紫扇贝与海湾扇贝及其回交后代母本来源的鉴定方法与流程

文档序号:12109247阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种紫扇贝与海湾扇贝及其回交后代母本来源的鉴定方法,其特征是所用标记引物为mtDNA-Z,分别由左端引物序列mtDNA-Z-F和右端引物序列mtDNA-Z-R组成。

2.如权利要求1所述的紫扇贝与海湾扇贝及其回交后代母本来源的鉴定方法,其特征是上述左端引物序列mtDNA-Z-F为:5’-TATGAGGTGTCCCCCAAGTC-3’。

3.如权利要求1所述的紫扇贝与海湾扇贝及其回交后代母本来源的鉴定方法,其特征是上述右端引物序列mtDNA-Z-R为:5’-ACTGGCAGACAAACAAATCGT-3’。

4.如权利要求1所述的紫扇贝与海湾扇贝及其回交后代母本来源的鉴定方法,其特征是具体步骤如下:

(1)分别取待鉴定的紫扇贝、海湾扇贝与海紫紫回交扇贝、紫海海回交扇贝、紫海紫回交扇贝、海紫海回交扇贝的闭壳肌,并用常规的方法提取全基因组DNA,用TE缓冲液稀释至终浓度100ng/μL保存在-20℃备用;

(2)以提取的紫扇贝、海湾扇贝与上述各回交扇贝的DNA为模板,用上述引物对其进行PCR扩增,反应体系为10μL,包括0.25U Taq DNA酶,含1.5mM MgCl2的1×PCR buffer,0.2mM dNTP mix,左右端引物各1μM,50ngDNA模板;反应程序为:94℃预变性3min,94℃1min,56℃1min,72℃1min,30个循环,72℃延伸10min;PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳,EB染色,凝胶成像系统照相观察电泳结果;如果在近460bp处有PCR特异性条带出现,则确定母本线粒体基因来源为紫扇贝,如果在近460bp处没有PCR特异性条带出现,则确定其母本线粒体基因来源为海湾扇贝。

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