本发明属于生物
技术领域：
。更具体地，涉及一对与成人神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感性相关的基因单体型aag/ggc及其应用。
背景技术：
：神经胶质瘤(gliomas)亦称胶质细胞瘤，简称胶质瘤，是发生于神经外胚层的肿瘤，故亦称神经外胚层肿瘤或神经上皮肿瘤。神经胶质瘤在颅内各种肿瘤中最为多见(约占50％)；在儿童恶性肿瘤中排第二位。近30年来，原发性恶性脑肿瘤发生率逐年递增，年增长率约为1.2％，中老年人群尤为明显。据文献报道，中国脑胶质瘤年发病率为3～6人/10万人，年死亡人数达3万人。在神经胶质瘤中以星形细胞瘤为最常见，其次为多形性胶质母细胞瘤，室管膜瘤占第三位。性别以男性多见，特别在多形性胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤中，男性明显多于女性。年龄大多见于20～50岁间，以30～40岁为最高峰，另外在10岁左右儿童亦较多见，为另一个小高峰。作为中枢神经系统最常见的恶性肿瘤，具有恶性程度高和侵袭性强的特点。现有资料表明，保守治疗的胶质瘤患者，平均生存期为14周；单纯外科手术能将这一时间延长到20周；手术和放疗结合可达36周；手术、放疗、化疗综合治疗也仅达40周，预后仍然很差。原发性肝细胞癌起源于肝脏的上皮组织，是我国高发的、危害极大的恶性肿瘤。原发性肝癌的病因及确切分子机制尚不完全清楚，目前认为其发病是多因素、多步骤的复杂过程，受环境和因此双重因素影响。最新国际流行病学的调查显示，目前每年的肝癌发病率全世界是74.83万，大约55％都在中国。90％左右的中国肝癌患者是肝细胞肝癌，它的主要发病相关因素是乙型肝炎病毒(hbv)引起的肝炎，肝炎以后的肝硬化，肝硬化以后转变的肝癌。此外，丙型肝炎病毒(hcv)感染、黄曲霉素、饮水污染、酒精、肝硬化、性激素、亚硝胺类物质、微量元素等都与肝癌发病相关。肺癌是一种常见的肺部恶性肿瘤，绝大多数肺癌起源于支气管粘膜上皮。非小细胞型肺癌包括鳞状细胞癌(鳞癌)、腺癌、大细胞癌，与小细胞癌相比其癌细胞生长分裂较慢，扩散转移相对较晚。非小细胞肺癌约占所有肺癌的80％，约75％的患者发现时已处于中晚期，5年生存率很低。肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不完全明确，大量资料表明，长期大量吸烟与肺癌的发生有非常密切的关系。已有的研究证明：长期大量吸烟者患肺癌的概率是不吸烟者的10～20倍，开始吸烟的年龄越小，患肺癌的几率越高。此外，吸烟不仅直接影响本人的身体健康，还对周围人群的健康产生不良影响，导致被动吸烟者肺癌患病率明显增加。城市居民肺癌的发病率比农村高，这可能与城市大气污染和烟尘中含有致癌物质有关。因此应该提倡不吸烟，并加强城市环境卫生工作。因此，本项目以神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌这三种恶性肿瘤为研究对象，具有重要的意义。功能基因组学(functionalgenomics)的进展告诉我们，基因的特定遗传改变可导致控制细胞生长的相应基因(包括自身或与之相互作用的其它基因)功能发生改变。因此，与恶性肿瘤发生和发展过程相关的基因遗传变异，比如占到人类90％变异的单核苷酸多态性(single-nucleotidepolymorphisms,snps)，也许有助于预测个体患病的易感性和早期诊断。snps指的是由单个核苷酸—a，t，c或g的改变而引起的dna序列的改变，造成包括人类在内的物种之间染色体基因组的多样性。例如，来自两个不同个体的dna片段，aagccta和aagctta为等位基因。几乎所有常见的snp位点都只有两个等位基因。snp是形成的遗传标记，是在群体中可以稳定保留下来的单碱基突变。一般来说snp具有一定的遗传性，是基因组dna序列中的单个核苷酸(atgc)的突变而引起的物种多态性。snp位点的分布是不均匀的，在非编码区比在编码区更常见。一般来说，自然选择倾向于保留最利于遗传适应性的snp位点。snp作为基因组最广泛存在的一类多态性标记，它以高密度以及二态性所适宜的快速、大规模的筛查和易于分型的特点决定了它比其他多态性标志更适合对复杂性疾病的研究。证据表明，snp对疾病、毒物的易感性和耐受性、疾病临床表型的多样性，以及对药物治疗的反应性都有着重要的影响。位于一条染色体上或某一区域的一组相关联的snp等位位点被称作单体型(haplotype)。snp位点并不是独立遗传的，而是在染色体上倾向于以一个整体遗传给后代。成组遗传的snp位点在一代又一代的遗传中绝少发生重组。于是，这样的一组snp位点类型也就是单体型。研究者一般通过比较患者和非患者来发现影响某种疾病的基因。在单体型频率不同的染色体区域，就有可能包含疾病相关基因。传统经典的snp基因分型方法是以凝胶电泳为基础的，如pcr-限制性片段长度多态性法(pcr-rflp)、单链构象多态性法(sscp)等，这些方法虽然成本较低，但由于低通量和特异性较低等原因，基本已经退出历史舞台。另一大类检测方法是近些年来发展起来的高通量、自动化程度较高的方法，较为常见的有dna测序法、芯片法、质谱法、高分辨率熔解曲线(hrm)法等。这些方法的最大优点是高通量、高特异性，但是价格比较昂贵，耗时长、操作繁琐、对技术要求较高等因素，并不适用于临床推广。而应用于snp检测的实时荧光定量pcr技术，可以综合上述两方面的优点，即特异性高、操着较简单、中通量，并且成本较低。可利用荧光定量pcr技术研发快速检测疾病易感性的试剂盒，适于临床实验室推广。人类胆囊收缩素b受体(cholecystokininbreceptor,cckbr)位于染色体11p15.4，全长12454bp，mrna长度2206bp，有5个外显子和4个内含子。该受体主要存在于中枢神经系统和消化系统，调节多巴胺并影响大脑神经递质的传递，调节精神焦虑、运动和摄食。研究显示，cckbr在神经胶质瘤、肝细胞癌和非小细胞肺癌这三种恶性肿瘤中的表达均有不同程度的升高。目前，还尚未有关于cckbr基因多态性位点与肿瘤易感性的检测方法和检测试剂盒的报道。若能通过找寻cckbr基因上的多态位点来进行恶性肿瘤易感人群的大规模筛查，可以逐步实现对癌症的早发现、早诊断、早治疗，有效推进癌症防控事业的发展。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中神经胶质瘤、肝细胞癌和非小细胞肺癌易感人群筛查存在的缺陷和不足，提供一种与神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感性相关的，来源于cckbr基因的snps位点rs2929183、rs2941023和rs2947025及其组成的基因单体型aag和ggc在检测神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感性中的应用。本发明的第一个目的是提供来源于cckbr基因的snps位点rs2929183、rs2941023和rs2947025，或其基因单体型aag和ggc。本发明的第二个目的是提供snps位点rs2929183、rs2941023和rs2947025，或其基因单体型aag和ggc的应用。本发明的第三个目的是提供一种检测rs2929183、rs2941023和rs2947025位点基因型的引物组。本发明的第四个目的是提供一种检测rs2929183、rs2941023和rs2947025位点基因型的方法。本发明的第五个目的是提供一种神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感性检测试剂盒。本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：起源于cckbr基因的snp位点rs2929183，rs2941023和rs2947025，或rs2929183-rs2941023-rs2947025位点所构成的基因连锁不平衡单体型aag和单体型ggc，所述单体型在rs2929183、rs2941023和rs2947025位点的单核苷酸分别为a、a、g或g、g、c。含有上述snps位点rs2929183、rs2941023和rs2947025的核苷酸序列如seqidno：1～3所示，所述snps位点rs2929183、rs2941023和rs2947025分别位于seqidno：1～3所示序列的第501、812和201位碱基处。本发明通过设计pcr扩增引物和荧光标记的探针来特异性检测三个突变位点rs2929183，rs2941023和rs2947025的基因型，并应用连锁不平衡软件haploview4.0进行基因型分析和遗传作图，并计算基因型和单体型与成人神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感性的关系，从而对这三种肿瘤进行易感性评估。本发明首先提供cckbr基因第1号内含子rs2929183、rs2941023和rs2947025位点在作为个体神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感性评估的标志物或靶点中的应用；具体是根据rs2929183、rs2941023和rs2947025位点的连锁不平衡形成的单体型aag和ggc多态性判断个体的神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感性。本发明通过分别比较神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌患者与正常人的cckbr基因序列，发现该基因第1号内含子rs2929183、rs2941023和rs2947025位点存在连锁不平衡(图1)，它们的单体型遗传多态性与神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感性均有着密切联系。具体地，所述应用为通过snp基因分型技术测定个体样本rs2929183、rs2941023和rs2947025位点的基因型，再使用haploview4.0软件对基因型进行连锁不平衡分析，发现存在2个主要的单体型(aag和ggc)。当单体型为aag，则该个体不是神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感群体；当单体型为ggc，则该个体为神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌的易感人群。优选地，所述snp基因分型技术为taqman荧光探针基因分型检测方法。本发明针对cckbr基因第1号内含子rs2929183、rs2941023和rs2947025位点的多态性，设计了用于分别检测rs2929183、rs2941023和rs2947025位点基因型的引物组，每个位点的检测引物组均包括一对pcr扩增引物及两条荧光探针，其序列依次如seqidno：4～15所示。所述荧光探针的5’末端标记荧光基团；其中一个等位基因标记vic，另一个等位基因标记6-carboxyfluorescein(fam)。3’末端则标记偶联着小沟槽结合剂(minorgroovebinder，mgb)的非荧光淬灭剂(non-fluorescentquencher，nfq)。同时，上述检测引物组在神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感性检测和/或制备神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感性检测试剂盒中的应用亦在本发明保护范围内。一种多态性位点rs2929183、rs2941023和rs2947025基因型的检测方法，包括如下步骤：s1.提取待测样本基因组dna；s2.以步骤s1所述dna为模板，用上述检测rs2929183、rs2941023和rs2947025位点基因型的引物组分别进行荧光定量pcr检测，分别确定rs2929183、rs2941023和rs2947025位点的基因型。具体地，所述荧光定量pcr反应体系为：20μlpcr反应体系中包括50ng的基因组dna和不含ung的taqman基因分型主反应液，以及500nm的上述pcr扩增引物和200nm的荧光探针。具体地，所述荧光定量pcr反应程序为：92℃15秒，60℃1分钟，反应35个循环。所述荧光定量pcr检测的仪器优先为7500ht快速实时pcr仪系统(appliedbiosystems,fostercity,ca,usa)。此外，所述检测方法在神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感性检测和/或制备神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感性检测试剂盒中的应用亦在本发明保护范围内。具体地，所述应用为利用上述的rs2929183、rs2941023和rs2947025位点基因型的检测方法对个体样本的rs2929183、rs2941023和rs2947025位点分别进行基因型检测，再使用haploview4.0软件对基因型进行连锁不平衡分析，发现存在2个主要的单体型(aag和ggc)。当单体型为aag，则该个体不是神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感群体；当单体型为ggc，则该个体为神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌的易感人群。同时，本发明还提供一种神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感性检测试剂盒，所述试剂盒包含上述分别检测rs2929183、rs2941023和rs2947025位点基因型的引物组seqidno：4～15。优选地，所述试剂盒还包含有荧光定量pcr所需试剂。更优选地，所述荧光定量pcr所需试剂为不含ung的taqman基因分型主反应液(优选taqmangenotypingmastermixwithoutung)。作为一种优选地可实施方式，本发明所述神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感性检测试剂盒的使用方法如下：s1.提取待测样本基因组dna；s2.以步骤s1所述dna为模板，用上述检测rs2929183、rs2941023和rs2947025位点基因型的引物组分别进行荧光定量pcr检测，分别确定rs2929183、rs2941023和rs2947025位点的基因型。s3.再使用haploview4.0软件对步骤s2中rs2929183、rs2941023和rs2947025基因型进行连锁不平衡分析；发现当单体型为aag，则该个体不是神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感群体，当单体型为ggc，则该个体为神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌的易感人群。所述荧光定量pcr反应体系为：20μlpcr反应体系中包括50ng的基因组dna和不含ung的taqman基因分型主反应液，以及500nm的上述pcr扩增引物和200nm的荧光探针。所述述荧光定量pcr反应程序为：92℃15秒，60℃1分钟，反应35个循环。所述荧光定量pcr检测的仪器优先为7500ht快速实时pcr仪系统(appliedbiosystems,fostercity,ca,usa)。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：(1)本发明提供了一种与神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌均密切相关的cckbr基因多态位点rs2929183、rs2941023和rs2947025及其单体型aag和ggc，对基于遗传学背景的个体化诊断和预警奠定了十分重要的基础，并将带来十分可观的社会和经济效益。(2)本发明的taqman荧光探针基因分型检测方法和试剂盒简单、快速、高通量、高敏感、特异性强，适用于神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感人群的大规模筛查，有利于指导肿瘤的预防。附图说明图1为正常对照组人群中rs2929183-rs2941023-rs2947025连锁不平衡作图。具体实施方式以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本
技术领域：
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。实施例1cckbr基因第1号内含子rs2929183、rs2941023和rs2947025位点检测引物和探针的设计1、引物和探针设计本实施例通过ncbi数据库和dbsnp数据库获得cckbr基因参考序列及rs2929183、rs2941023和rs2947025位点，根据该snp位点的上下游序列，通过大量研究，设计了如下表1所示的pcr扩增引物和荧光探针对。表1rs2929183、rs2941023和rs2947025位点taqman基因引物和探针的设计2、引物验证(1)使用dna血液本提取试剂盒(qiaampdnabloodminikit)提取随机选取的神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌患者和正常成人的基因组dna，用上述引物组进行荧光定量pcr反应来分别检测rs2929183、rs2941023和rs2947025位点基因型；(2)所述荧光定量pcr反应体系和扩增程序为：20μlpcr反应体系中包括50ng的基因组dna和不含ung的taqman基因分型主反应液，含500nm的上述扩增引物和200nm的上述探针。96孔的abi专用反应板置于7500ht快速实时pcr仪系统pcr仪系统(appliedbiosystems,fostercity,ca，usa)内；92℃15秒，60℃1分钟，反应35个循环。(3)结果显示，本实施例设计的引物探针可分别精确检测rs2929183、rs2941023和rs2947025位点的基因型，可用于下一步的神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感人群的大规模筛查和个体肿瘤预警及辅助诊断。实施例2rs2929183、rs2941023和rs2947025位点检测试验1、dna的提取外周血液标本来自于广东医学院附属医院和北京大学深圳医院。使用dna血液标本提取试剂盒(qiaampdnabloodminikit)提取血液中白细胞基因组dna。针对rs2929183、rs2941023和rs2947025位点，我们检测了642份正常人、304份成人神经胶质瘤患者、500份原发性肝细胞癌患者和650份非小细胞肺癌患者的标本。这些正常组和疾病组的临床特征见表2。表2正常人组、成人神经胶质瘤组、肝细胞癌组和非小细胞肺癌组的临床特征2、疾病---对照实验(case--controlstudy)(1)利用实施例1设计的检测引物和探针，分别对步骤1所述的642份正常人、304份成人神经胶质瘤患者、500份原发性肝细胞癌患者和650份非小细胞肺癌患者的标本中的rs2929183、rs2941023和rs2947025位点进行荧光定量pcr基因分型检测。(2)所述荧光定量pcr反应体系和扩增程序为：20μlpcr反应体系中包括50ng的基因组dna和不含ung的taqman基因分型主反应液，含500nm的上述扩增引物对和200nm的上述探针对。96孔的abi专用反应板置于7500ht快速实时pcr仪系统pcr仪系统(appliedbiosystems,fostercity,ca，usa)内；92℃15秒，60℃1分钟，反应35个循环。3、数据统计与分析病例组和对照组之间单体型的分布差异使用年龄、性别、吸烟和喝酒状态校正后的无条件logistic回归分析。所有的检验都是双侧检验，由于检测了3个snps位点，进行bonferroni校正后的有意义临界值是0.05÷3＝0.0167。为了保证所选的对照组和病例组都来自于同一汉族人群，先进行了hardy-weinberg平衡检验。结果见表3，表3为正常对照组cckbr基因rs2929183、rs2941023和rs2947025位点基因型频率及哈迪-温伯格检验(hardy-weinbergequilibrium)结果(phwe均>0.05)，表明所选择的人群符合孟德尔群体遗传学原理。表3正常对照组cckbr三种基因型hardy-weinberg群体遗传检验基因型染色体位点数量预计频数实际频率x2phwers29291836261578aa579580.50.9021.7090.191ag6359.90.098gg01.60rs29410236261725aa579580.50.9021.7090.191ag6359.90.098gg01.60rs29470256261846gg579580.50.9021.7090.191cg6359.90.098cc01.60phwe:hardy-weinbergequilibrium检验的p值哈迪-温伯格定律(hardy－weinberglaw)是指在理想状态下，各等位基因的频率和等位基因的基因型频率在遗传中是稳定不变的，即保持着基因平衡。此时各基因频率和各基因型频率存在如下等式关系并且保持不变：当等位基因只有一对(aa)时，设基因a的频率为p，基因a的频率为q，则a+a＝p+q＝1，aa+aa+aa＝p2+2pq+q2＝1。哈迪-温伯格平衡对于一个大且随机交配的种群，基因频率和基因型频率在没有迁移、突变和选择的条件下会保持不变，基因型频率就能达到平衡。在没有其它因素的影响下，这种平衡状态将一直保持。在人类群体遗传学中，哈迪-温伯格平衡一定程度反应了所研究群体的种族“纯”性。x2统计分析和logistic回归分析中，由于研究中检测了3个snps位点，bonferroni校正的有意义临界值是0.05÷3＝0.0167。若p值小于该临界值，表示该因素对疾病的发生起作用，且若该因素如果在正常对照组中的比率大于其在疾病组中的比率，则该因素是保护因素，若该因素如果在正常对照组中的比率小于其在疾病组中的比率，则该因素是危险因素。若p值大于或等于该临界值，则表明该因素对疾病的发生不起作用表4成人神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌cckbr单体型易感性统计单体型包括rs2929183-rs2941023-rs2947025。a是x2检验；b是校正年龄、性别、吸烟和喝酒状态之后的无条件logistic回归分析。a,b由于检测了3个snps位点，所以x2检验和logistic回归分析均采用bonferroni校正的有意义临界值是0.05÷3＝0.0167。表4是单体型与成人神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌发病风险的相关性统计结果。我们发现，单体型aag在三种肿瘤中的比率均小于其在正常对照中的比率，且无论是校正前还是校正后的统计数据均表明单体型aag的pa值和pb值均显著小于临界值(0.0167)，说明单体型aag是成人神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌发病风险的保护因素。而单体型ggc在三种肿瘤中的比率均大于其在正常对照中的比率，且无论是校正前还是校正后的统计数据均表明单体型ggc的pa值和pb值也小于临界值(0.0167)，说明单体型ggc是成人神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌发病风险的危险因素。实施例3成人神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感性检测试剂盒1、一种成人神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感性检测试剂盒，所述检测试剂盒包含以下组分：检测rs2929183，rs2941023和rs2947025位点特异性扩增引物各一对，荧光探针各一对，以及不含ung的taqman基因分型主反应液。所述特异性扩增引物和荧光探针的序列如表1所示。2、所述试剂盒的使用方法s1.提取待测样本基因组dna；s2.以步骤s1所述dna为模板，用上述引物组进行荧光定量pcr检测，分别确定rs2929183，rs2941023和rs2947025位点的基因型。s3.再使用haploview4.0软件对步骤s2基因型进行连锁不平衡分析；当单体型为aag，则该个体不是神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌易感群体，当单体型为ggc，则该个体为神经胶质瘤、原发性肝细胞癌和非小细胞肺癌的易感人群。所述荧光定量pcr反应体系为：20μlpcr反应体系中包括50ng的基因组dna和不含ung的taqman基因分型主反应液，以及500nm的上述pcr扩增引物和200nm的荧光探针。所述述荧光定量pcr反应程序为：92℃15秒，60℃1分钟，反应35个循环。所述荧光定量pcr检测的仪器优先为7500ht快速实时pcr仪系统(appliedbiosystems,fostercity,ca,usa)。最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。序列表<110>广东医科大学<120>一种源于cckbr基因的单体型aag/ggc及其应用<130>1714064zbsh042<141>2017-11-10<160>15<170>siposequencelisting1.0<210>1<211>1001<212>dna<213>人(homosapiens)<400>1tatttaccccacgaaataatctatgctttctcagccgagttgttacacactcacacttgg60attctgtcattcagccaatatttattgaaccagagattgtgctaggcagtgggaatgtaa120gttgaacaaaaccgacacaattcctacttcacagagctcaaagtttaatgggcgagacag180aaaagcaggggattgcagcacaaagtggaagagccttgacagggaaaagatagtgggaac240acaagtggaacacctctagcccagcccagcctccttgagaattaaagttggcctcttgag300gaaatgagctacaaagtcaaaaaaattagggaggctggctctaagcttcctgttggcaaa360aaaaaaaaaaaaaaaaaatatatatacacacacacacacacacacacacacacacacaca420catatacatatgggagagccagccaagtgaacgggcagaagaggcagaaagcatcccaaa480taaaaggacaagatgtataaraagctcaaagtttgaattcatggcacttttatccactgt540gacatagttttgagtgactagaacatatatcttaagaagggaataatgaacaggctggag600accagcctagagggtttgcagagagcctgctaggcctgaccatggaacatggactttctc660ccgagggcaataggaactactaaaagattcggtagtactaccaggattagttctataatg720tggagaacggattggaagacataagatggaaggcagggggatactttacaaggttactat780attacactgttctgggtgaaagatgatgctagctgagactaaggtaatggcaagggagat840ggagagaggtggatagatttgagagcctcttctggaaatggaatcaacagattagaagca900gagaggatggaagaggtcaagggatgacattcagatttctaacttggacaactgaatgga960tattggtgctatagcaattgtatacaatgagaaagataaca1001<210>2<211>1031<212>dna<213>人(homosapiens)<400>2ggatgctgttctgactgtcctgttttttatttatgtaacttatgtcaatagcatttgata60tcacttaccccaacctgcttgaaactctctttttcttgctttctggaagggcgtagctcc120tgcctttctgatggtttcatctgaatctccttcataaattctcctttctctgcctggctt180ttaaataatggtcttatgcagagtcttgacctaggacctattttcttctcattctataca240aaattttatgattttaactattctcggggcttctacatcctgtaggcaaagaccttcttc300aagtctgtatttccacctcagacctctcctgtaagttccagacccctggattcaacagct360tactaggtaacctcacctggatgccccactaacatttaaactcaatgggttccaaactga420atttataattccctcttccaaacctgtttctgctgttttgttatctttctcattgtatac480aattgctatagcaccaatatccattcagttgtccaagttagaaatctgaatgtcatccct540tgacctcttccatcctctctgcttctaatctgttgattccatttccagaagaggctctca600aatctatccacctctctccatctcccttgccattaccttagtctcagctagcatcatctt660tcacccagaacagtgtaatatagtaaccttgtaaagtatccccctgccttccatcttatg720tcttccaatccgttctccacattatagaactaatcctggtagtactaccgaatcttttag780tagttcctattgccctcgggagaaagtccatrttccatggtcaggcctagcaggctctct840gcaaaccctctaggctggtctccagcctgttcattattcccttcttaagatatatgttct900agtcactcaaaactatgtcacagtggataaaagtgccatgaattcaaactttgagcttct960tatacatcttgtccttttatttgggatgctttctgcctcttctgcccgttcagaaagtcc1020atrttccatgg1031<210>3<211>801<212>dna<213>人(homosapiens)<400>3atcttaagaagggaataatgaacaggctggagaccagcctagagggtttgcagagagcct60gctaggcctgaccatggaacatggactttctcccgagggcaataggaactactaaaagat120tcggtagtactaccaggattagttctataatgtggagaacggattggaagacataagatg180gaaggcagggggatactttasaaggttactatattacactgttctgggtgaaagatgatg240ctagctgagactaaggtaatggcaagggagatggagagaggtggatagatttgagagcct300cttctggaaatggaatcaacagattagaagcagagaggatggaagaggtcaagggatgac360attcagatttctaacttggacaactgaatggatattggtgctatagcaattgtatacaat420gagaaagataacaaaacagcagaaacaggtttggaagagggaattataaattcagtttgg480aacccattgagtttaaatgttagtggggcatccaggtgaggttacctagtaagctgttga540atccaggggtctggaacttacaggagaggtctgaggtggaaatacagacttgaagaaggt600ctttgcctacaggatgtagaagccccgagaatagttaaaatcataaaattttgtatagaa660tgagaagaaaataggtcctaggtcaagactctgcataagaccattatttaaaagccaggc720agagaaaggagaatttatgaaggagattcagatgaaaccatcagaaaggcaggagctacg780cccttccagaaagcaagaaaa801<210>5<211>22<212>dna<213>人(homosapiens)<400>5ggctctaagcttcctgttggca22<210>5<211>18<212>dna<213>人(homosapiens)<400>5tatatgttctagtcactc18<210>6<211>16<212>dna<213>人(homosapiens)<400>6atgtataaaaagctca16<210>7<211>16<212>dna<213>人(homosapiens)<400>7atgtataagaagctca16<210>8<211>19<212>dna<213>人(homosapiens)<400>8ctaatcctggtagtactac19<210>9<211>18<212>dna<213>人(homosapiens)<400>9gctcaaagtttgaattca18<210>10<211>19<212>dna<213>人(homosapiens)<400>10gaaagtccatattccatgg19<210>11<211>19<212>dna<213>人(homosapiens)<400>11gaaagtccatgttccatgg19<210>12<211>20<212>dna<213>人(homosapiens)<400>12accatggaacatggactttc20<210>13<211>19<212>dna<213>人(homosapiens)<400>13ccaagttagaaatctgaat19<210>14<211>17<212>dna<213>人(homosapiens)<400>14actttagaaggttacta17<210>15<211>17<212>dna<213>人(homosapiens)<400>15actttacaaggttacta17当前第1页12