一种同时提取CBD和CBDV的方法与流程

本发明涉及化学技术领域，具体涉及一种同时提取大麻二酚(cbd)和次大麻二酚(cbdv)的方法。

背景技术：

大麻(学名：cannabissatival.)大麻科、大麻属植物，又名麻、汉麻、火麻、山丝苗、黄麻，具有重要的农用及药用价值。大麻中含有一种毒性成分四氢大麻酚(thc)可使人致幻成瘾，可作毒品，曾在相当长时期内禁种。

由于大麻的经济、药用价值极高，专供工业用途的原料大麻简称为“工业大麻”，其生长期大麻花叶中thc含量小于千分之三，不具备提取毒性成分thc的价值或直接作为毒品吸食，可以合法进行规模化种植与工业化开发利用。

目前，人们已从大麻植株中分离出了500余种物质，其中大麻酚类化合物至少有86种。大麻酚类化合物是大麻植株中特有的一类物质，是大麻植物中主要的活性成分，有关它的研究一直是大麻研究的热点。大麻植株中主要的大麻酚类化合物有thc、大麻酚(cbn)、cbd、大麻萜酚(cbg)、cbdv等，其中前三者占大麻酚类化合物的90％以上。这些酚类物质已被证实具有很强的药理活性，如，cbd不具有神经毒性，其能阻碍thc对人体神经系统的影响，并具有明显的抗痉挛、抗风湿性关节炎、抗焦虑等药理活性，具有巨大产业开发价值；cbd和thcv可影响脂质和糖代谢，可能成为控制2型糖尿病患者血糖的新选择等，cbdv具有较好的抗癫痫活性，同时有研究表明cbdv可减轻恶心症状，有助于治疗胃肠问题；特别值得注意的是，这些酚类物质的联合应用作用更强。但大麻中的thc具有致瘾致幻作用，以工业大麻作为原料，得到不含thc的提取物，为药物制剂提供高活性物质原料很有必要。

专利申请cn201621167060.3公开了一种高纯度大麻二酚(cbd)的生产设备，其中，以己烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇等为溶剂，经过一次萃取，三次层析，最终得到95％以上成品，但是如此多步分离提纯，势必造成收率较低的问题，而且有害溶剂使用量较大，对环境、操作人员的影响较大，对厂房及设备要求相对较高，且容易造成产品中溶剂残留，后续处理难度较大，这些都不利于工业化大生产。专利申请cn103739585a公开了一种从工业大麻中提取二氢大麻酚(cbd)的工艺，其从花叶原料经烘烤转化，以石油醚、正己烷等萃取，浓缩膏经柱层析硅胶分离，最终得到成品，此工艺虽简单，但使用溶剂量极大，对环境极不友好，另外，层析硅胶不能重复使用，会增加总体的生产成本，也势必增加后续处理工作，为大规模的应用埋下隐患。专利申请cn201610674119.6中公开了一种从工业大麻花叶中提取大麻二酚的方法，其中摈弃了石油醚、正己烷、二氯甲烷等溶剂，采用乙醇作为提取溶剂，并结合改进的提取工艺，提高了大麻二酚的纯度，同时去除了成品中精神毒性成分四氢大麻酚。上述专利文献中均未涉及cbdv的提取，造成一定的资源浪费，而现有技术公开了cbdv可与标准抗癫痫药或其他大麻酚类化合物如cbd、thcv组合用于治疗癫痫，因此，同时利用花、叶中含量较高的cbdv也是一项重要课题。

技术实现要素：

为克服现有技术的不足，本发明提供一种同时提取cbd和cbdv的方法，其中cbd纯度可高达99.7％，cbdv一次结晶纯度可达98％，重结晶纯度可达99％以上，可形成一条绿色的生产线，两种高纯高含量的大麻素产品，工业化可行性、环境安全性与质量稳定性三大基本原则支撑的产业链。

具体地，本发明提供的同时提取cbd和cbdv的方法包括如下步骤：

(1)将大麻的提取部位粉碎，烘烤，得到药材粉末；

(2)将步骤(1)所得药材粉末用溶剂提取，得到提取液；

(3)将步骤(2)所得提取液浓缩，固液分离，得上清液；

(4)将步骤(3)所得上清液过吸附柱，分别洗脱，得洗脱液1和洗脱液2；

(5)将步骤(4)所得洗脱液1和洗脱液2分别浓缩，纯化，得到cbdv和cbd。

优选的，步骤(1)中所述的提取部位选自：大麻叶、大麻花、大麻根、大麻秆芯、大麻籽粕中的一种或两种以上任意比例的组合；更优选的，所述的提取部位为大麻花和/或大麻叶，进一步优选地，所述大麻花和/或大麻叶采用盛花期的大麻花和/或大麻叶。

优选的，步骤(1)中所述的大麻选自工业大麻、中间型大麻或药用大麻中的一种或两种以上的组合；更优选为工业大麻。

优选地，步骤(1)中所述的大麻提取部位为采摘后经过初步干燥(如晒干、烤干等干燥方式)的大麻提取部位，更优选地，所述大麻提取部位水分含量为10-15％，灰土含量在3％以下。

步骤(1)中所述的烘烤有利于大麻提取部位中的一些其他成分转化为大麻酚类化合物，如大麻酚酸可通过非酶促反应脱除羧基转化成为大麻酚(cbn)，烘烤后酚类化合物总含量可提高50％以上。

优选的，步骤(1)中所述烘烤的温度为100-150℃(具体如100、110、120、130、140或150℃)，更优选为120℃。

优选的，步骤(1)中所述烘烤的时间为20-80min(具体如20、40、60或80min)，更优选为40min。

在本发明的一个实施例中，步骤(1)中所述烘烤的温度为100-150℃，时间为20-80min，在这种条件下烘烤效率高，且不会破坏有效成分。

在本发明的一个优选实施例中，步骤(1)中所述烘烤温度为120℃，烘烤时间为40min。

优选的，步骤(1)中所述的粉碎为将大麻提取部位粉碎至10-80目(具体如10、20、30、40、50、60、70或80目)。

优选的，步骤(1)中所述的药材粉末中水分含量小于5％，更优选的，所述水分含量小于4％。

优选的，步骤(2)中所述的溶剂为乙醇，更优选的，所述乙醇为浓度为60-95％(v/v，具体如60％、70％、80％、90％或95％)，更优选为90％。

优选的，步骤(2)中所述的溶剂用量为6-30倍药材量(具体如6、7、8、9、10、15、20、25或30倍药材量)。

优选的，步骤(2)中所述提取次数为1-5次(具体如1、2、3、4或5次)，每次提取时间为1-3h。

优选的，步骤(2)中所述的提取方法选自：冷浸法、超声提取法、回流提取法和浸漉法中的一种或两种以上的组合；更优选的，步骤(2)中所述的提取方法为冷浸法。

优选的，所述的冷浸法提取具体如下：以6-10倍量60-95％乙醇冷浸2-3次，每次0.5-3h；更优选为：以6-10倍量80-95％乙醇冷浸2-3次，每次1-3h。

优选的，所述的浸漉法为连续浸漉法，其提取具体如下：以10-30倍量60-95％乙醇浸漉提取8-60h(具体如8、15、25、30、35、40、45、50、55或60h)，更优选地，以15-30倍量80-95％乙醇浸漉提取15-25h。

优选的，步骤(3)中所述浓缩为将提取液浓缩至酒精度40-70％(具体如40％、50％、60％、65％或70％)。

优选的，步骤(3)中所述浓缩的温度为50-70℃(具体如50、55、60、65或70℃)。

优选的，步骤(3)中所述的固液分离操作为沉降和/或过滤，更优选的，所述的沉降包括重力沉降和离心力沉降，所述的过滤优选为采用过滤设备如板框压滤机进行。

优选的，步骤(4)中所述的吸附柱填料选自：hpd系列、ads系列、hz系列、xad系列和d系列大孔树脂填料中的一种或两种以上的组合；更优选的，所述吸附柱填料选自：hpd100、hz18和d101中的一种或两种以上的组合。

步骤(4)的分别洗脱是所述方法的关键步骤，优选的，步骤(4)所述的洗脱为梯度洗脱，包括：先用洗脱溶剂1洗脱出cbdv，得到洗脱液1，再用洗脱溶剂2洗脱出cbd，得到洗脱液2，即洗脱液1中洗脱的目标化合物为cbdv，洗脱液2中洗脱的目标化合物为cbd。

更优选的，步骤(4)所述的洗脱为梯度洗脱，包括：先洗脱除杂，再用洗脱溶剂1洗脱出cbdv，得到洗脱液1，然后再用洗脱溶剂2洗脱出cbd，得到洗脱液2。

进一步优选的，步骤(4)所述的洗脱还包括最后用洗脱溶剂3洗脱出thc的步骤，得到洗脱液3。

优选的，所述的除杂洗脱溶剂为纯化水。

优选的，所述除杂洗脱溶剂用量为1-3倍柱体积，优选为2倍柱体积。

优选的，所述的洗脱溶剂1为低醇溶剂，如15-65％乙醇(具体如15％、20％、30％、40％、50％、60％或65％乙醇)，更优选为60％乙醇或65％乙醇。

优选的，所述的洗脱溶剂1用量为3-5倍柱体积，优选为4倍柱体积。

优选的，所述的洗脱溶剂2为高醇溶剂，如65-90％乙醇(具体如65％、70％、76％、80％、82％或90％乙醇)，更优选为76％乙醇、80％乙醇或82％乙醇。

优选的，所述的洗脱溶剂2用量为4-8倍柱体积(具体如4、5、6、7或8倍柱体积)，优选为5或6倍柱体积。

优选的，所述的洗脱溶剂3为90-95％乙醇，更优选为90％乙醇或95％乙醇。

优选的，所述除杂洗脱溶剂用量为2-4倍柱体积，优选为3倍柱体积。

在本发明的一个优选实施例中，步骤(4)中所述的洗脱包括：依次用纯化水洗脱除杂，以15-65％乙醇洗脱出cbdv，得洗脱液1，以65-90％乙醇洗脱出cbd，得洗脱液2，以90-95％乙醇洗脱出thc，得洗脱液3。

优选的，步骤(5)中所述的浓缩为将步骤(4)所得洗脱液1和洗脱液2分别浓缩至酒精度50-70％(具体如50％、55％、60％、65％或70％)。

优选的，步骤(5)中所述的纯化步骤包括：柱层析和/或结晶。

优选的，步骤(5)中所述的纯化步骤包括：(5a)将步骤(4)所得洗脱液1和/或洗脱液2分别进行柱层析，洗脱，分别得到洗脱液1-1和/或洗脱液2-1。

更优选的，步骤(5)中所述的纯化步骤还包括：(5b)将步骤(5a)所得洗脱液1-1和/或洗脱液2-1分别浓缩，结晶，分别得到cbdv和cbd。

优选的，所述的柱层析的层析柱填料选自：hpd系列、ads系列、hz系列、lx系列、hp系列、ods填料、mci填料、反相填料及以丙烯酸为母体的脱色树脂中的一种或两种以上的组合；更优选的，所述层析柱填料选自：hp20、ads7、dm130、mci、c18反相填料中的一种或两种以上的组合。

优选的，步骤(5a)所述的柱层析包括二次柱层析。

优选的，步骤(5a)中洗脱液1和/或洗脱液2的柱层析后洗脱的溶剂为65-80％乙醇(具体如65％、68％、70％、75％、78％或80％乙醇)。

优选的，步骤(5a)中洗脱液1和/或洗脱液2的柱层析后洗脱为梯度洗脱，包括先洗脱除杂，再洗脱出目标产物部分(即层析柱中吸附的cbdv、cbd)。

优选的，步骤(5b)中所述的浓缩为减压浓缩，更优选的，所述浓缩条件为：55-70℃，-0.10mpa。

优选的，步骤(5b)中所述的结晶为低温结晶；更优选的，步骤(5b)中所述的结晶条件为：4-10℃，12-48h。

优选的，步骤(5b)中所述的结晶还包括重结晶。

优选的，步骤(5b)中所述的结晶溶剂选自：乙醇、己烷、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、冰醋酸、二氧六环、四氯化碳、苯和石油醚中的一种或两种以上的组合，更优选自：乙醇、己烷和丙酮中的一种或两种以上的组合。

优选的，步骤(5)还包括：(5c)将步骤(5b)所得结晶洗涤，干燥。

优选的，步骤(5c)中所述的洗涤为采用纯化水淋洗。

优选的，步骤(5c)中所述的干燥方式选自：喷雾干燥、真空干燥、冷冻干燥、近红外干燥和微波干燥中的一种或两种以上的组合；更优选为真空干燥，干燥温度为30-50℃。

优选的，步骤(5)还包括将所得洗脱液3浓缩，纯化；更优选的，销毁，如采用酸(如浓盐酸、浓硝酸等)销毁。

本发明提供的提取cbd和cbdv的方法，所用的原料、试剂和仪器价廉易得，成本较低，采用的操作和方法简单易进行；且所用溶剂多为乙醇和水，降低了对环境和操作人员的影响和产品中溶剂残留；所得产品中目标产物含量非常高，如cbd纯度可高达99.7％，cbdv一次结晶纯度可达98％，重结晶纯度可达99％以上；且去除和销毁了精神毒性成分thc，产品安全性较高；此外，柱填料可重复使用，有利于降低生产成本，降低填料废弃物对环境的污染；上述方法批次稳定性比较好，产品纯度和收率均较高，充分利用资源，可实现工业放大化。

附图说明

图1所示为本发明实施例1制备的cbdv成品的hplc色谱图。

图2所示为本发明实施例1制备的cbd成品的hplc色谱图。

图3所示为本发明实施例2制备的cbdv成品的hplc色谱图。

图4所示为本发明实施例2制备的cbd成品的hplc色谱图。

图5所示为本发明实施例3制备的cbdv成品的hplc色谱图。

图6所示为本发明实施例3制备的cbd成品的hplc色谱图。

图7所示为本发明实施例4制备的cbdv成品的hplc色谱图。

图8所示为本发明实施例4制备的cbd成品的hplc色谱图。

具体实施方式

除非另有定义，本文使用的所有的技术和科学术语具有与本发明涉及领域的技术人员通常理解的相同的含义，如在本发明中出现的以下缩写及其对应的物质为：

cbdv次大麻二酚

cbd大麻二酚

cbg大麻萜酚

thcvδ9-四氢化次大麻酚

thc四氢大麻酚

cbn大麻酚

bv柱体积

除非特别说明，本发明中所述的“含量”一般为质量含量，如在提取物中cbdv的含量为10％-13％，是指：在提取物中，cbdv的质量占提取物总质量的10％-13％。

本发明中所述的乙醇，为纯乙醇与水的混合物或纯乙醇，其中浓度为体积百分比(v/v％)，如60％乙醇为乙醇和水的混合物，其含60％的纯乙醇和40％的水，100％乙醇为无水乙醇。

本发明中所述的“酒精度”指液体中乙醇的体积百分比，以室温下的体积比表示。

本发明中溶剂用量采用的“x倍”的描述，是指采用的溶剂如乙醇等的体积是药材质量的x倍，具体地，如“1倍乙醇”，如药材质量为1g，所用乙醇的用量为1ml。

下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明实施例中所用的大麻提取部位原料为：花叶原料为7-9月的成熟大麻花、叶，经农户初步干燥，为thc含量在0.3％以下的工业大麻。除非特别说明，其他试剂为商购产品。

实施例1

同时提取cbdv和cbd的工艺步骤如下：

1)将工业大麻花、叶原料粉碎为40目粗粉，在105℃下，烘烤80min，经测水分为3.6％；

2)将步骤1)所得药材以6倍95％乙醇室温浸泡1h，冷浸法提取3次，合并得提取液；

3)将步骤2)所得提取液55℃浓缩至酒精度50％，加入95％乙醇调酒精度为60％，沉降过夜，取得上清液；

4)将步骤3)所得上清液过大孔hpd100树脂，以纯化水洗2bv，60％乙醇洗涤4bv，从液相色谱检查到cbdv开始收集，至检测到cbdv浓度低于0.5g/l停止收集，其余部分做废液回收溶剂；再以80％乙醇洗脱5bv，从液相检查到cbd开始收集，至检测到cbd浓度低于0.5g/l停止收集；最后，以95％乙醇冲柱3bv，直至流出液近乎无色透明，这一部分绿色洗脱液主要为thc组分；

5)将步骤4)所得3个组分，分别浓缩：组分1和组分2浓缩至酒精度55％，分别上二次层析柱，填料分别为脱色树脂hp20和ads7；组分3浓缩至稠膏，趁热放出，加入1％浓盐酸搅匀以销毁；

6)对于步骤5)所得的组分1，以55％酒精除杂3bv，再以70％乙醇洗脱，得cbdv洗脱液；对于组分2，以60％乙醇除杂4bv，再以80％乙醇洗脱，得cbd洗脱液；

7)将步骤6)所得的两组cbdv和cbd的洗脱液，分别减压浓缩，55-70℃，-0.10mpa，直至浓缩液开始有明显乳白色浑浊，停止，分别放液并置于4-10℃冷库结晶12-48h；

8)将步骤7)所得的两组结晶母液排出，回收，并将晶体分别铲碎，抽滤至干，再以少量纯化水淋洗直至流出液透明无色，掏出晶体，置于30-50℃真空干燥，-0.10mpa，24-36h，直至水分测定在2％以下，即得两组成品，经hplc分别检测两组成品，色谱图分别如图1和2所示。

结果：经hplc测定cbdv纯度为98.45％，cbd纯度为99.22％。

实施例2

同时提取cbdv和cbd的工艺步骤如下：

1)将工业大麻花叶原料粉碎为60目粗粉，在150℃下，烘烤30min，经测水分为3.2％；

2)将步骤1)所得药材以10倍95％乙醇室温浸泡1h，冷浸法提取2次，合并得提取液；

3)将步骤2)所得提取液65℃浓缩至酒精度72％，板框过滤，取得上清液；

4)将步骤3)所得上清夜过hz18大孔树脂，以纯化水洗3bv，60％乙醇洗涤4bv，从液相检查到cbdv开始收集，至检测到cbdv浓度低于0.5g/l停止收集，其余部分做废液回收溶剂；再以76％乙醇洗脱5bv，从液相检查到cbd开始收集，至检测到cbd浓度低于0.5g/l停止收集；最后，以95％乙醇冲柱3bv，直至流出液近乎无色透明，这一部分绿色再生液主要为thc组分；

5)将步骤4)所得的3个组分，分别浓缩：组分1和组分2浓缩至酒精度55％，分别上二次层析柱，填料分别为dm130和mci；组分3浓缩至稠膏，趁热放出，加入1％浓硝酸搅匀以销毁；

6)对于步骤5)所得的组分1，以60％酒精除杂3bv，再以78％乙醇洗脱，得cbdv洗脱液；对于组分2，以45％乙醇除杂4bv，再以70％乙醇洗脱，得cbd洗脱液；

7)将步骤6)所得两组cbdv和cbd的洗脱液，分别减压浓缩，55-70℃，-0.10mpa，直至浓膏；

8)将步骤7)所得两组浓膏，分别在50℃下，加入50倍量和5倍量丙酮，趁热过滤，室温静置，待恢复室温，可见晶体在侧壁和底部析出，置于4-10冷库结晶；

9)将步骤8)所得两组结晶母液排出，回收，并将晶体分别铲碎，抽滤至干，再以少量纯化水淋洗直至流出液透明无色，掏出晶体，置于40-50℃真空干燥，-0.10mpa，24-36h，直至水分测定在2％以下，即得两组成品，经hplc分别检测两组成品，色谱图分别如图3和4所示。

结果：经hplc测定cbdv纯度为98.25％，cbd纯度为99.45％。

实施例3

同时提取cbdv和cbd的工艺步骤如下：

1)将工业大麻花叶原料粉碎为20目粗粉，在120℃下，烘烤40min，水分为3.5％；

2)将步骤1)所得药材以7倍80％乙醇60℃温浸泡1h，冷浸法提取2次，合并得提取液；

3)将步骤2)所得提取液70℃浓缩至酒精度65％，板框过滤，取得上清液；

4)将步骤3)所得上清夜过d101大孔树脂，以纯化水洗2bv，65％乙醇洗涤4bv，从液相检查到cbdv开始收集，至检测到cbdv浓度低于0.5g/l停止收集，其余部分做废液回收溶剂；再以82％乙醇洗脱6bv，从液相检查到cbd开始收集，至检测到cbd浓度低于0.5g/l停止收集；最后，以95％乙醇浸泡并冲柱3bv，直至流出液近乎无色透明，这一部分再生液主要为thc组分；

5)将步骤4)所得3个组分，分别浓缩：组分1浓缩至酒精度60％，上c18反相柱；组分2和组分3浓缩至稠膏，趁热放出。将组分3加入1％浓硝酸搅匀以销毁；

6)对于步骤5)所得组分1，以68％酒精等度洗脱，液相检查到cbdv纯度大于80％开始收集，至检测到cbdv纯度低于80％停止，得高纯cbdv洗脱液；对于组分2，直接以己烷复溶，过滤，4-10℃冷库结晶12-48h；

7)将步骤6)所得的cbdv的洗脱液组分1，减压浓缩，55-70℃，-0.10mpa，直至浓膏，得纯度98.65％半成品；将组分2结晶母液排出，回收，并将晶体分别铲碎，抽滤至干，再以少量纯化水淋洗直至流出液透明无色，掏出晶体；

8)将步骤7)所得两部分半成品置于40-50℃真空干燥，-0.10mpa，24-36h，直至水分测定在2％以下，即得两组成品，经hplc测定cbdv纯度为98.65％，cbd纯度为96.75％；

9)将步骤8)所得的两部分成品重新以65％乙醇60℃热溶解，降至室温后，分别置于4-10℃冷库结晶12-48h，将晶体分别铲碎，抽滤至干，再以少量纯化水淋洗直至流出液透明无色，掏出晶体；

10)重复步骤8)，干燥直至水分测定在2％以下，即得两组成品，经hplc分别检测两组成品，色谱图分别如图5和6所示。

结果：经hplc测定cbdv纯度为99.48％，cbd纯度为99.75％。

实施例4：对比实施例

提取cbd和cbdv的工艺步骤如下：

1)将工业大麻花叶原料粉碎为60目粗粉，在120℃下，烘烤40min，水分为3.5％；

2)将步骤1)所得药材以20倍正己烷60℃温浸泡2h，冷浸法提取2次，合并得提取液；

3)将步骤2)所得提取液40℃减压浓缩至干膏，用70％乙醇转溶，弃去不溶物；

4)将步骤3)所得转溶夜过hpd100大孔树脂，以纯化水洗2bv，65％乙醇洗涤4bv，从液相检查到cbdv开始收集，至检测到cbdv浓度低于0.5g/l停止收集，其余部分做废液回收溶剂；再以80％乙醇洗脱6bv，从液相检查到cbd开始收集，至检测到cbd浓度低于0.5g/l停止收集；最后，以95％乙醇浸泡并冲柱3bv，直至流出液近乎无色透明，这一部分再生液主要为thc组分；

5)将步骤4)所得3个组分，分别浓缩：组分1和组分2浓缩至酒精度55％，分别上二次层析柱，填料分别为mci和ads7；组分3浓缩至稠膏，趁热放出，加入1％浓硝酸搅匀以销毁；

6)对于步骤5)所得组分1，以45％酒精除杂3bv，再以65％乙醇洗脱，得cbdv洗脱液；对于组分2，以60％乙醇除杂4bv，再以80％乙醇洗脱，得cbd洗脱液；

7)将步骤6)所得的cbdv和cbd的洗脱液，分别减压浓缩，55-70℃，-0.10mpa，直至浓缩液开始有明显乳白色浑浊，停止，分别放液并置于4-10℃冷库结晶12-48h；

8)将步骤7)所得两组结晶母液排出，回收，并将晶体分别铲碎，抽滤至干，再以少量纯化水淋洗直至流出液透明无色，掏出晶体，置于30-50℃真空干燥，-0.10mpa，24-36h，直至水分测定在2％以下，即得两组成品，经hplc分别检测两组成品，色谱图分别如图7和8所示。

结果：经hplc测定cbdv纯度为99.20％，cbd纯度为99.52％。

实施例1-4的实验结果对比如表1所示。

表1实施例1-4的实验结果对比

由表1结果可知，本发明的方法制备的产品纯度和收率均较高，可充分利用资源，并可实现工业放大化。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换等，均应包含在本发明的保护范围之内。