对huvec细胞中人stat3的剂量依赖性反义抑制实施例5:在sk-br-3细胞中自由摄取反义寡核苷酸后对stat3的剂量依赖性反义抑制在sk-br-3细胞中以不同剂量测试来自实施例4的缺口聚体。细胞以每孔4,000个细胞的密度铺板。以0.02μm、0.1μm、0.5μm、1μm、2.5μm和10μm浓度的反义寡核苷酸孵育细胞,如表5中详细说明。约24小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用如上所述的人stat3引物探针组rts199测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表5中。如表5所示,大多数isis寡核苷酸能够穿透细胞膜,且反义寡核苷酸处理的细胞中stat3mrna水平以剂量依赖性方式显著降低。表5通过sk-br-3细胞自由摄取isis寡核苷酸对人stat3的剂量依赖性反义抑制isisno0.02μm0.1μm0.5μm1μm2.5μm10μmic50(μm)4813741018181682515.9481390010111240723.24814531413274558791.34814642332577085930.548147500354972881.048150079264549751.7481501004553652.7481523924566783920.5481525017131532684.44815490001633548.2481597101114224410.648171050101327666.04817252945473939632.64817501924364271801.14817633038516381890.64817681253425323512.4实施例6:在u251-mg细胞中自由摄取反义寡核苷酸后对stat3的剂量依赖性反义抑制在u251-mg细胞中以不同剂量进一步测试来自实施例5的缺口聚体。细胞以每孔4,000个细胞的密度铺板。以0.02μm、0.1μm、0.5μm、1μm、2.5μm和10μm浓度的反义寡核苷酸孵育细胞,如表6中详细说明。约24小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用如上所述的人stat3引物探针组rts199测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表6中。如表6所示,大多数isis寡核苷酸能够穿透细胞膜并且反义寡核苷酸处理的细胞中stat3mrna水平以剂量依赖性方式显著降低。表6通过u251-mg细胞自由摄取isis寡核苷酸对stat3mrna水平的剂量依赖性反义抑制实施例7:在u251-mg细胞中自由摄取反义寡核苷酸后对stat3的剂量依赖性反义抑制在u251-mg细胞中以不同剂量进一步测试来自上述研究的isis481464和isis481549。细胞以每孔4,000个细胞的密度铺板。以0.1μm、1μm、5μm、10μm和20μm浓度的反义寡核苷酸孵育细胞,如表7中详细说明。约24小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用如上所述的人stat3引物探针组rts199测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表7中。如7表所示,两个isis寡核苷酸能够穿透细胞膜。表7通过u251-mg细胞自由摄取isis寡核苷酸对stat3mrna水平的剂量依赖性反义抑制isisno0.1μm1μm5μm10μm20μmic50(μm)4814640306980792.348154900263538>20实施例8:在mda-mb-231细胞中自由摄取反义寡核苷酸后对stat3的剂量依赖性反义抑制在mda-mb-231细胞中以不同剂量进一步测试isis481464和isis481549。细胞以每孔4,000个细胞的密度铺板。以0.02μm、0.2μm、1.0μm、5.0μm和10.0μm浓度的反义寡核苷酸孵育细胞,如表8中详细说明。约24小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用如上所述的人stat3引物探针组rts199测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表8中。如表8所示,两个isis寡核苷酸能够穿透细胞膜并且以剂量依赖性方式显著降低stat3mrna水平。表8通过mda-mb-231细胞自由摄取isis寡核苷酸对stat3mrna水平的剂量依赖性反义抑制实施例9:在a431细胞中自由摄取反义寡核苷酸后对stat3的剂量依赖性反义抑制在a431细胞中以不同剂量进一步测试isis481464和isis481549。细胞以每孔4,000个细胞的密度铺板。以0.02μm、0.2μm、1.0μm、5.0μm和10.0μm浓度的反义寡核苷酸孵育细胞,如表9中详细说明。约24小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用如上所述的人stat3引物探针组rts199测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表9中。如表9所示,两个isis寡核苷酸能够穿透细胞膜并且以剂量依赖性方式显著降低stat3mrna水平。表9通过a431细胞自由摄取isis寡核苷酸对stat3mrna水平的剂量依赖性反义抑制实施例10:在h460细胞中自由摄取反义寡核苷酸后对stat3的剂量依赖性反义抑制在h460细胞中以不同剂量进一步测试isis481464和isis481549。细胞以每孔4,000个细胞的密度铺板。以0.02μm、0.2μm、1.0μm、5.0μm和10.0μm浓度的反义寡核苷酸孵育细胞,如表10中详细说明。约24小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用如上所述的人stat3引物探针组rts199测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表10中。如表10所示,两个isis寡核苷酸能够穿透细胞膜并且以剂量依赖性方式显著降低stat3mrna水平。表10通过h460细胞自由摄取isis寡核苷酸对stat3mrna水平的剂量依赖性反义抑制实施例11:对huvec细胞中人stat3的反义抑制设计了靶向人stat3核酸的反义寡核苷酸并且在体外测试它们对人stat3mrna表达的影响。利用电穿孔以1,000nm反义寡核苷酸转染以每孔20,000个细胞的密度培养的huvec细胞。在约24小时的处理期之后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用人引物探针组rts199(正向序列acatgccactttggtgtttcataa,在本文命名为seqidno:6;反向序列tcttcgtagattgtgctgatagagaac,在本文命名为seqidno:7;探针序列cagtatagccgcttcctgcaagagtcgaa,在本文命名为seqidno:8)测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。表11中的嵌合反义寡核苷酸被设计为3-10-3moe、脱氧和cet缺口聚体。缺口聚体为16个核苷酸长,其中中央缺口区段由10个2’-脱氧核苷构成,且两边(在5’和3’方向)为各自包含三个核苷的翼。5’翼区段中的每个核苷具有2’-moe糖修饰。3’翼区段中的每个核苷具有cet糖修饰。每个缺口聚体中的核苷间连接是硫代磷酸(p=s)连接。每个缺口聚体中的所有胞嘧啶残基是5’-甲基胞嘧啶。表11的化学列呈示每个缺口聚体的糖基序,其中‘e’指示2’-moe核苷,‘k’指示受约束的乙基(cet)核苷,且‘d’指示2’-脱氧核苷。“人靶起始位点”指示人基因序列中靶向缺口聚体的最5’端核苷。“人靶终止位点”指示人基因序列中靶向缺口聚体的最3’端核苷。表11中所列的每个缺口聚体靶向于人stat3mrna,在本文命名为seqidno:1(genbank登录号nm_139276.2)。表11靶向于seqidno:1的嵌合反义寡核苷酸对人stat3mrna水平的抑制实施例12:对huvec细胞中人stat3的剂量依赖性反义抑制在huvec细胞中以不同剂量测试来自上面实施例11中所述的研究的显示对stat3的显著体外抑制的缺口聚体。细胞以每孔20,000个细胞的密度铺板并且以23.4375nm、93.75nm、375.0nm和1,500.0nm浓度的反义寡核苷酸利用电穿孔转染,如表12中详细说明。在约16小时的处理期后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用如上所述的人stat3引物探针组rts199测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表12中,并且通过将所用的寡核苷酸浓度对在每种浓度下实现的stat3mrna表达的抑制百分比进行作图以及记录相比于对照实现stat3mrna表达的50%抑制的寡核苷酸浓度来计算。如表12所示,反义寡核苷酸处理的细胞中stat3mrna水平以剂量依赖性方式显著降低。表12对huvec细胞中人stat3的剂量依赖性反义抑制实施例13:对huvec细胞中人stat3的反义抑制设计了靶向人stat3核酸的反义寡核苷酸并且在体外测试它们对人stat3mrna表达的影响。表13和14中的嵌合反义寡核苷酸为具有各种化学修饰的16或17个核苷酸长的缺口聚体。每个缺口聚体包含由9个或10个2’-脱氧核苷组成的中央缺口区段,且两边(在5’和3’方向)为各自包含1、2、3、4或5个核苷酸的翼。翼中的每个核苷酸包含2’-moe糖修饰或cet糖修饰。缺口聚体基序包括3-10-3、4-9-3、2-10-4、1-10-5和3-10-4。表13和14的化学列提供每个缺口聚体的糖基序,其中‘e’指示2’-moe核苷,‘k’指示受约束的乙基(cet)核苷,且‘d’指示2’-脱氧核苷。每个缺口聚体中的核苷间连接是硫代磷酸(p=s)连接。每个缺口聚体中的所有胞嘧啶残基是5’-甲基胞嘧啶。将嵌合反义寡核苷酸的效能与isis481464、isis518344和isis518349(在本文之前描述)相比较。以1,000nm反义寡核苷酸利用电穿孔转染以每孔20,000个细胞的密度培养的huvec细胞。在约24小时的处理期之后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用上文所述的人引物探针组rts199测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。“人靶起始位点”指示人基因序列中靶向缺口聚体的最5’端核苷。“人靶终止位点”指示人基因序列中靶向缺口聚体的最3’端核苷。表13中的每个缺口聚体靶向于人stat3mrna,在本文命名为seqidno:1(genbank登录号nm_139276.2)。表14中的每个缺口聚体靶向于人stat3基因组序列,在本文命名为seqidno:2(从核苷酸4185000至4264000截短的genbank登录号nt_010755.14的互补序列)。表13靶向于seqidno:1的嵌合反义寡核苷酸对人stat3mrna水平的抑制表14靶向于seqidno:2的嵌合反义寡核苷酸对人stat3mrna水平的抑制实施例14:对huvec细胞中人stat3的剂量依赖性反义抑制在huvec细胞中以不同剂量测试来自实施例13中所述的研究的显示对stat3的显著体外抑制缺口聚体。细胞以每孔20,000个细胞的密度铺板并且以39.1nm、156.3nm、625.0nm和2,500.0nm浓度的反义寡核苷酸利用电穿孔转染,如表15中详细说明。在约16小时的处理期后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用如上所述的人stat3引物探针组rts199测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表15中。如表15所示,反义寡核苷酸处理的细胞中stat3mrna水平以剂量依赖性方式显著降低。表15对huvec细胞中人stat3的剂量依赖性反义抑制实施例15:对huvec细胞中人stat3的反义抑制设计靶向stat3核酸的附加的反义寡核苷酸并且在体外测试其对stat3mrna的影响。以1,000nm反义寡核苷酸利用电穿孔转染以每孔20,000个细胞的密度培养的huvec细胞。在约24小时的处理期之后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用上文所述的人引物探针组rts199测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。表16中的嵌合反义寡核苷酸是3-10-3脱氧、moe和cet缺口聚体或3-10-4脱氧、moe和cet缺口聚体。3-10-3缺口聚体为16个核苷长,其中中央缺口区段包含10个2’-脱氧核苷且两边(在5’和3’方向)为各自包含3个核苷的翼。3-10-4缺口聚体为17个核苷长,其中中央缺口区段包含10个2’-脱氧核苷且在5’方向的两侧为包含3个核苷的翼,而在3’方向的两侧为包含4个核苷的翼。每个缺口聚体中的核苷间连接是硫代磷酸(p=s)连接。每个缺口聚体中的所有胞嘧啶残基是5’-甲基胞嘧啶。表16的化学列表示每个缺口聚体的糖基序,其中‘e’指示2’-moe核苷,‘k’指示受约束的乙基(cet)核苷,且‘d’指示2’-脱氧核苷。“人靶起始位点”指示人基因序列中靶向缺口聚体的最5’端核苷。“人靶终止位点”指示人基因序列中靶向缺口聚体的最3’端核苷。表16中所列的每个缺口聚体靶向于人stat3mrna,在本文命名为seqidno:1(genbank登录号nm_139276.2)。表17中所列的每个缺口聚体靶向于人stat3基因组序列,在本文命名为seqidno:2(从核苷酸4185000至4264000截短的genbank登录号nt_010755.14的互补序列)。表16靶向于seqidno:1的嵌合反义寡核苷酸对人stat3mrna水平的抑制表17靶向于seqidno:2的嵌合反义寡核苷酸对人stat3mrna水平的抑制实施例16:对huvec细胞中人stat3的剂量依赖性反义抑制在huvec细胞中以不同剂量测试来自实施例15中所述的研究的显示对stat3的显著体外抑制的缺口聚体。细胞以每孔20,000个细胞的密度铺板并且以39.1nm、156.3nm、625.0nm和2,500.0nm浓度的反义寡核苷酸利用电穿孔转染,如表18中详细说明。在约16小时的处理期后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用如上所述的人stat3引物探针组rts199测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表18中。如表18所示,反义寡核苷酸处理的细胞中stat3mrna水平以剂量依赖性方式显著降低。表18对huvec细胞中人stat3的剂量依赖性反义抑制实施例17:靶向stat3的isis反义寡核苷酸在处理mda-mb-231人乳腺癌异种移植模型中的效应isis481464和isis481549用处理接种有人乳腺癌细胞mda-mb-231的balb/c裸小鼠。isis481549与小鼠序列可交叉反应的(即,与小鼠序列杂交)。评价肿瘤生长和寡核苷酸在小鼠中的耐受性。处理在pharmaroninc(beijing,p.r.china)进行研究。balb/c裸小鼠获自beijinghfkbio-technologyco.,ltd。mda-mb-231人乳腺癌细胞在体外保持为在补充有10%热灭活胎牛血清、100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素和2mml-谷氨酰胺的leibovitz’sl-15培养基中的单层培养物。将细胞保持在37℃、5%co2于空气中的气氛下。每周两次用胰蛋白酶-edta处理常规地继代培养肿瘤细胞。收集在指数生长期生长的细胞并且对肿瘤接种进行计数。三组八只随机分配的6-8周龄雌性balb/c裸小鼠各自在右肋接种mda-mb-231肿瘤片段(3mmx2mmx2mm,其从肿瘤接种通道产生)用于肿瘤发展。当平均肿瘤大小达到约100mm3时,反义寡核苷酸处理在肿瘤接种后第11天开始。两个组用25mg/kg的isis481464或isis481549腹膜内注射,一周两次,持续3周。小鼠对照组用pbs腹膜内注射,一周两次,持续3周。关于动物起卸、护理和处理的所有程序根据由institutionalanimalcareandusecommittee(iacuc)批准的指南进行。定期检查动物的肿瘤生长对正常行为如运动、食物消耗、体重变化和任何其它异常效应的任何影响。rna分析从肿瘤组织提取rna,以用于使用上文所述的引物探针组rts199对人stat3mrna水平进行实时pcr分析。也使用引物探针组mstat3_lts00664(正向序列cgacagcttccccatgga,在本文命名为seqidno:1513;反向序列atgcccagtcttgactctcaatc,在本文命名为seqidno:1514;探针序列ctgcggcagttcctggcacctt,在本文命名为seqidno:1515)测量鼠stat3mrna水平。结果表示为针对亲环蛋白标准化的相对于pbs对照的stat3的抑制百分比。如表19所示,用靶向stat3的isis反义寡核苷酸处理导致人和鼠stat3mrna两者相比于pbs对照的降低。表19在mda-mb-231异种移植模型中处理组的stat3mrna相对于pbs对照的抑制百分比对肿瘤生长的影响每周两次使用卡尺在两个方向测量肿瘤大小。肿瘤体积用下式评价:v=0.536xaxb2,其中a和b分别为肿瘤的长径和短径。利用肿瘤大小来计算t-c和tv/cv值。计算t-c,其中t作为处理组中的肿瘤达到预定大小(900mm3)所需的中位时间(以天计),而c作为对照组中的肿瘤达到相同大小所需的中位时间(以天计)。tv/cv值(以百分比表示)是isis寡核苷酸的抗肿瘤有效性的指示,其中tv和cv分别为在指定天(第32天)时处理组和对照组的平均体积。结果呈示于表20和21中。数据指示用isis481464和isis481549的处理显著阻碍肿瘤生长。表20在mda-mb-231异种移植模型中stat3的反义抑制对肿瘤生长的影响表21在mda-mb-231异种移植模型中stat3的反义抑制对肿瘤生长抑制的影响体重测量为了评价isis寡核苷酸对动物整体健康的影响,在处理期内定期测量体重。数据呈示于表22中并且指示用isis481464或isis481549的处理不会导致显著的体重增加或减轻。表22在mda-mb-231异种移植模型中小鼠的体重测量实施例18:靶向stat3的isis反义寡核苷酸在处理a431人表皮样癌异种移植模型中的效应用isis481464和isis481549处理接种有人表皮癌细胞a431的balb/c裸小鼠。isis481549与小鼠序列可交叉反应的(即,与小鼠序列杂交)。评价处理对小鼠中的肿瘤生长和耐受性的影响。处理在pharmaroninc(beijing,p.r.china)进行研究。balb/c裸小鼠获自beijinghfkbio-technologyco.,ltd。a431人表皮样癌细胞在体外保持为在补充有10%热灭活胎牛血清、100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素和2mml-谷氨酰胺的dmem培养基中的单层培养物。将细胞保持在37℃、5%co2于空气中的气氛下。每周两次用胰蛋白酶-edta处理常规地继代培养肿瘤细胞。收集在指数生长期生长的细胞并且对肿瘤接种进行计数。三组八只随机分配的6-8周龄雌性balb/c裸小鼠各自皮下接种5x106个a431肿瘤细胞用于肿瘤发展。当平均肿瘤大小达到约95mm3时,反义寡核苷酸处理在肿瘤接种后第8天开始。两个组用25mg/kg的isis481464或isis481549腹膜内注射,一周两次,持续4周。小鼠对照组用pbs腹膜内注射,一周两次,持续4周。关于动物起卸、护理和处理的所有程序根据由institutionalanimalcareandusecommittee(iacuc)批准的指南进行。在日常监控的时间检查动物的肿瘤生长对正常行为如运动、食物消耗、体重变化和任何其它异常效应的任何影响。rna分析从肿瘤组织提取rna,以用于使用上文所述的引物探针组rts199对人stat3mrna水平进行实时pcr分析。也使用上文所述的引物探针组mstat3_lts00664测量鼠stat3mrna水平。结果表示为针对亲环蛋白标准化的相对于pbs对照的stat3的抑制百分比。如表23所示,用isis反义寡核苷酸处理导致人和鼠stat3mrna两者相比于pbs对照的降低。表23在a431异种移植模型中处理组的stat3mrna相对于pbs对照的抑制蛋白质分析提取来自肿瘤裂解物的蛋白质,用于以stat3单克隆抗体(cellsignalingtechnology,cat#9135)对人stat3蛋白水平进行western分析。结果表示为针对管家蛋白cox-ii标准化的相对于pbs对照的stat3的抑制百分比。如表24中所示,用isis反义寡核苷酸处理导致stat3蛋白水平相比于pbs对照的降低。表24a431异种移植模型中处理组的stat3蛋白水平相对于pbs对照的抑制isisno降低%4814649948154922对肿瘤生长的影响每周两次使用卡尺在两个方向测量肿瘤大小。肿瘤体积用下式评价:v=0.536xaxb2,其中a和b分别为肿瘤的长径和短径。利用肿瘤大小来计算t-c和tv/cv值。计算t-c,其中t作为处理组中的肿瘤达到预定大小(800mm3)所需的中位时间(以天计),而c作为对照组中的肿瘤达到相同大小所需的中位时间(以天计)。tv/cv值(以百分比表示)是isis寡核苷酸的抗肿瘤有效性的指示,其中tv和cv分别为在指定天(第33天)时处理组和对照组的平均体积。结果呈示于表25和26中。数据指示用isis481464或isis481549的处理显著阻碍肿瘤生长。表25在a431异种移植模型中stat3的反义抑制对肿瘤生长的影响表26在a431异种移植模型中stat3的反义抑制对肿瘤生长抑制的影响体重测量为了评价isis寡核苷酸对动物整体健康的影响,在处理期内定期测量体重。数据呈示于表27中并且指示用isis481464或isis481549的处理不影响小鼠的整体健康。表27a431异种移植模型中小鼠的体重测量实施例19:靶向stat3的isis反义寡核苷酸在处理nci-h460人非小细胞肺癌(nsclc)异种移植模型中的效应用isis491464(靶向人stat3)和isis481549(靶向人和鼠stat3)处理接种有人nci-h460人nsclc的balb/c裸小鼠。评价处理对小鼠中的肿瘤生长和耐受性的影响。处理在pharmaroninc(beijing,p.r.china)进行研究。balb/c裸小鼠获自beijinghfkbio-technologyco.,ltd。nci-h460人nsclc细胞在体外保持为在补充有10%热灭活胎牛血清、100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素和2mml-谷氨酰胺的rpmi-1640培养基中的单层培养物。将细胞保持在37℃、5%co2于空气中的气氛下。每周两次用胰蛋白酶-edta处理常规地继代培养肿瘤细胞。收集在指数生长期生长的细胞并且对肿瘤接种进行计数。三组八只随机分配的6-8周龄雌性balb/c裸小鼠各自皮下接种2x106个nci-h460肿瘤细胞用于肿瘤发展。当平均肿瘤大小达到约100mm3时,反义寡核苷酸处理在肿瘤接种后第6天开始。两个组用25mg/kg的isis481464或isis481549腹膜内注射,一周两次,持续3周。第三组小鼠用pbs腹膜内注射,一周两次,持续3周,并且用作对照组。关于动物起卸、护理和处理的所有程序根据由institutionalanimalcareandusecommittee(iacuc)批准的指南进行。在日常监控的时间检查动物的肿瘤生长对正常行为如运动、食物消耗、体重变化和任何其它异常效应的任何影响。rna分析从肿瘤组织提取rna,以用于使用上文所述的引物探针组rts199对人stat3mrna水平进行实时pcr分析。也使用上文所述的引物探针组mstat3_lts00664测量鼠stat3mrna水平。结果表示为针对亲环蛋白标准化的相对于pbs对照的stat3的抑制百分比。如表28所示,用isis反义寡核苷酸处理导致人和鼠stat3mrna两者相比于pbs对照的降低。表28在nci-h460异种移植模型中处理组的stat3mrna相对于pbs对照的抑制对肿瘤生长的影响每周两次使用卡尺在两个方向测量肿瘤大小。肿瘤体积用下式评价:v=0.536xaxb2,其中a和b分别为肿瘤的长径和短径。利用肿瘤大小来计算t-c和tv/cv值。计算t-c,其中t作为处理组中的肿瘤达到预定大小(1,500mm3)所需的中位时间(以天计),而c作为对照组中的肿瘤达到相同大小所需的中位时间(以天计)。tv/cv值(以百分比表示)是isis寡核苷酸的抗肿瘤有效性的指示,其中tv和cv分别为在指定天(第20天)时处理组和对照组的平均体积。结果呈示于表29和30中。数据指示用isis481464或isis481549的处理显著阻碍肿瘤生长。表29在nci-h460异种移植模型中stat3的反义抑制对肿瘤生长的影响表30在nci-h460异种移植模型中stat3的反义抑制对肿瘤生长抑制的影响体重测量为了评价isis寡核苷酸对动物整体健康的影响,在处理期内定期测量体重。数据呈示于表31中并且指示用isis481464或isis481549的处理不影响小鼠的整体健康。表31nci-h460异种移植模型中小鼠的体重测量实施例20:人stat3的反义抑制在人成胶质细胞瘤原位小鼠模型中的效应用isis455291(具有cagcagatcaagtccaggga序列(seqidno:1590)的5-10-5moe缺口聚体)处理原位移植有人成胶质细胞瘤细胞的nu/j小鼠。评价处理对小鼠中的肿瘤生长和耐受性的影响。处理30只nu/j小鼠在右额叶中立体定向移植有5x105个u-87mg-luc2细胞。在肿瘤细胞移植后第15天,用溶于2μlpbs中的100μgisis455291在肿瘤移植位点以一次性注射对这些小鼠中的15只颅内给药。用2μlpbs在肿瘤移植位点以一次性注射对剩余的15只小鼠颅内给药。第二组的小鼠用作对照组。分析肿瘤移植后第18天,通过co2吸入对每个组的五只小鼠施以安乐死并且收集脑样品用于rna分析。从肿瘤组织提取rna,用于使用上文所述的引物探针组rts199对人stat3mrna水平进行实时pcr分析。用isis455291处理导致肿瘤组织中的人stat3mrna相比于pbs对照的27%降低。定期监控每个组中的剩余小鼠至多2周用于存活分析。pbs对照组的中位存活为30.5天。isis寡核苷酸处理的小鼠的中位存活为35天。p值为0.2088。实施例21:用isis481549的处理在apc/min+小鼠中的效应评价在apc/min+小鼠模型中用isis481549的处理对stat3mrna水平和肠道腺瘤数的影响。apc/min+小鼠品系在早期于整个肠道中易患自发性肠道腺瘤形成(mosera.r.等人,science1990.247:322-324)。处理两组4只雄性九周龄apc/min+小鼠皮下注射5mg/kg或25mg/kg的isis481549,每周施用五次(分别为25mg/kg和125mg/kg的每周总剂量),持续4周。一组4只雄性九周龄apc/min+小鼠皮下注射50mg/kg对照寡核苷酸isis141923,每周施用五次(250mg/kg的每周总剂量),持续4周。4只雄性九周龄apc/min+小鼠的对照组皮下注射pbs,每周施用五次,持续4周。最后一次注射后48小时,用异氟醚施以安乐死,然后劲椎脱位。除去结肠和肠道,彼此分离,并洗净。切除约5cm上肠道,并在含有1%2-巯基乙醇(rlt-bme)的2.5mlrlt缓冲(qiagen)中匀质化,且置于干冰中。将结肠切成两半,并将近端一半组织在2.5mlrlt-bme中匀质化,且置于干冰中。切除一小片肝(0.2g),并在rlt-bme匀质化,且置于干冰中。rna分析根据制造商方案使用purelinktmtotalrna纯化试剂盒(invitrogen;#12173-011a)从组织分离rna。根据制造商方案使用steponeplus系统(appliedbiosystems)进行rt-pcr。使用鼠引物探针组mstat3_lts000664(正向引物cgacagcttccccatgga,在本文命名为seqidno:1513;反向引物atgcccagtcttgactctcaatc,在本文命名为seqidno:1514;探针ctgcggcagttcctggcacctt,在本文命名为seqidno:1515)来测量stat3mrna水平。管家基因亲环蛋白的mrna水平用引物探针组mcyclo_24(正向引物tcgccgcttgctgca,在本文命名为seqidno:1516;反向引物atcggccgtgatgtcga,在本文命名为seqidno:1517;探针ccatggtcaaccccaccgtgttc,在本文命名为seqidno:1518)测量并且其用于标准化stat3mrna水平。用isis481549的处理导致肝(在肝中以25mg/kg/周和125mg/kg/周给药)、小肠和结肠中的stat3mrna表达相比于pbs对照的统计学显著的降低(表32)。使用student’s双尾t检验确定处理组和对照组之间的显著差异(p<0.05)。表32apc/min+小鼠中stat3mrna表达水平的抑制百分比处理(mg/kg/周)肝小肠结肠isis141923(250)000isis481549(125)987382isis481549(25)794132腺瘤数分析进行小肠的组织学分析以通过显微镜评价腺瘤数。以125mg/kg/周用isis481549的处理导致肿瘤数相比于pbs对照的统计学显著的减少(表33)。使用student’s双尾t检验确定处理组和对照组之间的显著差异(p<0.05)。表33apc/min+小鼠中的腺瘤计数实施例22:靶向stat3的反义寡核苷酸在处理pc-9nsclc异种移植模型中的效应接种有人非小细胞肺癌细胞系pc-9的balb/c裸小鼠(charlesriver)用isis481549和isis481464处理。评价小鼠中的肿瘤生长和stat3靶减少。处理六至八周龄雌性balb/c裸小鼠皮下接种7x106个pc-9人nsclc细胞。选择显示150-200mm3的平均肿瘤体积的小鼠并随机分成不同的处理组。两组7只小鼠皮下注射25mg/kg的isis481549或isis481464,每周施用五次(125mg/kg的每周总剂量),持续6周。一组7小鼠皮下注射25mg/kg的isis347526(tcttatgtttccgaaccgtt,非已知的鼠或人靶,在本文命名为seqidno:1519),每周施用五次(125mg/kg的每周总剂量),持续6周。对小鼠施以安乐死前24小时给予反义寡核苷酸的最终剂量。rna分析收集肿瘤并根据制造商方案使用qiagenrnaeasyminikit(#74106)分离rna。用人stat3引物探针组rts2033(正向引物gaggcccgcccaaca,在本文命名为seqidno:1520;反向引物ttctgctaatgacgttatccagtttt,在本文命名为seqidno:1521;探针ctgcctagatcggc,在本文命名为seqidno:1522)使用abisteponeplusrt-pcr仪器测量stat3mrna水平。用人引物探针组(正向引物gaaggtgaaggtcggagtc,在本文命名为seqidno:1523;反向引物gaagatggtgatgggatttc,在本文命名为seqidno:1524;探针caagcttcccgttctcagcc,在本文命名为seqidno:1525)管家基因gapdh的mrna水平并且其用于标准化rna水平。结果呈示于表34中并且指示反义寡核苷酸降低stat3mrna水平。表34在nsclc异种移植模型中stat3mrna表达水平相比于aso对照的抑制百分比处理(mg/kg)抑制%isis481464(25)40isis481549(25)22肿瘤生长分析在研究期间内定期测量肿瘤。使用下式计算肿瘤生长抑制(tgi):tgi=[1-(stat3aso组的x(最终))-stat3aso组的x(第1天)]/(对照aso组的x(最终)-对照aso组的x(第1天))]x100%,其中x=平均肿瘤体积。使用anova统计检验评价处理组与对照组的差异。结果呈示于表35中。数据指示肿瘤生长受isis481464显著抑制,第52天时tgi为97%。用isis481549的处理抑制pc-9肿瘤生长达78%。表35nsclc异种移植模型中的肿瘤生长测量体重分析在研究期间内定期测量体重。结果呈示于表36中并且指示处理组的体重相比于对照组无显著变化。表36nsclc异种移植模型中的体重测量天数10131820252831343842454852isis48146418.6519.4418.9819.6619.4019.4519.8920.2619.8620.3120.1320.0320.11isis48154918.1319.0618.6519.3019.3119.3619.2319.1818.2817.2116.4915.4815.01isis34752618.3419.2919.0519.6519.6319.9820.0820.6919.9020.1920.2520.0920.19实施例23:isis481464在处理lg-476nsclc异种移植模型中的效应免疫缺陷性nod.cg-prkdcscidil2rgtm1wjl/szj小鼠(nsg;jax#5557)接种有人非小细胞肺癌细胞系lg-476(jacksonlaboratory)并且用isis481464处理。评价小鼠中的肿瘤生长和stat3靶减少。处理四至六周龄雌性nsg小鼠皮下接种lg-476人nsclc细胞并每周三次监控其临床观察、体重和肿瘤体积。一旦肿瘤达到1,000mm3,就收集肿瘤并对其破碎。将测量为3-5mm3的肿瘤碎片皮下移植到30nsg小鼠的右后侧面。每周监控小鼠三次。当个体肿瘤达到200-250mm3的体积时,将小鼠随机分配成2组并注射25mg/kg的isis481464或pbs,每周施用5次(125mg/kg的周剂量),持续3周。最后一次给药后24小时收集肿瘤。rna分析用人特异性引物探针组rts2033使用abisteponeplusrt-pcr仪器制备来自肿瘤的裂解物。用人特异性引物探针组(正向引物gacggcgagcccttgg,在本文命名为seqidno:1526;反向引物tgctgtctttgggaccttgtc,在本文命名为seqidno:1527;探针ccgcgtctcctttgagctgtttgc,在本文命名为seqidno:1528)测量管家基因亲环蛋白的mrna水平。使用student’s双尾t检验确定处理组和对照组之间的显著差异(p<0.05)。用isis481464的处理导致肿瘤块中stat3mrna水平相比于pbs对照的43%降低(图8),其是统计学显著的。蛋白质分析通过将肿瘤在冰冷的含有蛋白酶抑制剂掺混物的放射性免疫沉淀测定(ripa)缓冲液中匀质化而制备总细胞裂解物。通过蛋白质印迹使用stat3抗体(abcamantibodies,#ab32500)分析裂解物。还探测管家蛋白细胞色素氧化酶ii(coxii;#ab79393)和生存素(#ab76424)。将stat3水平针对coxii蛋白质或生存素蛋白质标准化并使用imagej软件定量。用isis481464的处理导致肿瘤块中的stat3蛋白水平相比于pbs对照的50%降低,其是统计学显著的。肿瘤生长分析在研究期间内定期测量肿瘤。用isis481464的处理导致肿瘤体积相比于pbs对照减少约39%。实施例24:在pc9细胞中自由摄取反义寡核苷酸后stat3的剂量依赖性反义抑制在pc9细胞(非小细胞肺癌细胞系)中以不同剂量进一步测试来自上述研究的isis481464。细胞以每孔3,000个细胞的密度铺板。以0.02μm、0.1μm、0.5μm、2.5μm和10.0μm浓度的反义寡核苷酸孵育细胞,如表37中详细说明。约24小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用人stat3引物探针组rts2033(正向序列gaggcccgcccaaca,在本文命名为seqidno:1520;反向序列ttctgctaatgacgttatccagtttt,在本文命名为seqidno:1521;探针序列ctgcctagatcggc,在本文命名为seqidno:1522)测量mrna水平。根据管家基因β-肌动蛋白含量调节stat3mrna水平,如通过人引物探针组hts5002(正向序列cggactatgacttagttgcgttaca,在本文命名为seqidno:1529;反向序列gccatgccaatctcatcttgt,在本文命名为seqidno:1530;探针序列cctttcttgacaaaacctaacttgcgcaga,在本文命名为seqidno:1531)测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表37中。如表37所示,isis481464能够穿透细胞膜。表37通过pc9细胞自由摄取isis寡核苷酸对stat3mrna水平的剂量依赖性反义抑制实施例25:在c42b细胞中自由摄取反义寡核苷酸后对stat3的剂量依赖性反义抑制在c42b细胞(前列腺癌细胞系)中以不同剂量进一步测试来自上述的研究的isis481464。细胞以每孔3,000个细胞的密度铺板。以0.02μm、0.1μm、0.5μm、2.5μm和10.0μm浓度的反义寡核苷酸孵育细胞,如表38中详细说明。约24小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用人stat3引物探针组rts2033(正向序列gaggcccgcccaaca,在本文命名为seqidno:1520;反向序列ttctgctaatgacgttatccagtttt,在本文命名为seqidno:1521;探针序列ctgcctagatcggc,在本文命名为seqidno:1522)测量mrna水平。根据管家基因β-肌动蛋白含量调节stat3mrna水平,如通过人引物探针组hts5002(正向序列cggactatgacttagttgcgttaca,在本文命名为seqidno:1529;反向序列gccatgccaatctcatcttgt,在本文命名为seqidno:1530;探针序列cctttcttgacaaaacctaacttgcgcaga,在本文命名为seqidno:1531)测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表38中。如表38所示,isis481464能够穿透细胞膜。表38通过c42b细胞自由摄取isis寡核苷酸对stat3mrna水平的剂量依赖性反义抑制实施例26:在colo201细胞中自由摄取反义寡核苷酸后对stat3的剂量依赖性反义抑制在colo201细胞(结直肠癌细胞系)中以不同剂量进一步测试来自上述的研究的isis481464。细胞以每孔3,000个细胞的密度铺板。以0.02μm、0.1μm、0.5μm、2.5μm和10.0μm浓度的反义寡核苷酸孵育细胞,如表39中详细说明。约24小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用人stat3引物探针组rts2033(正向序列gaggcccgcccaaca,在本文命名为seqidno:1520;反向序列ttctgctaatgacgttatccagtttt,在本文命名为seqidno:1521;探针序列ctgcctagatcggc,在本文命名为seqidno:1522)测量mrna水平。根据管家基因β-肌动蛋白含量调节stat3mrna水平,如通过人引物探针组hts5002(正向序列cggactatgacttagttgcgttaca,在本文命名为seqidno:1529;反向序列gccatgccaatctcatcttgt,在本文命名为seqidno:1530;探针序列cctttcttgacaaaacctaacttgcgcaga,在本文命名为seqidno:1531)测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表39中。如表39所示,isis481464能够穿透细胞膜。表39通过colo201细胞自由摄取isis寡核苷酸对stat3mrna水平的剂量依赖性反义抑制实施例27:在bt474m1细胞中自由摄取反义寡核苷酸后对stat3的剂量依赖性反义抑制在bt474m1细胞(乳腺癌细胞系)中以不同剂量进一步测试来自上述的研究的isis481464。细胞以每孔3,000个细胞的密度铺板。以0.02μm、0.1μm、0.5μm、2.5μm和10.0μm浓度的反义寡核苷酸孵育细胞,如表40中详细说明。约24小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用人stat3引物探针组rts2033(正向序列gaggcccgcccaaca,在本文命名为seqidno:1520;反向序列ttctgctaatgacgttatccagtttt,在本文命名为seqidno:1521;探针序列ctgcctagatcggc,在本文命名为seqidno:1522)测量mrna水平。根据管家基因β-肌动蛋白含量调节stat3mrna水平,如通过人引物探针组hts5002(正向序列cggactatgacttagttgcgttaca,在本文命名为seqidno:1529;反向序列gccatgccaatctcatcttgt,在本文命名为seqidno:1530;探针序列cctttcttgacaaaacctaacttgcgcaga,在本文命名为seqidno:1531)测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表40中。如表40所示,isis481464能够穿透细胞膜。表40通过bt474m1细胞自由摄取isis寡核苷酸对stat3mrna水平的剂量依赖性反义抑制实施例28:在h929细胞中自由摄取反义寡核苷酸后对stat3的剂量依赖性反义抑制在h929细胞(多发性骨髓瘤细胞系)中以不同剂量进一步测试来自上述的研究的isis481464。细胞以每孔10,000-12,000个细胞的密度铺板。以0.01μm、0.5μm、2.5μm和10.0μm浓度的反义寡核苷酸孵育细胞,如表41中详细说明。约72小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用人stat3引物探针组rts2033(正向序列gaggcccgcccaaca,在本文命名为seqidno:1520;反向序列ttctgctaatgacgttatccagtttt,在本文命名为seqidno:1521;探针序列ctgcctagatcggc,在本文命名为seqidno:1522)测量mrna水平。根据管家基因β-肌动蛋白含量调节stat3mrna水平,如通过人引物探针组hts5002(正向序列cggactatgacttagttgcgttaca,在本文命名为seqidno:1529;反向序列gccatgccaatctcatcttgt,在本文命名为seqidno:1530;探针序列cctttcttgacaaaacctaacttgcgcaga,在本文命名为seqidno:1531)测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表41中。如表41所示,isis481464能够穿透细胞膜。表41通过h929细胞自由摄取isis寡核苷酸对stat3mrna水平的剂量依赖性反义抑制实施例29:在mm1r细胞中自由摄取反义寡核苷酸后对stat3的剂量依赖性反义抑制在mm1r细胞(多发性骨髓瘤细胞系)中以不同剂量进一步测试来自上述的研究的isis481464。细胞以每孔10,000-12,000个细胞的密度铺板。以0.01μm、0.5μm、2.5μm和10.0μm浓度的反义寡核苷酸孵育细胞,如表42中详细说明。约72小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用人stat3引物探针组rts2033(正向序列gaggcccgcccaaca,在本文命名为seqidno:1520;反向序列ttctgctaatgacgttatccagtttt,在本文命名为seqidno:1521;探针序列ctgcctagatcggc,在本文命名为seqidno:1522)测量mrna水平。根据管家基因β-肌动蛋白含量调节stat3mrna水平,如通过人引物探针组hts5002(正向序列cggactatgacttagttgcgttaca,在本文命名为seqidno:1529;反向序列gccatgccaatctcatcttgt,在本文命名为seqidno:1530;探针序列cctttcttgacaaaacctaacttgcgcaga,在本文命名为seqidno:1531)测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表42中。如表42所示,isis481464能够穿透细胞膜。表42通过mm1r细胞自由摄取isis寡核苷酸对stat3mrna水平的剂量依赖性反义抑制实施例30:靶向stat3的反义寡核苷酸在处理sk-ov3卵巢癌异种移植模型中的效应balb/c裸小鼠接种有人卵巢癌细胞系sk-ov3并用isis481464或isis481549处理。isis481549与小鼠序列可交叉反应的(即,与小鼠序列杂交)。研究1将人卵巢癌sk-ov3细胞(约100mm3)腹膜内注射到裸小鼠中。10天后,小鼠皮下接种25mg/kg的isis481464或isis481549,每周施用两次,持续11周。最后一次给药后24小时对小鼠施以安乐死。rna分析通过使用rna提取试剂盒(invitrogen)制备裂解物,用于使用人引物探针组(rts2033)和小鼠引物探针组(mstat3-lts0664)对stat3mrna水平进行rt-pcr分析。结果呈示于表43中。结果表示为相对于pbs对照的stat3的抑制百分比。数据指示用isis反义寡核苷酸的处理导致人和鼠stat3mrna两者相比于pbs对照的降低。表43在sk-ov3异种移植模型中处理组的stat3mrna相对于pbs对照的抑制百分比蛋白质分析用ripa缓冲液制备裂解物,用于使用抗磷酸化stat3抗体(cellsignaling)对stat3蛋白水平进行western印迹分析。结果呈示于图1中。数据指示用isis481549的处理导致磷酸化stat3蛋白质相比于pbs对照的降低。il-6水平分析通过使用rna提取试剂盒(invitrogen)制备裂解物,用于小鼠引物探针组mil6-lts00629对il-6mrna水平进行rt-pcr分析。结果呈示于表44中。结果表示为相对于pbs对照的il-6的抑制百分比。数据指示用isis481549的处理导致两个il-6mrna相比于pbs对照的降低。表44在sk-ov3异种移植模型中处理组的il-6mrna相对于pbs对照的抑制百分比肿瘤重量分析收集肿瘤。测量肿瘤重量并且结果呈示于表45中。结果表示为pbs对照肿瘤重量的百分比。数据指示用isis481549的处理导致肿瘤重量相比于pbs对照的显著降低。表45在sk-ov3异种移植模型中处理组的肿瘤重量相对于pbs对照的降低百分比研究2将人卵巢癌sk-ov3细胞(约100mm3)皮下接种到裸小鼠中。10天后,小鼠腹膜内接种50mg/kg的isis481464或50mg/kg的isis481464和isis481549的组合,每周施用五次,持续6周。最后一次给药后24小时对小鼠施以安乐死。肿瘤体积分析使用vernier卡尺定期测量肿瘤并且使用下式计算肿瘤体积:肿瘤体积=1/2(长度x宽度2)。结果呈示于图2中。数据指示用isis481464和isis481549的组合处理小鼠导致肿瘤生长的显著抑制。实施例31:isis481464在食蟹猴中的耐受性研究评价isis481464在食蟹猴中的效力和耐受性。处理首次接触试验的雄性和雌性食蟹猴分成五个处理组。三组5只猴各自在研究的第一周期间(在第1、3、5和7天)每两天接受3mg/kg、10mg/kg或30mg/kg的负荷剂量,此后每周施用一次(在第14天开始)。5只猴的对照组在研究的第一周期间(在第1、3、5和7天)每两天接受pbs作为负荷剂量,此后每周施用一次(在第14天开始)。经由1小时静脉内(i.v.)输注施用这些剂量。第五组5只猴在研究的第一周期间(在第1、3、5和7天)每两天接受皮下施用的30mg/kg的负荷剂量,此后每周皮下(s.c.)施用一次(在第14天开始)。对于i.v.输注,在无镇静剂下将动物限制在椅式限制器上。将插管置于头部静脉之一中并且使用校准注射器泵(stoeltingco,usa)以恒定速率输注适宜剂量的isis481464溶液约1小时。给药位点在右臂和左臂之间轮换并记录给药时间。选择输注速率以递送所计算的剂量体积,且监控泵的精确度以及对于每个剂量均作记录。在输注期结束时,给药溶液换成pbs。在s.c.施用的情况下,以顺时针旋转方向在背部的4个位点进行注射。通过定期剃毛以及经由纹身永久编号而保持注射位点。在第44天(即在第42天最后一次剂量后48小时)处死每个组的三只猴。观察每个组的其它2只猴的毒理学效应。在氯胺酮/甲苯噻嗪-诱导的麻醉和戊巴比妥钠的施用后通过放血对动物施以预定的安乐死。实施例中所述的方案由institutionalanimalcareandusecommittee(iacuc)批准。rna分析将肝组织在3ml补充有1%2-巯基甲醇(sigma)的rlt裂解缓冲液(qiagen)中匀浆化。根据制造商方案使用用于rna纯化的qiagenrneasy96孔板从所得匀浆物纯化rna。纯化后,使用perkin-elmerabiprism7700sequencedetectionsystem和stat3引物探针组rts3235(正向引物aagtttatctgtgtgacaccaacga,在本文命名为seqidno:1532;反向引物cttcaccattatttccaaactgcat,在本文命名为seqidno:1533;探针tgccgatgtccccccgca,在本文命名为seqidno:1534)使rna样品进行rt-pcr分析。使stat3mrna水平针对猴亲环蛋白a标准化,其使用引物探针组mk_cycloa_2nd(正向引物tgctggacccaacacaaatg,在本文命名为seqidno:1535;反向引物tgccatccaaccactcagtc,在本文命名为seqidno:1536;探针ttcccagtttttcatctgcactgccax,在本文命名为seqidno:1537)定量。经由i.v.输注或s.c.注射用30mg/kg给药浓度的isis481464的处理导致肝中的stat3mrna表达相比于pbs对照的统计学显著的降低(表46)。使用student’st检验确定处理组和对照组的显著差异(p<0.05)。表46食蟹猴中stat3mrna水平的抑制百分比处理抑制%3mgi.v.010mgi.v.730mgi.v.5230mgs.c.51蛋白质分析将肝组织在1ml冰冷的含有蛋白酶和磷酸酶的抑制剂掺混物(roche)的ripa缓冲液(sigma)中匀浆化。总裂解物通过bis-trispage(invitrogen)分离,转移至pvdf膜,且使用stat3一级抗体(cellsignaling,#9132)和gapdh(advancedimmunochemicals,#06-1-g4-c5)进行免疫印迹。在暴露于x射线薄膜后用enhancedchemiluminescenceplus检测试剂盒(amershambiosciences)检测免疫特异性带。然后扫描条带的强度并且使用imagej软件定量。使用student’st检验确定处理组和对照组的显著差异(p<0.05)。stat3蛋白水平剂量依赖性降低,如表47中所示,其中在3mg/kg/周和10mg/kg/周下分别降低33%和82%。不管给药途径如何,stat3蛋白在30mg/kg/周时是不可检测的。表47食蟹猴中stat3蛋白水平的抑制百分比处理抑制%3mgi.v.3310mgi.v.8230mgi.v.10030mgs.c.100肝功能为了评价isis寡核苷酸对肝功能的影响,从所有研究组收集血液样品。经由第44天(给药后48小时)股骨静脉穿刺收集血液样品。在不含抗凝剂的管中收集血液样品(1ml)用于血清分离。将管在室温保持约60min,然后以3,000rpm离心10min,获得血清。使用toshiba200frneo化学分析仪(toshibaco.,japan)测量不同肝功能标记物的水平。测量alt和ast的血浆水平且结果呈示于表48中,以iu/l表示。分别呈示雄性和雌性猴数据。结果指示用isis481464的处理在反义寡核苷酸的预期范围之外对肝功能无影响。表48反义寡核苷酸处理对食蟹猴血浆中肝功能标记物的影响肾功能为了评价isis寡核苷酸对肾功能的效应,从所有研究组收集血液样品。经由第44天(给药后48小时)股骨静脉穿刺收集血液样品。在不含抗凝剂的管中收集血液样品(1ml)用于血清分离。将管在室温保持约60min,然后以3,000rpm离心10min,获得血清。使用toshiba200frneo化学分析仪(toshibaco.,japan)测量不同肾功能标记物的水平。结果呈示于表49中,以mg/dl表示。结果指示用isis481464的处理在反义寡核苷酸的预期范围之外对肾功能无影响。表49反义寡核苷酸处理对食蟹猴中血浆bun和肌酐水平(mg/dl)的影响体重测量为了评价isis寡核苷酸对动物整体健康的影响,测量体重且呈示于表50和51中。结果指示用isis481464的处理对体重的影响在反义寡核苷酸的预期范围之内。表50反义寡核苷酸处理对雄性食蟹猴体重(g)的影响表51反义寡核苷酸处理对雌性食蟹猴体重(g)的影响实施例32:对huvec细胞中人stat3的反义抑制设计靶向stat3核酸的反义寡核苷酸并且在体外测试它们对stat3mrna的影响。以30nm反义寡核苷酸使用lipofectamine试剂转染以每孔5,000个细胞的密度培养的huvec细胞。在约24小时的处理期之后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用人引物探针组rts2033(正向序列gaggcccgcccaaca,在本文命名为seqidno:5;反向序列ttctgctaatgacgttatccagtttt,,在本文命名为seqidno:6;探针序列ctgcctagatcggc,在本文命名为seqidno:7)测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。表52和53中的嵌合反义寡核苷酸被设计为5-10-5moe缺口聚体。缺口聚体为20个核苷长,其中中央缺口区段由10个2’-脱氧核苷组成且两边(在5’和3’方向)为各自包含五个核苷的翼。5’翼区段中的每个核苷和3’翼区段中的每个核苷酸具有2’-moe修饰。每个缺口聚体中的核苷间连接是硫代磷酸(p=s)连接。每个缺口聚体中的所有胞嘧啶残基是5’-甲基胞嘧啶。“人靶起始位点”指示人基因序列中靶向缺口聚体的最5’端核苷。“人靶终止位点”指示人基因序列中靶向缺口聚体的最3’端核苷。表52中列出的每个缺口聚体靶向于人stat3mrna,在本文命名为seqidno:1(genbank登录号nm_139276.2)。表53中列出的每个缺口聚体靶向于人stat3基因组序列,在本文命名为seqidno:2(从核苷酸4185000至4264000截短的genbank登录号nt_010755.14的互补序列)。将缺口聚体的效能与isis337332、isis337333和isis345785相比较,它们也是靶向人stat3的5-10-5moe缺口聚体,并且它们进一步描述于uspn7,307,069(通过引用并入本文)中。表52靶向于seqidno:1的具有5-10-5moe翼和脱氧缺口的嵌合反义寡核苷酸对人stat3mrna水平的抑制表53靶向于seqidno:2的具有5-10-5moe翼和脱氧缺口的嵌合反义寡核苷酸对人stat3mrna水平的抑制实施例33:对huvec细胞中人stat3的剂量依赖性反义抑制在huvec细胞中以不同剂量测试来自实施例32中所述的研究的显示对stat3的显著体外抑制的缺口聚体。细胞以每孔5,000个细胞的密度铺板且以1.1nm、3.3nm、10.0nm、和30.0nm浓度的反义寡核苷酸使用试剂转染,如表54中详细说明。在约16小时的处理期后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用人stat3引物探针组rts199(正向序列acatgccactttggtgtttcataa,在本文命名为seqidno:6;反向序列tcttcgtagattgtgctgatagagaac,在本文命名为seqidno:7;探针序列cagtatagccgcttcctgcaagagtcgaa,在本文命名为seqidno:8)测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表54中,并且通过将所用的寡核苷酸浓度对在每种浓度下实现的stat3mrna表达的抑制百分比进行作图以及记录相比于对照实现stat3mrna表达的50%抑制的寡核苷酸浓度来计算。如表54所示,反义寡核苷酸处理的细胞中stat3mrna水平以剂量依赖性方式显著降低。表54对huvec细胞中人stat3的剂量依赖性反义抑制实施例34:微步设计的寡核苷酸对huvec细胞中人stat3的反义抑制基于实施例1中所示的证实至少50%抑制的缺口聚体设计附加的缺口聚体。通过创建向初始缺口聚体的上游和下游略微移动(即,“微步”)的缺口聚体来设计这些缺口聚体。在体外测试这些缺口聚体。isis337332作为比较物也包括在测定中。以30nm反义寡核苷酸使用lipofectamine试剂转染以每孔5,000个细胞的密度培养的huvec细胞。在约24小时的处理期之后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用上文所述的人引物探针组rts199测量stat3mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。结果呈示于表55中。表55中的嵌合反义寡核苷酸被设计为5-10-5moe缺口聚体。表55中以星形(*)指定的缺口聚体为初始缺口聚体,由其通过微步设计缺口聚体isis465226-466744。5-10-5缺口聚体为20个核苷长,其中中央缺口区段由10个2’-脱氧核苷组成且两边(在5’和3’方向)为各自包含5个核苷的翼。5’翼区段中的每个核苷和3’翼区段中的每个核苷具有2’-moe修饰。每个缺口聚体中的核苷间连接是硫代磷酸(p=s)连接。每个缺口聚体中的所有胞嘧啶残基是5’-甲基胞嘧啶。“靶起始位点”指示靶向缺口聚体的最5’端核苷。“靶终止位点”指示靶向缺口聚体的最3’端核苷。表55中列出的每个缺口聚体靶向于横跨seqidno:2(从核苷酸4185000至4264000截短的genbank登录号nt_010755.14的互补序列)的核碱基2313-76017的靶区。表55靶向于seqidno:2嵌合反义寡核苷酸对人stat3mrna水平的抑制实施例35:对huvec细胞中人stat3的剂量依赖性反义抑制在huvec细胞中以不同剂量测试来自实施例3中所述的研究的显示对stat3的显著体外抑制的缺口聚体。细胞以每孔5,000个细胞的密度铺板并且以8.8nm、17.5nm、35.0nm和70.0nm浓度的反义寡核苷酸使用试剂转染,如表56中详细说明。在约16小时的处理期后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用如上所述的人stat3引物探针组rts199测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。如表56所示,反义寡核苷酸处理的细胞中stat3mrna水平以剂量依赖性方式降低。表56使用lipofectamine试剂对huvec细胞中人stat3的剂量依赖性反义抑制实施例36:对huvec细胞中人stat3的剂量依赖性反义抑制在huvec细胞中以不同剂量进一步测试来自实施例3中所述的研究的缺口聚体。细胞以每孔20,000个细胞的密度铺板并且以187.5nm、375.0nm、750.0nm、1,500.0nm、3,000.0nm、and6,000.0nm浓度的反义寡核苷酸利用电穿孔转染,如表57中详细说明。在约16小时的处理期后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用如上所述的人stat3引物探针组rts199测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。如表57所示,反义寡核苷酸处理的细胞中stat3mrna水平以剂量依赖性方式显著降低。表57利用电穿孔对huvec细胞中人stat3的剂量依赖性反义抑制实施例37:靶向人stat3的反义寡核苷酸在cd1小鼠中的耐受性进一步测试39个显示高效能水平的反义寡核苷酸的体内耐受性。按组向每组八只雄性cd1小鼠皮下注射50mg/kg的isis反义寡核苷酸,一周两次,持续6周。一组8只雄性balb/c小鼠用pbs皮下注射,一周两次,持续3周。这组小鼠用作对照组。最后一次给药后三天,处死小鼠,并且收集器官和血浆用于进一步分析。在研究结束时测量肝、脾和肾重量,并且将其与pbs处理的小鼠相比较。为了评价isis寡核苷酸对肝功能的影响,使用自动化临床化学分析仪(hitachiolympusau400e,melville,ny)转氨酶血浆浓度。测量alt(丙氨酸转氨酶)和ast(天冬氨酸转氨酶)的血浆浓度。为了评价isis寡核苷酸对肾功能的影响,使用自动化临床化学分析仪(hitachiolympusau400e,melville,ny)测量血液尿素氮(bun)血浆浓度。将从所有小鼠组获得的血液送至antechdiagnostics,用于血细胞比容(hct)、平均红细胞容积(mcv)、平均红细胞血红蛋白量(mch)和平均红细胞血红蛋白浓度(mchc)测量和分析,以及差别血细胞计数的测量如wbc、rbc和总血红蛋白含量的测量。所测试的39个反义寡核苷酸中,某些反义寡核苷酸(包括isis455265、isis455269、isis455271、isis455272、isis455291、isis455371、isis455394、isis455703、isis455429、isis455471、isis455527、isis455530、isis455536、isis455548、isis455611、isis465236、isis465237、isis465588、isis465740、isis465754、isis465830、isis466670和isis466720)满足器官重量、alt、ast、bun和血液学参数的耐受性阈值。实施例38:cd1小鼠肝中反义寡核苷酸半衰期的测量用所述的isis反义寡核苷酸处理cd1小鼠并且评价肝中寡核苷酸半衰期。处理按组向每组12只cd1小鼠各自皮下注射50mg/kg的isis455265、isis455269、isis455271、isis455272、isis455291、isis455371、isis455393、isis455553、isis455582、isis455703、isis455394、isis455429、isis455438、isis455471、isis455527、isis455530、isis455536、isis455540、isis455548、isis455611、isis455429、isis455463、isis455464、isis455471、isis455527、isis455611、isis463236、isis463237、isis463239、isis463588、isis465740、isis465742、isis465751、isis465752、isis465754、isis465830、isis466670、isis466718和isis466720,每周两次,持续2周。最后一次给药后3天、28天和56天处死每个组的四只小鼠。收集肝用于分析。寡核苷酸浓度的测量测量全长寡核苷酸浓度以及总寡核苷酸浓度(包括降解形式)。所用方法是之前公布的方法的改进(leeds等人,1996;geary等人,1999),其包括苯酚-氯仿(液-液)萃取,之后固相萃取。在萃取之前加入内标(isis355868、27聚体2’-o-甲氧基乙基修饰的硫代磷酸寡核苷酸、gcgtttgctcttcttcttgcgtttttt,在本文命名为seqidno:2758)。使用校准曲线计算组织样品浓度,定量下限(lloq)为约1.14μg/g。然后使用winnonlin软件(pharsight)计算半衰期。每个寡核苷酸的半衰期呈示于表58中。选择半衰期在11-34天内的反义寡核苷酸用于进一步研究。表58cd1小鼠肝中isis寡核苷酸的半衰期实施例39:靶向人stat3的反义寡核苷酸在sprague-dawley大鼠中的耐受性进一步测试23个显示高效能水平的反义寡核苷酸用于体内耐受性。按组向每组四只sprague-dawley大鼠皮下注射50mg/kg的isis反义寡核苷酸,一周两次,持续6周。一组大鼠用pbs皮下注射,一周两次,持续6周。该组用作对照组。最后一次给药后三天,对大鼠施以安乐死,且收集器官和血浆用于进一步分析。在处理期结束时测量肝、脾和肾重量并且将其与pbs处理的大鼠相比较。为了评价isis寡核苷酸对肝功能的影响,使用自动化临床化学分析仪(hitachiolympusau400e,melville,ny)转氨酶血浆浓度。测量ast(天冬氨酸转氨酶)和总胆红素的血浆浓度。为了评价isis寡核苷酸对肾功能的影响,使用自动化临床化学分析仪(hitachiolympusau400e,melville,ny)测量bun、总尿蛋白和肌酐。所测试的23个反义寡核苷酸中,某些反义寡核苷酸(包括isis455269、isis455291、isis455371、isis455703、isis455429、isis465236、isis465237、isis465754、isis465830和isis466670)满足器官重量、ast、胆红素、bun、总尿蛋白和肌酐的耐受性阈值。实施例40:sprague-dawley大鼠肝和肾中反义寡核苷酸半衰期的测量用isis反义寡核苷酸处理spraguedawley大鼠并且评价寡核苷酸半衰期以及寡核苷酸降解的运行时间以及从肝和肾中的消除。处理按组向每组四只spraguedawley大鼠各自皮下注射20mg/kg的isis455265、isis455269、isis455271、isis455272、isis455291、isis455371、isis455394、isis455703、isis455429、isis455471、isis455527、isis455530、isis455536、isis455548、isis455611、isis465236、isis465237、isis465588、isis465740、isis465754、isis465830、isis466670和isis466720,每周两次,持续2周。最后一次给药后3天,处死大鼠并且收集肝和肾用于分析。寡核苷酸浓度的测量测量全长寡核苷酸浓度以及总寡核苷酸浓度(包括降解形式)。所用方法是之前公布的方法的改进(leeds等人,1996;geary等人,1999),其包括苯酚-氯仿(液-液)萃取,之后固相萃取。在萃取之前加入内标(isis355868、27聚体2’-o-甲氧基乙基修饰的硫代磷酸寡核苷酸、gcgtttgctcttcttcttgcgtttttt,在本文命名为seqidno:2758)。使用校准曲线计算组织样品浓度,定量下限(lloq)为约1.14μg/g。计算全长寡核苷酸浓度以及总寡核苷酸浓度的肾与肝比值。结果呈示于表59中。表59sprague-dawley大鼠中全长和总寡核苷酸浓度的肾与肝比值实施例41:在sk-br-3细胞中自由摄取反义寡核苷酸后对stat3的剂量依赖性反义抑制在sk-br-3细胞中以不同剂量测试来自实施例6-9中所述的啮齿类动物耐受性研究的缺口聚体。细胞以每孔4,000个细胞的密度铺板。以0.02μm、0.10μm、0.50μm、1.00μm、2.50μm和10.00μm浓度的反义寡核苷酸在无任何转染试剂下孵育细胞,如表60中详细说明。约24小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用如上所述的人stat3引物探针组rts199测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表60中。表60通过sk-br-3细胞自由摄取isis寡核苷酸对人stat3的剂量依赖性反义抑制实施例42:靶向人stat3的isis反义寡核苷酸的粘度的测量测量选自实施例6-10中所述的研究的反义寡核苷酸的粘度,目的在于筛选出粘度超过40cp的反义寡核苷酸。粘度超过40cp的寡核苷酸太粘稠以至于不能向任何受试者施用。将isis寡核苷酸(32-35mg)称重至玻璃小瓶中,加入120μl水,并通过在50℃加热小瓶将反义寡核苷酸溶解于溶液中。将部分(75μl)预热的样品吸移至微粘度计(cambridge)中。微粘度计的温度设定为25℃并且测量样品粘度。另一部分(20μl)预热的样品吸移到10ml水中,以于85℃在260nm进行uv读数(caryuv仪器)。结果呈示于表61中并且指示所有反义寡核苷酸溶液在上文所述的标准下的粘度是最佳的。表61靶向人stat3的isis反义寡核苷酸的粘度实施例43:靶向人stat3的isis反义寡核苷酸在食蟹猴中的效应在食蟹猴中进一步测试9个显示高效能水平的反义寡核苷酸。评价反义寡核苷酸在肝和肾中的耐受性和药动学特性。在koreainstituteoftoxicology,republicofkorea进行研究。在研究之前,将猴保持隔离30天的时间,在这期间进行标准小组的血清化学和血液学、对卵细胞和寄生虫的粪便样品的检查以及结核测试,筛选出异常或患病猴。第一周使9组四只分配的雄性食蟹猴各自皮下注射25mg/kg的isis反义寡核苷酸,每周三次,随后在接下来的7周内每周两次。第一周使4只食蟹猴的对照组皮下注射pbs,每周三次,随后在接下来的7周内每周两次。在第55天(即最后一次给药后48小时)进行所有组的终末期处死。在研究期间,每天观察猴的疾病或痛苦的症状。移除显示处理副作用的任何动物并且交付至兽医和研究总监。为了评价isis寡核苷酸对动物整体健康的影响,在第55天测量脾、心、肾、肝和胆囊重量。测量器官重量并且将处理组重量与相应的pbs对照重量相比较。为了评价isis寡核苷酸对肝和肾功能的影响,从所有研究组收集血液样品。在血液收集之前对猴禁食过夜。将各自约1ml血液样品收集到不含任何抗凝剂的管中用于血液分离。将管在室温保持约90min,然后离心(在室温3000rpm离心10min),获得血清。使用toshiba200frneo化学分析仪(toshibaco.,japan)测量转氨酶浓度。在第55天测量alt(丙氨酸转氨酶)、ast(天冬氨酸转氨酶)和bun的血浆浓度。类似地,也在第55天测量c-反应蛋白(crp),其在肝中合成并且用作炎症标记物。为了评价isis寡核苷酸对涉及炎症的因素的影响,在第55天从所有动物收集血液用于补体c3水平、mip-1β细胞因子水平和血小板数的分析。对于补体c3分析,将各自约0.5ml的血液样品收集到不含任何抗凝剂的管中用于血液分离。对于细胞因子水平分析,将各自约2ml的血液样品收集到不含任何抗凝剂的管中用于血液分离。将管在室温保持约90min,然后离心(在室温3000rpm离心10min),获得血清。使用自动分析仪(toshiba200frneo化学分析仪,toshibaco.,japan)测量补体c3。将血清用于利用九格searchlightmultiplexarray的细胞因子分析。对于血小板计数,将各自约0.5ml的血液样品收集到含有edta钾盐的管中。使用advia120血液分析仪(bayer,usa)分析样品的血小板计数。在第55天测量肝和肾中寡核苷酸的浓度。所用方法是之前公布的方法的改进(leeds等人,1996;geary等人,1999),其包括苯酚-氯仿(液-液)萃取,之后固相萃取。在萃取之前加入内标(isis355868、27聚体2’-o-甲氧基乙基修饰的硫代磷酸寡核苷酸、gcgtttgctcttcttcttgcgtttttt,在本文命名为seqidno:2758)。使用校准曲线计算组织样品浓度,定量下限(lloq)为约1.14μg/g。所测试的9个反义寡核苷酸中,某些反义寡核苷酸(包括isis455269、isis455371、isis455429和isis455670)满足器官重量、alt、ast、bun和血液学参数的耐受性阈值。实施例44:在mda-mb-231细胞中自由摄取反义寡核苷酸后对stat3的剂量依赖性反义抑制在mda-mb-231细胞中以不同剂量进一步测试来自实施例12中所述的研究的isis寡核苷酸。细胞以每孔4,000个细胞的密度铺板。以0.02μm、0.20μm、1.00μm、5.00μm和10.00μm浓度的反义寡核苷酸在无任何转染试剂下孵育细胞,如表62中详细说明。约24小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用如上所述的人stat3引物探针组rts199测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表62中。表62通过mda-mb-231细胞自由摄取isis寡核苷酸对stat3mrna水平的剂量依赖性反义抑制实施例45:在u251-mg细胞中自由摄取反义寡核苷酸后对stat3的剂量依赖性反义抑制在u251-mg细胞中以不同剂量进一步测试来自实施例12中所述的研究的isis寡核苷酸。细胞以每孔4,000个细胞的密度铺板。以0.1μm、1.0μm、5.0μm、10.0μm和20.0μm浓度的反义寡核苷酸在无任何转染试剂下孵育细胞,如表63中详细说明。约24小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用如上所述的人stat3引物探针组rts199测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表63中。表63通过u251-mg细胞自由摄取isis寡核苷酸对stat3mrna水平的剂量依赖性反义抑制实施例46:在a431细胞中自由摄取反义寡核苷酸后对stat3的剂量依赖性反义抑制在a431细胞中以不同剂量进一步测试来自实施例12中所述的研究的isis寡核苷酸。细胞以每孔4,000个细胞的密度铺板。以0.02μm、0.2μm、1.0μm、5.0μm和10.0μm浓度的反义寡核苷酸在无任何转染试剂下孵育细胞,如表64中详细说明。约24小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用如上所述的人stat3引物探针组rts199测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表64中。如表64所示,isis寡核苷酸能够穿透细胞膜并且以剂量依赖性方式显著降低stat3mrna水平。表64通过a431细胞自由摄取isis寡核苷酸对stat3mrna水平的剂量依赖性反义抑制实施例47:在h460细胞中自由摄取反义寡核苷酸后对stat3的剂量依赖性反义抑制在h460细胞中以不同剂量进一步测试来自实施例12中所述的研究的isis寡核苷酸。细胞以每孔4,000个细胞的密度铺板。以0.02μm、0.20μm、1.00μm、5.00μm和10.00μm浓度的反义寡核苷酸在无任何转染试剂下孵育细胞,如表65中详细说明。约24小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用如上所述的人stat3引物探针组rts199测量mrna水平。根据总rna含量调节stat3mrna水平,如通过测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表65中。如表65所示,isis寡核苷酸能够穿透细胞膜并且以剂量依赖性方式显著降低stat3mrna水平。表65通过h460细胞自由摄取isis寡核苷酸对stat3mrna水平的剂量依赖性反义抑制实施例48:靶向stat3的isis寡核苷酸在处理u251人神经胶质瘤癌症异种移植模型中的效应用来自实施例12中所述的研究的isis寡核苷酸处理接种有人u251神经胶质瘤肿瘤细胞的balb/c裸小鼠。评价处理对小鼠中的肿瘤生长的影响。处理balb/c裸小鼠皮下移植1x106个肿瘤细胞。移植第4天,按组向每组4只小鼠腹膜内注射施用50mg/kg的isis455269、isis455291、isis455371、isis455703、isis455429、isis465237、isis465754、isis465830或isis466670,一周五次,持续3周半。一组小鼠腹膜内注射施用50mg/kg的对照寡核苷酸isis141923,一周五次,持续3周半。一组小鼠腹膜内注射施用pbs,一周五次,持续3周半。对肿瘤生长的影响每周两次使用卡尺在两个方向测量肿瘤大小,且肿瘤体积用下式计算:v=0.5xaxb2,其中a和b分别为肿瘤的长径和短径。结果呈示于表66中。数据指示用isis寡核苷酸的处理显著阻碍肿瘤生长。‘n/a’指示该时间点的数据点不可用。表66在u251异种移植模型中stat3的反义抑制对肿瘤生长的影响实施例49:靶向stat3的isis455291在处理mda-mb-231人乳腺癌异种移植模型中的效应用isis455291接种有人乳腺癌细胞mda-mb-231的balb/c裸小鼠。评价处理对小鼠中的肿瘤生长和耐受性的影响。处理在pharmaroninc(beijing,p.r.china)进行研究。balb/c裸小鼠获自beijinghfkbio-technologyco.,ltd。mda-mb-231人乳腺癌细胞在体外保持为在补充有10%热灭活胎牛血清、100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素和2mml-谷氨酰胺的leibovitz’sl-15培养基中的单层培养物。将细胞保持在37℃、5%co2于空气中的气氛下。每周两次用胰蛋白酶-edta处理常规地继代培养肿瘤细胞。收集在指数生长期生长的细胞并且对肿瘤接种进行计数。两组八只随机分配的6-8周龄雌性balb/c裸小鼠各自在右肋接种mda-mb-231肿瘤片段(3mmx2mmx2mm,其从肿瘤接种通道产生)用于肿瘤发展。当平均肿瘤大小达到约100mm3时,反义寡核苷酸处理在肿瘤接种后第11天开始。一个组用50mg/kg的isis455291腹膜内注射,一周两次,持续3周。另一组小鼠用pbs腹膜内注射,一周两次,持续3周,并且用作对照组。关于动物起卸、护理和处理的所有程序根据由institutionalanimalcareandusecommittee(iacuc)批准的指南进行。在日常监控的时间检查动物的肿瘤生长对正常行为如运动、食物消耗、体重变化和任何其它异常效应的任何影响。rna分析从肿瘤组织提取rna,用于使用上文所述的引物探针组rts199对人stat3mrna水平进行实时pcr分析。也使用引物探针组mstat3_lts00664(正向序列cgacagcttccccatgga,在本文命名为seqidno:1513;反向序列atgcccagtcttgactctcaatc,在本文命名为seqidno:1514;探针序列ctgcggcagttcctggcacctt,在本文命名为seqidno:1515)测量鼠stat3mrna水平。结果表示为针对亲环蛋白标准化的相对于pbs对照的stat3的抑制百分比。如表67所示,用isis455291的处理导致人和鼠stat3mrna两者相比于pbs对照的降低。表67在mda-mb-231异种移植模型中处理组的stat3mrna相对于pbs对照的抑制抑制%人stat391鼠stat394对肿瘤生长的影响每周两次使用卡尺在两个方向测量肿瘤大小。肿瘤体积用下式评价:v=0.536xaxb2,其中a和b分别为肿瘤的长径和短径。利用肿瘤大小来计算t-c和tv/cv值。计算t-c,其中t作为处理组中的肿瘤达到预定大小(900mm3)所需的中位时间(以天计),而c作为对照组中的肿瘤达到相同大小所需的中位时间(以天计)。tv/cv值(以百分比表示)是isis寡核苷酸的抗肿瘤有效性的指示,其中tv和cv分别为在指定天(第32天)时处理组和对照组的平均体积。结果呈示于表68和69中。数据指示对stat3mrna的抑制显著阻碍肿瘤生长。表68在mda-mb-231异种移植模型中stat3的反义抑制对肿瘤生长的影响天数pbsisis4552911110310315185156182922052251932025745437291,332792321,7411,075表69在mda-mb-231异种移植模型中stat3的反义抑制对肿瘤生长抑制的影响体重测量为了评价isis寡核苷酸对动物整体健康的影响,在处理期内定期测量体重。数据呈示于表70中并且指示用isis455291的处理不影响小鼠的整体健康。表70在mda-mb-231异种移植模型中小鼠的体重测量实施例50:靶向stat3的isis455291在处理a431人表皮样癌异种移植模型中的效应用isis455291处理接种有人表皮癌细胞a431的balb/c裸小鼠。评价处理对小鼠中的肿瘤生长和耐受性的影响。处理在pharmaroninc(beijing,p.r.china)进行研究。balb/c裸小鼠获自beijinghfkbio-technologyco.,ltd。a431人表皮样癌细胞在体外保持为在补充有10%热灭活胎牛血清、100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素和2mml-谷氨酰胺的dmem培养基中的单层培养物。将细胞保持在37℃、5%co2于空气中的气氛下。每周两次用胰蛋白酶-edta处理常规地继代培养肿瘤细胞。收集在指数生长期生长的细胞并且对肿瘤接种进行计数。两组八只随机分配的6-8周龄雌性balb/c裸小鼠各自皮下接种5x106个a431肿瘤细胞用于肿瘤发展。当平均肿瘤大小达到约95mm3时,反义寡核苷酸处理在肿瘤接种后第8天开始。一个组用50mg/kg的isis455291腹膜内注射,一周两次,持续4周。另一组小鼠用pbs腹膜内注射,一周两次,持续3周,并且用作对照组。关于动物起卸、护理和处理的所有程序根据由institutionalanimalcareandusecommittee(iacuc)批准的指南进行。在日常监控的时间检查动物的肿瘤生长对正常行为如运动、食物消耗、体重变化和任何其它异常效应的任何影响。rna分析从肿瘤组织提取rna,用于使用上文所述的引物探针组rts199对人stat3mrna水平进行实时pcr分析。也使用上文所述的引物探针组mstat3_lts00664测量鼠stat3mrna水平。结果表示为针对亲环蛋白标准化的相对于pbs对照的stat3的抑制百分比。如表71所示,用isis455291的处理导致人和鼠stat3mrna两者相比于pbs对照的降低。表71在a431异种移植模型中处理组的stat3mrna相对于pbs对照的抑制抑制%人stat367鼠stat392对肿瘤生长的影响每周两次使用卡尺在两个方向测量肿瘤大小。肿瘤体积用下式评价:v=0.536xaxb2,其中a和b分别为肿瘤的长径和短径。利用肿瘤大小来计算t-c和tv/cv值。计算t-c,其中t作为处理组中的肿瘤达到预定大小(800mm3)所需的中位时间(以天计),而c作为对照组中的肿瘤达到相同大小所需的中位时间(以天计)。tv/cv值(以百分比表示)是isis寡核苷酸的抗肿瘤有效性的指示,其中tv和cv分别为在指定天(第33天)时处理组和对照组的平均体积。结果呈示于表72和73中。数据指示对stat3mrna的抑制阻碍肿瘤生长。表72在a431异种移植模型中stat3的反义抑制对肿瘤生长的影响天数pbsisis455291894951417817317308242215283932468257228875759311,071984331,2101,112表73在a431异种移植模型中stat3的反义抑制对肿瘤生长抑制的影响体重测量为了评价isis寡核苷酸对动物整体健康的影响,在处理期内定期测量体重。数据呈示于表74中并且指示用isis455291的处理不影响小鼠的整体健康。表74a431异种移植模型中小鼠的体重测量实施例51:靶向stat3的isis455291在处理nci-h460人非小细胞肺癌(nsclc)异种移植模型中的效应用isis455291处理接种有人nci-h460人nsclc的balb/c裸小鼠。评价处理对小鼠中的肿瘤生长和耐受性的影响。处理在pharmaroninc(beijing,p.r.china)进行研究。balb/c裸小鼠获自beijinghfkbio-technologyco.,ltd。nci-h460人nsclc细胞在体外保持为在补充有10%热灭活胎牛血清、100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素和2mml-谷氨酰胺的rpmi-1640培养基中的单层培养物。将细胞保持在37℃、5%co2于空气中的气氛下。每周两次用胰蛋白酶-edta处理常规地继代培养肿瘤细胞。收集在指数生长期生长的细胞并且对肿瘤接种进行计数。两组八只随机分配的6-8周龄雌性balb/c裸小鼠各自皮下接种2x106个nci-h460肿瘤细胞用于肿瘤发展。当平均肿瘤大小达到约100mm3时,反义寡核苷酸处理在肿瘤接种后第6天开始。一个组用50mg/kg的isis481549腹膜内注射,一周两次,持续3周。另一组小鼠用pbs腹膜内注射,一周两次,持续3周,并且用作对照组。关于动物起卸、护理和处理的所有程序根据由institutionalanimalcareandusecommittee(iacuc)批准的指南进行。在日常监控的时间检查动物的肿瘤生长对正常行为如运动、食物消耗、体重变化和任何其它异常效应的任何影响。对肿瘤生长的影响每周两次使用卡尺在两个方向测量肿瘤大小。肿瘤体积用下式评价:v=0.536xaxb2,其中a和b分别为肿瘤的长径和短径。利用肿瘤大小来计算t-c和tv/cv值。计算t-c,其中t作为处理组中的肿瘤达到预定大小(1,500mm3)所需的中位时间(以天计),而c作为对照组中的肿瘤达到相同大小所需的中位时间(以天计)。tv/cv值(以百分比表示)是isis寡核苷酸的抗肿瘤有效性的指示,其中tv和cv分别为在指定天(第20天)时处理组和对照组的平均体积。结果呈示于表75和76中。数据指示对stat3的抑制显著阻碍肿瘤生长。表75在nci-h460异种移植模型中stat3的反义抑制对肿瘤生长的影响天数pbsisis4552916104104830318011746408131,175620151,642819182,2771,320202,8591,81222-2,330表76在nci-h460异种移植模型中stat3的反义抑制对肿瘤生长抑制的影响体重测量为了评价isis寡核苷酸对动物整体健康的影响,在处理期内定期测量体重。数据呈示于表77中并且指示用isis455291的处理不影响小鼠的整体健康。表77nci-h460异种移植模型中小鼠的体重测量实施例52:人stat3的反义抑制在人成胶质细胞瘤原位小鼠模型中的效应用isis455291(具有cagcagatcaagtccaggga序列(seqidno:1590)的5-10-5moe缺口聚体)处理原位移植有人成胶质细胞瘤细胞的nu/j小鼠。评价处理对小鼠中的肿瘤生长和耐受性的影响。处理30只nu/j小鼠在右额叶中立体定向移植有5x105个u-87mg-luc2细胞。在肿瘤细胞移植后第15天,用溶于2μlpbs中的100μgisis455291在肿瘤移植位点以一次性注射对这些小鼠中的15只颅内给药。用2μlpbs在肿瘤移植位点以一次性注射对剩余的15只小鼠颅内给药。第二组的小鼠用作对照组。分析肿瘤移植后第18天,通过co2吸入对每个组的五只小鼠施以安乐死并且收集脑样品用于rna分析。从肿瘤组织提取rna,用于使用上文所述的引物探针组rts199对人stat3mrna水平进行实时pcr分析。用isis455291处理导致肿瘤组织中的人stat3mrna相比于pbs对照的27%降低。定期监控每个组中的剩余小鼠至多2周用于存活分析。pbs对照组的中位存活为30.5天。isis寡核苷酸处理的小鼠的中位存活率为35天。p值为0.2088。实施例53:在pc9细胞自由摄取反义寡核苷酸后对stat3的剂量依赖性反义抑制在在pc9细胞(非小细胞肺癌细胞系)中以不同剂量进一步测试来自上述的研究的isis455703和isis455291。细胞以每孔3,000个细胞的密度铺板。以0.02μm、0.1μm、0.5μm、2.5μm和10.0μm浓度的反义寡核苷酸孵育细胞,如表78中详细说明。约24小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用人stat3引物探针组rts2033(正向序列gaggcccgcccaaca,在本文命名为seqidno:1520;反向序列ttctgctaatgacgttatccagtttt,在本文命名为seqidno:1521;探针序列ctgcctagatcggc,在本文命名为seqidno:1522)测量mrna水平。根据管家基因β-肌动蛋白含量调节stat3mrna水平,如通过人引物探针组hts5002(正向序列cggactatgacttagttgcgttaca,在本文命名为seqidno:1529;反向序列gccatgccaatctcatcttgt,在本文命名为seqidno:1530;探针序列cctttcttgacaaaacctaacttgcgcaga,在本文命名为seqidno:1531)测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表78中。如表78所示,isis455703和isis455291能够穿透细胞膜。表78通过pc9细胞自由摄取isis寡核苷酸对stat3mrna水平的剂量依赖性反义抑制实施例54:在c42b细胞自由摄取反义寡核苷酸后对stat3的剂量依赖性反义抑制在c42b细胞(前列腺癌细胞系结直肠癌细胞系)中以不同剂量进一步测试来自上述的研究的isis455291。细胞以每孔3,000个细胞的密度铺板。以0.02μm、0.1μm、0.5μm、2.5μm和10.0μm浓度的反义寡核苷酸孵育细胞,如表79中详细说明。约24小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用人stat3引物探针组rts2033(正向序列gaggcccgcccaaca,在本文命名为seqidno:1520;反向序列ttctgctaatgacgttatccagtttt,在本文命名为seqidno:1521;探针序列ctgcctagatcggc,在本文命名为seqidno:1522)测量mrna水平。根据管家基因β-肌动蛋白含量调节stat3mrna水平,如通过人引物探针组hts5002(正向序列cggactatgacttagttgcgttaca,在本文命名为seqidno:1529;反向序列gccatgccaatctcatcttgt,在本文命名为seqidno:1530;探针序列cctttcttgacaaaacctaacttgcgcaga,在本文命名为seqidno:1531)测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。如表79所示,isis455291能够穿透细胞膜。表79通过c42b细胞自由摄取isis寡核苷酸对stat3mrna水平的剂量依赖性反义抑制实施例55:在colo201细胞中自由摄取反义寡核苷酸后对stat3的剂量依赖性反义抑制在colo201细胞(结直肠癌细胞系)中以不同剂量进一步测试来自上述的研究的isis455291。细胞以每孔3,000个细胞的密度铺板。以0.02μm、0.1μm、0.5μm、2.5μm和10.0μm浓度的反义寡核苷酸孵育细胞,如表80中详细说明。约24小时后,从细胞分离rna且通过定量实时pcr测量stat3mrna水平。使用人stat3引物探针组rts2033(正向序列gaggcccgcccaaca,在本文命名为seqidno:1520;反向序列ttctgctaatgacgttatccagtttt,在本文命名为seqidno:1521;探针序列ctgcctagatcggc,在本文命名为seqidno:1522)测量mrna水平。根据管家基因β-肌动蛋白含量调节stat3mrna水平,如通过人引物探针组hts5002(正向序列cggactatgacttagttgcgttaca,在本文命名为seqidno:1529;反向序列gccatgccaatctcatcttgt,在本文命名为seqidno:1530;探针序列cctttcttgacaaaacctaacttgcgcaga,在本文命名为seqidno:1531)测量。结果表示为相对于未处理的对照细胞的stat3的抑制百分比。每个寡核苷酸的半数最大抑制浓度(ic50)也呈示于表80中。如表29所示,isis455291能够穿透细胞膜。表80通过colo201细胞自由摄取isis寡核苷酸对stat3mrna水平的剂量依赖性反义抑制序列表<110>isispharmaceuticals,inc.erice.swayzesusanm.freierroberta.macleodyoungsookim<120>信号转导及转录激活蛋白3(stat3)表达的调节<130>biol0142us<150>61/471,035<151>2011-04-01<150>61/558,308<151>2011-11-10<150>61/471,001<151>2011-04-01<150>61/471,045<151>2011-04-01<150>61/558,316<151>2011-11-10<150>61/471,015<151>2011-04-01<160>2758<170>用于windowsversion4.0的fastseq<210>1<211>4978<212>dna<213>智人(homosapien)<400>1ggtttccggagctgcggcggcgcagactgggagggggagccgggggttccgacgtcgcag60ccgagggaacaagccccaaccggatcctggacaggcaccccggcttggcgctgtctctcc120ccctcggctcggagaggcccttcggcctgagggagcctcgccgcccgtccccggcacacg180cgcagccccggcctctcggcctctgccggagaaacagttgggacccctgattttagcagg240atggcccaatggaatcagctacagcagcttgacacacggtacctggagcagctccatcag300ctctacagtgacagcttcccaatggagctgcggcagtttctggccccttggattgagagt360caagattgggcatatgcggccagcaaagaatcacatgccactttggtgtttcataatctc420ctgggagagattgaccagcagtatagccgcttcctgcaagagtcgaatgttctctatcag480cacaatctacgaagaatcaagcagtttcttcagagcaggtatcttgagaagccaatggag540attgcccggattgtggcccggtgcctgtgggaagaatcacgccttctacagactgcagcc600actgcggcccagcaagggggccaggccaaccaccccacagcagccgtggtgacggagaag660cagcagatgctggagcagcaccttcaggatgtccggaagagagtgcaggatctagaacag720aaaatgaaagtggtagagaatctccaggatgactttgatttcaactataaaaccctcaag780agtcaaggagacatgcaagatctgaatggaaacaaccagtcagtgaccaggcagaagatg840cagcagctggaacagatgctcactgcgctggaccagatgcggagaagcatcgtgagtgag900ctggcggggcttttgtcagcgatggagtacgtgcagaaaactctcacggacgaggagctg960gctgactggaagaggcggcaacagattgcctgcattggaggcccgcccaacatctgccta1020gatcggctagaaaactggataacgtcattagcagaatctcaacttcagacccgtcaacaa1080attaagaaactggaggagttgcagcaaaaagtttcctacaaaggggaccccattgtacag1140caccggccgatgctggaggagagaatcgtggagctgtttagaaacttaatgaaaagtgcc1200tttgtggtggagcggcagccctgcatgcccatgcatcctgaccggcccctcgtcatcaag1260accggcgtcc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