本发明属于化学物质及其制备技术领域，具体的为一种4h-1，2，4-三唑-3-硫醇衍生物即4-(取代的氨基)-5-(2'-(取代的亚甲基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇衍生物及其制备方法与应用。
背景技术：
恶性肿瘤是当今世界危及人类生命的最常见、最严重疾病。自2010年起，恶性肿瘤已取代心血管疾病成为全世界死亡率最高的疾病，其发病率仍然不断增高。三氮唑衍生物具有较强的生物活性三氮唑衍生物有作为激酶类抑制剂的潜力，能够有效治疗蛋白激酶调节异常所引发的疾病，具有生物利用度高、抗癌活性明显和毒性低的优点。
开发蛋白激酶抑制剂抑制其在细胞内的功能，进而达到抗肿瘤的目的，具有很好的应用前景。因此设计合成具有生物利用度高、抗癌活性明显和毒性低等优点的蛋白激酶抑制剂是目前研究的热点。
技术实现要素：
本发明的第一目的在于提供一种4h-1，2，4-三唑-3-硫醇衍生物即4-(取代的氨基)-5-(2'-(取代的亚甲基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇衍生物及其制备方法。
本发明的第二目的在于提供一种4h-1，2，4-三唑-3-硫醇衍生物即4-(取代的氨基)-5-(2'-(取代的亚甲基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇衍生物作为蛋白激酶抑制剂和组蛋白去乙酰化抑制剂在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。特别是抗人宫颈癌hela细胞、人肺癌a549细胞和人乳腺癌mcf7细胞药物中的应用。
一种4h-1，2，4-三唑-3-硫醇衍生物即4-(取代的氨基)-5-(2'-(取代的亚甲基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇衍生物，其结构式为：
式中r代表是烷氧基、氯代、羟基取代的芳基。
所述的4h-1，2，4-三唑-3-硫醇衍生物包括4-(2-氯亚苄基氨基)-5-(2'-(2-氯亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇、4-(2，5-二甲氧基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-2，5-二甲氧基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇、4-(4-甲氧基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-4-甲氧基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇、4-(4-羟基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-4-羟基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇、4-(2，3-二甲氧基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-2，3-二甲氧基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇。
一种4h-1，2，4-三唑-3-硫醇衍生物的制备方法，包括以下步骤：
干燥的反应瓶中，在室温条件下依次加入乙醇，4-氨基-3-肼基-5-巯基-1，2，4-三氮唑，取代苯甲醛，催化剂三氟乙酸，升温至70～80℃，反应8～9小时，薄层色谱法检测反应完全后停止反应，冷却，反应液过滤，得滤饼，滤饼用乙醇洗涤，干燥得黄色固体产物，该黄色固体产物即为4h-1，2，4-三唑-3-硫醇衍生物，收率为75％～85％。
作为优选，所述的催化剂三氟乙酸，以质量百分比计，用量为4-氨基-3-肼基-5-巯基-1，2，4-三氮唑和取代苯甲醛的1％～5％。催化剂的用量对化学反应速率有影响，在一定用量范围内，随着用量增加，反应时间减少，反应速率加快；当用量增加到一定值后，反应时间反应速率不再改变。发明人经过实验发现，催化剂三氟乙酸在1％～5％之间，反应速率最快，用时最小。
作为优选，所述的干燥条件为40～50℃的真空干燥箱内干燥4～8小时。
作为优选，所述的干燥条件为45℃的真空干燥箱内干燥6小时。
作为优选，所述的4-氨基-3-肼基-5-巯基-1，2，4-三氮唑，取代苯甲醛的摩尔配比为1:(2～2.2)。发明人发现，使取代苯甲醛过量，可以保证4-氨基-3-肼基-5-巯基-1，2，4-三氮唑反应完全，使得目标化合物-(取代氨基)-5-(2'-(取代亚甲基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇衍生物杂质更少，更易分离提纯，保证产品收率和纯度。
作为优选，所述的取代苯甲醛包括2-氯苯甲醛、2，5-二甲氧基苯甲醛、4-甲氧基苯甲醛、4-羟基苯甲醛、2，3-二甲氧基苯甲醛。发明人经过实验发现，利用所述的5种取代苯甲醛制备得到的相应的目标产物，其产率和抗肿瘤作用都更好。
所述的一种4h-1，2，4-三唑-3-硫醇衍生物作为蛋白激酶抑制剂和组蛋白去乙酰化抑制剂在制备抗肿瘤药物中应用。利用mtt比色法对4h-1，2，4-三唑-3-硫醇衍生物进行抗肿瘤活性测试，结果表明具有明显的抗肿瘤活性，可用于制备治疗肿瘤药物中。
本发明反应成本低，产率高，反应过程简单易控制，适用于工业化生产，且该类衍生物具有一定的抗癌活性。
具体实施方式
下面通过实施例，对本发明的技术方案作进一步具体的说明：
实施例1：4-(2-氯亚苄基氨基)-5-(2'-(2-氯亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇的制备
在干燥的25ml反应瓶中，室温条件下分别加入10ml乙醇，0.146g(0.001mol)4-氨基-3-肼基-5-巯基-1，2，4-三氮唑，224μl(0.002mol)2-氯苯甲醛，3μl三氟乙酸，升温至70～80℃，反应8～9小时，薄层色谱法检测反应完全后停止反应。反应液冷却，过滤，得滤饼；乙醇洗涤滤饼2次，滤饼在40～50℃的真空干燥箱干燥4～8h后得黄色固体产物0.32g，收率82.1％。
经核磁共振检测，该黄色固体波谱数据为：1h-nmr(600mhz,dmso-d6)δ11.11(brs,1h),10.98(s,1h),8.77(s,1h),8.43-8.48(m,1h),7.95(dd,j＝2.20,7.15hz,1h),7.62-7.66(m,2h),7.5-7.58(m,1h),7.50-7.53(m,1h),7.38-7.44(m,2h)；13c-nmr(150mhz,dmso-d6)δ159.8,155.4,148.5,141.2,135.5,134.3,133.0,132.2,131.3,130.6,130.3,128.8,128.1,128.0,126.9；hrms(+):calcdforc16h12cl2n6s[m+h]+391.0294,found391.0296；calcdforc16h12cl2n6sna[m+na]+413.0113,found413.0110.说明该黄色固体为4-(2-氯亚苄基氨基)-5-(2'-(2-氯亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇。
实施例2：4-(2，5-二甲氧基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-2，5-二甲氧基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇的制备
在干燥的25ml反应瓶中，室温条件下分别加入10ml乙醇，0.146g(0.001mol)4-氨基-3-肼基-5-巯基-1，2，4-三氮唑，0.333g(0.0021mol)2，5-二甲氧基苯甲醛，4μl三氟乙酸，升温至70～80℃，反应8～9小时。薄层色谱法检测反应完全后停止反应。反应液冷却，过滤，得滤饼；乙醇洗涤滤饼2次，滤饼在40～50℃的真空干燥箱干燥4～8小时后得黄色固体产物0.37g，收率83.7％。
经核磁共振检测，该黄色固体波谱数据为：1h-nmr(600mhz,dmso-d6)δ10.82(s,1h),10.06(s,1h),8.2(s,1h),7.16(d,j＝2.20hz,2h),6.79(d,j＝2.20hz,2h),6.74(t,j＝2.20hz,1h),6.51(t,j＝2.20hz,1h),3.83(s,6h),3.75(s,6h)；13c-nmr(150mhz,dmso-d6)δ162.1,161.2,161.1,148.5,145.3,136.9,134.7,107.0,105.0,104.7,102.2,56.0,55.7,39.9；hrms(+):calcdforc20h22n6o4s[m+h]+443.1496,found443.1498；calcdforc20h22n6o4sna[m+na]+465.1315,found465.1317.说明该黄色固体为4-(2，5-二甲氧基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-2，5-二甲氧基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇。
实施例3：4-(4-甲氧基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-4-甲氧基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇的制备
在干燥的25ml反应瓶中，室温条件下分别加入10ml乙醇，0.146g(0.001mol)4-氨基-3-肼基-5-巯基-1，2，4-三氮唑，243μl(0.002mol)4-甲氧基苯甲醛，3μl三氟乙酸，升温至70～80℃，反应8～9小时。薄层色谱法检测反应完全后停止反应。反应液冷却，过滤，得滤饼；乙醇洗涤滤饼2次，滤饼在40～50℃的真空干燥箱干燥4～8h后得黄色固体产物0.32g，收率83.8％。
经核磁共振检测，该黄色固体波谱数据为：1h-nmr(600mhz,dmso-d6)δ13.25(s,1h),10.50(s,1h),9.91(s,1h),8.27(s,1h),7.96(d,j＝8.80hz,2h),7.58(d,j＝8.62hz,2h),7.12(d,j＝8.80hz,2h),6.99(d,j＝8.80hz,2h),3.87(s,3h),3.79(s,3h)；13c-nmr(150mhz,dmso-d6)δ163.2,162.7,160.8,159.8,148.8,145.3,131.3,128.5,127.6,125.3,114.9,114.7,56.0,55.7；hrms(+):calcdforc18h18n6o2s[m+h]+383.1285,found383.1283；calcdforc20h22n6o4sna[m+na]+405.1104,found405.1107.说明该黄色固体产物为4-(4-甲氧基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-4-甲氧基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇。
实施例4：4-(4-羟基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-4-羟基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇的制备
在干燥的25ml反应瓶中，室温条件下分别加入10ml乙醇，0.146g(0.001mol)4-氨基-3-肼基-5-巯基-1，2，4-三氮唑，216μl(0.0022mol)4-羟基苯甲醛，3μl三氟乙酸，升温至70～80℃，反应8～9小时，薄层色谱法检测反应完全后停止反应。反应液冷却，过滤，得滤饼；乙醇洗涤滤饼2次，滤饼在40～50℃的真空干燥箱干燥4～8h后得黄色固体产物0.32g，收率83.8％。
经核磁共振检测，该黄色固体波谱数据为：1h-nmr(600mhz,dmso-d6)δ13.19(brs,1h),10.38(s,1h),10.35(brs,1h),9.83(brs,1h),9.76(s,1h),8.21(s,1h),7.80-7.87(m,2h),7.44-7.49(m,2h),6.91-6.96(m,2h),6.78-6.82(m,2h)；13c-nmr(150mhz,dmso-d6)δ163.5,162.0,159.8,159.3,148.8,145.7,131.6,128.6,126.0,123.7,116.3,116.1；hrm(+):calcdforc16h12n6o2s[m+h]+353.0815,found353.0815；calcdforc16h12n6o2sna[m+na]+375.0635,found375.0637.说明该黄色固体产物为4-(4-羟基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-4-羟基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇
实施例5：4-(2，3-二甲氧基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-2，3-二甲氧基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇的制备
在干燥的25ml反应瓶中，室温条件下分别加入10ml乙醇，0.146g(0.001mol)4-氨基-3-肼基-5-巯基-1，2，4-三氮唑，0.332g(0.002mol)2，3-二甲氧基苯甲醛，3μl三氟乙酸，升温至70～80℃，反应8～9小时，薄层色谱法检测反应完全后停止反应。反应液冷却，过滤，得滤饼；乙醇洗涤滤饼2次，滤饼在40～50℃的真空干燥箱干燥4～8h后得黄色固体产物0.36g，收率81.4％。
经核磁共振检测，该黄色固体波谱数据为：1h-nmr(600mhz,dmso-d6)δ13.34(s,1h),10.78(s,1h),10.54(s,1h),8.62(s,1h),7.84(dd,j＝1.47,7.70hz,1h),7.39(dd,j＝1.83,7.52hz,1h),7.29-7.31(m,1h),7.23-7.28(m,1h),7.09(d,j＝7.70hz,1h),7.06-7.08(m,1h),3.88(s,3h),3.85(s,3h),3.83(s,3h),3.78(s,3h)；13c-nmr(150mhz,dmso-d6)δ159.8,156.8,153.2,150.1,148.7,147.9,140.8,128.4,126.5,125.0,124.7,118.6,117.1,117.1,114.0,62.2,61.6,56.5,56.4；hrms(+):calcdforc20h22n6o4s[m+h]+443.1496,found443.1496；calcdforc20h22n6o4sna[m+na]+465.1315,found465.1318.说明该黄色固体产物为4-(2，3-二甲氧基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-2，3-二甲氧基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇
实施例6：利用检测细胞存活和生长的常规方法mtt比色法对实施例1-5所得的4-(2-氯亚苄基氨基)-5-(2'-(2-氯亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇、4-(2，5-二甲氧基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-2，5-二甲氧基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇、4-(4-甲氧基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-4-甲氧基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇、4-(4-羟基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-4-羟基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇和4-(2，3-二甲氧基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-2，3-二甲氧基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇进行体外抗肿瘤活性测试，同时以阳性药物舒尼替尼的抗肿瘤活性测试进行对比，肿瘤细胞选用了人宫颈癌hela细胞、人肺癌a549细胞和人乳腺癌mcf7细胞，具体实验数据如表1所示：
表1
由表1可以看出，4-(2-氯亚苄基氨基)-5-(2'-(2-氯亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇、4-(2，5-二甲氧基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-2，5-二甲氧基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇、4-(4-甲氧基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-4-甲氧基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇、4-(4-羟基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-4-羟基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇和4-(2，3-二甲氧基亚苄基氨基)-5-(2'-(2-2，3-二甲氧基亚苄基氨基)-肼基)-4h-1，2，4-三唑-3-硫醇五个化合物的抗肿瘤活性与阳性药物舒尼替尼的抗肿瘤活性都相近，说明都具有很好的抗癌活性作用。其中该类五种化合物对人宫颈癌hela细胞的ic50都小于舒尼替你对人宫颈癌hela细胞的ic50，说明该类化合物对人宫颈癌hela细胞的抑制作用最好，抗人宫颈癌hela细胞活性最强。
因此4h-1，2，4-三唑-3-硫醇衍生物可以在制备治疗或预防肿瘤疾病的药物中应用。
本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。