本发明涉及一种利用生物酶、水提、超声波三种方法协同提取海带中多糖的工艺，属于提取分离技术领域。
背景技术：
海带(laminariajaponica)又名昆布，是褐藻门海带目海带科海带属，生长在海水里，柔初似带，是一种深褐色的海藻类植物。海带多糖是一种白色粉末，至今从海带中提取的海带多糖广义上主要包括3种：褐藻胶(algin)、褐藻糖胶(fucoidan)和褐藻淀粉(laminaran)。海带多糖具有很高的食用与药用价值，具有免疫调节功能，如多糖能治疗慢性病毒性肝炎、风湿病等，还具有抗感染、降血脂、抗凝血、抗福射，能控制细胞分裂和分化，调节细胞的生长，促进蛋白质和核酸的生物合成作用，而且多糖是植物提取物，药物毒性极小，因而多糖的研究引起了人们的极大兴趣。
当前对海带多糖的提取方法，有很多相关的文献或报道，主要有水提、酸提、碱提，超声波提取等这几种方法，这些方法都有一定的缺陷有关涉及酶提的方法比较少，如热水提取法难以释放大量胞内成分，使其提取效率不高、耗时长，也是其难以推广的主要原因；酸提容易造成多糖水解；碱提容易降低多糖的活性。本发明采用清洁安全高效的生物酶、水提、超声波三种方法混合进行多糖的提取，不仅克服了水提、酸提的提取率低，多糖活性易被破坏的缺点，而且酶提法所得多糖分子量低，更容易被人体吸收，水提的同时进行灭酶，超声波可以在短时间让细胞壁更容易被破坏，让胞内多糖溶液更容易流出。
技术实现要素：
本发明提供了一种工艺成熟，提取率高的海带多糖的提取方法。
为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种酶法协同水提和超声波共同作用提取海带多糖的工艺，其步骤包括：
(1)原料处理：选取市售海带为原料，浸泡，洗净晒干后，粉碎，过筛，制的海带粉，备用；
(2)酶解：复合纤维素酶、果胶酶和蛋白酶进行复合酶解：取步骤(1)中制得的海带粉，加入一定其体积倍数的柠檬酸柠檬酸钠缓冲溶液或醋酸调节ph，加入与其重量0.3-2％的复合纤维素酶、0.1-2％的果胶酶、0.1-2％的蛋白酶，搅拌均匀，一定温度下酶解数小时后，迅速升温至80-100℃保温浸提1-3h；
(3)超声波处理：取步骤(2)的浆液，超声波处理15-40min，作用温度30-65℃，完成后过滤，收集滤液；
(4)浓缩：取步骤(3)的多糖溶液，置于真空浓缩设备中，控制真空度进行浓缩，得到海带多糖浓缩液；
(5)干燥：取步骤(4)的海带多糖浓缩液倒入培养皿中干燥，得海带粗多糖；
本发明所述海带为新鲜海带。
与现有技术相对，本发明有以下优点：
(1)利用生物酶法是一种温和的方法，不会破坏多糖的结构，由于酶具有较强的专一性，所以提取效率较高且无其它溶剂残留，从而不会影响多糖活性，可适合大规模生产，同时采用蛋白酶脱除蛋白质的效果远优与酸法和sevag法，并且会提高多糖的浸出率。
(2)加复合纤维素酶，更有利于破坏海带的细胞壁，使3种多糖从细胞间和细胞内溶出；果胶酶的加入，切断了褐藻胶大分子；蛋白酶的加入，降解了蛋白质大分子，使溶液粘度得到降低，更有利于褐藻糖胶溶出；而复合酶的同时加入，不利于充分发挥复合纤维素酶的破壁作用，作为保健品或医药品更利于人体吸收。
(3)水提的同时进行灭酶，超声波可以在短时间让细胞壁更容易被破坏，促使多糖更容易转移到提取溶剂中。多糖提取过程没有醇类参与，多糖提取液悬蒸后，直接进行干燥，保证提取的多糖全部获得，现有工艺都会经醇沉，势必造成多糖损失，多糖提取过程没有醇类参与，成本低，工艺简化。
具体实施方式
实施例1
(1)原料处理：选取市售海带为原料，浸泡，洗净晒干后，粉碎，过筛，制的海带粉，备用；
(2)酶解：复合纤维素酶、果胶酶和蛋白酶进行复合酶解：取步骤(1)中制得的海带粉，加入其重量50倍的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液与其重量1％的复合纤维素酶、0.8％的果胶酶、0.5％的蛋白酶，搅拌均匀，55℃酶解3h，迅速升温至100℃保温浸提1h；
(3)超声波处理：取步骤2)的浆液，超声波处理15min，作用温度40℃，，完成后过滤，收集滤液；
(4)浓缩：取步骤(3)的多糖溶液，置于真空浓缩设备中，控制真空度99kpa，温度60℃浓缩至原体积的1/3，得到海带多糖浓缩液；
(5)干燥：取步骤(4)的海带多糖浓缩液置于真空冷冻设备内，温度-80℃，冷冻干燥12h，得海带粗多糖；
实施例2
(1)原料处理：选取市售海带为原料，浸泡，洗净晒干后，粉碎，过筛，制的海带粉，备用；
(2)酶解：复合纤维素酶、果胶酶和蛋白酶进行复合酶解：取步骤(1)中制得的海带粉，加入其重量50倍的醋酸溶液与其重量0.8％的复合纤维素酶、1％的果胶酶、1％的蛋白酶，搅拌均匀，65℃酶解3h，迅速升温至90℃保温浸提1h；
(3)超声波处理：取步骤(2)的浆液，超声波处理20min，作用温度50℃，完成后过滤，收集滤液；
(4)浓缩：取步骤(3)的多糖溶液，置于真空浓缩设备中，控制真空度99kpa，温度60℃浓缩至原体积的1/3，得到海带多糖浓缩液；
(5)干燥：取步骤(4)的海带多糖浓缩液置于60℃真空烘箱内干燥，得海带粗多糖；
实施例3
(1)原料处理：选取市售海带为原料，浸泡，洗净晒干后，粉碎，过筛，制的海带粉，备用；
(2)酶解：复合纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白酶进行复合酶解：取步骤(1)中制得的海带粉，加入其重量80倍的柠檬酸柠檬酸钠缓冲溶液与其重量0.3％的纤维素酶、0.8％的果胶酶、1.4％的蛋白酶，搅拌均匀，60℃酶解6h，迅速升温至80℃保温浸提1h；
(3)超声波处理：取步骤(2)的浆液，超声波处理30min，作用温度60℃，完成后过滤，收集滤液；
(4)浓缩：取步骤(3)的多糖溶液，置于真空浓缩设备中，控制真空度99kpa，温度60℃浓缩至原体积的1/3，得到海带多糖浓缩液；
(5)干燥：取步骤(4)的海带多糖浓缩液100℃干燥12h，得海带粗多糖。