一种离心柱式基因组DNA小量抽提试剂盒的制作方法

本实用新型涉及一种试剂盒，具体涉及一种离心柱式基因组DNA小量抽提试剂盒，属于医疗器械技术领域。

背景技术：

试剂盒用于盛放检测化学成分、药物残留、病毒种类等化学试剂的盒子。一般医院、制药企业使用，为了节约时间、方便使用，越来越多的实验步骤与检测方法被开发为试剂盒，但是传统的试剂盒为简单的单层包装盒，内部空间为封闭的单一结构，所有物品被叠放于盒内，在使用过程中，技术人员很难准确迅速的获得，给实际操作带来不便，其中包含有基因组DNA抽提试剂盒，抽提出的基因组DNA完整性差和纯度低，且产率低，获得药剂后需重新购买反应器材，才能进行使用，影响工作效率，增加成本。

技术实现要素：

本实用新型要解决的技术问题是克服现有试剂盒在使用过程中时需重新购买反应器材，影响工作效率，增加成本的缺陷，提供一种离心柱式基因组DNA小量抽提试剂盒。

为了解决上述技术问题，本实用新型提供了如下的技术方案：

本实用新型提供了一种离心柱式基因组DNA小量抽提试剂盒，包括盒体、盒盖、容置通孔、试剂盘、洗脱液盘、试剂瓶、高速电机、纯化柱、缓冲液盘、齿轮、齿槽、纯化柱盖、废液收集槽、试剂放置层和凹槽，所述盒体的顶部设有所述盒盖，所述容置通孔、所述洗脱液盘和所述试剂瓶均设于所述盒体的顶部，所述容置通孔的底部设有所述试剂盘，所述试剂盘上设有所述齿槽，所述容置通孔的底部设有所述高速电机，所述试剂盘与所述高速电机连接，所述纯化柱安装于所述试剂盘的顶部，所述纯化柱的顶端设有所述缓冲液盘，所述缓冲液盘的顶部安装有所述纯化柱盖，所述纯化柱的底部设有所述齿轮，所述纯化柱通过所述齿轮与所述试剂盘上的所述齿槽相互咬合连接，所述盒体的中部设有所述废液收集槽，所述盒体的底端设有所述试剂放置层，所述试剂放置层内设有所述凹槽。

作为本实用新型的一种优选技术方案，所述容置通孔的沿壁上设有卡扣。

作为本实用新型的一种优选技术方案，所述纯化柱对于DNA的最大容量约为30到50微克之间。

作为本实用新型的一种优选技术方案，所述试剂放置层内设有六个所述凹槽。

本实用新型所达到的有益效果是：该装置提供的方法简单易行，通过去垢剂处理和特殊的液体系统将裂解细胞后产生的DNA结合在纯化柱材上，避免酚仿抽提，所获的基因组DNA具有完整性好、产量大、纯度高和稳定性好等特点，可以满足PCR、酶切、分子杂交和文库构建等各种分子生物学实验需要，且药剂的包装和使用均在试剂盒上完成，提高效率，同时结构简单，节约资源。

附图说明

附图用来提供对本实用新型的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本实用新型的实施例一起用于解释本实用新型，并不构成对本实用新型的限制。在附图中：

图1是本实用新型的结构示意图；

图2是本实用新型的纯化柱结构示意图；

图中:1、盒体；2、盒盖；3、容置通孔；4、试剂盘；5、洗脱液盘；6、试剂瓶；7、高速电机；8、纯化柱；9、缓冲液盘；10、齿轮；11、齿槽；12、纯化柱盖；13、废液收集槽；14、试剂放置层；15、凹槽。

具体实施方式

以下结合附图对本实用新型的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本实用新型，并不用于限定本实用新型。

实施例1

如图1-2所示，本实用新型提供了一种离心柱式基因组DNA小量抽提试剂盒，包括盒体1、盒盖2、容置通孔3、试剂盘4、洗脱液盘5、试剂瓶6、高速电机7、纯化柱8、缓冲液盘9、齿轮10、齿槽11、纯化柱盖12、废液收集槽13、试剂放置层14和凹槽15，盒体1的顶部设有盒盖2，容置通孔3、洗脱液盘5和试剂瓶6均设于盒体1的顶部，容置通孔3的底部设有试剂盘4，试剂盘4上设有齿槽11，容置通孔3的底部设有高速电机7，试剂盘4与高速电机7连接，纯化柱8安装于试剂盘4的顶部，纯化柱8的顶端设有缓冲液盘9，缓冲液盘9的顶部安装有纯化柱盖12，纯化柱8的底部设有齿轮10，纯化柱8通过齿轮10与试剂盘4)上的齿槽11相互咬合连接，盒体1的中部设有废液收集槽13，盒体1的底端设有试剂放置层14，试剂放置层14内设有凹槽15。

容置通孔3的沿壁上设有卡扣，用以固定纯化柱8于容置通孔3内，防止被试剂盘4的旋转产生的离心力发生偏移。

纯化柱8对于DNA的最大容量约为30到50微克之间，可以抽提少至数百个细胞，多至25mg组织、0.5-1cm鼠尾、500万个培养细胞、20亿个细菌或5000万个酵母，通常每500万淋巴细胞可以抽提得到15-25微克总DNA，每25mg肝、脑、肾组织可以抽提得到10-30微克总DNA，每25毫克心、肺组织可以抽提得到5-10微克总DNA，每10mg脾组织可以抽提得到5-30微克总DNA，每1.2cm小鼠尾尖或0.3cm大鼠尾尖可以获得10-25微克总DNA。

试剂放置层14内设有六个所述凹槽15，分别装有样品裂解液A、样品裂解液B、洗涤液I、洗涤液II、洗脱液和蛋白酶K。

具体原理：第一次使用前洗涤液I需添加7ml无水乙醇，洗涤液II需添加24ml无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记，温度较低时样品裂解液A或样品裂解液B中可能会有沉淀产生，属正常现象，使用前必须检查一遍，如有沉淀，55℃水浴孵育使沉淀溶解，混匀后使用，第一步，取不超过25mg的组织(脾不超过10mg)，剪切成尽可能小的碎片，加入180微升样品裂解液A；第二步，加入20微升蛋白酶K，混匀，55℃水浴孵育至完全裂解，在孵育期间可以偶尔取出样品迅速摇晃以加快裂解速度，裂解的时间因组织不同而有所不同，通常可在1-3小时内完成，为方便起见，可以直接裂解过夜，裂解过夜对抽提效果无任何负面影响，组织完全裂解后可以呈粘稠状，但不应该呈可把DNA纯化柱8堵住的凝胶状，如果消化过夜仍呈凝胶状，说明样品用量过多，作为补救措施，可以把整个反应体系放大一倍；第三步，最高速剧烈摇晃15秒，加入200微升样品裂解液B，摇晃混匀，70℃孵育10分钟，加入样品裂解液B后需立即摇晃混匀，加入样品裂解液B后可能会产生白色沉淀，但大多数情况在70℃孵育后会溶解，即使70℃孵育后仍有白色沉淀也不会干扰后续实验，有些组织例如肺、脾，在加入样品裂解液B后可能会形成凝胶状物，此时需剧烈晃动样品，以尽量破坏凝胶状物；第四步，加入200微升无水乙醇，摇晃混匀，加入乙醇后必须充分混匀，否则会严重影响抽提效果，加入乙醇后可能产生白色沉淀，属正常现象，后续步骤中必须把白色沉淀和溶液全部转移到纯化柱8内；第五步，把第四步中的混合物加入到DNA纯化柱内，≥6000g(约≥8000rpm)离心1分钟，倒弃废液收集槽13内液体，进行本步骤前需将纯化柱8置于废液收集槽13上，倒弃废液后回收废液收集槽13,注意：必须把沉淀全部转移到DNA纯化柱内，否则会严重影响抽提效果；第六步，加入500微升洗涤液I，≥6000g(约≥8000rpm)离心1分钟，倒弃废液收集槽13内液体；第七步，加入600微升洗涤液II，≥18000g(约≥12000rpm)离心1分钟，倒弃废液收集槽13内液体；第八步，再≥18000g(约≥12000rpm)离心1分钟，以去除残留的乙醇，不可把离心时间延长而省略本步骤，倒弃废液后再离心可以确保充分去除残留的乙醇；第九步，将DNA纯化柱置于一洁净的1.5ml离心管上，加入50-200微升洗脱液，室温放置1-3分钟，≥12000rpm离心1分钟，所得液体即为纯化得到的总DNA，洗脱液需要直接加至纯化柱8管内柱面中央，使液体被纯化柱吸收，如果有必要，可以使用去离子水或进行洗脱，使用较小体积的洗脱液可以使获得的总DNA的浓度较高，但洗脱下来的DNA量相对较少，如果对于获得较多量的DNA非常重要，可以在第一次用200微升洗脱液洗脱后，再用200微升洗脱液重复洗脱一次。第二次洗脱可以增加产量10-80％，特别是当第一次洗脱下来的DNA大于10微克时，第二次洗脱可以获得第一次洗脱时50-80％的量，一次性加入多于200微升的洗脱液对洗脱效果的改善相对不太明显。

该装置提供的方法简单易行，通过去垢剂处理和特殊的液体系统将裂解细胞后产生的DNA结合在纯化柱8上，避免酚仿抽提，所获的基因组DNA具有完整性好、产量大、纯度高和稳定性好等特点，可以满足PCR、酶切、分子杂交和文库构建等各种分子生物学实验需要，且药剂的包装和使用均在试剂盒上完成，提高效率，同时结构简单，节约资源。

最后应说明的是：以上所述仅为本实用新型的优选实施例而已，并不用于限制本实用新型，尽管参照前述实施例对本实用新型进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本实用新型的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。